專利名稱：對il-31特異的人源化抗體分子的制作方法
對IL-31特異的人源化抗體分子
背景技術(shù)：
已發(fā)現(xiàn)新鑒定的細胞因子IL-31當在小鼠中過表達時導致皮炎樣癥狀。參見， Dillon，等人，Nature Immunol. 5 :752_760，2004。這些癥狀可以通過使用拮抗劑得到減 輕，所述拮抗劑阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-31的活性，并且包括抗IL-31抗體。還 參見，于2003年1月21日提交的美國專利申請序列號10/352，554(美國專利公開號 2003-0224487)，現(xiàn)在的美國專利序列號 7，064，186,7, 425，325 和 7，459，293。單克隆抗體技術(shù)已提供用于在鑒定且治療疾病中使用的廣泛多樣的治療以及診 斷。包括嚙齒類動物抗原結(jié)合位點的許多重組或生物合成分子已得到描述。特別地，通 過僅將嚙齒類動物結(jié)合位點而不是整個可變結(jié)構(gòu)域移植到人免疫球蛋白重和輕鏈結(jié)構(gòu) 域內(nèi)，具有直接構(gòu)建到人抗體上的嚙齒類動物抗原結(jié)合位點的分子已得到描述。參見例 如，Riechmann 等人(1988) Nature 332 :323_327 和 Verhoeyen 等人(1988) Science 239 1534-1536。具有抗原結(jié)合位點的分子已在于1994年9月21日公開的英國專利公開號 GB 2，276，169中得到描述，其中可變結(jié)構(gòu)域的至少一個互補決定區(qū)(⑶RS)衍生自鼠類單 克隆抗體，并且分子的其余免疫球蛋白衍生部分衍生自人免疫球蛋白。許多單鏈抗原結(jié)合 位點多肽和單鏈Fv(sFv)分子也已得到描述。參見例如，屬于Huston等人的美國專利號 5，132，405和5，091，513 ；以及屬于Ladner等人的美國專利號4，946，778。小鼠抗人IL-31單克隆抗體先前已在2006年5月8日提交的美國專利申請序列 號11/430，066中得到描述(美國專利公開號2006-02752960)，其描述了這樣的小鼠單克隆 抗體，其識別人IL-31，并且可以用于產(chǎn)生嵌合抗體。然而，嵌合抗體可能引起免疫原性，并 且人源化小鼠抗人IL-31抗體是希望的。人源化抗體一般具有超過小鼠或在某些情況下超 過嵌合抗體的用于在人治療中的至少3個潛在優(yōu)點(1)因為效應(yīng)子部分是人，所以它可以 與人免疫系統(tǒng)的其他部分更好地相互作用(例如，通過補體依賴性細胞毒性(CDC)或抗體 依賴性細胞毒性(ADCC)更有效地破壞靶細胞)；(2)人免疫系統(tǒng)不會將人源化抗體的構(gòu)架 或恒定區(qū)識別為外源的，并且因此針對此類所注入抗體的抗體應(yīng)答應(yīng)小于針對完全外源的 小鼠抗體或部分外源的嵌合抗體；和⑶已報告所注射的小鼠抗體在人循環(huán)中具有比正常 抗體的半衰期短得多的半衰期(D. Shaw等人，J. Immunol, 138，4534-4538 (1987))。所注射 的人源化抗體推測將具有更類似于天然存在的人抗體的半衰期，允許給予更小且更不頻繁 的劑量。因此，需要提供關(guān)于小鼠抗人IL-31抗體的人源化可變區(qū)氨基酸序列的分子，用 于治療IL-31介導的炎癥。發(fā)明概述在一個方面中，本發(fā)明涉及與人IL-31結(jié)合的經(jīng)分離的抗體，其包括a)包括分別 由氨基酸序列SEQ ID NO :1、2和3組成或分別由氨基酸序列SEQ ID N0:l、4和3組成的 ⑶Rs的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域；b)包括由氨基酸序列SEQ IDNO :5、6和7組成的⑶Rs的 人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個方面，本發(fā)明涉及本文描述的抗體，其中a)所述人源化 重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與選自下述的氨基酸序列具有至少90%等同的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)
7FR1、FR2、FR3 和 FR4 :1)分別地 SEQ ID NO :8 (FRl)、9 (FR2)、10 (FR3)和 11(FR4)的氨基酸 序列；2)分別地 SEQ ID NO :12(FR1)、13(FR2)、14(FR3)和 15(FR4)的氨基酸序列；3)分別 地SEQ ID NO 12 (FRl)、13 (FR2)、16 (FR3)和15 (FR4)的氨基酸序列；和b)所述人源化輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域包括與選自下述的氨基酸序列構(gòu)架區(qū)具有至少90%等同的氨基酸序列的構(gòu)架 區(qū) FR5、FR6、FR7 和 FR8 1)分別地 SEQ ID NO 17 (FR5)、18 (FR6)、19 (FR7)和 20 (FR8)的氨 基酸序歹Ij ；和2)分別地SEQ ID NO :17(FR5)、18(FR6)、21(FR7)和20 (FR8)的氨基酸序列。 在一個實施方案中，所述同一性是至少95 %，更加優(yōu)選至少98 %，最優(yōu)選至少99 %。在另一個方面，本發(fā)明涉及如本文所描述的經(jīng)分離的抗體，其中在重鏈的FRl中 位置29處的氨基酸是亮氨酸，并且在重鏈的FR3中位置32處的氨基酸是苯丙氨酸。在另 一個方面，本發(fā)明涉及如本文所描述的經(jīng)分離的抗體，其中在重鏈的FR3中位置8處的氨基 酸是賴氨酸，并且在輕鏈的FR7中位置15處的氨基酸是酪氨酸。在一個進一步的方面，本發(fā)明涉及與人IL-31結(jié)合的經(jīng)分離的抗體，其包括a)包 括分別具有SEQ ID NO :1和3的氨基酸序列的CDRl和CDR3以及具有AIYP⑶⑶TRYSXaa IX aa2FXaa3G(SEQID NO 22)的氨基酸序列的CDR2的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中Xaal是谷 氨酰胺或脯氨酸，Xaa2是絲氨酸或賴氨酸，并且Xaa3是谷氨酰胺或賴氨酸；所述人源化重 鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與下述氨基酸序列具有至少90%等同的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)FR1、FR2、 FR3 和 FR4 分別地 SEQ ID NO :8、9、10 和 11，或分別地 SEQ ID NO 12、13、14 和 15，或分別 地SEQ ID NO: 12、13、16和15;并且前提是在FRl中位置29處的氨基酸是亮氨酸，并且在 FR3中位置32處的氨基酸是苯丙氨酸；b)包括由SEQ ID NO :5、6和7的氨基酸序列組成 的⑶Rs的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別與SEQ ID N0:17、 18、19和20的氨基酸序列具有至少90%等同，或分別與SEQ ID NO 17、18、21和20的氨基 酸序列具有至少90%等同的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)FR5、FR6、FR7和FR8。在本發(fā)明的一個方 面，所述同一性是至少95%，更加優(yōu)選至少98%，最優(yōu)選至少99%。在另一個方面，本發(fā)明 涉及如本文所描述的經(jīng)分離的抗體，其中在重鏈的FR3中位置8處的氨基酸是賴氨酸，并且 在輕鏈的FR7中位置15處的氨基酸是酪氨酸。