專利名稱：一種從長(zhǎng)春七中提取鎮(zhèn)痛有效成分蛇床子素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物的提取方法，具體一種從長(zhǎng)春七中提取鎮(zhèn)痛有效 成分蛇床子素的方法。
技術(shù)背景文獻(xiàn)報(bào)道蛇床子素具有鎮(zhèn)痛和抗炎作用(胡杰，陳剛.蛇床子素抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖南中醫(yī)雜志.2007， 23 (1): 82-83.)，且鎮(zhèn)痛 作用與長(zhǎng)春七提取物具有鎮(zhèn)痛作用的研究結(jié)果(石娟，王云霞，邊敏，等. 長(zhǎng)春七提取物鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志.2006， 23(2): 100-102.)相吻合；長(zhǎng)春七又名巖風(fēng)，為傘形科巖風(fēng)屬植物長(zhǎng)春七 [丄沾a"o^ ^c/2tor附era/s ( Fisch) DC.]的干燥根及根莖，具有發(fā)散風(fēng)寒，祛 風(fēng)濕，鎮(zhèn)痛，健脾胃，止咳，解毒之功效。主治感冒風(fēng)寒，周身疼痛，咳 嗽，頭痛，牙痛，關(guān)節(jié)腫痛，跌打損傷，風(fēng)濕筋骨疼痛、麻木，金牛七中 毒等癥。在陜西、甘肅、四川等地有分布(中國(guó)科學(xué)院西北植物研究所編 著.秦嶺植物志.第一巻.種子植物(第三冊(cè))[M].北京科學(xué)出版社， 1981.410-411.江蘇新醫(yī)學(xué)院編.中藥大辭典(上冊(cè))[M].上海上?？茖W(xué)技 術(shù)出版社，1985.456.)。關(guān)于長(zhǎng)春七的鎮(zhèn)痛有效成分研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，《中國(guó)藥典》(2005年版)、及地方標(biāo)準(zhǔn)也未有收載，同時(shí)，市場(chǎng)上長(zhǎng)春七 藥材的質(zhì)量控制又缺乏量化指標(biāo)。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種從長(zhǎng)春七中提取鎮(zhèn)痛有效成分蛇床子素的方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是1) 乙醚提取首先取長(zhǎng)春七藥材粗粉，用6倍量的乙醚回流提取， 過(guò)濾；藥渣再用6倍量的乙醚回流提取一次，過(guò)濾，合并兩次提取液，棄 去藥渣，得到長(zhǎng)春七的乙醚提取液，回收乙醚溶劑后，得到的殘留物就是 乙醚提取物；2) 第一次柱色譜法分離取長(zhǎng)春七乙醚提取物拌樣后加至硅膠色譜 柱上，用氯仿-甲醇(20: 0 20: 4)溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集其中氯 仿-甲醇(20: O)的洗脫液，回收溶劑，得到提取物；3) 第二次柱色譜法分離將第一次柱色譜法分離得到的氯仿-甲醇(20:0) 提取物拌樣后加至另一硅膠色譜柱上，以石油醚-醋酸乙酯(20: 0 20: 20)溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚-醋酸乙酯(20:1)的洗脫液，放 置，有灰黃色粉末狀沉淀析出，過(guò)濾，得沉淀；4) 精制將第二次柱色譜法分離得到的沉淀用石油醚-醋酸乙酯(20:1) 反復(fù)重結(jié)晶，得蛇床子素的白色針狀結(jié)晶。本發(fā)明以鎮(zhèn)痛作用為藥效學(xué)指標(biāo)對(duì)長(zhǎng)春七的不同提取部位進(jìn)行活性 篩選，確定了長(zhǎng)春七鎮(zhèn)痛的有效部位，并對(duì)有效部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究， 分離并鑒定出了蛇床子素，己有的研究結(jié)果證明蛇床子素具有鎮(zhèn)痛作用， 可作為長(zhǎng)春七的鎮(zhèn)痛有效成分，長(zhǎng)春七的乙醚部位為長(zhǎng)春七具有鎮(zhèn)痛作用 的有效部位，可望成為鎮(zhèn)痛藥的替代品，發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。
