專利名稱：抗light的人源化抗體及其使用的制作方法
抗LIGHT的人源化抗體及其使用
背景技術：
本申請要求2009年3月M日提交的美國臨時申請第61/202，661號的權益。美國臨時申請第61/202，661號的全部內容通過引用并入本文。本發(fā)明涉及特異性結合LIGHT多肽的抗原結合多肽和制備及使用該類抗體的方法。具體地，本發(fā)明涉及特異性結合LIGHT多肽的人源化抗原結合多肽。所述抗原結合多肽用于治療和診斷免疫性疾病和病癥、炎癥性疾病和病癥和惡性疾病和病癥，例如，炎癥性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、多發(fā)性硬化癥、類風濕關節(jié)炎和移植。與腫瘤壞死因子(TNF)在結構上有關的蛋白質統(tǒng)稱為TNF超家族。LIGHT是 TNF超家族的一個成員，其在被激活的T細胞和未成熟的樹突狀細胞中表達(Tamada等， J. Immunology. 2000)。LIGHT是II型跨膜蛋白，被稱為TNF超家族成員14 (TNFSF14)，也被稱為TL5、LTg、⑶258和HVEML。LIGHT是T協(xié)同刺激分子，LIGHT誘導T細胞增殖和細胞因子的產生(Tamada K.等，Nat. Med. 2000)。LIGHT也誘導單核細胞和內皮細胞中的炎癥反應(Otterdal 等，Blood 2006 ；Chang 等，J. Biomed. Sci. 2005)。LIGHT結合于在不同細胞類型上表達的3個不同受體在T-細胞和B細胞上表達的皰疹病毒進入介質(HVEM) (Kwon等，J. Biol. Chem 1997)、在基質細胞和非造血細胞上表達的淋巴毒素 β 受體(LT β R) (Ettinger 等，Curr TopMicrobiol Immunol. 2000)和誘騙受體3/TR6。樹突狀細胞和T細胞中的LIGHT增強了 T細胞增殖和細胞因子的產生。rLIGHT 可直接協(xié)同刺激T細胞反應(Tamada K.等，Nat. Med. 2000)。LIGHT在各種炎癥性疾病和病癥中的作用已通過使用LIGHT缺陷模型和LIGHT過表達轉基因動物的各種模型所證明。LIGHT在小鼠中的過表達導致活化的外周T細胞群過度產生和嚴重的自身免疫性疾病的自發(fā)產生(Wang等，J. Clin. Invest. 2001) 0 LIHGT 的靶向破壞導致T細胞的協(xié)同刺激活化和Thl型免疫反應方面的缺陷(Scheu等，J. Exp. Med. 2002 ；Xu 等 J. Immunol. 2007)。由于LIGHT對T細胞的有效刺激活性，LIGHT是慢性炎癥的重要組成部分。因此， LIGHT的抗體，尤其是LIGHT拮抗劑抗體，會在治療與慢性炎癥有關的疾病中有用。這種疾病包括，但不僅限于下列討論的疾病。腸道菌群失調的免疫反應是炎癥性腸病(IBD)的主要病因。T輔助細胞在IBD的異常免疫反應中有重要作用。具體而言，已經將Thl細胞與克羅恩病聯系起來。一些研究已經驗證了 LIGHT在腸道炎癥中的關鍵作用。LIGHT過表達的轉基因小鼠易患T細胞介導的自身免疫疾病，且LIGHT轉基因小鼠表現出嚴重的T細胞介導的腸道炎癥并患上結腸炎(Wang J.等，J. Clin. Invest. 2004 ；Wang J.等，J. Immunol2005 ；Wang 等，J. Clin. Invest 2001 ； Shaikh等，J. Immunol. 2001)。此外，用可溶性LT β R-Fc阻斷LIGHT和其受體的相互作用改善了 TNBS 誘導的結腸炎(An，MM 等，Pharmacol. Res. 2005)。在人體染色體 19pl3. 312-14 上，LIGHT位于與IBD感受性基因座位重疊的位置(Rioux等，Am. J. Hum. Genet. (2000)； Bonen 等，Gastroenterology (2003))。在類風濕關節(jié)炎(RA)患者的關節(jié)滑液中已檢測出高水平的LIGHT蛋白。例子可參見，RA患者滑膜成纖維細胞中重組LIGHT誘導的炎癥介質(Recombinant LIGHT-induced inflammatory mediators in synovial fibroblastsfrom RA patients, Pierer 等， Rheumatology (2007) ；Kang 等，Arthritis &Rheumatism(2007))禾Π 阻斷 LIGHT-受體相互作用防止膠原誘導性關節(jié)炎的進展(Blocking LIGHT-receptor interaction prevents development ofCoIlagen-Induced Arthritis, Fava 等，J. Immunol. (2003))。 最后，在2007年11月，Biogen IDEC公司宣布了在IIa期臨床試驗中對RA患者使用 baminercept (LT β R-Fc ffi^SS ) (Biogen IDEC Press Release, 2007 ^Ξ 11 月 9 日)。在肝炎的實驗模型中LIHGT被上調。通過利用抗體或者可溶性LT β R處理阻斷了 LIGHT和LIGHT受體的相互作用，顯著地減弱了肝臟炎癥，減少了炎癥細胞因子的產生并防止小鼠患上致命的肝炎(Anand 等，J.Clin. Invest. (2006) ；An 等 Biol. Pharm. Bull.
(2006))ο幾份研究表明，在動物模型中阻斷LIGHT-受體相互作用防止移植物抗宿主病 (GVHD)并且延長同種異體移植物的存活(Xu等，Blood(2007) Je等，J. Exp. Med. (2002)； Fan 等，Transplantation (2007))。除了上面提到的研究之外，阻斷LIGHT受體(LTi3R*HVEM)還顯著地減少不同動物模型中的疾病跡象，所述疾病例如，膠原誘導性關節(jié)炎(CIA)和實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)，實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)動物模型是多發(fā)性硬化癥(MQ的動物模型 (Fava 等，J Immunol. (2003)和 Suen 等，J. Exp. Med. (1997))。LIGHT 敲除的小鼠也在 IL-12 的產生方面有缺陷，因此缺乏對炎癥刺激產生IFNy介導的、抗原特異性Thl反應的能力。因此，本領域有必要創(chuàng)造特異性結合于LIGHT的抗原結合多肽和拮抗劑抗原結合多肽以治療炎癥性、惡性、自身免疫性疾病和病癥，例如多發(fā)性硬化癥、IBD和RA以及上文描述的或本領域已知的其他疾病。與可溶性受體的使用相比，特異性結合LIGHT的抗原結合多肽和拮抗劑抗原結合多肽有一些優(yōu)勢，例如1)與Fc-融合蛋白相比，抗體在血流中具有更長的半衰期；2)與可溶性受體相比，抗體具有更高的療效，因為抗體可被設計成對 LIGHT具有更高的親和力；以及3)由于對LIGHT的特異性，抗體是比可溶性受體更為安全的選擇。LIGHT拮抗劑抗體只會阻斷LIGHT介導的信號轉導從而改善局部炎癥過程，而沒有由可溶性受體引起的可最終導致免疫抑制的次級淋巴組織結構的全身性衰竭。

發(fā)明內容
本發(fā)明基于LIGHT多肽在炎癥疾病中的作用。具體地，本發(fā)明基于LIGHT刺激諸如IFN- γ和IL-8之類的致炎性細胞因子的能力并且基于LIGHT是⑶3協(xié)同刺激的Thl7 細胞產生的IL-17的強效刺激劑。由于最近發(fā)現Thl7細胞是所有主要的自身免疫病癥中引起持續(xù)發(fā)炎和組織損傷的炎癥過程的重要驅動因素，因此LIGHT和IL-17的產生之間的聯系尤其重要，所述主要的自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化癥(MS)、炎癥性腸病(IBD)和類風濕關節(jié)炎(RA)?？傮w上，本發(fā)明涉及特異性結合于TNF樣細胞因子TL5的抗原結合多肽，所述TNF 樣細胞因子TL5又稱LIGHT (參見GenBank登錄號AF036581，通過引用全部并入本文)。在一些實施方式中，本發(fā)明的抗原結合多肽包括人源化重鏈可變區(qū)(VH)和人源化輕鏈可變區(qū)(VK)。例如，在一些實施方式中，本發(fā)明的抗原結合多肽包括人類抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)的骨架區(qū)(FR)，同時基本上保留親本單克隆抗體的抗原結合特異性(即互補決定區(qū) (OTR))。除⑶R外，人源化重鏈可變區(qū)和/或人源化輕鏈可變區(qū)至少約87%人源化、至少約 90%人源化、至少約95%人源化、至少約98%人源化或至少約100%人源化?？乖Y合多肽分子來自單克隆抗體供體(例如，小鼠單克隆抗體供體)并包括來自單克隆抗體的CDR(例如，小鼠單克隆CDR)。在一些實施方式中，本發(fā)明的抗原結合多肽是LIGHT活性的拮抗劑和 /或LIGHT與LIGHT受體相互作用的拮抗劑。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(l)CDR-Hl，所述 CDR-Hl包含氨基酸序列X1Y X2X3X4 (SEQ IDNO 1 ，其中X1是氨基酸D、S、T或N, X2是氨基酸Y、L或W，&是氨基酸I或M，且&是氨基酸Y、H、E或N ； (2)⑶R-H2，所述⑶R-H2包含氨基酸序列 XJAPXJiPgCKAAAJXMi^FXMXySEQ ID NO :19)，其中)(5 是氨基酸 Y、M、V 或 W，X6是氨基酸D、N、H或F，X7是氨基酸Y、G或S，X8是氨基酸N、S、T或D，X9是氨基酸G、 S或D，X10是氨基酸G、D、E或I，X11是氨基酸T或S，X12是氨基酸K或R，且X13是氨基酸Y 或L，X14是氨基酸Q或E，X15是氨基酸K或N，X16是氨基酸K、I或R，且X17是氨基酸G、A 或 D ； (3)CDR-H3，所述 CDR-H3 包含選自以下的氨基酸序列(i) WX18X19 (SEQ IDNO 20) ； (ii) X20X21X22X23X24X25X26X27X28 (SEQ ID NO 21)；和(i i i) X20X21X22X23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO 22)，其中X18是氨基酸D或N，X19是氨基酸R或Y，X20是氨基酸Ε、T或G，X21是氨基酸D、S 或N，X22是氨基酸Y或G，X23是氨基酸G、S或V，X24是氨基酸I、S或W，)(25是氨基酸S、W或 A，X26是氨基酸T、F或M，X27是氨基酸Y、P或D，且\2%是氨基酸S或Y。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(l)CDR-Ll，所述 CDR-Ll 包含選自以下的氨基酸序列(iU29)(3(1SX31X32X33X34X35X36X37X38 (SEQ ID NO :38) ； (ii)X
