專利名稱：：酰胺化合物或其鹽，以及各自使用該酰胺化合物或其鹽的生物膜形成抑制劑、生物膜去除...的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及新酰胺化合物及其鹽，所述酰胺化合物及其鹽能夠抑制生物膜形成、剝離或去除沉積的生物膜，或殺菌。本發(fā)明進一步涉及包含所述酰胺化合物或其鹽作為有效成分的生物膜形成抑制劑、生物膜去除劑(生物膜剝離劑)和殺菌劑，及其用途。
背景技術：
：微生物的某些種類，如細菌或真菌，粘附于載體表面并在其上形成菌落。當該菌落包含一定數(shù)量的桿菌細胞時，其形成/分泌有機物質如多糖或糖蛋白，所述有機物質生長為生物膜。生物膜類似于使其它微生物進入并在其中形成復雜微生物群的培養(yǎng)基。在自然環(huán)境中、在工業(yè)領域中以及在人類中到處都能夠找到此生物膜沉積物。此生物膜沉積物引起許多問題，包括在工業(yè)設備中如在工廠排水管中的金屬管腐蝕或在閥門操作期間的故障的那些，在循環(huán)型浴缸中產生軍團菌，以及各種人類感染包括皮膚病如丘瘆或皮膚炎癥，眼睛感染如經(jīng)由接觸透鏡的微生物角膜炎，口腔內疾病如齲或牙周炎，或其它疾病如中耳炎、細菌性前列腺炎或嚢肺性纖維化肺炎。由生物膜引起的許多這些感染(生物膜感染)，例如牙周炎，是難治療的，難治療的一個原因是在生物膜中的微生物被膜(細胞外基質)覆蓋，因此將不與免疫系統(tǒng)細胞或抗菌物質直接接觸。另一個原因是生物膜中的細菌具有非常緩慢的新陳代謝，認為這也干擾在活性分裂細胞中顯示最大作用的抗生素。由于上述原因，為完全治療生物膜感染，需要確保以下兩者防止通過樣i生物的生物膜沉積以及去除沉積的生物膜。通常將生物膜物理地，例如通過用刷子等將它們擦去而去除。然而，因為生物膜通常牢固地粘附于載體表面，所以即使用大量的努力，這也不特別有效。根據(jù)此存在的問題，能夠控制生物膜沉積的化合物已引起關注。例如，專利文獻1和2公開了在控制生物膜沉積中有效的具有特定酰胺結構的化合物的發(fā)明。專利文獻l:WO2004/016213專利文獻2:WO2002/088298
發(fā)明內容然而，專利文獻1和2中公開的化合物不能剝離或去除已形成的生物膜。生物膜形成或沉積的抑制或阻止可減少形成或沉積的生物膜的厚度至一定程度，或如果該化合物顯示理想的效果，甚至可破壞該膜。然而，由于生物膜中的微生物仍存活，所以存在以下可能當抗菌劑的效果減小或消失時，微生物可再次形成生物膜。由于此點，對于各種生物膜缺陷如感染，此技術不是根本的解決方案。因此，用于抑制生物膜形成或沉積的該類藥物不足以克服由生物膜引起的各種缺陷，或徹底地治愈生物膜感染。因此，存在對于能夠剝離或去除沉積的生物膜的藥物的需求。本發(fā)明的目的是提供用于剝離或去除沉積的生物膜的化合物，特別是用于抑制通過微生物的生物膜形成以及用于剝離或去除沉積的生物膜的新化合物。本發(fā)明還提供包含該化合物作為有效成分的生物膜去除劑(包括剝離劑)和生物膜形成抑制劑，特別是對由細菌如銅綠4艮單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)或牙周炎病原菌(periodontitispathogenicbacteria)形成的生物膜具有一定作用的生物膜去除劑和生物膜形成抑制劑。本發(fā)明進一步提供包含該化合物作為有效成分的殺菌劑。本發(fā)明進一步提供包含該生物膜去除劑、該生物膜形成抑制劑或殺菌劑的產品，如防止或治療口腔內疾病如涉及牙周炎病原菌的牙周炎的口腔用組合物。作為深入研究的結果，本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，具有特定酰胺結構的化合物具有以下兩種作用剝離或去除沉積的生物膜，以及抑制通過微生物的生物膜形成。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，所述酰胺化合物具有與現(xiàn)存抗生素可比的殺菌活性。因為該化合物的此特性，本發(fā)明人能夠完成本發(fā)明。以下(I)至(V)包括在本發(fā)明的范圍內。(I)新酰胺化合物或其鹽(1-1).由通式(l)表示的酰胺化合物或其鹽pRi<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中，Ri是氫原子或羥基，^是Cw2烷基，Q是由式(Q1)或(Q2)表示的取代基，其中n和m是0或l。(1-2).根據(jù)(I-1)所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q1)表示的取代基，其中m是0。(1-3).根據(jù)(I-1)所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q1)表示的取代基，其中m是l。(1-4).根據(jù)(I-1)所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q2)表示的取代基，其中n是0。(1-5).根據(jù)(I-1)所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q2)表示的取代基，其中n是l。(1-6).根據(jù)(I-1)所述的酰胺化合物或其鹽，其中由通式(l)表示的酰胺化合物是選自由以下組成的組的至少一種化合物N-(吡咯烷-3-基)癸酰胺、N-(吡咯烷-3-基)十二酰胺、N-(吡咯烷-4-基)癸酰胺、N-(吡咯烷-4-基)十二酰胺、N々比咯烷-1-基)十二酰胺、N-(吡咯烷-l-基)-3-羥基十二酰胺、N-(哌啶-l-基)十二酰胺。(n)生物膜去除劑(生物膜剝離劑)(II-l).一種生物膜去除劑，其包含根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。(n-2).根據(jù)(n-i)所述的生物膜去除劑，其中該生物膜去除劑去除由銅綠假單胞菌或牙周炎病原菌形成的生物膜。(n-3).根據(jù)(i-1)至(i-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為生物膜去除劑的用途。(n-4).根據(jù)(i-i)至(i-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽用于制備生物膜去除劑的用途。(n-5).根據(jù)(i-i)至(i-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽，其用作生物膜去除劑的有效成分。(III)生物膜形成抑制劑(III-l).一種生物膜形成抑制劑，其包含根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。(ni-2).根據(jù)(ni-1)所述的生物膜形成抑制劑，其中該生物膜形成抑制劑抑制由銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)或牙周炎病原菌(periodontitispathogenicbacteria)形成的生物月莫的形成。(III-3).根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為生物膜形成抑制劑的用途。(III-4).根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽用于制備生物膜形成抑制劑的用途。(III-5).根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽，其用作生物膜形成抑制劑的有效成分。(IV)殺菌劑(IV-1).—種殺菌劑，其包含根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。(IV-2).—種殺菌劑，其包含根據(jù)(I-2)或(I-3)所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。(IV-3).根據(jù)(IV-1)所述的殺菌劑，其中所述酰胺化合物是選自由以下組成的組的至少一種化合物N-(吡咯烷-3-基)癸酰胺、N-(吡咯烷-3-基)十二酰胺、N-(吡咯烷-4-基)癸酰胺，以及N-(吡咯烷-4-基)十二酰胺。