具體實(shí)施方式
實(shí)例例1:本發(fā)明是從陜西太白產(chǎn)長(zhǎng)春七藥材粗粉的乙醚提取物中提 取分離鎮(zhèn)痛有效成^"蛇床子素的方法。優(yōu)選的方法為首先取長(zhǎng)春七藥材粗粉，用6倍量的乙醚回流提取，過(guò)濾，藥渣再用6倍量的乙醚回流提 取一次，過(guò)濾，合并兩次提取液，棄去藥渣，得到乙醚提取液，回收乙醚 溶劑后，得到的殘留物就是乙醚提取物；乙醚提取物用硅膠色譜柱分離兩 次第一次用氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集其中氯仿-甲醇(20: 0)洗脫液，洗脫液回收溶劑后的提取物用于第二次柱色譜分離；第二次以 石油醚-醋酸乙酯溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚-醋酸乙酯(20:1) 洗脫液，回收部分溶劑，放置后有灰黃色粉末狀沉淀出現(xiàn)，過(guò)濾，得沉淀; 所得沉淀用石油醚-醋酸乙酯(20:1)反復(fù)重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶，稱為 化合物I ?；衔颕的純度檢査采用TLC法，展開劑系統(tǒng)分別選用石油醚 -醋酸乙酯(2:1)、正己烷-醋酸乙酯(4:1)和正己烷-二氯甲烷(1: 3)， 供試品的色譜中，在可見光下無(wú)斑點(diǎn)，在紫外燈(254nm)下顯單一藍(lán)紫 色熒光斑點(diǎn)；噴以10%的硫酸乙醇溶液，揮干溶劑后加熱至斑點(diǎn)顯色清晰， 可見光下呈單一玫瑰紅色斑點(diǎn)，在紫外燈(254nm)下顯單一藍(lán)色熒光斑 點(diǎn)。證明化合物I為純化合物?；衔颕為白色針狀結(jié)晶(石油醚-醋酸乙酯(20: 1) 〕， mp80-82。C。 異羥肟酸鐵反應(yīng)顯紫紅色。紫外燈(254nm)下顯藍(lán)色熒光。UV《，"m (溶劑:甲醇)258， 322。 IR《y :3020 (=CH)， 2880 (-CH) ,1722 (C=0) ，1605 (-C=C) ，1565 (C=C) ，1435,1281和1120 (C畫O-C)， 850 (S=cH和S純)。^-NMR (300MHz，CHCl3) S : 6.23( 1H, d ， J = 9.5Hz, 3國(guó)H), 7.61( 1H, d ， J = 9.5 Hz， 4國(guó)H) ， 7.29( 1H, d， J = 8.5 Hz, 5-H ), 6.81 (IH， d， J = 8.5Hz,6-H)，3.53(2H,d， J = 7.5Hz，l' -H) , 5.22 ( lH,t， 2' -H)， 1.66(3H,s， 4'畫H)，1.83(3H,s， 5'畫H) ， 3.91 (3H， s， -OCH3)。 13C-NMR (75MHz，CHCl3) S : 161.3 (C-2 ) ， 117.9 (C國(guó)3 ), 143.7 (C畫4 ) ， 126.2 (C隱5 )，112.9 (C-6) ， 160.2 (C畫7 ) , 112.9 (C-8 ) ， 21.9 ( C-l' ) , 121.2(C-2' ) , 132.5 (C-3' ),17.8(C-4' ),25.7(C國(guó)5' ) ,107.4 (C-4a) , 152.8 (C國(guó)8a)。