在另一個方面，本發(fā)明涉及如本文所描述的 經(jīng)分離的抗體，其中氨基酸Xaal是谷氨酰胺，Xaa2是賴氨酸，并且Xaa3是賴氨酸；氨基酸 Xaal是脯氨酸，Xaa2是絲氨酸，并且Xaa3是谷氨酰胺；或氨基酸Xaal是谷氨酰胺，Xaa2是 賴氨酸，并且Xaa3是谷氨酰胺。在另一個方面，本發(fā)明涉及如本文所描述的經(jīng)分離的抗體，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域 的⑶Rs分別由SEQ ID NO :1、4和3組成，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶Rs分別由SEQ ID NO :5、6 和7組成，重鏈可變結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)分別由SEQ ID N0:8、9、10和11組成，并且輕鏈可變結(jié) 構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)分別由SEQ ID NO :17、18、19和20組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及如本文所描述的經(jīng)分離的抗體，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域 的⑶Rs分別由SEQ ID NO :1、2和3組成，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶Rs分別由SEQ ID NO :5、6 和7組成，重鏈可變結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)分別由SEQ ID NO: 12、13、14和15組成，并且輕鏈可變 結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)分別由SEQ ID NO :17、18、19和20組成。在另一個方面，本發(fā)明涉及如本文所描述的經(jīng)分離的抗體，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域 的⑶Rs分別由SEQ ID NO :1、2和3組成，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶Rs分別由SEQ ID NO :5、6 和7組成，重鏈可變結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)分別由SEQ ID NO: 12、13、16和15組成，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)分別由SEQ ID NO :17、18、21和20組成。如由本文實施例和教導顯示的，在本文描述的人源化抗體的FRl中位置29處的亮 氨酸和在FR3中位置32處的苯丙氨酸的存在對所述抗體的親和力和效力而言具有正面影 響。如例如在Biacore測定法中顯示的，當與在以下這些位置處具有另一個氨基酸的人源 化抗體相比較時，具有在FRl中位置29處的亮氨酸和在FR3中位置32處的苯丙氨酸的人 源化抗體的結(jié)合親和力更佳(比較例如實施例3的表2中的克隆編號7、10、13和14)。在 重鏈的FRl的位置29和FR3的94處的這些氨基酸對親和力和效力而言的正面影響也已通 過2種其他生物學測試加以證實(參見實施例4和5)。在本發(fā)明的一個實施方案中，本文公開的抗體包括選自α、Y、μ、δ或ε人免疫 球蛋白重鏈的恒定區(qū)的重鏈免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域。在本發(fā)明的一個實施方案中，本文公 開的抗體包括選自人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域；人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域；人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域；人IgG4 恒定結(jié)構(gòu)域；人IgM恒定結(jié)構(gòu)域；人IgE恒定結(jié)構(gòu)域和人IgA恒定結(jié)構(gòu)域的重鏈免疫球蛋白 恒定結(jié)構(gòu)域。在一個實施方案中，人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域是在溶液中穩(wěn)定并且具有很少的補體 活化活性或無補體活化活性的突變形式。在一個實施方案中，重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu) 域是在位置241處(Kabat編號)具有Ser至Pro突變的人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域。在一個實施方案中，免疫球蛋白輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域選自κ或λ人免疫球蛋白輕 鏈的恒定區(qū)。優(yōu)選地，免疫球蛋白輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域是κ人免疫球蛋白輕鏈的恒定區(qū)。發(fā)明詳述在詳細闡述本發(fā)明前，定義下述術(shù)語對于其理解可能是有幫助的如本文所使用的，術(shù)語“抗體”包括多克隆抗體、親和力純化的多克隆抗體、單克隆 抗體和抗原結(jié)合片段，例如F(ab' )2、Fab蛋白酶解片段、和單鏈可變區(qū)片段(scFvs)。通 常還包括遺傳改造的完整抗體或片段，例如嵌合抗體、Fv片段、單鏈抗體等，以及合成抗原 結(jié)合肽和多肽。非人抗體可以通過下述進行人源化將非人CDRs移植到人構(gòu)架和恒定區(qū) 上，或摻入整個非人可變結(jié)構(gòu)域(任選地通過替換所暴露的殘基用人樣表面對其進行“掩 飾(cloaking)”，其中結(jié)果是“鑲蓋(veneered) ”抗體)。在某些情況下，人源化抗體可以保 留在人可變區(qū)構(gòu)架結(jié)構(gòu)域內(nèi)的非人殘基，以增強合適的結(jié)合特征。通過對抗體進行人源化， 可以增加生物半衰期，并且減少關(guān)于在施用于人后的不利免疫反應(yīng)的可能性。術(shù)語“嵌合抗體”指其輕和重鏈基因一般已通過遺傳改造由屬于不同物種的免疫 球蛋白可變和恒定區(qū)基因構(gòu)建的抗體。例如，來自小鼠單克隆抗體的基因的可變區(qū)段可以 與人恒定區(qū)段例如Yl和Y3連接。一般的治療性嵌合抗體因此是由來自小鼠抗體的可變 或抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和來自人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域組成的雜交蛋白質(zhì)，盡管也可以使用其他哺 乳動物物種。如本文所使用的，術(shù)語“免疫球蛋白”指由基本上通過免疫球蛋白基因編碼的一種 或多種多肽組成的蛋白質(zhì)。一種形式的免疫球蛋白構(gòu)成抗體的基本結(jié)構(gòu)單元。這種形式是 四聚體，并且由2對等同的免疫球蛋白鏈組成，每對具有一條輕鏈和一條重鏈。在每對中， 輕和重鏈可變區(qū)一起負責與抗原結(jié)合，并且恒定區(qū)負責抗體效應(yīng)子功能。全長免疫球蛋白“輕鏈”(約25Kd或214個氨基酸)由在NH2末端處的可變區(qū)基 因(約110個氨基酸)和在COOH末端處的K或λ恒定區(qū)基因編碼。全長免疫球蛋白“重 鏈”(約50Kd或446個氨基酸)相似地由可變區(qū)基因(約116個氨基酸)和其他前述恒定
