專利名稱：一種適用于檸檬黃的人工抗原的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種適用于檸檬黃的人工抗原的制備方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
朽1檬黃，英文名Tartrazine, Acid Yellow 23 ;化學(xué)名也叫酒石黃，肼黃，C. I.酸性黃23 ;CAS號(hào)1934-21-0 ;分子式是C16H9N4Na3O9S215檸檬黃色素(Tar)是目前我國批準(zhǔn)使用的六種食用合成色素之一，其分子結(jié)構(gòu)為偶氮化合物，在體內(nèi)代謝的產(chǎn)物對(duì)人體具有潛在危害一芳香類化合物。因此，我國對(duì)在食品中添加檸檬黃色素有嚴(yán)格限制。凡是肉類及其加工品，魚類及其加工品等都不能使用人工合成色素，即使在適用的品種和范圍內(nèi)，使用劑量也有嚴(yán)格規(guī)定，決不允許過量使用。但實(shí)際上，我國食品中普遍存在檸檬黃色素的超標(biāo)、超范圍使用現(xiàn)象屢禁不止。如果人們長期或一次性大量食用檸檬黃含量超標(biāo)的食品，可能會(huì)引起過敏、腹瀉等癥狀，當(dāng)攝入量過大，超過肝臟負(fù)荷時(shí)會(huì)在體內(nèi)蓄積，對(duì)腎臟、肝臟 產(chǎn)生一定傷害。目前，檸檬黃檢測(cè)采取的方法是薄層分析及分光光度計(jì)法。近年來，我國科研工作者在檸檬黃檢測(cè)方面做了大量的工作，但都主要集中在理化檢測(cè)方面，但這些方法不僅需要昂貴的儀器設(shè)備，專業(yè)的操作人員，對(duì)檢材的要求也比較高，并且需要進(jìn)一步的樣本前處理才能進(jìn)行。這已經(jīng)不能達(dá)到現(xiàn)代檢測(cè)對(duì)快速、方便、準(zhǔn)確的要求。近年來，國內(nèi)外已經(jīng)開展了對(duì)色素類免疫分析方法的研究，但國內(nèi)外尚比較少發(fā)展出針對(duì)檸檬黃的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，為了更好地檢測(cè)檸檬黃，有必要制備開發(fā)出能針對(duì)檸檬黃更高靈敏度和更好特異性抗體的檸檬黃人工抗原。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種適用于檸檬黃的人工抗原的制備方法。所制備的產(chǎn)品用于檸檬黃的免疫分析方法研究，為今后人們的研究提供了必需的人工抗原。本發(fā)明的技術(shù)方案一種適用于檸檬黃的人工抗原的制備方法，以丁二酸單乙酯酰氯和2，2- 二甲基-1，2- 二噁烷-4，6- 二酮為原料，經(jīng)過4步化學(xué)反應(yīng)，制得檸檬黃衍生物TAR，以TAR為半抗原用活性酯法將其與載體蛋白BSA或OVA偶聯(lián)，制備檸檬黃的人工抗原，從而免疫產(chǎn)生針對(duì)檸檬黃的特異性抗體，用于建立酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法；
(I)檸檬黃衍生物TAR的合成TAR化學(xué)名稱為I-苯基-3-丙酸-4-苯偶氮基_5_吡唑啉酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)和合成路線如下
權(quán)利要求
1.一種適用于檸檬黃的人工抗原的制備方法，其特征在于以丁二酸單乙酯酰氯和2，2- 二甲基-1，2- 二噁烷-4，6- 二酮為原料，經(jīng)過4步化學(xué)反應(yīng)，制得檸檬黃衍生物TAR，以TAR為半抗原用活性酯法將其與載體蛋白BSA或OVA偶聯(lián)，制備檸檬黃的人工抗原，從而免疫產(chǎn)生針對(duì)檸檬黃的特異性抗體，用于建立酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法； (1)檸檬黃衍生物TAR的合成TAR化學(xué)名稱為I-苯基-3-丙酸-4-苯偶氮基_5_吡唑啉酮，其化學(xué)結(jié)構(gòu)和合成路線如下
全文摘要
一種適用于檸檬黃的人工抗原的制備方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以丁二酸單乙酯酰氯和2,2-二甲基-1,2-二噁烷-4,6-二酮為原料，經(jīng)過4步化學(xué)反應(yīng)，制得檸檬黃的衍生物TAR；并以該沒含有磺酸基團(tuán)的檸檬黃衍生物TAR為半抗原，用活性酯法將其與載體蛋白BSA或OVA偶聯(lián)，制備檸檬黃的人工抗原，用分光光度法測(cè)定偶聯(lián)物的偶聯(lián)比，并免疫產(chǎn)生針對(duì)檸檬黃的特異性抗體，同時(shí)建立酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。本發(fā)明成功合成了檸檬黃的人工抗原，合成步驟簡(jiǎn)潔，有效，完全可用于免疫分析中，為以后人們的研究提供了必需的檸檬黃人工抗原，可以滿足國內(nèi)對(duì)檸檬黃研究的需要。
文檔編號(hào)C07K14/765GK102924590SQ20121047748
公開日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月22日
發(fā)明者胥傳來, 李灼坤, 尹玉云, 劉利強(qiáng), 胡擁明, 林菲 申請(qǐng)人:江南大學(xué)