(SEQ ID NO 39)；和 QiiU29X3tlSX31X32X33X34X35X36X37X38X3 A0X41X42H(SEQ ID NO :40)，其中X29是氨基酸K或R，X30是氨基酸A或S，)(31是氨基酸Q或 K，X32是氨基酸D、S或N，X33是氨基酸V、I或L，X34是氨基酸G、S、V或L，X35是氨基酸T、 N或H，X36是氨基酸A、N或S，X37是氨基酸V、L、N或G，X38是氨基酸A、H、G或Y，X39是氨基酸N或T，X40是氨基酸T或Y，X41是氨基酸Y或M，X42是氨基酸F或H ； ( ⑶R-L2，所述 CDR-L2 包含氨基酸序列 X43X44X45X46X47X48X49 (SEQID NO 41)，其中 X43 是氨基酸 W、Y、K 或 I， X44是氨基酸A、T或V，X45是氨基酸S或Y，X46是氨基酸T、Q或N，X47是氨基酸R、S或L，X48 是氨基酸H、I、F或E，且X49是氨基酸T或S ；和( ⑶R-L3，所述⑶R-L3包含氨基酸序列 X50X51X52X53X54X55PX56T (SEQ ID NO :4 ，其中 X50 是氨基酸 Q 或 S，)(51 是氨基酸 Q 或 H，X52 是氨基酸S或Y，X53是氨基酸S、N、T或R，X54是氨基酸S、R、H或E，)(55是氨基酸Y、W、V或L，且 X56是氨基酸L或Y。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)和人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-Hl，所述CDR-Hl包含氨基酸序列X1YX2X3X4(SEQ ID NO 18)，其中X1是氨基酸D、S、T或N，X2是氨基酸Y、L或W，X3是氨基酸I或M，且&是氨基酸Y、H、E或N ；⑵ CDR-H2，所述 CDR-H2 包含氨基酸序列 X5M6PX7X8X9XltlX11X12X13NX14X15FX16X17 (SEQ ID NO 19)， 其中&是氨基酸Y、Μ、V或W，X6是氨基酸D、N、H或F，X7是氨基酸Y、G或S，X8是氨基酸N、S、T或D，X9是氨基酸G、S或D，Xltl是氨基酸G、D、E或I，X11是氨基酸T或S，X12是氨基酸K或R，且X13是氨基酸Y或L，X14是氨基酸Q或E，X15是氨基酸K或N，X16是氨基酸K、 I或R，且是氨基酸G、A或D ；和(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含選自以下的氨基酸序列
(i)WX18X19(SEQ ID NO 20) ； (ii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28 (SEQID NO 21)；和(iii)X20X21X22X 23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO :2 ，其中 X18 是氨基酸 D 或 N，X19 是氨基酸 R 或 Y，X20 是氨基酸Ε、T或G，X21是氨基酸D、S或N，X22是氨基酸Y或G，X23是氨基酸G、S或V，X24是氨基酸I、S或W，)(25是氨基酸S、W或A，X26是氨基酸T、F或M，X27是氨基酸Y、P或D，且\2%是氨基酸S或Y。所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-Ll，所述⑶R-Ll包含選自以下的氨基酸序列Gn29X30SX31X32X33X34X35X36X37Xs^SEQ ID NO 38) Jiin29X30SX31X32X33X34X35X36X37 ^38^39^40^41^42 (SEQ ID NO 39)；禾口 (^:1))^9)(30^)(3^32)(33)(34)^5)^6)(37)^8)(39)(40)(4^4211(^ ID NO 40)，其中)(29是氨基酸K或R，X30是氨基酸A或S，X31是氨基酸Q或K，X32是氨基酸D、S或 N，X33是氨基酸V、I或L，X34是氨基酸G、S、V或L，X35是氨基酸T、N或H，X36是氨基酸A、N 或S，X37是氨基酸V、L、N或G，X38是氨基酸A、H、G或Y，X39是氨基酸N或T，X40是氨基酸 T或Y，X41是氨基酸Y或M，X42是氨基酸F或H ； ( ⑶R-L2，所述⑶R-L2包含氨基酸序列 X43X44X45X46X47X48X49 (SEQ ID NO :41)，其中 X43 是氨基酸 W、Y、K 或 IJ44 是氨基酸 A、T 或 V, X45 是氨基酸S或Y，X46是氨基酸T、Q或N，X47是氨基酸R、S或L，X48是氨基酸H、I、F或E，且 X49 是氨基酸 τ 或 S ；和(3) CDR-L3，所述 CDR-L3 包含氨基酸序列)(5(1X51X52X53X54)(55PX56T (SEQID NO 42)，其中)(5。是氨基酸Q或S，X51是氨基酸Q或H，X52是氨基酸S或Y，X53是氨基酸S、 N、T或R，X54是氨基酸S、R、H或E，X55是氨基酸Y、W、V或L，且是氨基酸L或Y。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1) CDR-H1，所述 CDR-Hl 包含選自以下的氨基酸序列(i) SSYIH (SEQ ID NO :23)，(ii) DYYIY (SEQ ID NO: 26)，(iii)TYLIE(SEQ IDNO 29), (iv)TYWMN(SEQ ID NO :32)，和(v)NYLIE(SEQ ID NO :35)； 0)CDR-H2，所述 CDR-H2 包含選自以下的氨基酸序列(i)WIFPGSDITKYNEKFKG(SEQ ID NO: 24)，(ii)YIDPYNGGTKYNQKFKD(SEQ ID NO 27), (iii)VINPGTGETKYNENFRA(SEQ ID NO :30)， (iv)MIHPSDSESRLNQKFID(SEQ ID NO :33)，和(ν)VINPGSGDTKYNENFKG(SEQ ID NO :36)；禾口 (3)CDR-H3，所述 CDR-H3 包含選自以下的氨基酸序列(i) EDYGISTYSAMDF (SEQ ID NO 25)，
(ii)TSGSSffFPY (SEQ IDNO 28)，(iii) WDR (SEQ ID NO 31), (iv) GNYVffAMDY (SEQ ID NO: ；34)，和(ν) WNY (SEQ ID NO :37)。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1) CDR-Ll，所述CDR-Ll包含選自以下的氨基酸序列(i) KASQDVGTAVA (SEQ ID NO 43)， (ii)RASQSISNNLH(SEQ ID NO :46)，(iii)RSSQNLVHSNGNTYFH(SEQ ID NO 49), (iv) RASKSVSTSGYTYMH(SEQ ID NO: 52)，和(ν)RSSQSLLHSNGNTYFH(SEQ ID NO :55) ； (2)CDR_L2， 所述CDR-L2包含選自以下的氨基酸序列(i) WASTRHT (SEQID NO :44)，(ii) YTYQSIS (SEQ ID NO 47), (iii)KVSNRFS(SEQ IDNO :50)，和(iv)ITSNLES(SEQ ID NO :53)；禾口 (3)CDR_L3，所述CDR-L3 包含選自以下的氨基酸序列(i)QQYSSYPLT(SEQ ID NO 45), (ii) QQSNRWPLT (SEQ ID NO 48), (iii)SQSTHVPYT(SEQ ID NO :51)，和(iv)QHSRELPYT(SEQ ID NO :54)。本發(fā)明的另一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)和/或人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)⑶r-hl，所述cdr-hl包含氨基酸序列syyih(seq id no 23)，(2) cdr-h2，所述 cdr-h2 包含氨基酸序列 wifpgsditkynekfkg(seq id no :24)，和(3)cdr_h3， 所述⑶r-h3包含氨基酸序列edygistysamdf(seq id no 25)；所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1) cdr-ll，所述 cdr-ll 包含氨基酸序列 kasqdvgtava (seq id no 43)，⑵ cdr-l2， 所述cdr-l2包含氨基酸序列wastrht (seq id no 44)，和cdr-l3，所述cdr-l3 (3)包含氨基酸序列 qqyssyplt (seq id no :45)。本發(fā)明的實施方式還包括特異性結合于light多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列(1)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX ‘ ^ewx ‘ 2gx5ix6px7x8x
s3x10x11x12x13nxwx15fx16x17x' 3x' 4tx ‘ 5tx' 6dx' 7sx' 8stx' 9ymelsx' 10lrsx' ndtavyyc-ARffX18X19WGQGTLVTVSS (SEQ IDNO :1)；(2)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX' ^ewx' 2gx5ix6px7x8x9x10
x11x12x13nx14x15fx16x17x' 3x' 4tx' 5tx' 6dx' 7sx' 8stx' 9ymelsx'10lrsx'ndtavyycarx20)(2 !X22X23X24X25X26X27X28Wgqgtlvtvss (seq id no a)；禾口(3)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX'^ewx'2gx5ix6px7x8x9x10