(IV-4).根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項，優(yōu)選(I-2)或(I-3)所述的酰胺化合物或其鹽作為殺菌劑的用途。(IV-5).根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項，優(yōu)選(I-2)或(I-3)所述的酰胺化合物或其鹽用于制備殺菌劑的用途。(IV-6).根據(jù)(I-l)至(I-6)任一項，優(yōu)選(I-2)或(I-3)所述的酰胺化合物或其鹽，其用作殺菌劑的有效成分。(V)生物膜去除劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑的用途(V-l).—種口腔用組合物，其包含根據(jù)(II-2)所述的生物膜去除劑、根據(jù)(III-2)所述的生物膜形成抑制劑或根據(jù)(IV-1)所述的殺菌劑，所述生物膜去除劑用于剝離或去除由牙周炎病原菌形成的生物膜，所述生物膜形成抑制劑用于抑制由牙周炎病原菌形成的生物膜。(V-2).根據(jù)(V-1)所述的口腔用組合物，其用于防止或減輕由牙周炎病原菌引起的口腔內疾病或口臭。(V-3).以下物質用于制備口腔用組合物的用途根據(jù)(II-2)所述的生物膜去除劑、根據(jù)(III-2)所述的生物膜形成抑制劑或根據(jù)(IV-1)所述的殺菌劑，所述生物膜去除劑用于剝離或去除由牙周炎病原菌形成的生物膜，所述生物膜形成抑制劑用于抑制由牙周炎病原菌形成的生物膜的形成。(V-4).根據(jù)(V-3)所述的用途，其中所述口腔用組合物防止或減輕由牙周炎病原菌引起的口腔內疾病或口臭。(V-5).用作口腔用組合物的有效成分的以下物質根據(jù)(II-2)所述的生物膜去除劑、根據(jù)(III-2)所述的生物膜形成抑制劑或根據(jù)(IV-1)所述的殺菌劑，所述生物膜去除劑用于剝離或去除由牙周炎病原菌形成的生物膜，所述生物膜形成抑制劑用于抑制由牙周炎病原菌形成的生物膜的形成。(V-6).根據(jù)(V-5)所述的生物膜去除劑，其中所述口腔用組合物是用于防止或減輕由牙周炎病原菌引起的口腔內疾病或口臭的口腔用組合物。圖l顯示了流式細胞系統(tǒng)。附圖標記說明1:培養(yǎng)基瓶(Nunc的產品)，2:泵(4-通道蠕動泵ISM935:ISMATEC產品)，3:空氣去除部(改進的塞住的玻璃柱)，4:玻璃槽(glasscell)(觀察用玻璃毛細管FC91(lmmxlmmxl4mm):BioSurfaceTechnology的產品)，5:廢液瓶(N薩的產品)，6:碰管(cpl.5mm),7a、7b:三向供水栓(Termo的產品)，8a、8b:膜過濾器(0.44ium:Millipore的產品)，9:培養(yǎng)基，10:廢液。圖2顯示當4吏用測試液(化合物1a-l,250pM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實驗例l)。圖3顯示當4吏用測試液(化合物lb-l，250pM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實驗例l)。圖4顯示當使用測試液(化合物1c-1，100pM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實驗例l)。圖5顯示當使用測試液(化合物1c-2，1OOpM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實驗例l)。圖6顯示當使用測試液(化合物1d-1,1OOpM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實-驗例l)。圖7顯示當使用測試液(化合物1和2，100pM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實驗例l)。圖8顯示當4吏用測試液(化合物3,100|iM)時生物膜形成的狀態(tài)與當使用對照測試液時生物膜形成的狀態(tài)(對照)之間的對比(實驗例l)。圖9顯示當使用對照測試液時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖10顯示當4吏用測試液(化合物la-l,100pM)時生物月莫去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖11顯示當4吏用測試液(化合物lb-l，lOO)iM)時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖12顯示當4吏用測試液(化合物1c-1,1OOpM)時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖13顯示當4吏用測試液(化合物1c-2,1OOpM)時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖14顯示當使用測試液(比較化合物1，lOOiuM)時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖15顯示當使用測試液0匕較化合物2，100fiM)時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。圖16顯示當使用測試液(比較化合物3，100^M)時生物膜去除的狀態(tài)(實驗例3)。具體實施例方式a)新酰胺化合物或其鹽本發(fā)明提供用于剝離或去除沉積的生物膜，或用于抑制生物膜形成的新酰胺化合物。所述酰胺化合物或其鹽用于后述的生物膜去除劑或生物膜形成抑制劑的有效成分。本發(fā)明還提供具有殺菌活性的新酰胺化合物及其鹽。所述酰胺化合物或其鹽用于后述的殺菌劑的有效成分。本發(fā)明的"生物膜"是指由粘附于固體表面的由微生物形成的粘液膜狀分泌物。在該生物膜中，多種共存的微生物形成復合體(菌落)。也可將"生物膜"描述為由微生物產生的粘液狀排泄物圍繞的微生物的集合體。該生物膜能夠粘附至缺乏自治能力的惰性固體或固體上，如聚合物、塑料、陶瓷、金屬、玻璃或羥基磷灰石。另外，當然該固體可為皮膚、骨頭、牙齒、齒齦、組織或活生物體的任一其它部分。酰胺化合物由以下通式(i)表示。vR(i)其中，W是氫原子或羥基，112是(:5_12烷基，Q是由式(Q1)或(Q2)表示的取代基，(H2C)nJ(Q2)其中n和m是0或l在式(l)中，P^表示包括如下的直鏈或支鏈C^2烷基的Cw2烷基正戊基、1-曱基正丁基、2-曱基正丁基、3-曱基正丁基、l，l-二曱基正丙基、1，2-二甲基正丙基、2,2-二曱基正丙基、1-乙基正丙基、正己基、1-曱基正戊基、2-曱基正戊基、3-甲基正戊基、4-甲基正戊基、1,1-二甲基正丁基、1,2-二曱基正丁基、1,3-二曱基正丁基、2，2-二甲基正丁基、2，3-二甲基正丁基、3,3-二曱基正丁基、1-乙基正丁基、2-乙基正丁基、1，1,2-三曱基正丙基、1，2，2-三曱基正丙基、l-乙基-l-甲基正丙基、l-乙基-2-曱基正丙基、l-甲基-l-乙基正戊基、正庚基、2-庚基、1-乙基-1，2-二曱基正丙基、l-乙基-2，2-二甲基正丙基、正辛基、3-辛基、4-曱基-3-正庚基、6-曱基-2-正庚基、2-丙基-l-正庚基、2，4，4-三曱基-l-正戊基、正壬基、2-壬基、2，6-二甲基-4-正庚基、3-乙基-2,2-二甲基-3-正戊基、3，5，5-三甲基-1-正己基、正癸基、2-癸基、4-癸基、3，7-二曱基-1-正辛基、3，7-二曱基-3-正辛基、正十一烷基或正十二烷基。直鏈或支鏈C^2烷基更優(yōu)選為直鏈或支鏈C7.u烷基，進一步優(yōu)選為C7.i。烷基。特別優(yōu)選的烷基的實例包括直鏈正庚基、正辛基、正壬基、正癸基和正十一烷基。在通式(l)中，R"可為氫原子或羥基；然而，優(yōu)選氫原子。在通式(l)中，由Q表示的取代基可為由Q1表示的取代基，其中111=0(3-吡咯烷基)或其中m=l(4-哌啶基)。由Q表示的取代基可為由Q2表示的取代基，其中11=0(1-吡咯烷基)或其中11=1(1-哌啶基)。