9區(qū)基因之一(約330個氨基酸)編碼。重鏈分類為Υ、μ、α、δ或ε，并且將抗體的同種 型分別限定為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在輕和重鏈內(nèi)，可變和恒定區(qū)通過約12個或更多 個氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈還包括約10個或更多個氨基酸的“D”區(qū)。(一般參見， Fundamental Immunology (Paul, W.，編輯，第二版 Raven Press, N. Y. , 1989)，第 7 章(其關(guān) 于產(chǎn)生抗體和抗體片段的公開內(nèi)容通過引用合并入本文)。免疫球蛋白輕或重鏈可變區(qū)由通過3個高變區(qū)間斷的“構(gòu)架”區(qū)組成。因此，術(shù)語 “高變區(qū)”指負責抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基。高變區(qū)包括來自“互補決定區(qū)”或“CDR”的 氨基酸殘基(即，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97 (L3)，以及重鏈 可變結(jié)構(gòu)域中的 31-35 (HI)、50_65(H2)和 95-102 (H3) (Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,Md. (1991))和/或來自“高變環(huán)”的那些殘基(即，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的 殘基 26-32 (Li)、50-52 (L2)和 91-96 (L3)，以及重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的 26-32 (Hl)、53-55 (H2) 和 96-101 (H3) ；Chothia 和 Lesk, 1987，J. Mol. Biol. 196 901-917)(這兩者都通過引用合 并入本文)?！皹?gòu)架區(qū)”或“FR”殘基是除如本文所限定的高變區(qū)殘基外的那些可變結(jié)構(gòu)域 殘基。不同輕或重鏈的構(gòu)架區(qū)的序列在物種內(nèi)是相對保守的。因此，“人構(gòu)架區(qū)”是與天然 存在的人免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)基本上等同(約85%或更多，通常90-95%或更多)的構(gòu)架 區(qū)。其為組成的輕和重鏈的組合構(gòu)架區(qū)的抗體構(gòu)架區(qū)作用于定位且對齊CDR。CDR主要負 責與抗原的表位結(jié)合。因此，術(shù)語“人源化”免疫球蛋白指包括人構(gòu)架區(qū)和來自非人(通常為小鼠或大 鼠)免疫球蛋白的一個或多個CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白被稱為“供 體”，并且提供構(gòu)架的人免疫球蛋白被稱為“受體”。恒定區(qū)不一定存在，但如果它們存在，那 么它們必須與人免疫球蛋白恒定區(qū)基本上等同，即至少約85-90%、優(yōu)選約95%或更多等 同。因此，人源化免疫球蛋白的所有部分，可能除CDR外，與天然人免疫球蛋白序列的相對 應(yīng)部分基本上等同?！叭嗽椿贵w”是包括人源化輕鏈和人源化重鏈免疫球蛋白的抗體。例 如，人源化抗體將不包括如上文定義的一般嵌合抗體，例如，因為嵌合抗體的整個可變區(qū)是 非人的。術(shù)語“重組抗體”意指其中氨基酸序列已與天然抗體的那種不同的抗體。因為重 組DNA技術(shù)在抗體產(chǎn)生中的關(guān)聯(lián)性，所以無需局限于在天然抗體中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列；可 以重新設(shè)計抗體以獲得所需特征?？赡艿淖儺愑性S多并且范圍從僅一個或數(shù)個氨基酸的改 變到例如可變或恒定區(qū)的完全重新設(shè)計。一般而言，將進行恒定區(qū)中的改變以便改善或改 變特征，例如補體結(jié)合、與膜的相互作用和其他效應(yīng)子功能。將進行可變區(qū)中的改變以便改 善抗原結(jié)合特征。除抗體外，免疫球蛋白還可以以各種其他形式存在，包括例如單鏈或Fv、Fab 和(Fab’)2，以及雙抗體、線性抗體、多價或多特異性雜交抗體(如上文所述且在下述中 詳述的Lanzavecchia 等人，Eur. J. Immunol. 17,105(1987))和以單鏈(例如，Huston 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. , 85, 5879-5883 (1988)和 Bird 等人，Science, 242, 423-426 (1988)，其就其關(guān)于抗體片段的教導通過引用合并入本文)。(一般參見，Hood等 人，“Immunology"，Benjamin，N. Y.，第二版(1984)，以及 Hunkapiller 和 Hood，Nature， 323，15-16(1986)，其關(guān)于抗體通過引用合并入本文)。
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如本文所使用的，術(shù)語“單鏈Fv”、“單鏈抗體”、“Fv”或“scFv”指包括來自重和 輕鏈的可變區(qū)但缺乏恒定區(qū)但在單條多肽鏈內(nèi)的抗體片段。一般地，單鏈抗體進一步包括 在VH和VL結(jié)構(gòu)域之間的多肽接頭，這使得其形成將允許抗原結(jié)合的所需結(jié)構(gòu)。單鏈抗體 由 Pluckthun 在 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第 113 卷，Rosenburg 禾口 Moore編輯Springer-Verlag，New York，第269-315頁(1994)中詳細討論；還參見國際專 利申請公開號WO 88/01649以及美國專利號4，946，778和5，260，203，其公開內(nèi)容為了任何 目的通過引用合并入本文。在特定實施方案中，單鏈抗體也可以是雙特異性和/或人源化 的。"Fab片段”由一條輕鏈以及一條重鏈的Cm和可變區(qū)組成。Fab分子的重鏈無法與 另一個重鏈分子形成二硫鍵。"Fab'片段”包含一條輕鏈和一條重鏈，其包含在Chi和Ch2結(jié)構(gòu)域之間的更多恒 定區(qū)，從而使得鏈間二硫鍵可以在2條重鏈之間形成，以形成F(ab' )2分子。"F(ab' )2片段”包括包含在Chi和Ch2結(jié)構(gòu)域之間的恒定區(qū)的部分的2條輕鏈和 2條重鏈，從而使得鏈間二硫鍵在2條重鏈之間形成。由不精確的分析方法(例如凝膠電泳)測定的多聚體的分子量和長度應(yīng)理解為近 似值。當此類值表示為“約”X或“大約”X時，所述值X應(yīng)理解為精確至士 10%。本文引用的所有參考文獻通過引用整體合并入本文。本發(fā)明基于抗體的人源化小鼠抗人IL-31可變區(qū)序列的發(fā)現(xiàn)。這些抗體作為針對 IL-31的拮抗劑的使用可以抑制一般而言的炎癥，并且特異性地皮炎和瘙癢疾病的癥狀。本 發(fā)明提供了抗體的人源化輕鏈和重鏈區(qū)的用途，所述抗體識別、結(jié)合和/或中和IL-31多 肽。此類人源化輕和重鏈區(qū)可以與免疫球蛋白恒定區(qū)例如IgG4或IgGl融合，并且在各種 宿主細胞中表達。