x11x12x13nx14x15fx16x17x' 3x' 4tx' 5tx' 6dx' 7sx' 8stx' 9ymelsx' 10lrsx' ndtavyycarx20)(2 !X22X23X24X25X26X27X28AMDFffGQGTLVTVSS (SEQ ID NO :3)，其中 X1 是氨基酸 D、S、T 或 N，X2 是氨基酸y、l或w，x3是氨基酸i或m，&是氨基酸y、h、e或n，x5是氨基酸y、μ、v或w，x6是氨基酸d、n、h或f，x7是氨基酸y、g或s，x8是氨基酸n、s、t或d，x9是氨基酸g、s或d， X10是氨基酸G、D、E或I，X11是氨基酸T或S，X12是氨基酸K或R，且)(13是氨基酸Y或L，X14 是氨基酸q或e，x15是氨基酸k或n，x16是氨基酸k、i或r，且x17是氨基酸g、a或d，其中 x18是氨基酸d或n，x19是氨基酸r或y，x20是氨基酸ε、t或g，x21是氨基酸d、s或n，x22 是氨基酸y或g，x23是氨基酸g、s或v，x24是氨基酸i、s或w，)(25是氨基酸s、w或a，x26是氨基酸t(yī)、f或m，x27是氨基酸y、p或d，x28是氨基酸s或y，且其中x'工是氨基酸r或g， x' 2是氨基酸m或i，x' 3是氨基酸k或r，x' 4是氨基酸v或a，x' 5是氨基酸m、l或 i, x' 6是氨基酸v或r，x' 7是氨基酸t(yī)或k，x' 8是氨基酸a、i或t，x' 9是氨基酸v 或a，x' 1(1是氨基酸r或s，且x'工工是氨基酸d或ε。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于light多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyyihwvrqapgqrlewmgwifpgsditkynekfkgrvt itrdtsastaymelsslrsedtavyycaredygistysamdfwgqgtlvtvss(seq id no 4),qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftdyyiywvrqapgqglewigyidpynggtkynqkfkdrvt mtrdtsistaymelsrlrsddtavyycartsgsswfpywgqgtlvtvss(seq id no 5),
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIYWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNGGTKYNQKFKDKAT LTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTSGSSWFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 6),QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYLIEWVRQAPGQGLEWMGVINPGTGETKYNENFRARVT MTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWDRWGQGTLVTVSS(SEQ ID N0:7)，和QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPSDSESRLNQKFIDRVT MTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYVWAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :8)。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列(1)X' 12X' 13X' I4X' I5TQX ‘ I6PX' 17^' 18^' 19^' 2(|X, 2lX, 22^' 23^' 24^' 25^' 26^' 2
7父 28-^ 29-^ 30^29-^305^31-^32-^33-^34-^35-^36-^37-^38^ 31-^ 3234-^ 35-^37-^ 38^ IX
'I39X43X44X45X46X47X48X49GX' 40PX' 41RFSGSGSGTX' 42FTLX' 43IX' 44X' 45X' 46X' 47X' 48EDX' 49X' ggX' S1YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTXr 52VEIKR (SEQ ID NO :9)；(2)V 12X, I3X1 14X1 15TQX1 I6PX1 I7X1 18^1 I9X1 20X1 21X1 22X1 23^1 24X1 25X1 26^1 2 7乂 28-^- 29乂 3〇G 乂 29乂30§乂31乂32 乂 33^^4X35 乂 36乂37乂38 乂 39 乂40 乂 41 乂 42監(jiān) 31^ 3234^ 35^ 36^ 37^
1 3gLIX ‘39^43^44^45^46^47^48^49^ ‘ 4〇PX ‘ 41 RFSGSGSGTX ‘ ^FTLX ‘ 43工乂 ‘ 44^ ‘ 45乂 ‘ 46^ ‘ 47^ ‘ 48^0
V 49X'5。X' S1YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTXr &VEIKR(SEQ IDNO :10)；禾口(3)V 12X, 13X1 14X1 I5TQX1 I6PX1 I7X1 18^1 I9X1 20X1 21X1 22X1 23^1 24X1 25X1 26乂, 2
7乂 28-^- 29乂 30^29^305^31 ^32^33^34^35^36^37^38^39^40 31^- 3234^- 35^- 36^- 3
7X ‘ ‘ 39^3^44^5 ^- ‘ ‘ 41 RFSGSGSGTX ‘ ‘ 43 ^, 44^ ‘ 45^ ‘ 46^ ‘ 47^ ‘ 4δΕ Χ ‘ 49^ ‘50x' 51YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQ IDNO :11)，其中 &9是氨基酸K 或R， X30是氨基酸A或S，X31是氨基酸Q或K，X32是氨基酸D、S或N，X33是氨基酸V、I或L，X34 是氨基酸G、S、V或L，X35是氨基酸T、N或H，X36是氨基酸A、N或S，X37是氨基酸V、L、N或 G，X38是氨基酸A、H、G或Y，X39是氨基酸N或T，X40是氨基酸T或Y，X41是氨基酸Y或M， X42是氨基酸F或H，X43是氨基酸W、Y、K或I，X44是氨基酸A、T或V，)(45是氨基酸S或Y，)(46 是氨基酸T、Q或N，X47是氨基酸R、S或L，X48是氨基酸H、I、F或E，)(49是氨基酸T或S，)(5(1 是氨基酸Q或S，X51是氨基酸Q或H，X52是氨基酸S或Y，X53是氨基酸S、N、T或R，X54是氨基酸S、R、H或E，X55是氨基酸Y、W、V或L，X56是氨基酸L或Y，且其中X' 12是氨基酸D或 E, X' 13是氨基酸I或V，X' 14是氨基酸V或Q，X' 15是氨基酸M或L，X' ^5是氨基酸S 或T，X' 17是氨基酸3、0^或1^3' ^是氨基酸3、11或？3' 19是氨基酸L或Q，X'加是氨基酸A、S或P，X' 21是氨基酸V或Α，Χ' μ是氨基酸S或T，X' ^是氨基酸？、1^或乂， X' ^是氨基酸G或K，X' 是氨基酸E、Q或D，X' ^5是氨基酸R、K或P，X' 27是氨基酸 A或V，X' w是氨基酸T或S，X'㈨是氨基酸I或L，X' 3(1是氨基酸S、T或N，X' ^是氨基酸F或Y，X' %是氨基酸Q或L，X' ^是氨基酸K或R，X' 34是氨基酸G或D，X' 35是氨基酸Q或K，X' %是氨基酸A、S或P，X' 37是氨基酸K、R或Q，X' 38是氨基酸L或R， X' 39是氨基酸￥或1(，1' 4(1是氨基酸V或I，X' 41是氨基酸S、A或D，X' 42是氨基酸D或E，X' 43是氨基酸K或T，X' 44是氨基酸3或隊乂' 45是氨基酸S或R，X' 46是氨基酸 V或L，X' 47是氨基酸Q或E，X' 48是氨基酸？、々或33' 49是氨基酸？、々或￥3' 5Q是氨基酸A或G，X' 51是氨基酸T或V，且X' ^是氨基酸R或K。本發(fā)明的一些實施方式也包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGT EFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :12)，EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISNNLHWYQQKPDQSPKLLIKYTYQSISGVPSRFSGSGSGT DFTLTlNSLEAEDAATYYCQQSNRffPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 13)，EIVMTQSPATLSVSPGEKATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLIYYTYQSISGIPARFSGSGSGT EFTLTISSLQSEDFAVYYCQQSNRWPLTFGQGTRVEIKR(SEQ ID NO :14)，DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO 15),DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSG SGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 16)，禾口DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYTYMHWYQQKPGQPPKLLIYITSNLESGVPDRFSGS GSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :17)。本發(fā)明的一些實施方式包括特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含(a)重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQRLEWMGWIFPGSDITKYNEKFKGRVT ITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYGISTYSAMDFWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 4)和(b)輕鏈