更具體地，由式(l)表示的本發(fā)明的酰胺化合物能夠具體地表示為由以下式(la)至(ld)表示的酰胺化合物。b),其中Ri和R"與以上的那些相同。更具體地，由式(la)表示的化合物相應于其中取代基Q為Ql的由通式(l)表示的化合物，在Q1中，m=0。由式(lb)表示的化合物相應于其中取代基Q為Q1的由通式(1)表示的化合物，在Q1中，m=l。類似地，由式(lc)表示的化合物相應于其中取代基Q為Q2的由通式(1)表示的化合物，在Q2中，n=0。由式(ld)表示的化合物相應于其中取代基Q為Q2的由通式(1)表示的化合物，在Q2中，n=l。根據(jù)本發(fā)明的酰胺化合物優(yōu)選由式(la)至(ld)表示的酰胺化合物，其中W是氫原子，112是直鏈(:5-12烷基，更優(yōu)選C7.n烷基，進一步優(yōu)選Cwo烷基。在此化合物中，R"尤選直鏈烷基如正庚基、正辛基、正壬基或正癸基。請注意，由式(la)表示的酰胺化合物包括由以下式(la')或(la")表示的異構體。更具體地，可單獨或組合使用異構體la'和la"作為生物膜去除劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑的有效成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中R/和R"與以上的那些相同。本發(fā)明的由式(l)表示的酰胺化合物與酸形成鹽。與酰胺化合物(l)形成鹽的酸并不特別限定，但是優(yōu)選藥用的酸。該酸的實例包括無機酸如鹽酸、硝酸、硫酸或磷酸；有機酸如蟻酸、乙酸、酒石酸、馬來酸、蘋果酸、杼檬酸、水楊酸、苯甲酸或抗壞血酸。用于本發(fā)明的酰胺化合物(1)能夠通過例如由反應式1表示的方法來制造。反應式l0R'Q國NH+H"J(2)(3)其中Q、Ri和I^與以上的那些相同。根據(jù)反應式l,本發(fā)明的酰胺化合物(1)能夠通過使由式(2)表示的胺化合物與由式(3)表示的羧酸化合物反應來生產。此反應在適當?shù)目s合劑存在下在惰性溶劑中進行?？s合劑的實例包括酸性卣化物形成劑如三氯化磷、三溴化磷、五氯化磷、三氯氧磷、亞硫酰氯；混合酸肝形成劑如氯曱酸乙酯或甲磺酰氯(chlorinatedmethanesulfonyl);碳二亞胺如N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺或l-乙基-3-二曱氨基丙基碳二亞胺。還可使用如以下的其它縮合劑N,N'-羰基二咪唑、2-乙氧基-N-乙氧基羰基-l，2-二氫喹啉(EEDQ)或三苯膦-四氯化碳(復合物)。惰性溶劑并不特別限定。惰性溶劑的實例包括芳香烴如苯、曱苯或二曱苯；囟化芳香烴如氯苯或二氯苯；脂族烴如己烷、2R1(1)環(huán)己烷或石油醚；卣化脂族經(jīng)如二氯甲烷、1，2-氯乙烷、氯仿或四氯化石友；醚如乙醚、二異丙醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇二曱醚或乙二醇二乙醚；酮如丙酮、2-丁酮或曱基異丁基酮；腈如乙腈、丙腈或節(jié)腈；酰胺如N，N-二曱基曱酰胺或六甲基磷酰三胺(HMPA);亞砜如二甲基亞砜；及這些的混合物。根據(jù)反應式2，本發(fā)明的酰胺化合物(l)還能夠在適合的溶劑中，如果必要在堿存在下，通過使由式(2)表示的胺化合物與由式(4)表示的羧酸卣化物反應來生產。反應式2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中Q、R4口I^與以上的那些相同，X表示卣原子。的惰性溶劑。如上所述，如果必要，可在堿存在下進4于反應。》威的實例包括堿金屬或堿土金屬氫氧化物如氫氧化鈉、氬氧化鉀或氫氧化鈣；堿金屬碳酸鹽或碳酸氬鹽如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀；石威金屬或石威土金屬乙酸鹽如乙酸鈉、乙酸鉀或乙酸鈣；^威金屬或^咸土金屬氬化物如氫化鈉、氫化鉀或氬化4丐；銨鹽如氫氧化銨、碳酸氫銨或乙酸銨；以及7k胺如三曱胺、三乙胺、N，N-二甲基苯胺、吡啶、4-(二甲氨基)吡啶、二氮雜-雙環(huán)-辛烷(DABCO)、二氮雜-雙環(huán)壬烯(DBN)或二氮雜-雙環(huán)十一碳烯(DBU)。反應中使用的試劑的量并不特別限定，但是酰胺化合物(2)的量優(yōu)選每摩爾羧酸化合物(3)或羧酸卣化物(4)0.8至5mo1,更優(yōu)選l至3mo1。在由反應式l表示的反應中，縮合劑的量典型地為每摩爾羧酸化合物(3)0.8至5mo1，更優(yōu)選l至3mo1。當在由反應式2表示的反應中使用堿時，堿的量典型地為每摩爾羧酸卣化物(4)0.8至5mo1，更優(yōu)選l至3mo1。反應溫度并不特別限定，但是典型地設置為-10°C至溶劑沸點。反應時間依賴于上述量或溫度而變化，但是典型地控制在5至10小時。請注意，在前述反應中使用的胺化合物(2)、羧酸化合物(3)和羧酸卣化物(4)均商購可得或能夠通過已知方法容易地制造。如此獲得的目標酰胺化合物(l),可通過經(jīng)由通常的分離如柱色譜或重結晶從反應混合物中分離而容易地精制。(II)生物膜去除劑(生物膜剝離劑)、生物膜形成抑制劑、殺菌劑如后述實驗例中所示，根據(jù)本發(fā)明的酰胺化合物(1)及其鹽能夠剝離或去除生物膜、抑制生物膜的形成，以及具有殺菌活性。具有這些性能，根據(jù)本發(fā)明的酰胺化合物(l)及其鹽可用作用于剝離或去除生物膜，或防止生物膜形成(生物膜去除劑或生物膜形成抑制劑)的組合物的有效成分，或用于殺菌組合物(殺菌劑)的組成的有效成分。根據(jù)本發(fā)明的酰胺化合物(l)及其鹽用作有效的生物膜去除劑或生物膜形成抑制劑，且其對于各種形成生物膜的細菌及由細菌形成的生物膜是有效的。細菌的范圍沒有限制，包括銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、牙周炎病原菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)。本發(fā)明的酰胺化合物(l)及其鹽對于銅綠假單胞菌(Pseudomonasaemginosa)、牙周炎病原菌和由這些細菌形成生物膜是特別有效的。'F支單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌特別有效的殺菌劑。因而，本發(fā)明提供含酰胺化合物(l)或其鹽作為有效成分的生物膜去除劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑(將生物膜去除劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑在下文中稱為"制劑")。本發(fā)明的制劑可為酰胺化合物(l)或其鹽本身，或為通過以下步驟制成的組合物將任意載體或添加劑與酰胺化合物(l)或其鹽混合，并根據(jù)用途用已知方法將該混合物加工成期望形狀。雖然它并不特別限定，但是本發(fā)明的形式包括固體產品如片劑、粉末、顆粒、藥丸、粉末漿料或膠嚢(硬膠嚢、軟膠嚢)；糊或凝膠產物如乳膏(cream)、軟膏或凝膠；以及液體產物如溶液、懸浮液或乳液、漿料、酏劑、噴霧劑或氣溶膠。只要所得制劑確保充分的生物膜去除效果、對于生物膜形成的抑制效果或殺菌活性，本發(fā)明的制劑中酰胺化合物(l)或其鹽的含量并不限定。換言之，為確保預期的生物膜去除效果，應將酰胺化合物(l)或其鹽的含量調整為每100重量％的制劑0.001至99重量％,優(yōu)選0.01至50重量％或0.05至10重量％。因而，本發(fā)明的制劑以確保生物膜去除效果、對于生物膜形成的抑制效果或殺菌活性的比例包含酰胺化合物(1)或其鹽，且在不損害生物膜去除效果、對于生物膜形成的抑制效果或殺菌效果的范圍內，其可根據(jù)制劑的用途或目的而包含其它組分。盡管它并不特別限定，但是其它組分的可能實例包括用于藥物制劑的通用載體如稀釋劑(diluentbases)、粘結劑、分散劑、粘度改進劑、潤滑劑、pH調節(jié)劑、增溶劑；和其它試劑如抗生素、抗微生物劑、殺菌劑、防腐劑、助洗劑、漂白劑、酶、螯合劑、消泡劑、著色劑(染料、顏料等)、軟化劑、保濕劑、表面活性劑、抗氧化劑、香沖+、矯味劑、氣味掩蔽劑和溶劑。