使用單克隆抗體的小鼠抗人IL-31輕鏈和重鏈可變區(qū)的氨基酸序列產(chǎn)生 本文描述的人源化抗IL-31可變區(qū)序列，所述單克隆抗體先前在通過引用合并入本文、于 2006年5月8日提交的美國專利申請序列號11/430，066 (美國專利公開號2006-02752960) 中描述。抗體可以包括包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)或由輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)組成 的抗體或抗體片段，并且可以是中和、抑制、減少、阻止或最小化IL-31對其受體的作用的 嵌合、人源化或抗體片段?？贵w或抗體片段的臨床結(jié)果可以是炎性或自身免疫疾病中的減 少，所述疾病例如皮炎，特別是特應(yīng)性皮炎以及瘙癢疾病和克羅恩氏病，如本文進一步描述 的。在一個實施方案中，皮炎是特應(yīng)性皮炎。在另一個實施方案中，皮炎是結(jié)節(jié)性癢疹。在 另一個實施方案中，皮炎是濕疹。減少也可以是發(fā)癢、搔抓或脫發(fā)中的減少。IL-31是新發(fā)現(xiàn)的T細胞細胞因子，其當在小鼠中過表達時導致皮炎樣癥狀。參 見，Dillon，等人，Nature Immunol. 5 :752_760，2004。IL-31 是關(guān)于這樣的細胞因子的 HUGO 名稱，所述細胞因子先前在于2003年1月21日提交的美國專利申請序列號10/352，554(美 國專利公開號2003-0224487)，目前的美國專利序列號7，064，186，Sprecher, Cindy等 人，2003，通過引用合并入本文)中描述為Zcytol7rlig。還參見Dillon，等人，Nature Immunol.，同上。人IL-31的氨基酸序列顯示于SEQ ID NO 24中。組織分析揭示小鼠IL-31 的表達在睪丸、腦、CD90+細胞、前列腺細胞、唾液腺和皮膚中發(fā)現(xiàn)。關(guān)于IL-31的異二聚受體在美國專利公開號20030224487中描述為zcytorl7(HUG0名稱，IL-31RA)，其與制癌素M受體β (OSMR^)形成異二聚體。IL-31從由 活化人外周血細胞(hPBC)產(chǎn)生的cDNA文庫中分離，所述細胞就CD3進行選擇。CD3是對于 淋巴樣起源的細胞特別是T細胞獨特的細胞表面標記。通過包括人源化小鼠抗人輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和/或人源化小鼠抗人重鏈可變結(jié) 構(gòu)域的分子(本文稱為“IL-31抗原結(jié)合分子”或“IL-31拮抗劑”)抑制、中和或阻斷信 號轉(zhuǎn)導可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多測定法進行測量。例如，測量增殖中的減少 的測定法包括關(guān)于染料的減少的測定法，例如AlamarBlue (AccuMed International, Inc. ffestlake, Ohio)，3_(4，5- 二甲基噻唑 _2_ 基)_2，5- 二苯基四唑溴化物(Mosman， Τ. Immunol. Meth. 65 :55_63，1983) ；3，(4，5 二 甲基噻唑-2-基)-5-3-羧基甲氧基苯 基-2H-四唑；2，3-雙(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯基氨基)羰基]-2H-四唑 氫氧化物；和氰基二甲苯基-四唑氯化物(其從Polysciences，Inc.，Warrington, PA商 購可得)；促有絲分裂測定法，例如3H-胸苷摻入的測量；使用例如萘黑或臺盼藍的染料排 除測定法；使用二乙酰熒光素的染料攝??；和鉻釋放。一般而言，參見Freshney，Culture of Animal Cells :A Manual ofBasic Technique,第三版Wiley-Liss, 1994,其通過弓|用合 并入本文。除上述外，關(guān)于表達IL-31RA和全長OSMRii的BaF3細胞的例子或如本文描述 的活性例子中顯示的，參見公開的美國專利公開號20030224487，(Sprecher, Cindy等人， 2003)。用于制備編碼本文描述的抗體的多核苷酸(包括DNA和RNA)的方法是本領(lǐng)域 眾所周知的?？俁NA可以使用異硫氰酸胍提取隨后通過在CsCl梯度中離心分離而制備 (Chirgwin 等人，Biochemistryl8 :52_94，1979)。多聚(A)+RNA 使用 Aviv 和 Leder 的方法 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69 :1408_12，1972)由總 RNA 制備?；パa DNA(cDNA)使用已知 方法由多聚(A)+RNA制備。在備選方法中，可以分離基因組DNA。編碼IL-31抗體的多核苷 酸隨后通過例如雜交或PCR進行鑒定且分離。本發(fā)明還包括人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑，其結(jié)合IL-31多肽的 功能片段，和編碼此類功能片段的核酸分子。如本文所定義的“功能性” IL-31或其片段的 特征在于其增殖或分化活性，其誘導或抑制專門化細胞功能的能力，或其與這些受體(可 溶或固定的)的抗IL-31抗體或IL-31RA/OSMRi3異二聚體特異性結(jié)合的能力。因此，本發(fā) 明進一步提供了人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑，其結(jié)合包括一個或多個IL-31 功能片段的多肽分子。本發(fā)明還提供了人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑，其與包括IL-31多 肽的具有表位的部分或免疫原性表位或抗原性表位的多肽片段或肽結(jié)合。抗體與這些表位 的結(jié)合導致IL-31在其同源受體上的信號轉(zhuǎn)導的抑制、阻斷、中和和/或減少。小鼠抗人IL-31單克隆抗體先前已在于2006年5月8日提交的共同未決的美國專 利申請序列號11/430，066(美國專利公開號2006-02752960)中得到描述。小鼠抗人IL-31 抗體的可變區(qū)的氨基酸序列在于2007年9月4日提交的共同未決的美國專利申請序列號 11/850,006和于2007年9月4日提交的共同擁有的PCT申請US07/77555中得到描述，這 兩個專利都為了可變區(qū)序列和抗體產(chǎn)生方法而通過引用合并入本文。這些氨基酸序列用作 關(guān)于本文描述的人源化序列的原材料。特別地，小鼠抗人IL-31抗體序列來自具有克隆編 號292. 12. 3. 1的雜交瘤。