可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGT EFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :12)。在本發(fā)明的一些實施方式中，特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽包含上述人源化重鏈或人源化輕鏈中的任一個或其組合。另外，在一些實施方式中，本發(fā)明的抗原結合多肽包含來自重鏈的上述⑶R區(qū)(即⑶R-H1、⑶R-H2或⑶R-H3)中的一個或一個以上， 或來自輕鏈的上述⑶R區(qū)(即⑶R-L1、⑶R-L2或⑶R-L3)中的一個或一個以上或其組合。在本發(fā)明的其他實施方式中，特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽是抗體分子或其片段，所述片段例如Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段或scFv分子。在一些實施方式中，所述抗原結合多肽是抗體分子?？贵w分子可包含嵌合抗體，包括例如，融合于鼠重鏈可變區(qū)和鼠輕鏈可變區(qū)的人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)。在其他實施方式中，所述抗原結合多肽是scFv分子，所述scFv分子包含具有選自 NH2-L-VH-X-VK-C00H和NH2-L-VK-X-VH-C00H的化學式的多肽，其中L·是前導序列，VH是人源化抗體重鏈可變區(qū)，X是連接多肽，VK是人源化抗體輕鏈可變區(qū)。在另外的實施方式中， 將scFv分子融合或連接于人類血清白蛋白多肽(HSA)以產生scFv HSA融合分子?？蓪?scFv分子融合或連接于HSA的N-末端或C-末端。在其他的實施方式中，所述抗原結合多肽是Fab片段?？蓪⒈景l(fā)明的Fab片段融合或連接于HSA上?？蓪ab片段的重鏈或輕鏈融合或連接于HSA的N-末端或C-末端。本發(fā)明的一些實施方式包括結合或融合于治療劑或診斷劑的抗原結合多肽。例如，治療劑可選自細胞毒性劑、放射性標記物、免疫調節(jié)劑、激素、酶、寡核苷酸、光敏治療劑及其組合。診斷劑的例子可包括放射性標記物、光敏診斷劑、超聲增強劑或非放射性標記物。本發(fā)明的一些實施方式還包括含有本發(fā)明抗原結合多肽的組合物和制備這種多肽的方法。此外，本發(fā)明的實施方式包括治療或診斷炎癥性、免疫性或惡性疾病或病癥的方法，所述方法包括將本發(fā)明的抗原結合多肽和組合物給藥于有此需要的患者。在其他實施方式中，本發(fā)明包括使用本發(fā)明的組合物治療疾病的方法，所述疾病包括但不限于自身免疫性疾病(例如，狼瘡)、炎癥性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、關節(jié)炎(例如，類風濕關節(jié)炎)、多發(fā)性硬化癥、移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、中樞神經系統(tǒng)損傷、諸如克羅恩病、銀屑病、白血病或淋巴瘤(例，慢性淋巴細胞白血病(CLL))之類的Thl介導的腸道疾病、動脈粥樣硬化、肺癌與結腸癌以及諸如肝炎之類的病毒感染。在一些實施方式中，本發(fā)明包括分離的編碼前述抗原結合多肽的多核苷酸?？蓪⒍嗪塑账峥刹僮鞯剡B接至啟動子以在合適的宿主細胞中表達所編碼的多肽。另外，本發(fā)明的實施方式包括生產本發(fā)明的抗原結合多肽的方法，所述方法包括a)培養(yǎng)用多核苷酸轉化的細胞以表達所編碼的多肽，所述多核苷酸編碼本發(fā)明的抗原結合多肽；b)回收由此表達的多肽。


圖1表示從外周血淋巴細胞(PBL)中分離Thl和Thl7細胞，所述外周血淋巴細胞 (PBL)由聚蔗糖密度梯度離心法從血液分離。去除單核細胞后，用2yg/mL PHA加IL-12和抗-IL-4抗體對Thl細胞進行培養(yǎng)。Thl7細胞在37°C下被結合于板的抗-⑶3抗體加可溶性抗-⑶觀抗體或IL-12加IL-18刺激2天。收集細胞培養(yǎng)的上清液，并由ELISA檢測上清液中IFN-Y和IL-17的產生。圖2表示LIGHT如何誘導Thl7細胞產生IL-17。37°C下，在不存在LIGHT或存在各種濃度的LIGHT的情況下，用結合于板的抗-CD3抗體刺激Thl7細胞2天。收集細胞培養(yǎng)上清液，并用ELISA檢測上清液中IL-17的產生。圖3說明鼠抗-LIGHT單克隆抗體(10D11)如何抑制LIGHT與其受體結合。用蛋白 A捕獲法將LIGHT受體HVEM (TR2)、誘騙受體3 (TR6)和LT β R的Fc融合蛋白包被在96孔板上。在不存在LIGHT抗體或存在各種濃度的LIGHT抗體的情況下，使用鏈霉親和素-HRP 測定LIGHT-生物素與受體的結合。圖4說明鼠抗-LIGHT單克隆抗體(10D11)如何抑制LIGHT誘導內皮細胞產生 IL-8。將HUVEC細胞接種于96孔板中。在不存在LIGHT抗體或存在LIGHT抗體(10D11) 和非中和對照(19H9)的情況下，用LIGHT處理匯合的HUVEC細胞5小時。用ELISA測定來自HUVEC的IL-8分泌。圖5A至5C說明各種抗-LIGHT鼠單克隆抗體如何抑制LIGHT誘導的HT-四細胞凋亡。LIGHT/TL5誘導結腸癌細胞系HT-29的細胞死亡。用HT-四細胞活性檢測(如實施例2所述)測定LIGHT抗體的中和活性。37°C下用IFN- γ預處理HT-四細胞6小時。然后在不存在抗-LIGHT或存在各種濃度的抗-LIGHT和對照抗體或LT β R-Fc的情況下用LIGHT 培養(yǎng)細胞3天。細胞活性用細胞滴度Glo試劑(!Iomega)測定。圖5A顯示鼠抗-LIGHT單克隆抗體(IODll)抑制LIGHT誘導的HT-四細胞凋亡的能力。圖5B和圖5C顯示鼠源抗體 5E10、13C7、14A10、14G8、15G4、7G5、18F1、2B12、16F12、18B1 和 10D11AB 抑制人(B)和獼猴 (C) LIGHT誘導的HT-四細胞凋亡的能力。圖6A表示小鼠抗-LIGHT IODll的VH結構域與最接近的人胚系VH1-02的比對。該比對用作制備人源化IODl IVH的模板，所述人源化IODl IVH在圖6A確定為Hum 10D11VH#1。圖6B表示小鼠抗-LIGHT 10D11的VH結構域與確定為CAI54212的表達抗體VH結構域的比對，CAI54212部分來自圖6A的VH1-02胚系。該序列比對用作制備人源化IODl IVH 的模板，所述人源化IODl IVH在圖6B確定為HumlODl 1VH#2。圖6C表示小鼠抗-LIGHT 10D11的VK結構域與最接近的人類胚系基因似6的比對。該序列比對用作制備人源化10D11VK的模板，所述人源化10D11VK在圖6C確定為 10D11VK#1。圖7表示2種不同的人源化LIGHT抗體抑制LIGHT誘導的HT-四細胞凋亡。37°C 下用IFN- γ預處理HT-四細胞6小時。然后在不存在小鼠和人源化LIGHT抗體或存在各種濃度的小鼠和人源化LIGHT抗體或對照抗體的情況下，用LIGHT培養(yǎng)細胞3天。用細胞滴度Glo試劑(ftOmega)測定細胞活性。圖8表示完全人源化LIGHT抗體抑制LIGHT誘導的HT-四細胞凋亡。37°C下用 IFN- γ預處理HT-四細胞6小時。然后在不存在小鼠和人源化LIGHT抗體或存在各種濃度的小鼠和人源化LIGHT抗體或對照抗體的情況下，用LIGHT培養(yǎng)細胞3天。用細胞滴度 Glo試劑(ftOmega)測定細胞活性。圖9A和圖9B表示，與對照抗體16H02相比，人源化抗體抑制人LIGHT (A)和獼猴 LIGHT(B)誘導的Η ^9細胞凋亡。37°C下用IFN-γ預處理HT-四細胞6小時。然后在不存在小鼠和人源化LIGHT抗體或存在各種濃度的小鼠和人源化LIGHT抗體或對照抗體的情況下，用LIGHT培養(yǎng)細胞3天。用細胞滴度Glo試劑(!Iomega)測定細胞活性。圖IOA和圖IOB表示LIGHT抗體和活化的T細胞的結合。Thl、Th2和Thl7細胞由外周血淋巴細胞(PBL)產生，所述PBL通過聚蔗糖密度梯度離心法從血液中分離。Thl 和Thl7細胞如前述(圖1)產生。通過2 μ g/mL PHA加IL-4和抗-IFN- α抗體培養(yǎng)PBL 3 天產生Th2細胞。3天后，細胞用5ng/mL IL-12維持。用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯 (PMA)和離子霉素激活細胞持續(xù)M小時以誘導LIGHT表達。通過流式細胞儀使用與PE結合的山羊抗-小鼠耦合抗體測定LIGHT抗體與活化T細胞的結合。圖IOA表示小鼠LIGHT抗體結合于活化的 1ι17細胞。常溫下將LIGHT抗體與 1ι17 細胞一起孵育40分鐘。小鼠IgGl用作陰性對照。圖IOB表示，與對照組相比，人源化5Ε10抗體與 ι 、Thl7和Th2活化的T細胞的結合。用PMA/離子霉素活化極化的T細胞持續(xù)M小時。常溫下將細胞與生物素標記的 LIGHT抗體或對照抗體一起孵育40分鐘。用PBS洗2次后，通過流式細胞儀用結合于PE的鏈霉親和素確定抗體與表達在活化T細胞上的LIGHT的結合。圖中虛線表示人源化LIGHT 抗體的結合。實體填充表示對照抗體的結合。圖IlA和圖IlB顯示候選的鼠抗-LIGHT抗體中的重鏈可變結構域㈧和輕鏈可變結構域(B) (5E10、13C7、14G8和18B1)的序列比對。圖中的方框表示每個序列的CDR結構域。圖IlC和圖IlD表示鼠5E10重鏈可變VH(C)和輕鏈可變VK (D)與三個最匹配的人胚系重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VK)序列的序列比對。
具體實施例方式術語的定義注意，單數形式(“a”或“an”)是指一個(一種)或一個以上(一種以上)；例如， “單數形式(“an”)抗原結合多肽”理解為代表一種或一種以上抗原結合多肽。因此，單數形式(“a”或“an”)、“一個(一種)或一個以上(一種以上)”和“至少一個(一種)，，在本發(fā)明中可互相交換使用。如本發(fā)明所使用的術語“多肽”意為包含單個“多肽”和多個“多肽”，并指由酰胺鍵 (也稱為肽鍵)線性連接的單體(氨基酸)組成的分子。術語“多肽”指兩個或兩個以上氨基酸的任何單鏈或多鏈，且不指明產物的具體長度。因此，用于指兩個或兩個以上氨基酸的單鏈或多鏈的肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白質”、“氨基酸鏈”或任何其他術語都包含在“多肽” 的定義內，且可用術語“多肽”替代任何上述肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白質”、“氨基酸鏈”或任何其他術語或與任何上述肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白質”、“氨基酸鏈”或任何其他術語互換使用。術語“多肽”還意指多肽表達后修飾的產物，包括而不限于被已知的保護基團糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、衍生化，以及蛋白水解切割或被非天然生成的氨基酸修飾。多肽可來自天然的生物來源或由重組技術產生，但未必由特定的核酸序列翻譯而來。它可以任何方式生成，包括通過化學合成而生成?！胺蛛x的”多肽或其片段、變體或衍生物指不在其自然環(huán)境中的多肽。不需要特殊水平的純化。例如，分離的多肽可從天然或自然的環(huán)境中分離出去。就本發(fā)明的目的而言， 認為宿主細胞中表達的重組產生的多肽和蛋白是分離的，正如已用任何適當的技術分離、 分餾、部分純化或完全純化的天然多肽或重組多肽。術語“多核苷酸”意為包括單個核苷酸和多個核苷酸，并指分離的核苷酸分子或結構，例如，信使RNA(mRNA)或質粒DNA (pDNA)。