除了酰胺化合物(l)或其鹽，本發(fā)明的制劑可包含抗微生物劑或殺菌劑，例如，四環(huán)系殺菌劑如鹽酸二曱胺四環(huán)素；陽離子殺菌劑如三氯生(triclosan)、十六烷基氯化吡^定鑰或苯索氯銨；或大環(huán)內酯類抗生素。菌效果或活性的化合物。所述化合物的實例包括堿性氨基酸如精氨酸、賴氨酸或組氨酸；包括以下的各種酶淀4分改性酶如法呢醇(farnesol)、轉葡糖苷酶或環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶(CGTase);和淀粉水解酶如a-淀粉酶。在生物膜已發(fā)展成有害作用或需要殺菌的任何地方，本發(fā)明的制劑是可適用的。本發(fā)明的制劑能夠用例如以下方式來^f吏用，乂人而去除沉積在工業(yè)領域、循環(huán)型浴缸等中的生物膜。將已加工為懸浮液、水分散性粉末或水溶性粉末的本發(fā)明的制劑，在目標設備的管道中循環(huán)，或噴射在設備的目標部分上。本發(fā)明的制劑還能夠采用供應至水槽的高濃度液體或固體制劑如片劑、粉末或粒劑的形式，以將在水中稀釋或溶解的去除劑施用至目標部分。此外，能夠將本發(fā)明的制劑加工成適合于口服給藥、腸胃外給藥或局部給藥的醫(yī)藥制劑。此外，如下所示，能夠將本發(fā)明的制劑加工成各種口腔衛(wèi)生產品如刷牙劑、口腔除臭劑、漱口液、牙齦用藥物、口香糖、含漱劑、人造牙齒或用于牙齒材料的清潔劑。本發(fā)明制劑的適合使用量依賴于目標對象或劑型而變化(特別是對于緩釋制劑它是不同的)，因此不能夠清楚地限定。然而，當用于防止或治療生物膜感染時，例如，本發(fā)明制劑的適合的每天劑量典型地為lng/mL至100mg/mL，優(yōu)選10ng/mL至10mg/mL,以絕對量的話，典型地為lng至500mg,基于本發(fā)明酰胺化合物(1)或其鹽的劑量(例如，對于人的總量為300mg)。(III)口腔用組合物本發(fā)明提供含生物膜去除劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑的口腔用組合物?；谝韵率聦嵾M行本發(fā)明含酰胺化合物(l)或其鹽作為有效成分的本發(fā)明的生物膜去除劑或生物膜形成抑制劑具有去除/抑制由牙周炎病原菌形成的生物膜的特別顯著的效果，以及含酰胺化合物(l)或其鹽作為有效成分的本發(fā)明的殺菌劑對于細菌具有特別顯著的殺菌活性。形成生物膜的牙周炎病原菌的實例包括牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)、一畐賽其斤i旦纟內菌(Tannerellaforsythensis)、ii線共生力文線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans)、中間普氏菌(prevotellaintermedia)、侵蝕艾肯菌(Eikenellacorrodens)、直腸彎曲菌(Campylobacterrectus)、具核梭桿菌(Fusobacteriumnucleatum)和齒祐密螺旋體(Treponemadenticola)。根據(jù)本發(fā)明的口腔用組合物典型地為專門用于口腔治療以防止或治療口腔內疾病如涉及病原菌的牙周炎的組合物。此組合物的實例包括刷牙劑如牙膏、刷牙粉、刷牙液或滲透性刷牙劑；以錠劑、片劑、液體、膠狀、橄欖型(oleasters)或膜形式的口腔除臭劑和漱口液；和以乳膏、軟膏或凝膠形式的牙齦用藥物。根據(jù)本發(fā)明的口腔用組合物還可為專門用于保養(yǎng)醫(yī)用口腔材料，如人造牙齒或其它牙齒材料以防止口腔內疾病的組合物。優(yōu)選調整口腔用組合物中生物膜去除劑、生物膜形成抑制劑或殺菌劑的比例，以使為去除劑、抑制劑或殺菌劑的有效成分的酰胺化合物(1)或其鹽的含量(總量)為每100重量％的組合物0.001至99重量％，優(yōu)選0.01至50重量％，更優(yōu)選0.05至10重量％。根據(jù)組合物的類型或形式，如需要，除了前述組分外，本發(fā)明的口腔用組合物可以在通常使用的范圍包含以下組分。研磨劑硅石粉磨料如硅膠、可沉降硅、火成性硅、水合硅酸、無水硅酸、鈦硅酸鹽、沸石、鋁硅酸鹽和鋯珪酸鹽；和磷酸二氫鈣、二水合磷酸氬鈣、無水磷酸氫鈣、焦磷酸鈣、正磷酸鎂、正磷酸鈣、氫氧化鋁、氧化鋁、輕質-友酸鈣、重質碳酸鈣、碳酸鎂、正磷酸鎂、硅酸鋯、不溶性偏磷酸鈉、不溶性偏磷酸鈣、氧化鈦和合成樹脂研磨劑。這些研磨劑可單獨或組合使用。當31入此研磨劑(如在牙膏中)時，該量并不特別限定，但優(yōu)選每100重量％的口腔用組合物為3至80重量％,更優(yōu)選10至50重量％。濕潤劑和粘稠劑多元醇如甘油、濃縮甘油、雙甘油、乙二醇、雙丙甘醇、聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇或l,3-丁二醇；和4唐醇如木糖醇、麥芽糖醇或乳醇。這些濕潤劑和粘稠劑可單獨或組合使用。粘結劑藻酸鹽及其書f生物如藻酸、藻酸鈉、丙二醇藻酸酯、含4丐藻酸鈉、藻酸鉀、藻酸鈣、藻酸銨；膠如角叉菜膠(主要是i、X和k)、黃原膠、黃蓍膠、刺梧桐樹膠、阿拉伯樹膠、刺槐豆膠或瓜耳膠；纖維素如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、纖維素乙酸酯或羥乙基纖維素鈉；明膠、瓊脂、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉、羧乙烯基聚合物、聚乙烯吡咯烷酮、卡波(carbopol)、石圭月交、4呂石圭月交(aluminiumsilicagel)牙口土曾津占'1"生《圭(thickeningnaturesilica)。這些粘結劑可單獨或組合使用。當引入此粘結劑(如在牙膏中)時，該量并不特別限定，但優(yōu)選每100重量％的口腔用組合物為0.1至10重量％。發(fā)泡劑十二烷基硫酸鈉、月桂?；“彼徕c、烷基磺基琥珀酸鈉(alkylsulfomonosodiumsuccinate)、沖宗沖閭油月旨肪酸單甘油石風4內(palm-oil-fatty-acidmono-glycerolsulfonesodium)、a-烯烴石風鈉、N-丙烯?；被崛鏝-丙烯酰基谷氨酸、2-烷基-N-羧甲基-N-羥乙基咪唑啉甜菜堿、麥芽糖醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、脂肪酸二乙醇酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油或聚氧乙烯脂肪酸酯。這些發(fā)泡劑可單獨或組合使用。表面活性劑作為表面活性劑，陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、非離子表面活性劑和兩性表面活性劑均是可使用的。陰離子表面活性劑的實例包括十二烷基硫酸鈉、十四烷基硫酸鈉、N-月桂?；“彼徕c鹽、N-肉豆蔻?；“彼徕c鹽、十二烷基苯磺酸鈉、氫化椰子脂酸單甘油酯硫酸氫鈉(hydrogenationcoconutfattyacidmonoglyceridemono-sodiumsulfate),月桂基石黃基硫酸鈉、a-烯烴石黃酸鈉、N-丙烯?；劝彼猁}如N-棕櫚酰基谷氨酸鈉，和N-丙烯?；ＪS酸鹽如N-曱基-N-丙烯酰基?；撬徕c。非離子表面活性劑的實例包括蔗糖脂肪酸酯類如蔗糖脂肪酸酯或麥芽糖脂肪酸酯，糖醇脂肪酸酯如麥芽糖醇脂肪酸酯和內半縮醛脂肪酸酯，烷基醇酰胺，聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯如聚氧乙烯山梨糖醇單硬脂酸酯，聚氧乙烯脂肪酸酯如聚氧乙烯氫化蓖麻油，脂肪酸乙醇酰胺如月桂酸單-或雙-乙醇酰胺，失水山梨糖醇脂肪酸酯，聚氧乙烯高級醇醚，聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物，聚氧乙烯聚氧丙烯脂肪酸酯，聚甘油脂肪酸酯和普盧蘭尼克(Pluronic)。兩性表面活性劑的實例包括2-烷基-N-羧甲基-N-羥乙基咪唑啉甜菜堿，N-烷基二氨基乙基甘氨酸如N-十二烷基二氨基乙基甘氨酸或N-十四烷基二氨基乙基甘氨酸，以及N-烷基-l-羥乙基咪唑啉甜菜堿鈉。這些表面活性劑可以單獨或組合〗吏用。