與蛇床子 素對(duì)照品TLC行為一致，且混合后熔點(diǎn)不下降。與文獻(xiàn)I (于德泉，楊峻 山.分析化學(xué)手冊(cè)[M].2版.第7分冊(cè)，北京化學(xué)工業(yè)出版社，2002: 450.) 一致，經(jīng)鑒定為蛇床子素(osthol)。本發(fā)明所稱的蛇床子素，又稱歐芹酚甲醚(osthole)，是從陜西太白產(chǎn) 的傘形科巖風(fēng)屬植物長(zhǎng)春七[i:沾a"o泡6wc/ztom7era/s ( Fisch) DC.]藥材粗 粉的乙醚提取物中分離得到，屬香豆素類化合物。化學(xué)名7-甲氧基-8-異戊稀基香豆素2H國(guó)1國(guó)BenzGpyran國(guó)2漏GiiG, 7—md;hoxy-8—(3誦methy1—2-butenyl)結(jié)構(gòu)式分子式及分子量C15H1603; 244.28 物理性狀熔點(diǎn)80°C-82°C ，白色針狀結(jié)晶。 蛇床子素為長(zhǎng)春七的鎮(zhèn)痛有效成分，長(zhǎng)春七的乙醚部位為長(zhǎng)春七具有 鎮(zhèn)痛作用的有效部位。
權(quán)利要求
1、一種從長(zhǎng)春七中提取鎮(zhèn)痛有效成分蛇床子素的方法，其特征在于1)乙醚提取首先取長(zhǎng)春七藥材粗粉，用6倍量的乙醚回流提取，過(guò)濾；藥渣再用6倍量的乙醚回流提取一次，過(guò)濾，合并兩次提取液，棄去藥渣，得到長(zhǎng)春七的乙醚提取液，回收乙醚溶劑后，得到的殘留物就是乙醚提取物；2)第一次柱色譜法分離取長(zhǎng)春七乙醚提取物拌樣后加至硅膠色譜柱上，用氯仿-甲醇(20∶0～20∶4)溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集其中氯仿-甲醇(20∶0)的洗脫液，回收溶劑，得到提取物；3)第二次柱色譜法分離將第一次柱色譜法分離得到的氯仿-甲醇(20∶0)提取物拌樣后加至另一硅膠色譜柱上，以石油醚-醋酸乙酯(20∶0～20∶20)溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，收集石油醚-醋酸乙酯(20∶1)的洗脫液，放置，有灰黃色粉末狀沉淀析出，過(guò)濾，得沉淀；4)精制將第二次柱色譜法分離得到的沉淀用石油醚-醋酸乙酯(20∶1)反復(fù)重結(jié)晶，得蛇床子素的白色針狀結(jié)晶。
全文摘要
一種從長(zhǎng)春七中提取鎮(zhèn)痛有效成分蛇床子素的方法，首先取長(zhǎng)春七藥材粗粉，用乙醚回流提取，過(guò)濾；藥渣再用乙醚回流提取一次，過(guò)濾，合并兩次提取液，棄去藥渣，回收乙醚溶劑后，得到的殘留物就是乙醚提取物；取長(zhǎng)春七乙醚提取物拌樣后加至硅膠色譜柱上，依次用氯仿-甲醇溶劑和石油醚-醋酸乙酯系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，回收溶劑，得到提取物；將提取物放置，有灰黃色粉末狀沉淀析出，過(guò)濾，得沉淀；將沉淀物用石油醚-醋酸乙酯反復(fù)重結(jié)晶，得蛇床子素的白色針狀結(jié)晶。本發(fā)明以鎮(zhèn)痛作用為藥效學(xué)指標(biāo)對(duì)長(zhǎng)春七的不同提取部位進(jìn)行活性篩選，確定了長(zhǎng)春七鎮(zhèn)痛的有效部位，分離并鑒定出了蛇床子素，可作為長(zhǎng)春七的鎮(zhèn)痛有效成分。
文檔編號(hào)C07D311/00GK101255148SQ20081001778
公開日2008年9月3日 申請(qǐng)日期2008年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月25日
發(fā)明者容夢(mèng)榮, 朱彗凝, 娟 石 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)