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如本文所描述的抗體的活性可以通過其抑制或減少增殖的能力進行測量，使用測 量表達IL-31RA受體的細胞的增殖或與表達IL-31RA受體的細胞的結(jié)合的各種測定法。特 別感興趣的是IL-31依賴性細胞中的改變。待改造為IL-31依賴性的合適細胞系包括IL-3 依賴性 BaF3 細胞系(Palacios 和 Steinmetz，Cell 41 :727_734，1985 ；Mathey-Prevot 等 人 Mol. Cell. Biol. 6 :4133_4135，1986)、FDC-Pl (Hape 1 等人 Blood64 :786_790，1984)和 M07e (Kiss等人，Leukemia 7:235-240,1993)。生長因子依賴性細胞系可以根據(jù)已公開的 方法建立(例如 Greenberger 等人，Leukemia Res. 8 :363_375，1984 ；Dexter 等人，Baum 等人編輯，Experimental HematoloRy Today, 8th Ann. Mtg. Int. Soc. Exp. Hemato 1. 1979, 145-156，1980)。人源化抗IL-31抗體或拮抗劑的活性也可以在本文描述的BaF3增殖測定 法、Biacore測定法或NHK測定法中進行測量。在一個實施方案中，免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域選自α、Υ、μ、δ或ε人免 疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)。所述恒定區(qū)可以是Yl、Y2、Y3或Y 4人免疫球蛋白重鏈的恒定 區(qū)。在另一個實施方案中，免疫球蛋白輕鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域選自κ或λ人免疫球蛋白 輕鏈的恒定區(qū)。在另一個實施方案中，重恒定鏈是人Y 4，其在溶液中是穩(wěn)定的并且具有很少的補 體活化活性或無補體活化活性。在另一個實施方案中，重恒定鏈是人Yl。免疫球蛋白可以選自免疫球蛋白主要類別中的任何，包括IgA、IgD、IgE、IgG和 IgM,以及任何亞類或同種型，例如IgGU IgG2、lgG3和IgG4 ；IgA-I和IgA-2。IL-31的活性的抑制可以通過許多測定法進行測量。除本文公開的這些測定法外， 樣品可以在各種測定法內(nèi)就IL-31活性的抑制進行測試，所述測定法經(jīng)設(shè)計為測量受體結(jié) 合、IL-31依賴性細胞應(yīng)答的刺激/抑制或IL-31RA受體表達細胞的增殖。IL-31結(jié)合多肽包括IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑也可以用于配體的純 化。多肽固定在固體支持物上，例如瓊脂糖、交聯(lián)瓊脂糖、玻璃、纖維樹脂、基于二氧化硅的 樹脂、聚苯乙烯、交聯(lián)聚丙烯酰胺或類似材料的珠，所述材料在使用條件下是穩(wěn)定的。用于 使多肽與固體支持物鏈接的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括胺化學、溴化氰活化、N-羥基琥 珀酰亞胺活化、環(huán)氧化物活化、巰基活化和酰胼活化。所得到的介質(zhì)一般將以柱的形式配 置，并且使包含配體的液體流經(jīng)柱一次或多次，以允許配體與受體多肽結(jié)合。配體隨后使用 鹽濃度、離液劑(胍HCl)或pH中的改變進行洗脫，以破壞配體_受體結(jié)合。人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑視為特異性結(jié)合，如果1)它們顯 示結(jié)合活性的閾值水平，和2)它們不與相關(guān)多肽分子顯著交叉反應(yīng)。如果與和對照(非 IL-31)多肽的結(jié)合親和力相比較，本文的IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑以至少10倍 大的親和力與IL-31多肽、肽或表位結(jié)合，那么測定結(jié)合的閾值水平。優(yōu)選抗體顯示IO6M-1 或更大的結(jié)合親和力(Ka)，優(yōu)選Ι ΛΓ1或更大，更優(yōu)選IO8M4或更大，且最優(yōu)選Ι ΛΓ1或更 大。人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑的結(jié)合親和力可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員例如 通過 Scatchard 分析(Scatchard，G.，Ann. NY Acad. Sci. 51 :660_672，1949)容易地測定。使用標準Western印跡分析(Ausubel等人，同上)，例如通過檢測IL-31多肽 而不是已知相關(guān)多肽的IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑顯示IL-31抗原結(jié)合分子或 IL-31拮抗劑是否不與相關(guān)多肽分子顯著交叉反應(yīng)。篩選還可以使用非人IL-31和IL-31突變多肽完成。此外，IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑可以針對已知相關(guān)多肽進行“篩 選”，以分離與IL-31多肽特異性結(jié)合的群體。例如，IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑 與相關(guān)多肽吸附，所述相關(guān)多肽與不溶性基質(zhì)粘附；對IL-31特異的IL-31抗原結(jié)合分子 或IL-31拮抗劑將在合適的緩沖條件下流經(jīng)基質(zhì)。Antibodies :A Laboratory Manual, Harlow禾口 Lane (編輯)，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988 CurrentProtocoIs in ImmunoloRY, CooliRan, ^A (編輯)，National Institutesof Health, John Wiley 禾口 Sons,Inc. ,1995。人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑的特征在于當在經(jīng)純化的重組蛋白質(zhì) 人IL-31的存在下生長時，其阻斷、抑制、阻止或減少受體結(jié)合的能力。例如，人源化IL-31 抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑可以以許多方法進行表征，所述方法包括框并(即，測定每種 抗體是否可以抑制任何其他結(jié)合的結(jié)合)、相對親和力和中和。本發(fā)明的人源化IL-31抗原結(jié)合分子或IL-31拮抗劑顯示于下文表1和

圖1中。在下表1中，關(guān)于具有指定“12VH1”的克隆(艮P，克隆7、9、10、13-18和26-36) 術(shù)語 “fback” 意指 LC (back) +HC (fback)；術(shù)語"LC (back) ” 意指 LC (G66R、G68E、D70Q、 F71Y、T72S)；并且術(shù)語 “HC (back) ” 意指 HC(F29L、M69L、R71A、T73K、V78A、R94F)。相似 地，在下表1中，關(guān)于指定“12VH5”的克隆(艮P，克隆8、11和21-24)術(shù)語“fback”意指 LC (back) +HC (fback)；術(shù)語"LC (back) ”意指 LC(G66R、G68E、D70Q、F71Y、T72S)；并且術(shù)語 "HC (back) ” 意指 HC (G24A、S28T、F29L、I69L、S70T、R94F)。表1 人源化292. 12. 3. 1構(gòu)建體
克隆 編號突變 描述重鏈 SEQ ID NO 輕鏈 SEQ ID NO 712VHl-gly+fback2526812VH5-gly+fback2726912VHl-gly+HC(fback)25281012VHl-gly+LC(fback)29261112VH5-gly+HC(fback)27281312VHl-gly+HC (F29L, M69L, R71A, T73K, V78A)+LC(fback)3026
1權(quán)利要求