甜味劑糖精鈉、天冬甜素、卡哈苡苷、甜菊提取物(steviaextract)、對甲氧基肉桂醛、新橙皮苷二氫查耳酮、紫蘇亭、甘草甜素和索馬甜(thaumatin)。這些甜味劑可單獨或組合使用。防腐劑對羥基苯甲酸酯如鞋苯甲酸曱酯、羥苯甲酸乙酯、羥苯甲酸丙酯或羥苯甲酸丁酯；苯曱酸鈉、苯氧基乙醇和烷基二氨基乙基甘氨酸鹽酸鹽。這些防腐劑可單獨或組合使用。香料組分l-薄荷醇、茴香腦、薄荷酮、桉樹腦、宇烯、香芽酮、水楊酸曱酯、丁酸乙酯、丁子香酚、百里酚、正癸醇、香茅醇、a-松油醇、香茅醇乙酸酯、芳樟醇、乙基芳樟醇、香草醛、薄荷、肉桂醛和反-2-己烯醛。這些香料組分可單獨或組合使用。請注意，這些組分可為純化產品，或可為含這些組分的精油的粗產品(例如，檸檬油、橙油、鼠尾草油、迷迭香油、山扁豆和肉桂油、多香果油、肉桂葉油、紫蘇子油、冬青油、丁子香的油或桉樹油)。此外，除了前述的香料組分外，可使用其它組分或精油如脂族醇或其酯、薛烯碳氬化物(terpenecarbonhydride)、苯酚醚、醛、酮或內酯，只要不損害本發(fā)明的效果即可。這些香料組分的量優(yōu)選每100重量％的全部口腔用組合物為0.02至2重量％。抗微生物組分抗菌金屬如銀、銅、鋅或其具有低水溶性的金屬鹽(如，氧化銀、氯化銀、碳酸銀、磷酸銀、氫氧化銅、葡糖酸銅、氧化鋅、檸檬酸鋅、硬脂酸鋅和三氯酚鋅(zinctrichlorophenate)、氫氧化鋅、草酸鋅、磷酸鋅)、葉綠素銅、十六烷基氯化吡啶鎿、苯4L氣4妄(benzalkoniumchloride)、三氣生、曰本Y扁^白石克酉事(hinokithiol)、溶菌酶氯化物。防腐組分非離子表面活性劑如對羥基苯甲酸酯、苯曱酸鈉或三氯生；陽離子防腐劑如苯索氯銨或十六烷基氯化吡啶鎗。口腔用有效成分溶菌酶氯化物、氟化鈉、氟化鉀、單氟磷酸鈉、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、日本偏柏;克醇、抗壞血酸、抗壞血酸鹽、氯己定鹽(chlorhexidinesalts)、十六烷基氯^[匕吡P定鑰、苯扎氯銨、苯索氯銨、紅沒藥醇、三氯生、異丙基曱酚、生育酚醋酸鹽、epsilon(e)誦氛基己酸、凝血酉臾、#至基4呂尿囊素(aluminiumhydroxylallantoin)、乳酸鋁、二氫膽甾醇、甘草亭酸、甘草酸鹽、葉綠素銅鹽、氯化鈉、愈創(chuàng)木奧磺酸鹽、葡聚糖酶、鹽酸吡,素、凝血酸、氯化鈉、維他命C和E、各種酶(如，葡聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶、變構酶(mutanase)或果膠酶)、酒石控制劑(tartarcontrolagents)如甘菊環(huán)或多磷酸鹽，尼古丁去除劑如聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮，以及感覺過敏預防劑如乳酸鋁或硝酸鉀。這些口腔用有效成分可單獨或組合使用。j^它^力口齊J顏料如食品藍l、氧化鈦、抗氧化劑如二丁基曱酚和調味物質如茶葉干餾液或谷氨酸鈉。本發(fā)明的口腔用組合物能夠通過任一常用的步驟來制造。在出售以使消費者將其應用至目標部分之前，通過在鋁管、層壓管、玻璃蒸發(fā)管、塑料管、塑料瓶、氣溶膠容器等中包裝，完成例如以牙膏形式的口腔用組合物的生產。本發(fā)明的口腔用組合物防止口中通過牙周炎病原菌的生物膜形成，及去除形成的口腔內生物膜，由此有效地防止細菌群落的產生。此外，通過在去除劑中引入抗微生物劑，改進的抗微生物效果將進一步提高口腔用組合物的質量。因此，本發(fā)明的口腔用組合物對于防止或治療牙周炎和牙周病(例如，齒齦炎)是有效的。此外，本發(fā)明的口腔用組合物對于防止或去除由于牙周炎或牙周病(例如，齒齦炎)導致的口臭是有效的。實施例以下描述才艮據(jù)本發(fā)明的酰胺化合物(1)的生產例和實驗例以更具體地解釋本發(fā)明。然而，本發(fā)明并不限于這些實施例。生產例1N-(吡咯烷-3-基)十二酰胺(la-l)的生產將0.22g(lmmol)的十二酰氯和0.18g(2.1mmol)的3-氨基吡咯烷溶解于10ml的二氯甲烷中。攪拌溶液同時用冰冷卻12小時。在減壓下濃縮反應液。將所得殘渣用乙酸乙酯進行萃取。獲得的乙酸乙酯層用稀鹽酸和飽和食鹽洗滌，用硫酸鎂干燥，并在減壓下濃縮。將所得殘渣用硅膠色譜法(展開溶劑己烷/乙酸乙酯=3/7)純化，以獲得由下式表示的N-(吡咯烷-3-基)十二酰胺(化合物la-l)。產量0.15g(0.62mmo1)產率62%iH國NMR(CDCl3,500MHz):0.88ppm(t,3H)，1.29ppm(m，12H),1.65ppm(m，2H)，1.88ppm(m,1H)，2.10ppm(m，1H),2.26ppm(m,2H)，3.21ppm(m,1H),3.49ppm(m,1H),3.65ppm(m，3H),8.59ppm(br，1H)。生產例3N-(哌啶-4-基)十二酰胺(lb-l)的生產除了使用4-氨基哌啶代替3-氨基吡咯烷之外，進行與生產產量0.18g(0.69mmo1)產率69%^-NMR(CDCl3,500MHz):0.90ppm(t,3H),1.28ppm(m,16H),1.64ppm(t，2H)，1.76ppm(m，1H)，2.00ppm(br,1H),2.13ppm(m,1H),2.27ppm(t，2H)，3.24ppm(m，1H)，3.51ppm(m,1H),3.67ppm(m,3H)。生產例2N-(吡咯烷-3-基)癸酰胺(化合物la-2)的生產除了使用癸酰氯代替十二酰氯之外，進行與生產例l相同的步驟，以獲得由下式表示的N-(吡咯烷-3-基)癸酰胺(化合物la國2)。嚴量0.16g(0.64mmo1)產率64%iH-NMR(CDCl3，500MHz):0.87ppm(t，3H),1.25ppm(m,14H)，1.59ppm(m，2H)，1.82ppm(m,2H),2.31ppm(m，2H)，2.67ppm(t1H)，2.90ppm(m，1H)，3.06ppm(m,1H)，3.81ppm(m，1H)，4.50ppm(m，1H),8.00ppm(br,1H)。生產例5N-(吡咯烷-l-基)十二酰胺(化合物lc-l)的生產例1相同的步驟，以獲得由下式表示的N-(哌啶-4-基)十二酰胺(lb陽l)。(lb-l)產量0.16g(0.56mmo1)產率56%^-NMR(CDCl3，500MHz):0.88ppm(t，3H)，1.27ppm(m,18H)，1.59ppm(m,2H)，1.86ppm(m，2H),2.30ppm(t，2H)，2.68ppm(t,1H)，2.89ppm(m，1H)，3.05ppm(t，1H)，3.71ppm(d,1H)，4.51ppm(d，1H)。生產例4N-(哌啶-4-基)癸酰胺nb-2〗的生產除了使用4-氨基哌啶代替3-氨基吡咯烷，使用癸酰氯代替十二酰氯之外，進行與生產例l相同的步驟，以獲得由下式表示的N-(哌咬-4-基)癸酰胺(lb-2)。除了使用l-氨基吡咯烷代替3-氨基吡咯烷之外，進行與生產例1相同的步驟，以獲得由下式表示的N-(吡咯烷-1-基)十二酰胺(化合物lc-l)。產量0.21g(0.78mmo1)產率78%工H畫NMR(CDCl3，500MHz):0.88ppm(t，3H)，1.28ppm(m，16H)，1.62ppm(m,2H)，1.88ppm(m，5H)，2.06ppm(m,1H)，2.47ppm(m,2H),2.91ppm(t，2H),6.11ppm(br,1H)。生產例6N-(吡咯烷-l-基)-3-羥基十二酰胺(化合物lc-2)的生產(1)3-羥基癸酸乙酯的合成將7.8g由鹽酸活化的鋅和25ml苯放置在引入迪安-斯達克(DeanandStark)裝置的循環(huán)設備中。使溶液循環(huán)同時加熱。向所得溶液中，滴入15.6g(100mmol)的癸醛和18.4g(110mmol)的溴代乙酸乙酯的混合溶液。六小時后，將溶液冷卻至室溫。加入50o/o(w/w)硫酸以分離溶劑，并分離有機層。該有機層用硫酸鎂干燥，并在減壓下濃縮。所得殘渣通過硅膠色譜法(展開溶劑己烷/乙酸乙酯=2/8)純化。結果，獲得3-羥基癸酸乙酯。產量30.6g(93mmo1)產率93%工H畫NMR(CDCl3,500MHz):0.91ppm(t，3H)，1.28ppm(m,17H),1.44ppm(m，2H)，2.43ppm(m，2H)，4.02ppm(m，1H)，4.18ppm(q,2H)。