多核苷酸可含有常規(guī)的磷酸二酯鍵或非常規(guī)鍵(例如，諸如在肽核酸(PNA)中發(fā)現的酰胺鍵之類的酰胺鍵)。術語“核酸”指出現在多核苷酸中的任何一個或一個以上的核酸片段，例如，DNA或RNA片段。“分離的”核酸或多核苷酸意為從自然環(huán)境中分離的核酸分子(DNA或RNA)。例如，就本發(fā)明的目的而言，認為包含在載體內的編碼本發(fā)明抗體的重組多核苷酸是分離的。分離的多核苷酸的另外例子包括， 保持在異源宿主細胞中的重組多核苷酸或溶液中的(部分或完全)純化的多核苷酸。分離的RNA分子包括本發(fā)明多核苷酸的體內或體外RNA轉錄體。根據本發(fā)明的分離的多核苷酸或核酸進一步包括合成產生的這種分子。另外，多核苷酸或核酸可為諸如啟動子、核糖體結合位點或轉錄終止子之類的調控元件，或可包括諸如啟動子、核糖體結合位點或轉錄終止子之類的調控元件。如本發(fā)明所使用的“編碼區(qū)”是由翻譯成氨基酸的密碼子構成的核酸的一部分。雖然“終止密碼子”(TAG、TGA或TAA)不翻譯成氨基酸，但也可認為“終止密碼子”是部分編碼區(qū)，而任何側翼序列(例如啟動子、核糖體結合位點、轉錄終止子、內含子等等)不是部分編碼區(qū)。本發(fā)明的兩個或兩個以上編碼區(qū)可出現在單個多核苷酸結構中，例如，在單個載體上，或在分離的多核苷酸結構中(例如，在獨立的(不同的)載體上)。此外，任何載體可包含單個編碼區(qū)或包含兩個或兩個以上的編碼區(qū)，例如，單個載體可分別編碼免疫球蛋白重鏈可變區(qū)和免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)。另外，本發(fā)明的載體、多核苷酸或核酸可編碼異源編碼區(qū)，所述異源編碼區(qū)融合或不融合于編碼本發(fā)明的抗原結合多肽或其變體或衍生物的核酸。異源編碼區(qū)包括但不限于特定元件或模體，例如分泌信號肽或異源功能結構域。在一些實施方式中，所述多核苷酸或核酸是DNA。就DNA而言，包含編碼多肽的核酸的多核苷酸通?？砂瑔幼雍?或其他轉錄或翻譯控制元件，所述控制元件可操作地與一個或一個以上的編碼區(qū)結合?？刹僮鞯亟Y合使基因產物(如多肽)的編碼區(qū)與一個或一個以上的調控序列以該方式結合，以使基因產物的表達在調控序列的影響或控制之下。 如果啟動子功能的誘導導致編碼預期基因產物的mRNA轉錄，并且兩個DNA片段之間的連接性質沒有干擾指導基因產物表達的表達調控序列的能力或者沒有干擾待轉錄的DNA模板的能力，那么兩個DNA片段(例如多肽編碼區(qū)和與之相關的啟動子)是“可操作地結合” 的。因此，如果啟動子能夠使所述核酸轉錄，那么啟動子區(qū)將與編碼多肽的核酸可操作地結合。啟動子可為僅在特定細胞中指導基本的DNA轉錄的細胞特異啟動子。除啟動子外，其他轉錄控制元件(例如增強子、操縱基因、阻遏子和轉錄終止信號)可與多核苷酸可操作地結合，從而指導細胞特異性轉錄。本發(fā)明公開了合適的啟動子和其他轉錄控制區(qū)。本領域技術人員已知許多轉錄控制區(qū)。這些轉錄控制區(qū)包括但不限于在脊椎動物細胞中起作用的轉錄控制區(qū)，例如但不限于，來自巨細胞病毒(與內含子-A結合的立即早期啟動子)、猿猴病毒40 (早期啟動子)和逆轉錄病毒(如勞斯肉瘤病毒)的啟動子和增強子片段。其他轉錄控制區(qū)包括來自脊椎動物基因(例如肌動蛋白、熱休克蛋白、牛生長激素和兔球蛋白)的轉錄控制區(qū)，以及能夠控制真核細胞中基因表達的其他序列。另外的合適的轉錄控制區(qū)包括組織特異性啟動子和增強子以及淋巴因子可誘導的啟動子(例如， 可由干擾素或白介素誘導的啟動子)。相似地，本領域普通技術人員已知許多翻譯控制元件。這些翻譯控制元件包括但不限于核糖體結合位點、翻譯起始密碼子和終止密碼子以及來自小核糖核酸病毒的元件 (尤其是內部核糖體進入位點，或IRES，也稱作CITE序列)。在其他實施方式中，本發(fā)明的多核苷酸是RNA，例如，信使RNA(mRNA)的形式。本發(fā)明的多核苷酸和核酸編碼區(qū)可與編碼分泌多肽或信號多肽的其他編碼區(qū)結合，所述分泌多肽或信號多肽指導本發(fā)明的多核苷酸編碼的多肽分泌。根據信號假說，哺乳細胞分泌的蛋白質具有信號肽或分泌前導序列，一旦已經開始使生長的蛋白鏈輸出穿過粗面內質網，就從成熟蛋白中切除所述信號肽或分泌前導序列。本領域普通技術人員意識到， 脊椎動物細胞分泌的多肽一般具有融合于該多肽N-末端的信號肽，從完整的或“全長”的多肽中切除所述信號肽從而產生該多肽分泌的或“成熟的”形式。在一些實施方式中，使用天然的信號肽(例如，免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號肽)，或所述天然的信號肽序列的功能性衍生物，所述功能性衍生物保留了指導與其可操作地結合的多肽分泌的能力?？蛇x地，可使用異源哺乳動物信號肽或其功能性衍生物。例如，野生型前導序列可由人類組織型纖溶酶原激活物(TPA)或小鼠葡萄糖苷酸酶的前導序列代替。如本發(fā)明所描述的“抗體”或“抗體分子”，指全長的(即，自然生成或由正常免疫
20球蛋白基因片段重組過程形成)免疫球蛋白分子(例如，IgG抗體)。本發(fā)明包括結合LIGHT的一些抗原結合多肽，所述多肽包括抗體、抗體或抗原結合片段、其變體或衍生物。如上所述，除非特指全尺寸的抗體，術語“抗原結合多肽”包括全尺寸的抗體以及“抗原結合片段”或這些抗體的變體、類似物或衍生物，例如，天然產生的抗體或免疫球蛋白分子或工程抗體分子或以類似的方式將抗原結合于抗體分子的片段-Fab 片段、scFv分子等。抗體片段(包括單鏈抗體)可只包含可變區(qū)或包含與下列全部或部分結合的可變區(qū)鉸鏈區(qū)、CHU CH2和CH3結構域。本發(fā)明還包括抗原結合片段，所述抗原結合片段也包含可變區(qū)與鉸鏈區(qū)、CHI、CH2和CH3結構域的任意組合。如本發(fā)明所使用的術語“抗體片段”或“抗原結合片段”是抗體的一部分，例如 F(ab' )2、F(ab)2、Fab'、Fab、Fv、scFv等等。不考慮結構，抗體片段與完整抗體所識別的同種抗原結合。術語“抗體片段”包括適體、鏡像適體(spiegelmer)和雙價抗體。術語“抗體片段”還包括通過結合于特定抗原以形成復合物的像抗體一樣作用的任何合成蛋白或基因工程改造蛋白。例如，抗體片段包括由可變區(qū)構成的分離的片段，例如由重鏈和輕鏈的可變區(qū)構成的“Fv”片段、輕鏈和重鏈可變區(qū)由肽連接物連接的重組單鏈多肽分子(“scFv 蛋白”)、scFv融合于HSA的N末端或C末端進行表達的scFv HSA融合多肽、Fab’ HSA融合多肽和由模擬高變區(qū)的氨基酸殘基構成的最小識別單元，在所述Fab’ HSA融合多肽中， VH-CHl或VK-CK通過融合于HSA來產生，然后分別和與其同源的VK-CK輕鏈或VH-CHl重鏈一起折疊以形成Fab’。術語“抗原結合多肽”和“免疫球蛋白，，在本發(fā)明中可互換使用?？乖Y合多肽或免疫球蛋白包含重鏈的至少可變結構域，并通常包含重鏈和輕鏈的至少可變結構域。已相對熟知脊椎動物系統(tǒng)中基本的免疫球蛋白結構。參見，例如，Harlow等，Antibodies =A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 2nd ed. 1988)。如以下將詳細討論的，術語“抗原結合多肽”包含各種類型的可從生物化學上區(qū)別的多肽。本領域技術人員將認為，重鏈分類為Y、μ、α、δ或ε，它們之中包含一些亞類 (例如YlM Y 4)。所述重鏈的性質決定抗體的“類別”，所述類別分別是IgG、IgM、IgA、 IgG或IgE0免疫球蛋白亞類(同種型)(例如，IgG1, IgG2, IgG3、IgG4, IgG5等)已被表征并已知其賦予功能性特化作用。根據本發(fā)明，本領域技術人員可容易地辨別這些類別中的每一種的修飾類型和同種型的修飾類型，因此所述修飾類型在本發(fā)明的范圍內。所有免疫球蛋白類別都明顯在本發(fā)明范圍之內，以下討論主要涉及免疫球蛋白分子的IgG類。關于 IgG，標準的免疫球蛋白分子包含兩個相同的分子量約23，000道爾頓的輕鏈多肽和兩個相同的分子量約53，000至70，000道爾頓的重鏈多肽。典型地，所述四條鏈由二硫鍵以“Y” 結構連接，其中輕鏈從“Y”的開口處開始將重鏈括在一起并穿過可變區(qū)延伸。輕鏈分為κ或λ類。每類重鏈均可與κ或λ輕鏈結合。一般而言，輕鏈和重鏈互相共價結合，兩條重鏈的“尾”部以共價二硫鍵互相結合；或者當免疫球蛋白由雜交瘤、 B細胞或基因改造宿主細胞生成時，所述兩條重鏈的“尾”部以非共價鍵互相結合。重鏈中氨基酸序列從在Y結構的叉末端的N-末端開始，至每條鏈底部的C-末端結束。輕鏈和重鏈均分為結構同源的區(qū)域和功能同源的區(qū)域。術語“恒定”和“可變”是功能上使用的。就這點而言，認識到輕鏈(VK)和重鏈(VH)部分的可變結構域決定抗原的識別和特異性。相反，輕鏈(CK)和重鏈(CH1、CH2或CH3)的恒定結構域提供重要的生物特性，例如分泌、經胎盤的移動、Fc受體結合、補體結合等等。按照慣例，恒定區(qū)結構域離抗體的抗原結合位點或氨基末端越遠，恒定區(qū)結構域的編號越大。N-末端部分是可變區(qū)而C-末端部分是恒定區(qū)；CH3和CK結構域實際上分別包含重鏈和輕鏈的羧基末端。如上文所指出的，可變區(qū)使抗體選擇性識別并特異性結合抗原上的表位。也就是說，抗體的VK結構域和VH結構域，或互補決定區(qū)(CDR)的子集組合以形成可變區(qū)，所述可變區(qū)以三維抗原結合位點為特征。這個四級抗體結構形成抗原結合位點，所述位點位于Y每條臂的末端。更具體地，抗原結合位點以每個VH和VK鏈上的三個⑶R(即⑶R-H1、 ⑶R-H2、⑶R-H3、⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3)為特征。在一些例子中(例如，來自駱駝的一些免疫球蛋白分子或基于駱駝免疫球蛋白設計的一些免疫球蛋白分子)，完整的免疫球蛋白分子可只包含重鏈，沒有輕鏈。參見，例如，Hamers-Casterman等，Nature 363 446-448(1993)。在天然產生的抗體中，出現在每個抗原結合結構域中的六個“互補決定區(qū)”或 “CDR”是短的、非連續(xù)的氨基酸序列，所述氨基酸序列被特異性定位以使抗體在水性環(huán)境中呈現三維結構時形成抗原結合結構域?？乖Y合結構域中氨基酸的剩余部分(也稱 “骨架”區(qū))顯示出較少的分子間可變性。骨架區(qū)主要采用折疊結構，而⑶R形成連結折疊結構的環(huán)，并在某些情況下形成部分折疊結構。因此，骨架區(qū)起形成支架的作用，所述支架用于通過鏈間、非共價相互作用以正確的方向定位CDR。定位的CDR形成的抗原結合結構域界定了互補于免疫反應抗原上的表位的表面。所述互補的表面提高了抗體與其關聯表位的非共價結合。