與人IL 31結(jié)合的經(jīng)分離的抗體或抗體片段，其包括a)包括分別由氨基酸序列SEQ ID NO1、2和3組成或分別由氨基酸序列SEQ ID NO1、4和3組成的CDR1、CDR2和CDR3的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域；和b)包括分別由SEQ ID NO5、6和7的氨基酸序列組成的CDR1、CDR2和CDR3的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的抗體或抗體片段，其中a)所述人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與選自下述的氨基酸序列具有至少90%等同的氨 基酸序列的構(gòu)架區(qū)FR1、FR2、FR3和FR4 i)分別地SEQ ID NO :8(FR1)、9(FR2)、10(FR3)和 11(FR4)的氨基酸序列；ii)分別地SEQ ID NO :12(FR1)、13(FR2)、14(FR3)和 15(FR4)的氨基酸序列；iii)分別地SEQ ID NO 12 (FRl)、13 (FR2)、16 (FR3)和 15(FR4)的氨基酸序列；禾口b)所述人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與選自下述的氨基酸序列具有至少90%等同的氨 基酸序列的構(gòu)架區(qū)FR5、FR6、FR7和FR8 i)分別地SEQ ID NO :17(FR5)、18(FR6)、19(FR7)和 20 (FR8)的氨基酸序列；禾口ii)分別地SEQ ID NO :17(FR5)、18(FR6)、21(FR7)和 20 (FR8)的氨基酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的抗體或抗體片段，其中所述人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別由 SEQ ID NO :8(FR1)、9(FR2)、10(FR3)和 11(FR4)的氨基酸序列組成的構(gòu)架區(qū) FR1、FR2、FR3 和FR4 ；并且其中所述人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別由SEQ ID NO 17 (FR5)、18 (FR6)、 19 (FR7)和20 (FR8)的氨基酸序列組成的構(gòu)架區(qū)FR5、FR6、FR7和FR8。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的抗體或抗體片段，其中所述人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別 由SEQ ID NO :12(FR1)、13(FR2)、14(FR3)和15(FR4)的氨基酸序列組成的構(gòu)架區(qū)FR1、 FR2、FR3和FR4 ；并且其中所述人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別由SEQ ID NO :17(FR5)、 18 (FR6)、19 (FR7)和20 (FR8)的氨基酸序列組成的構(gòu)架區(qū)FR5、FR6、FR7和FR8。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的抗體或抗體片段，其中所述人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別 由SEQ ID NO :12(FR1)、13(FR2)、14(FR3)和15(FR4)的氨基酸序列組成的構(gòu)架區(qū)FR1、 FR2、FR3和FR4 ；并且其中所述人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別由SEQ ID N0:17(FR5)、 18 (FR6)、21 (FR7)和20 (FR8)的氨基酸序列組成的構(gòu)架區(qū)FR5、FR6、FR7和FR8。
6.根據(jù)權(quán)利要求2-5中任一項的抗體或抗體片段，其中在FRl(SEQ ID NO :8或SEQ ID NO: 12)中位置29處的氨基酸是亮氨酸，并且在FR3 (SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO 16)中位 置32處的氨基酸是苯丙氨酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的抗體或抗體片段，其中在FR7(SEQ IDN0:19或SEQ ID NO 21)中 位置15處的氨基酸是酪氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的抗體或抗體片段，其中在FR3(SEQ ID N0:14或SEQ ID NO 16) 中位置8處的氨基酸是賴氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的抗體或抗體片段，其中在FR3(SEQ ID N0:14或SEQ ID NO 16) 中位置8處的氨基酸是賴氨酸。
10.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的抗體或抗體片段，其中所述抗體包括選自下述的重鏈免 疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域a)人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域；2b)人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域；c)人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域；d)人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域；e)人IgM恒定結(jié)構(gòu)域；f)人IgE恒定結(jié)構(gòu)域；和g)人IgA恒定結(jié)構(gòu)域。
11.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的抗體片段，其中所述片段選自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv 片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；單抗體；和由抗體片段形成的多特異性抗體。
12.根據(jù)任何前述權(quán)利要求的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包括PEG。
13.藥物組合物，其包括根據(jù)任何前述權(quán)利要求的抗體或抗體片段。
14.經(jīng)分離的抗體，其選自a)包括由氨基酸序列SEQID NO :46組成的輕鏈和由氨基酸序列SEQ ID NO 47組成 的重鏈的抗體；b)包括由氨基酸序列SEQID NO :48組成的輕鏈和由氨基酸序列SEQ ID NO 49組成 的重鏈的抗體；和c)包括由氨基酸序列SEQID NO 50組成的輕鏈和由氨基酸序列SEQ ID NO 51組成 的重鏈的抗體。