(2)3-羥基癸酸的生產將l6.5g。0mmol)在步驟(l)中獲得的!3-羥基癸酸乙酯和10.0g(250mmol)的氬氧化鋰溶解于50mL四氬呋喃和100mL水的混合溶液中，將該溶液在室溫下攪拌12小時。反應液通過稀鹽酸中和，并在減壓下濃縮。將殘渣用乙酸乙酯進行萃取。將獲得的乙酸乙酯層用飽和食鹽洗滌，用硫酸鎂干燥，并在減壓下濃縮。所得殘渣通過硅膠色譜法(展開溶劑乙酸乙酯/曱醇=4/6)純化，以獲得3-羥基癸酸(產率=90%)。產量12.2g(45mmo1)產率90%iH-NMR(CDCl3，500MHz):0.86ppm(t，3H),1.25ppm(m,14H),1.33ppm(m,2H)，2.31ppm(m，2H)，3.79ppm(m，1H)。(3)N-(吡咯烷-l-基)-3-羥基十二酰胺的生產將0.24g(l.lmmol)在步驟(2)中獲得的3-羥基十二酸和0.09g(lmmol)的1-氨基吡咯烷溶解于10ml二氯曱烷中。將0.13g(1.1mmol)的二曱氨基吡咬和0.15g(1.2mmol)的二異丙基乙胺添加至溶液中。此外，力口入0.21g(1.1mmol)的l-乙基-3-二曱氨基丙基碳二亞胺。將混合物在室溫下攪拌12小時，并在減壓下濃縮。所得殘渣用乙酸乙酯進行萃取。將獲得的乙酸乙酯層用飽和食鹽洗滌，用硫酸鎂干燥，并在減壓下濃縮。獲得的殘渣通過硅膠色譜法(展開溶劑乙酸乙酯/曱醇=8/2)純化，以獲得由下式表示的N-(吡咯烷-l-基)-3-羥基十二酰胺(化合物lc-2)。0OH產量0.01g(0.35mmo1)產率35%產量0.24g(0.84mmo1)產率84%^-NMR(CDCl3,500MHz):0.87ppm(t,3H)，1.31ppm(m，17H)，1.55ppm(m，7H)，2.06ppm(dt,d=440Hz，2H),2.48ppm(dm，d=440Hz，2H)，2.67ppm(dm,d=400Hz，2H)，6.32ppm(br,1H)。實驗例l用于對銅綠假單胞菌的生物膜形成抑制效果的評價測試用圖l中所示的流式細胞系統(tǒng)，對于在生產例l、3、5、6和7中生產的各酰胺化合物(化合物la-l、lb-l、lc-l、lc-2、ld-l)單胞菌的生物膜形成的抑制效果。比粉b物1丄H誦NMR(CDCl3,500MHz):0.88ppm(t,3H)，1.26ppm(m，14H),1.43ppm(m,2H),1.58ppm(m,1H)，2.24ppm(m,3H)，2.55ppm(m,2H)，3.81ppm(m,2H),3.86ppm(m,2H)，4.04ppm(m,1H)。生產例7N-(哌啶-l-基)十二酰胺(化合物ld-l)的生產除了使用l-氨基哌啶代替3-氨基吡咯烷之外，進行與生產例1相同的步驟，以獲得由下式表示的N-(哌啶-1-基)十二酰胺(ld隱l)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>比較化合物2比較化合物3流式細胞系統(tǒng)(圖l)將培養(yǎng)基瓶(l)、蠕動泵(2)、玻璃槽(4)和廢液瓶(5)經(jīng)由硅管(6)連接，以使用蠕動泵(2)將培養(yǎng)基(9)從培養(yǎng)基瓶(1)供應至玻璃槽(4)。該系統(tǒng)包括在蠕動泵(2)與開關(7a)之間，用以去除夾帶的氣體的空氣去除部(3)。在流式細胞系統(tǒng)中的所有器具使用y射線或高壓滅菌器來滅菌。如以下具體地描述，用以下方式4企測各酰胺化合物對于生物膜形成的抑制效果。將細菌在玻璃槽(4)中培養(yǎng)以在該槽的內壁上生長生物膜，將含一個酰胺化合物的測試液施涂至該生物膜。然后使用熒光共焦顯微鏡(LeicaTCSSP2:Leica的產品)觀察該生物膜的狀態(tài)以評價對于化合物的生物膜形成的抑制效果。材料細菌使用電穿孔(electroportion)法通過將pTdk-LVAgfp質粒插入銅綠假單胞菌PAO1-菌抹中來制備細菌，以轉化銅綠假單胞菌PA01-菌林來表達綠色熒光蛋白(下文中稱為"gfp表達PA01-菌抹"X參見TeresaR.等人，AppliedandEnvironmentalMicrobiology,Apr.2001，p.1865-1873)。培養(yǎng)基將30mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基用于預溫育，將0.3mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基用于主要培養(yǎng)。含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基通過將200pg/mL羧節(jié)青霉素添加至含以下物質的水溶液中來制備30mM葡萄糖或0.3mM的葡萄糖、15mM的硫酸銨、33.7mM的二水磷酸氫二鈉、22.1mM的磷酸二氫4甲、51.7mM的氯化鈉、0.47mM的氯化4美、0.08mM的氯化4丐和以下0.1%痕量金屬溶液。痕量金屬溶液含1.16mM二水合硫酸鉤、0.72mM七水合硫酸鐵、0.08mM單水合硫酸錳、0.08mM五水合硫酸銅、0.07mM七水合硫酸鋅、0.04mM七水合硫酸鈷、0.04mM單水合高錳酸鈉和0.08mM硼酸的水;容液細菌懸浮液將gfp表達PAOl-菌林接種在30mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基中，并在恒溫槽中在37。C下進行搖瓶培養(yǎng)一夜。將獲得的過夜培養(yǎng)液用3OmM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基稀釋至OD590=0.1。測試液和對照測試液測試液測試液通過以下來制備在二曱基亞砜(DMSO)中溶解100-250pM的根據(jù)生產例l、3和5至7的各化合物la-l、lb-l、lc-l、lc-2或ld-l以及100-250]LiM的作為比較例的比較化合物l至3,將所得的DMSO溶液供應至0.3mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基，以使各化合物的濃度為0.1%(v/v)。對照測試液4吏用不含所述化合物的DMSO作為對照測試液。測^式方法用70體積％的含水乙醇填充流式細胞系統(tǒng)，并使其靜置至少12小時以對該系統(tǒng)殺菌。然后，將已通過膜過濾器(8a)過濾的空氣使用蠕動泵(2)供應至流式細胞系統(tǒng)內以干燥該系統(tǒng)。此后，用0.3mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基充入該系統(tǒng)。將500iiL的細菌懸浮液從上表面注入玻璃槽(4)內，該玻璃槽通過關閉三向供水栓(7a、7b)來密封。使如此的槽在室溫下靜置l小時。在靜態(tài)培養(yǎng)后，開啟兩個三向供水栓(7a、7b),從而以200pL每分鐘的流速供應各測試液和對照測試液。用熒光共焦顯樣"竟，從上三維觀察粘附至玻璃槽內壁的由銅綠假單胞菌(gfp表達PA01-菌林)的生物膜形成(沉積)的過程，以觀察隨著時間(1小時、48小時、60小時、72小時和84小時后)的變化。請注意將測試液和對照測試液用新鮮液體每36小時替換。圖2至8顯示在用于對照測試液(對照測試)的實-驗中的生物膜條件與用于測試液(化合物la-l、lb-l、lc-l、lc-2、ld-l或比較化合物1至3)的實驗中的生物膜條件之間的比較結果。圖2至8顯示在各實驗中粘附至玻璃槽內壁的銅綠假單胞菌(gfp表達PAO1-菌抹)的三維條件，具有玻璃槽內壁的前視圖和玻璃槽的橫截面圖(垂直和水平)。根據(jù)這些結果，在使用對照測試液的對照測試中，觀察到銅綠假單胞菌(gfp表達PAO1-菌株)形成巨大的厚生物膜；然而在使用含化合物la-l、lb-l、lc-l、lc-2或ld-l的測試液的測試中，沒有觀察到此生物膜的形成。同時，在使用包含比較化合物l、2或3的測試液的測試中，如在對照測試中》見察到巨大的厚生物膜。這顯示在生產例l、3和5至7中獲得的化合物la-l、lb-l、lc-l、1c-2和1d-1能夠抑制由銅綠假單胞菌的生物膜形成。實驗例2用于對牙周炎病原菌的生物膜形成的抑制效果的評價測試如實驗例l，使用圖l的流式細胞系統(tǒng)，對于在生產例l、3、5和6中生產的各酰胺化合物(化合物la-l、lb-l、lc-l、lc-2),評價對由牙周炎病原菌的生物膜形成的抑制效果。