對于任何給定的重鏈或輕鏈可變區(qū)，本領域的普通技術人員可容易地辨別分別包含CDR和骨架區(qū)的氨基酸，因為它們已被精確定義(參見 "Sequences of Proteins of Immunological Interest", Kabat, E.等，美國健康與人類月艮務部(U. S. Dept. of Health and Human Services)，1983 ；和 Chothia與 Lesk，J. MoI. Biol.， 196 :901-917 (1987)，上述文獻通過引用全部并入本文)。如果本領域使用和/或接受的術語有兩個或兩個以上的定義，本發(fā)明使用的定義意在包含所有這些定義，除非明確指出相反意義。一個具體的例子是使用術語“互補決定區(qū)”(“CDR”)描述在重鏈和輕鏈多肽可變區(qū)內發(fā)現的非連續(xù)抗原結合位點。這個特殊的區(qū)域已在Kabat等在美國健康與人類服務部發(fā)表的文章“Sequences of Proteins of Immunological Interest” (1983)和 Chothia 等在 J. MoI. Biol. 196 :901-917 (1987)中發(fā)表的文章中描述，上述文獻通過引用全部并入本文。當將Kabat和Chothia的⑶R定義相互比較時，根據Kabat和Chothia的⑶R定義包括氨基酸殘基的重疊或氨基酸殘基的子集。 然而，適用于抗體或其變體CDR的任一定義的應用意在本發(fā)明定義及使用的術語的范圍之內。包括由以上引用的每一參考文獻所定義的CDR的適當的氨基酸殘基在下表I中列出以作比較。包含特定CDR的確切的殘基數目隨CDR的序列和大小而不同。已知抗體的可變區(qū)氨基酸序列，本領域的技術人員通?？纱_定哪些殘基包含特定的⑶R。表 權利要求
1.一種特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽含有人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-Hl，所述⑶R-Hl包含氨基酸序列X2X3X4(SEQIDNO :18)，其中，X1為氨基酸 D、S、T或N ；X2為氨基酸Y、L或W ；X3為氨基酸I或M ；且&為氨基酸Y、H、E或N ；(2)CDR-H2，所述 CDR-H2 包含氨基酸序列 XJAPXA^g^XnXuXJXMXuFXwXu (SEQ ID NO 19)，其中，X5為氨基酸Y、M、V或W ；X6為氨基酸D、N、H或F ；X7為氨基酸Y、G或S成為氨基酸N、S、T或D ；X9為氨基酸G、S或D ；X10為氨基酸G、D、E或I ；X11為氨基酸T或S ；X12 為氨基酸K或R ；且X13為氨基酸Y或L ；X14為氨基酸Q或E ；X15為氨基酸K或N ；X16為氨基酸K、I或R ；且X17為氨基酸G、A或D ；以及(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含選自以下的氨基酸序列 ⑴WX18X19(SEQ ID NO 20)；(ii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28(SEQ ID NO 21)；和(iii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO 22)；其中，X18為氨基酸D或N ；X19為氨基酸R或Y ；X20為氨基酸Ε、T或G ；X21為氨基酸D、 S或N ；X22為氨基酸Y或G ；X23為氨基酸G、S或V ；X24為氨基酸I、S或W ；X25為氨基酸S、W 或A ；X26為氨基酸T、F或M ；X27為氨基酸Y、P或D ；且)(28為氨基酸S或Y。
2.一種特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-L1，所述⑶R-Ll包含選自以下的氨基酸序列 (土)父29父305父31父32父33父34父35父36父37父38(3已0 ID NO 38)； (iDXMXsoSXMX^XmXMX^X^XwX^X^X^XMX^CSEQ ID NO :39)；禾口 (iii) X29X30SX31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42H (SEQ IDNO 40)；其中，)(29為氨基酸K或R ；X30為氨基酸A或S ；X31為氨基酸Q或K ；X32為氨基酸D、S或 N ；X33為氨基酸V、I或L ；X34為氨基酸G、S、V或L ；X35為氨基酸T、N或H ；X36為氨基酸A、N 或S ；X37為氨基酸V、L、N或G ；X38為氨基酸A、H、G或Y ；X39為氨基酸N或T ；X40為氨基酸T 或Y ；X41為氨基酸Y或M ；X42為氨基酸F或H ；(2)CDR-L2，所述 CDR-L2 包含氨基酸序列 A3X44X45X46X47X48X49 (SEQ ID NO 41)；其中，)(43為氨基酸W、Y、K或I ；X44為氨基酸A、T或V ；X45為氨基酸S或Y ；X46為氨基酸T、Q或N ；X47為氨基酸R、S或L ；X48為氨基酸H、I、F或E ；且)(49為氨基酸T或S ；以及(3)CDR-L3，所述CDR-L3 包含氨基酸序列)(5。X51X52X53X54X55P)(56T(SEQ ID NO :42)； 其中，I為氨基酸Q或S ；X51為氨基酸Q或H ；X52為氨基酸S或Y ；X53為氨基酸S、N、T或R ；X54為氨基酸S、R、H或E ；X55為氨基酸Y、W、V或L ；且)(56為氨基酸L或Y。
3.一種特異性結合于LIGHT多肽的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含 (a)人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-Hl，所述⑶R-Hl包含氨基酸序列X2X3X4(SEQIDNO :18)，其中，X1為氨基酸 D、S、T或N ；X2為氨基酸Y、L或W ；X3為氨基酸I或M ；且&為氨基酸Y、H、E或N ；(2)CDR-H2，所述 CDR-H2 包含氨基酸序列 XJAPXA^g^XnXuXJXMXuFXwXu (SEQ ID NO 19)，其中，X5為氨基酸Y、M、V或W ；X6為氨基酸D、N、H或F ；X7為氨基酸Y、G或S成為氨基酸N、S、T或D ；X9為氨基酸G、S或D ；X10為氨基酸G、D、E或I ；X11為氨基酸T或S ；X12為氨基酸K或R ；且X13為氨基酸Y或L ；X14為氨基酸Q或E ；X15為氨基酸K或N ；X16為氨基酸K、I或R ；且X17為氨基酸G、A或D ；以及(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含選自以下的氨基酸序列 ⑴WX18X19(SEQ ID NO 20)；(ii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28(SEQ ID NO 21)；和(iii)X20X21X22X23X24X25X26X27X28AMDF (SEQ ID NO 22)；其中，X18為氨基酸D或N ；X19為氨基酸R或Y ；X20為氨基酸Ε、T或G ；X21為氨基酸D、 S或N ；X22為氨基酸Y或G ；X23為氨基酸G、S或V ；X24為氨基酸I、S或W ；X25為氨基酸S、W 或A ；X26為氨基酸T、F或M ；X27為氨基酸Y、P或D ；且)(28為氨基酸S或Y ；以及 (b)人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-L1，所述⑶R-Ll包含選自以下的氨基酸序列 (土)父29父305父31父32父33父34父35父36父37父38(3已0 ID NO 38)； (iDXMXsoSXMX^XmXMX^X^XwX^X^X^XMX^CSEQ IDNO :39)；禾口 (iii) X29X30SX31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42H (SEQ IDNO 40)；其中，)(29為氨基酸K或R ；X30為氨基酸A或S ；X31為氨基酸Q或K ；X32為氨基酸D、S或 N ；X33為氨基酸V、I或L ；X34為氨基酸G、S、V或L ；X35為氨基酸T、N或H ；X36為氨基酸A、N 或S ；X37為氨基酸V、L、N或G ；X38為氨基酸A、H、G或Y ；X39為氨基酸N或T ；X40為氨基酸T 或Y ；X41為氨基酸Y或M ；X42為氨基酸F或H ；(2)CDR-L2，所述CDR-L2 包含氨基酸序列)(43)(44X45X46)(47X48X49 (SEQ ID NO :41)，其中，X43 為氨基酸W、Y、K或I ；X44為氨基酸A、T或V ；X45為氨基酸S或Y ；X46為氨基酸T、Q或N ；X47 為氨基酸R、S或L ；X48為氨基酸H、I、F或E ；且)(49為氨基酸T或S ；以及(3)CDR-L3，所述 CDR-L3 包含氨基酸序列 X5。)(51X52)(53X54)(55PX56T (SEQ ID NO :4 ，其中， X50為氨基酸Q或S ；X51為氨基酸Q或H ；X52為氨基酸S或Y ；X53為氨基酸S、N、T或R ；X54為氨基酸S、R、H或E ；X55為氨基酸Y、W、V或L ；且)(56為氨基酸L或Y。
4.如權利要求1所述的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體重鏈可變區(qū)，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-H1，所述⑶R-Hl包含選自以下的氨基酸序列(1)SSYIH(SEQID NO 23)；(ii)DYYIY(SEQID NO 26)；(iii)TYLIE(SEQID NO 29)；(iv)TYWMN(SEQID NO :32)；禾口 (ν)NYLIE(SEQ ID NO :35)；(2)⑶R-H2，所述⑶R-H2包含選自以下的氨基酸序列(i)WIFPGSDITKYNEKFKG(SEQID NO 24)；(ii)YIDPYNGGTKYNQKFKD(SEQID NO :27)；(iii)VINPGTGETKYNENFRA(SEQID NO 30)；(iv)M1HPSDSESRLNQKFID(SEQID NO :33)；禾口 (ν) VINPGSGDTKYNENFKG (SEQ ID NO :36)；以及(3)⑶R-H3，所述⑶R-H3包含選自以下的氨基酸序列(i)EDYGISTYSAMDF(SEQID NO :25)；(ii)TSGSSffFPY(SEQID NO 28)；(iii)WDR(SEQID NO :31)；(iv)GNYVffAMDY(SEQID NO :34)；禾口 (ν)WNY(SEQ ID NO :37)。