15.與人IL-31結(jié)合的經(jīng)分離的抗體或抗體片段，其包括a)包括分別具有SEQID NO :1和3的氨基酸序列的⑶Rl和⑶R3以及具有 AIYPGDGDTRYSXaalXaa2FXaa3G(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列的CDR2的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中Xaal是谷氨酰胺或脯氨酸， Xaa2是絲氨酸或賴氨酸，并且Xaa3是谷氨酰胺或賴氨酸，并且其中所述人源化重鏈可變 結(jié)構(gòu)域包括與選自下述的氨基酸序列具有至少90%等同的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)FR1、FR2、 FR3 禾口 FR4 1)分別地SEQ ID NO :8(FR1)、9(FR2)、10(FR3)和 11(FR4)的氨基酸序列；2)分別地SEQ ID NO :12(FR1)、13(FR2)、14(FR3)和 15(FR4)的氨基酸序列；禾口3)分別地SEQ ID NO :12(FR1)、13(FR2)、16(FR3)和 15(FR4)的氨基酸序列；并且其中在FRl (SEQ ID NO :8或SEQ ID NO 12)中位置29處的氨基酸是亮氨酸，并且 在FR3(SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 16)中位置32處的氨基酸是苯丙氨酸；和b)包括分別由SEQID NO :5(CDR1)、6(CDR2)和7(CDR3)的氨基酸序列組成的CDR1、 ⑶R2和⑶R3的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括分別與SEQ ID NO 17、18、19和20的氨基酸序列具有至少90%等同，或分別與SEQ ID NO :17、18、21和20 的氨基酸序列具有至少90%等同的氨基酸序列的構(gòu)架區(qū)FR5、FR6、FR7和FR8 ；并且其中在FR7(SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO 21)中位置15處的氨基酸是酪氨酸。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的抗體或抗體片段，其中SEQID NO 22的Xaal、Xaa2和Xaa3選自a)Xaal谷氨酰胺，Xaa2是賴氨酸，并且Xaa3是賴氨酸；b)Xaal是脯氨酸，Xaa2是絲氨酸，并且Xaa3是谷氨酰胺；和c)Xaal是谷氨酰胺，Xaa2是賴氨酸，并且Xaa3是谷氨酰胺。
17.根據(jù)權(quán)利要求15的抗體或抗體片段，其中在FR3(SEQ IDN0:14或SEQ ID NO 16) 中位置8處的氨基酸是亮氨酸。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-17中任一項的抗體或抗體片段，其中所述抗體包括選自下述的 重鏈免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域a)人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域；b)人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域；c)人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域；d)人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域；e)人IgM恒定結(jié)構(gòu)域；f)人IgE恒定結(jié)構(gòu)域；和g)人IgA恒定結(jié)構(gòu)域。
19.根據(jù)權(quán)利要求15-18中任一項的抗體片段，其中所述片段選自Fab、Fab'、 F(ab' )2、Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；單抗體；和由抗體片段形成的多特 異性抗體。
20.根據(jù)權(quán)利要求15-19中任一項的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包括PEG。
21.藥物組合物，其包括權(quán)利要求15-20中任一項的抗體或抗體片段。
22.治療哺乳動物中的炎癥的方法，其包括施用與人IL-31結(jié)合的抗體或抗體片段，其 中所述抗體或抗體片段包括a)包括分別由氨基酸序列SEQID NO :1、2和3組成或分別由氨基酸序列SEQ ID NO 1、4和3組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域；和b)包括分別由SEQID NO :5、6和7的氨基酸序列組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化 輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
23.治療哺乳動物中的瘙癢的方法，其包括施用與人IL-31結(jié)合的抗體或抗體片段，其 中所述抗體或抗體片段包括a)包括分別由氨基酸序列SEQID NO :1、2和3組成或分別由氨基酸序列SEQ ID NO 1、4和3組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域；和b)包括分別由SEQID NO :5、6和7的氨基酸序列組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化 輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
24.與人IL-31結(jié)合的經(jīng)分離的抗體或抗體片段，其包括選自下述的人源化重鏈可變 結(jié)構(gòu)域和人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域a)與SEQID NO :25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；b)與SEQID NO :27的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；c)與SEQID NO :25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 28的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；d)與SEQID NO :29的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；e)與SEQID NO :27的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 28的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；f)與SEQID NO :30的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；g)與SEQID NO :31的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；h)與SEQID NO :25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 32的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；i)與SEQID NO :25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 33的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；j)與SEQ ID NO :25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 34的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；k)與SEQ ID NO :35的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；1)與SEQ ID NO :27的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 32的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；m)與SEQ ID NO :27的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO :33的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；η)與SEQ ID NO :27的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 34的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；ο)與SEQ ID NO :36的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 37的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；P)與SEQ ID NO :25的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和包括SEQ ID NO 37的氨基酸序列的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；q)包括SEQ ID NO :38的氨基酸序列的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域和包括SEQ ID NO 37 的氨基酸序列的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；r)包括SEQ ID NO :39的氨基酸序列的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域和包括SEQ ID NO 37 的氨基酸序列的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；s)與SEQ ID NO :40的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 37的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；t)與SEQ ID NO :41的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 37的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；u)與SEQ ID NO :42的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 37的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；ν)與SEQ ID NO :43的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 37的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；w)與SEQ ID NO :44的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 26的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域； χ)與SEQ ID NO :36的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域和與SEQ ID NO 28的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；y)與SEQ ID NO :36的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO 28的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；和 ζ)與SEQ ID NO :45的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域 和與SEQ ID NO :37的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的抗體或抗體片段，其中所述抗體包括選自下述的重鏈免疫球蛋 白恒定結(jié)構(gòu)域a)人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域；b)人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域；c)人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域；d)人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域；e)人IgM恒定結(jié)構(gòu)域；f)人IgE恒定結(jié)構(gòu)域；和g)人IgA恒定結(jié)構(gòu)域。
26.根據(jù)權(quán)利要求24或25的抗體片段，其中所述片段選自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv 片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；單抗體；和由抗體片段形成的多特異性抗體。
27.根據(jù)權(quán)利要求24-26中任一項的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包括PEG。
28.與人IL-31結(jié)合的抗體或抗體片段在制備用于治療哺乳動物中的炎癥的藥物中的 用途，其中所述抗體或抗體片段包括a)包括分別由氨基酸序列SEQID NO :1、2和3組成或分別由氨基酸序列SEQ ID NO 1、4和3組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域；和b)包括由SEQID NO :5、6和7的氨基酸序列組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域。
29.與人IL-31結(jié)合的抗體或抗體片段在制備用于治療哺乳動物中的瘙癢的藥物中的 用途，其中所述抗體或抗體片段包括a)包括分別由氨基酸序列SEQID NO :1、2和3組成或分別由氨基酸序列SEQ ID NO 1、4和3組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域；和b)包括由SEQID NO :5、6和7的氨基酸序列組成的⑶R1、⑶R2和⑶R3的人源化輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域。
全文摘要
本發(fā)明提供了人源化小鼠抗人IL-31抗體和抗體片段，其能夠結(jié)合IL-31，并且從而中和、抑制、限制或減少IL-31的促炎或促瘙癢效應(yīng)。
文檔編號C07K16/24GK101970488SQ200880119654
公開日2011年2月9日 申請日期2008年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月7日
發(fā)明者K·邦登斯加德, R·貝克曼 申請人:津莫吉尼蒂克斯公司