材料細菌<吏用牙周炎病原菌牙齒艮卟啉單力包菌(Torphvromonasgingivalis)381-菌才朱(臨床菌才朱)。培養(yǎng)基使用含5pg/L氯化血紅素和1pg/L甲萘醌的GAM培養(yǎng)基。細菌懸浮液將381-菌林接種在GAM培養(yǎng)基上，并培養(yǎng)直至穩(wěn)定期(OD55。=1.8)。然后通過含上述物質的新鮮GAM培養(yǎng)基將培養(yǎng)基稀釋20倍。測試液和對照測試液測試液測試液通過以下來制備在二曱基亞砜(DMSO)中溶解lOOiaM的才艮據(jù)生產例l、3、5和6的各化合物la-l、lb-l、lc-l或1c-2和100pM的作為比較例的比較化合物1和2，并將所得的DMSO溶液供應至上述細菌懸浮液，以使各化合物的濃度為0.1%(v/v)?！酚谡諟y^式液4吏用不含所述化合物的DMSO作為對照測試液。測j式方法用不銹槽(3x7x120mm)替換流式細胞系統(tǒng)的玻璃槽(4)(參見圖l),在該槽中放置10個羥基磷灰石(HA)圓盤(直徑6mm，厚度lmm)。將該HA圓盤進4亍唾液處理一夜。將各測試液和對照測試液以8mL/min的流速在系統(tǒng)中循環(huán)14天。i青注意測試液和對照測試液用新鮮液體每兩天-,換。在培養(yǎng)后，將HA圓盤浸入300pL無菌蒸餾水中，并通過超聲波在4。C下處理30分鐘。將在HA圓盤中形成的生物膜剝離并懸浮在蒸餾水中。然后，用吸收比色計(C07500比色計，F(xiàn)unakoshi的產品)測量1OOpL懸浮液的濁度(測量波長=55Onm)。除去最小和最大值，基于所得的OD值，得到平均OD。此外，以與對照平均OD值相同的方式，得到用于對照測試液的濁度的平均值。通過下式得到生物膜形成抑制率(抑制率)。生物膜形成抑制率(％)={(平均OD值)/(平均比較OD值}x100表1顯示該4直。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>根據(jù)結果，經(jīng)檢測的化合物la-l、lb-l、lc-l和lc-2能夠抑制由牙周炎病原菌引起的生物膜形成。實驗例3用于對銅綠假單胞菌的生物膜去除效果的評價測試用圖l的流式細胞系統(tǒng)，對于在生產例l、3、5和6中生產的各酰胺化合物(化合物la-l、lb-l、lc-l、lc-2)以及作為比較例的比較化合物1至3，評價對由銅綠假單胞菌形成的生物膜的去除效果。如下進行生物膜去除效果的評價。在流式細胞系統(tǒng)的玻璃槽(4)中細菌培養(yǎng)以在內槽壁中生長生物膜后，將含一種酰胺化合物的測試液施涂至生物膜。然后用熒光共焦顯微鏡(LeicaTCSSP2)觀察生物膜的狀態(tài)。材料細菌如實驗例l，使用gfp表達PA01-菌抹。對于培養(yǎng)基，使用與實驗例1的那些一樣的含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基、痕量金屬溶液和細菌懸浮液。測試液和對照測試液測試液測試液通過以下來制備在二曱基亞砜(DMSO)中，溶解100jiM的根據(jù)生產例l、3、5和6的各化合物la-l、lb-l、lc-l和將所得的DMSO溶液供應至0.3mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基，以使各化合物的濃度為0.1%(v/v)。只于照測^式液使用不含所述化合物的DMSO作為對照測試液。測:逸方法將流式細胞系統(tǒng)用含水乙醇(70體積％)填充，并使其靜置至少12小時以對該系統(tǒng)殺菌。然后，將已通過膜過濾器(8a)過濾的空氣使用蠕動泵(2)供應至流式細胞系統(tǒng)內以干燥該系統(tǒng)。此后，該系統(tǒng)用0.3mM含葡萄糖的FAB培養(yǎng)基填充。將500(iL的細菌懸浮液從上表面注入至玻璃槽(4)內，該玻璃槽通過關閉三向供水栓(7a、7b)來密封。將如此的槽在室溫下靜置l小時。在靜態(tài)培養(yǎng)后，開啟兩個三向供水栓(7a、7b)，從而以200pL每分鐘的流速供應各測試液和對照測試液。用熒光共焦顯微鏡，從上三維觀察粘附至玻璃槽內壁的由銅綠假單胞菌(gfp表達PA01-菌林)的生物膜形成(沉積)的過程，以觀察隨著時間(3天、4天、5天、6天、7天和10天后)的變4匕。_清注意測試液和對照測試液用新鮮液體每36小時替換。圖9顯示在用于對照測試液(對照測試)的實驗中的生物膜狀態(tài)。圖9中的各圖片顯示粘附至玻璃槽內壁的由銅綠假單胞菌(gfp表達PAO1-菌抹)形成的生物膜的三維狀態(tài)，用玻璃槽內壁的前視圖和玻璃槽的截面面圖(垂直和水平)。圖10至13顯示在分別用于以下不同測試液的實驗中的生物膜狀態(tài)化合物la-l、lb-l、lc-l和lc-2。圖14至16顯示在分別用于含比4交化合物1至3的測試液的實驗中的生物膜狀態(tài)。根據(jù)這些結果，在使用對照測試液的對照測試中，觀察到銅綠假單胞菌(gfp表達PAO1-菌抹)形成巨大的厚生物膜，該生物膜在十天培養(yǎng)后甚至生長更大。相反，在使用含化合物la-l、lb-l、lc-l或lc-2的測試液的測試中，乂見察到隨著時間沉積的生物膜的逐漸消失(圖10至13)。此外，還目視觀察到從槽壁沉積的生物膜的逐漸脫落以及在槽中生物膜脫落的流動片。在含化合物lc-l和lc-2的測試液中，在它再減少直至消失之前，生物膜首先減少然后在六天培養(yǎng)后又增加(圖12和13)。這顯示生物膜形成和去除交替發(fā)生。同時，在使用含比較化合物1至3的測試液的測試中，沒有觀察到生物膜的此種消失(圖14至16)。此結果顯示在生產例l、3和5和6中制備的化合物la-l、lb-l、lc-l和lc-2對于剝離或去除沉積生物膜是有效的。實驗例4對于殺菌效果的評價測試根據(jù)"CLSI(M7畫A7)2006"的肉湯稀釋法(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,M7-A7，MethodsforDilutionAntimicrobialSusceptibilityTestsforBacteriaThatGrowAerobically;ApprovedStandard-SeventhEdition,2006),沖企須'j以下測試化合物對于銅綠假單胞菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌活性。測試化合物(1)羧千青霉素(Carbenicillin)(CBPC)(2)頭孢他啶(Ceftazidime)(CAZ)(3)妥布霉素(Tobramycin)(TOB)(4)氮紅霉素(Azithromycin)(AZM)("化合物la-l的鹽酸鹽(生產例l)(6)化合物la-2的鹽酸鹽(生產例2)(7)化合物lb-l的鹽酸鹽(生產例3)(8)化合物lb-2的鹽酸鹽(生產例4)請注意，(1)至(4)是已知的抗生素。"^平<介的纟田菌(由來自TokvoUniversityResearchCenterforAdvancedScienceandTechnology的教授Dr.Suga提供)4同纟錄作支單月包菌(Pseudomonasaeruginosa)PAOl4同纟錄^支單月包菌(Pseudomonasaeruginosa)ATCC27853大腸桿菌(Escherichiacoli)ATCC25922金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC29213耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(StaphylococcusaureusMethicillinresistant)(MRSA)ATCC43300測試方法將上述各細菌接種在TSB培養(yǎng)基中(BactoTSB肉湯、BD的產品)以在37。C下過夜培養(yǎng)。將培養(yǎng)液施涂至TSB瓊脂々反以培養(yǎng)約20小時從而形成菌落。從瓊脂板取三至五個菌落，將它們的平均菌落接種在4ml的TSB培養(yǎng)基中。將菌落在35。C下培養(yǎng)直至微生物的數(shù)量為1x1()8至2x108CFU/mL。