5.如權利要求2所述的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)⑶R-L1，所述⑶R-Ll包含選自以下的氨基酸序列(1)KASQDVGTAVA(SEQID NO :43)；(ii)RASQSISNNLH(SEQID NO 46)；(iii)RSSQNLVHSNGNTYFH(SEQID NO 49)；(iv)RASKSVSTSGYTYMH(SEQID NO :52)；禾口 (ν)RSSQSLLHSNGNTYFH(SEQ ID NO :55)；(2)⑶R-L2，所述⑶R-L2包含選自以下的氨基酸序列(i)WASTRHT(SEQID NO 44)；(ii)YTYQSIS(SEQID NO 47)；(iii)KVSNRFS(SEQID NO 50)；禾口(iv)ITSNLES (SEQ ID NO :53)；以及(3)⑶R-L3，所述⑶R-L3包含選自以下的氨基酸序列(i)QQYSSYPLT(SEQID NO :45)；(ii)QQSNRffPLT(SEQID NO 48)；(iii)SQSTHVPYT(SEQID NO :51)；禾口(iv)QHSRELPYT(SEQID NO :54)。
6.如權利要求4所述的抗原結合多肽，其中(1)所述CDR-Hl包含氨基酸序列SYYIH(SEQID NO 23)；(2)所述CDR-H2 包含氨基酸序列 WIFPGSDITKYNEKFKG(SEQ IDNO :24)；且(3)所述CDR-H3 包含氨基酸序列 EDYGISTYSAMDF (SEQ ID NO 25)。
7.如權利要求5所述的抗原結合多肽，其中(1)所述CDR-Ll 包含氨基酸序列 KASQDVGTAVA(SEQ ID NO :43)；(2)所述CDR-L2包含氨基酸序列WASTRHT(SEQ ID NO :44)；且(3)所述CDR-L3 包含氨基酸序列 QQYSSYPLT (SEQ ID NO 45)。
8.如權利要求6所述的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽進一步包含人源化抗體輕鏈可變區(qū)，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含(1)CDR-Ll，所述 CDR-Ll 包含氨基酸序列 KASQDVGTAVA (SEQ IDNO 43)；(2)CDR-L2，所述CDR-L2 包含氨基酸序列 WASTRHT(SEQ ID NO :44)；以及(3)CDR-L3，所述CDR-L3 包含氨基酸序列 QQYSSYPLT (SEQ ID NO :45)。
9.如權利要求1所述的抗原結合多肽，其中，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列(ι) Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX ‘ ^ewx ‘ 2gx5ix6px7x8x9x!OX11X12X13NX14X15FX16X17X' 3X' 4TX ‘ 5TX' 6DX' 7SX' 8STX' 9YMELSX' 10LRSX' nDTAVYYCAR-wx18x19wgqgtlvtvss (seq ID NO :1)；(2)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX' ^ewx' ^x5ix6px7x8x9x10x1 !X12X13NX14X15FX16X17X' 3X' 4TX' 5TX' 6DX' 7SX' 8STX' 9YMELSX' 10LRSX' nDTAVYYCARX20X21X 22X23X24X25X26X27X28WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :2)；以及(3)Qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftx1Yx2X3X4WvrqapgqX' ^ewx' ^x5ix6px7x8x9x10x1 !X12X13NX14X15FX16X17X' 3X' 4TX' 5TX' 6DX' 7SX' 8STX' 9YMEL SX' 10LRSX' nDTAVYYCARX20X21 X22X23X24X25X26X27X28AMDFffGQGTLVTVS S (SEQ ID NO :3)，其中，X1為氨基酸D、S、T或N ；X2為氨基酸Y、L或W ；X3為氨基酸I或M式為氨基酸 Y、H、E或N ；X5為氨基酸Y、Μ、V或W ；X6為氨基酸D、N、H或F ；X7為氨基酸Y、G或S 為氨基酸N、S、T或D ；X9為氨基酸G、S或D ；X10為氨基酸G、D、E或I J1I為氨基酸T或S ；X12 為氨基酸K或R ；且X13為氨基酸Y或L ；X14為氨基酸Q或E ；X15為氨基酸K或N ；X16為氨基酸K、I或R ；且X17為氨基酸G、A或D ；其中X18為氨基酸D或N ；X19為氨基酸R或Y ；X20為氨基酸E、T或G ；X21為氨基酸D、S或N ；X22為氨基酸Y或G ；X23為氨基酸G、S或V ；X24為氨基酸I、S或W ；X25為氨基酸S、W或A ；X26為氨基酸T、F或M ；X27為氨基酸Y、P或D ；X28為氨基酸S或Y ；并且其中，X'工為氨基酸R或G;X' 2為氨基酸M或I;X' 3為氨基酸K或R;X' 4為氨基酸V或A;X' 5為氨基酸M、L或I ;X' 6為氨基酸V或R;X' 7為氨基酸T或K;X' 8為氨基酸Α、Ι或Τ;Χ' 9為氨基酸V或Α;Χ' 1(1為氨基酸R或S;且X' 氨基酸D或Ε。
10.如權利要求9所述的抗原結合多肽，其中，所述人源化抗體重鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列(a)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQRLEWMGWIFPGSDITKYNEKFKGRVTITRD TSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYGISTYSAMDFffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :4)；(b)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIYWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNGGTKYNQKFKDRVTMTRD TSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARTSGSSWFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :5)；(c)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIYWVRQAPGQGLEWIGYIDPYNGGTKYNQKFKDKATLTVD KSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTSGSSWFPYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :6)；(d)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYLIEWVRQAPGQGLEWMGVINPGTGETKYNENFRARVTMTRD TSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWDRWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :7)；禾口(e)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTYWMNWVRQAPGQGLEWMGMIHPSDSESRLNQKFIDRVTMTRD TSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYVffAMDYffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO :8)。
11.如權利要求2所述的抗原結合多肽，其中，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列(1) )(, 12Xf 13X, I4X ‘ 15TQX ‘ I6PX ‘ 17乂 ‘ 18乂 ‘ 19乂 ‘ 2〇X ‘ 21^ ‘ 22^ ‘ 23^ ‘ 24^ ‘ 25^ ‘ 26^ ‘ 27S9X43X44X45X46X47X48X49GX' 4ciPX' 41RFSGSGSGTX' 42FTLX' 43IX' 44X' 45X' 46X' 47X' 4δΕ0Χ' 49X' 5oX' 51Y YCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQID NO :9)，(2) X , I2X , I3X ‘ 14X ‘ I5TQX ‘ I6P乂 ‘ 17乂 ‘ 18乂 ‘ 19乂 ‘ 20^ ‘ 21^ ‘' γ' 22入‘ V' 23入‘ ψ 24入26乂'27V28-^- 29-^- 30^29^305^31^32^33^34^35^36^37^38^39^40 ! ^ 31^ 3234^ ‘37VggLIX1 39^3^4^5^46^- ‘ ‘ 41RFSGSGSGTX1 1 43IX144x,45^ ‘V' V' 46λ 47λ 駁^EDXr49^I5oX' 51YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQ ID NO:10)；和(3) X , I2X , I3X ' 14X ' I5TQX ' I6P乂 ' 17^ ' 18^ ' I9X ' 2〇X ' 2lX 1' Y' 22入‘ V' 23入' γ/ 24入27V28^ 29^ 30^29^305^31^32^33^34^35^36^37^38^39^40 ! ^^- 31^-32QX,‘ γ' 34入‘35乂‘ V' 36入37X'3gLIX1 39&3乂44&5^46^7^48^49 ' 4QPX ' 41 RFSGSGSGTX' ^FTLX1 43 IXr44x,45^ ‘47乂，4SEDX/49^'5oX' 51YYCX50X51X52X53X54X55PX56TFGQGTX' 52VEIKR(SEQ ID NO :11),其中，)(29為氨基酸κ或R ；X30為氨基酸A或S ；X31為氨基酸Q或K ；X32為氨基酸D、S或 N ；X33為氨基酸V、I或L ；X34為氨基酸G、S、V或L ；X35為氨基酸T、N或H ；X36為氨基酸A、N 或S ；X37為氨基酸V、L、N或G ；X38為氨基酸A、H、G或Y ；X39為氨基酸N或T ；X40為氨基酸 T或Y ；X41為氨基酸Y或M ；X42為氨基酸F或H ；X43為氨基酸W、Y、K或I A44為氨基酸A、T 或V ；X45為氨基酸S或Y ；X46為氨基酸T、Q或N ；X47為氨基酸R、S或L ；X48為氨基酸H、I、 F或E ；X49為氨基酸T或S ；X50為氨基酸Q或S ；X51為氨基酸Q或H ；X52為氨基酸S或Y ；X53 為氨基酸S、N、T或R ；X54為氨基酸S、R、H或E ；X55為氨基酸Y、W、V或L ；X56為氨基酸L或 Y;并且其中，X' 12為氨基酸D或E;X' 13為氨基酸I或V;X' 14為氨基酸V或Q;X' 15為氨基酸M或L;X' ^；為氨基酸S或T;X' 17為氨基酸3、0、六或1^3' 18為氨基酸3、1~或？; X'⑴為氨基酸L或Q;X'㈤為氨基酸A、S或P;X' 21為氨基酸V或A;X' ^為氨基酸S 或T;X' ^為氨基酸P、L或V;X'對為氨基酸G或K;X'邪為氨基酸E、Q或D ^5為氨基酸R、K或Ρ;Χ' 27為氨基酸A或V;X'此為氨基酸T或S;X'四為氨基酸I或L;X' 3o 為氨基酸S、T或N;X' 31為氨基酸F或Y;X' %為氨基酸Q或L;X' 33為氨基酸K或R ； X' 34為氨基酸G或D;X' %為氨基酸Q或K;X' %為氨基酸A、S或P 37為氨基酸K、R 或Q;X' %為氨基酸L或R;X' 39為氨基酸Y或K;X' 4(1為氨基酸V或I ;Χ' 41為氨基酸 3、八或0 3' 42為氨基酸D或Ε;Χ' 43為氨基酸K或Τ;Χ' 44為氨基酸S或Ν;Χ' 45為氨基酸S或R;X' 46為氨基酸V或L;X' 47為氨基酸Q或E;X' 48為氨基酸P、A或S 49 為氨基酸F、A或V;X' 5(1為氨基酸A或G;X' 51為氨基酸T或V;且X' ^為氨基酸R或 K0