通過測量隨著時間培養(yǎng)液在590nm處的吸光度的變化算出隨時間的微生物的數(shù)量。當濁度為等同于0.5個馬克法蘭標準(McFarlandstandard)時，判斷微生物的數(shù)量達到目標水平-lxl()S至2x108CFU/mL。將如此獲得的桿菌(bacillus)培養(yǎng)液在15分鐘內稀釋10倍，并將5^L部分接種在評價用96孔微板的各孔中。此96孔微板是具有U形底的經(jīng)滅菌的96孔微板(Falcon35-3918:BD的產品)，各孔用MH培養(yǎng)基(BBLMH肉湯BD產品)的lOOitiL部分填充。在真菌培養(yǎng)液接種后15分鐘內，將測試化合物以2倍階梯稀釋的方式供應至孔內。然后在37。C下進行培養(yǎng)18小時。如下測定MIC。"S(Susceptible)"是指與當不使用測試液相比，引起在孔底部中沉積的聚集體的直徑降低80%以上的濃度。"R(Resistant)"是指引起直徑降低低于80。/。的濃度。降低為目視觀察的。"I(Intermediate)"是指不能夠目視檢測的濃度。測試結果表2示出了已知化合物(1)至(4)(CBPC、CAZ、TOB、AZM)的殺菌性能的測量結果。表2的右欄顯示了它們的殺菌活性的公開測量結果，其根據(jù)"CLSI(M100-S16)2006"(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,M100-S16,PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;SixteenthInformationalSupplement,2006)液體稀釋方法。表2測試結果<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>因為此數(shù)據(jù)與由上述測試給出的數(shù)據(jù)一致，確認上述測試合適地評價了化合物(1)至(4)的殺菌活性。表3顯示了對于本發(fā)明的各化合物la-l、la-2、lb-l和lb-2的鹽酸鹽的結果。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>根據(jù)表3，這些化合物具有與現(xiàn)存抗生素可比的抗菌活性。發(fā)明的效果本發(fā)明的化合物能夠抑制生物膜形成及去除形成的生物膜，由此解決了通過由微生物形成的生物膜引起的各種缺陷。具有抑制由牙周炎病原菌或銅綠假單胞菌的生物膜形成，還有剝離或去除已形成的生物膜的特別的特征，本發(fā)明的化合物可用于各種用途。本發(fā)明的化合物對于治療難治療的生物膜感染是有效的。具有此特征，本發(fā)明的化合物將極大地有助于完成生物膜感染的治愈。例如，在天然環(huán)境中任何地方存在的銅綠假單胞菌，需要少量的有機物和濕氣，從而繁殖和生長成生物膜。因此，在水管或水儲存槽中，銅綠假單胞菌經(jīng)常引起院內感染(in-hospitalinfections)、替孩吏生物病(substitutedmicrobism)、才幾會感染(opportunisticinfection)和衛(wèi)生缺陷(sanitarydefects)。此外，牙周炎病原菌形成稱為牙菌斑的生物膜，其引起口臭或口腔內疾病如牙周炎或牙槽膿溢。已公知牙菌斑的去除對于口腔內衛(wèi)生或對于治療口腔內疾病是重要的。然而，如上所述，生物膜在一定程度上是耐藥物如殺菌劑的?？紤]到此問題，本發(fā)明的生物膜去除劑或生物膜形成抑制劑抑制在醫(yī)院設備或私宅中的管或水儲存槽中通過銅綠假單胞菌的生物膜的形成，還促進沉積生物膜的去除，由此防止由生物膜引起的住院感染或其它各種缺陷，并改進環(huán)境衛(wèi)生。本發(fā)明的生物膜去除劑或生物膜形成抑制劑還能抑制由牙周炎病原菌的生物膜的形成以及去除由牙周炎病原菌形成的生物膜，該生物膜在牙齒、牙齦或口腔內牙齒材料上可發(fā)現(xiàn)，由此有效地防止或治療牙齦疾病如牙周炎或牙槽膿溢，口腔內病如口腔炎以及減少口臭。本發(fā)明的化合物，特別是含由式(Q1)表示的取代基Q的由通式(l)表示的化合物或其鹽，具有對于包括以下的各種細菌的優(yōu)異的殺菌活性銅綠假單胞菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。因此，此化合物用于殺菌劑。權利要求1.由通式(1)表示的酰胺化合物或其鹽其中，R1是氫原子或羥基，R2是C5-12烷基，Q是由式(Q1)或(Q2)表示的取代基，其中n和m是0或1。2.根據(jù)權利要求l所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q1)表示的取代基，其中m是0。3.根據(jù)權利要求l所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q1)表示的取代基，其中m是l。4.根據(jù)權利要求l所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q2)表示的取代基，其中n是0。5.根據(jù)權利要求l所述的酰胺化合物或其鹽，其中，在通式(l)中，Q是由式(Q2)表示的取代基，其中n是l。6.根據(jù)權利要求l所述的酰胺化合物或其鹽，其中由通式(l)表示的酰胺化合物是選自由以下組成的組的至少一種化合物N-(吡咯烷-3-基)癸酰胺、N-(吡咯烷-3-基)十二酰胺、其中，Ri是氫原子或羥基，112是(:5.12烷基，Q是由式(Q1)或(Q2)表示的取代基，(1.由通式(l)表示的酰胺化合物或其鹽:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>N-(吡咯烷-4-基)癸酰胺、N-(吡咯烷-4-基)十二酰胺、N-(吡咯烷-l-基)十二酰胺、N-(吡咯烷-l-基)-3-羥基十二酰胺、N-(哌啶-l-基)十二酰胺。7.—種生物膜去除劑，其包含根據(jù)權利要求l-6任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。8.根據(jù)權利要求7所述的生物膜去除劑，其中所述生物膜是由銅綠假單胞菌或牙周炎病原菌形成的膜。9.一種生物膜形成抑制劑，其包含根據(jù)權利要求l-6任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。10.根據(jù)權利要求9所述的生物膜形成抑制劑，其中所述生物膜是由銅綠假單胞菌或牙周炎病原菌形成的膜。11.一種殺菌劑，其包含根據(jù)權利要求l-6任一項所述的酰胺化合物或其鹽作為有效成分。12.根據(jù)權利要求ll所述的殺菌劑，其中所述酰胺化合物由通式(l)表示，在所述通式(l)中，Q是由式(Q1)表示的取代基，其中m是0或l。13.根據(jù)權利要求ll所述的殺菌劑，其中所述酰胺化合物是選自由以下組成的組的至少一種化合物N-(吡咯烷-3-基)癸酰胺、N-(吡咯烷-3-基)十二酰胺、N-(吡咯烷-4-基)癸酰胺，以及N-(吡咯烷-4-基)十二酰胺。14.一種口腔用組合物，其包含根據(jù)權利要求8所述的生物膜去除劑、根據(jù)權利要求10所述的生物膜形成抑制劑或根據(jù)權利要求ll所述的殺菌劑，所述生物膜去除劑用于去除由牙周炎病原菌形成的生物膜，所述生物膜形成抑制劑用于抑制由牙周炎病原菌形成的生物膜。全文摘要公開了一種新酰胺化合物或其鹽，其具有生物膜形成抑制活性或分離和去除已制成的生物膜的活性。還公開了含此酰胺化合物或其鹽作為有效成分的生物膜形成抑制劑或生物膜去除劑。該酰胺化合物或其鹽由右述通式(1)表示。該生物膜形成抑制劑或生物膜去除劑含有此酰胺化合物或其鹽作為有效成分。(在式(1)中，R¹表示氫原子或羥基；R²表示C_5-12烷基；Q表示由上式(Q1)或(Q2)表示的取代基。在該式中，n和m獨立地表示為0或1。)文檔編號C07D207/00GK101528686SQ20078003998公開日2009年9月9日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權日2006年10月27日發(fā)明者五十嵐?jié)?菅裕明申請人:國立大學法人東京大學;大塚化學株式會社