12.如權利要求11所述的抗原結合多肽，其中，所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)包含選自以下的氨基酸序列(a)DIQLTQSPSFLSASV⑶RVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTL TISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 12)；(b)EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISNNLHWYQQKPDQSPKLLIKYTYQSISGVPSRFSGSGSGTDFTL TlNSLEAEDAATYYCQQSNRffPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO 13)；(C)EIVMTQSPATLSVSPGEKATLSCRASQSISNNLHWYQQKPGQAPRLLIYYTYQSISGIPARFSGSGSGTEFTL TISSLQSEDFAVYYCQQSNRWPLTFGQGTRVEIKR(SEQ ID NO 14)；(d)DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSG TDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO 15)；(e)DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQNLVHSNGNTYFHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSG TDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :16)；禾口(f)DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYTYMHWYQQKPGQPPKLLIYITSNLESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO :17).
13.一種特異性結合于LIGHT的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含權利要求9至 10中任一項所述的人源化重鏈和權利要求11至12中任一項所述的人源化輕鏈。
14.如權利要求1至13任一項所述的抗原結合多肽，其中，所述抗原結合多肽選自抗體分子、Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段和scFv分子。
15.如權利要求14所述的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽包含(a)含有以下氨基酸序列的重鏈可變區(qū)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQRLEWMGWIFPGSDITKYNEKFKGRVTITRD TSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYGISTYSAMDFffGQGTLVTVSS(SEQ ID NO 4)；禾口(b)含有以下氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPSRFSGSGSGTEFTL TISSLQPEDFATYYCQQYSSYPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO: 12)。
16.如權利要求15所述的抗原結合多肽，其中，所述抗體分子包含人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)。
17.如權利要求15至16任一項所述的抗原結合多肽，其中，所述抗體分子為IgG分子。
18.如權利要求14所述的抗原結合多肽，其中(a)所述抗原結合多肽為scFv分子；或(b)所述抗原結合多肽為scFvHSA融合分子；或(c)所述抗原結合多肽為FabHSA融合分子。
19.如權利要求18所述的抗原結合多肽，其中(a)權利要求18(a)所述的scFv分子包含具有選自以下的化學式的多肽(i) nh2-l-vh-x-vk-cooh 和(ii)nh2-l-vk-x-vh-cooh ；其中，L 為前導序列；VH 為所述人源化抗體重鏈可變區(qū)；X為連接多肽；VK為人源化抗體輕鏈可變區(qū)；(b)權利要求18(b)所述的scFv HSA融合分子的scFv部分在HSA的N-末端表達，并且所述scFv HSA融合分子多肽具有選自以下的化學式(i) NH2-L-VH-X-VK-HSA-C00H和(ii) NH2-L-VK-X-VH-HSA-C00H，其中，L 為前導序列；VH 為所述人源化抗體重鏈可變區(qū)；X為連接多肽；HSA為人血清白蛋白；VK為所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)；(c)權利要求18(b)所述的scFv HSA融合分子的scFv部分在HSA的C-末端表達，并且所述scFv HSA融合分子多肽具有選自以下的化學式(i)NH2-HSA-VH-X-VK-C00H 和(ii)NH2-HSA-VK-X-VH-C00H，其中，L 為前導序列；VH 為所述人源化抗體重鏈可變區(qū)；X為連接多肽；HSA為人血清白蛋白；VK為所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)；(d)權利要求18(c)所述的抗原結合多肽，其中，所述FabHSA融合分子的重鏈部分在 HSA的N末端或C末端表達，并且所述Fab HSA融合分子多肽具有選自以下的化學式(i) NH2-VH-CH1-HSA-C00H 和(ii)NH2-HSA-VH-CHl-C00H，其中，VH 為所述人源化抗體重鏈可變區(qū)；CHl為所述恒定的重鏈結構域1 ；HSA為人血清白蛋白；或(e)權利要求18(c)所述的抗原結合多肽，其中，所述FabHSA融合分子的輕鏈部分在 HSA的N末端或C末端表達，并且所述Fab HSA融合分子多肽具有選自以下的化學式(i) NH2-VK-CK-HSA-C00H和(ii)NH2-HSA-VK-CK-C00H，其中，VK為所述人源化抗體輕鏈可變區(qū)； CK為所述輕鏈恒定結構域；HSA為人血清白蛋白。
20.如權利要求1至19任一項所述的抗原結合多肽，所述抗原結合多肽與治療劑或診斷劑聯合。
21.如權利要求20所述的抗原結合多肽，其中(a)所述治療劑選自細胞毒性劑、放射性標記物、免疫調節(jié)劑、激素、酶、寡核苷酸、光敏治療劑及其組合；或(b)所述診斷劑選自放射性標記物、光敏診斷劑、超聲增強劑和非放射性標記物。
22.如權利要求1至21任一項所述的抗原結合多肽，其中(a)所述多肽為LIGHT的拮抗劑；或(b)所述多肽不是LIGHT的激動劑。
23.如權利要求1至22任一項所述的抗原結合多肽，其中，所述多肽與LIGHT結合的Kd 優(yōu)選為約IO8M-1至約IOiqMA
24.一種藥物組合物，所述組合物包含權利要求1至23任一項所述的抗原結合多肽和載體。
25.如權利要求M所述的藥物組合物，所述組合物進一步包含額外的治療劑或診斷劑。
26.一種治療或診斷疾病或病癥的方法，所述方法包括將權利要求M或25所述的藥物組合物給藥于有此需要的患者，其中，所述疾病或病癥選自炎癥性疾病或病癥、免疫性疾病或病癥、惡性疾病或病癥、自身免疫疾??；炎癥性腸病(IBD)；慢性阻塞性肺病(COPD)；關節(jié)炎；類風濕關節(jié)炎；多發(fā)性硬化癥；移植排斥；移植物抗宿主病(GVHD)；中樞神經系統(tǒng)損傷；Thl介導的腸?。豢肆_恩??；銀屑病；白血??；淋巴瘤；慢性淋巴細胞白血??；動脈粥樣硬化；肺癌；結腸癌；和肝炎。
27.一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸編碼權利要求1至23任一項所述的抗原結合多肽。
28.一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含啟動子序列，所述啟動子序列可操作地連接于權利要求27所述的多核苷酸。
29.一種分離的細胞，所述細胞用權利要求27或28所述的多核苷酸轉化。
30. 一種制備由權利要求27或28所述的多核苷酸編碼的抗原結合多肽的方法，所述方法包括a)培養(yǎng)由所述多核苷酸轉化的細胞，從而表達編碼的抗原結合多肽；以及b)回收由此表達的抗原結合多肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及特異性結合LIGHT多肽的抗原結合多肽或其變體或衍生物。本發(fā)明還涉及制備所述抗體的方法以及尤其在免疫性疾病或病癥、炎癥性疾病或病癥和惡性疾病或病癥(例如，炎癥性腸病、克羅恩病、潰瘍性結腸炎、多發(fā)性硬化癥、類風濕關節(jié)炎和移植)的治療或診斷中使用所述抗體的方法。
文檔編號C07K16/28GK102428103SQ201080021618
公開日2012年4月25日 申請日期2010年3月22日 優(yōu)先權日2009年3月24日
發(fā)明者克雷格·羅森, 布里奇特·A·庫克西, 帕拉尼薩米·卡納卡拉伊, 維克托·羅施克, 羅杰·史密斯 申請人:泰華生物制藥美國公司