具有抗腫瘤活性的植物提取物及其活性成分的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及從朝鮮黃楊（Buxusmicrophyllavar.koreanaNakai）的葉子中提取分離得到具有體外抗腫瘤活性的總生物堿及其制備方法，以及從朝鮮黃楊葉子總生物堿中分離得到五種具有體外抗腫瘤活性的黃楊生物堿類化合物及其制備方法。本發(fā)明所涉及的提取物采用的原料容易大量獲取，所得到的單體化合物結(jié)構(gòu)新穎，且具有體外抗腫瘤活性，總生物堿及其中活性單體化合物的提取分離方法簡易，便于對其進(jìn)行進(jìn)一步的藥理和臨床研究，為開發(fā)療效好且毒副作用小的新型抗腫瘤藥物創(chuàng)造條件。
【專利說明】具有抗腫瘤活性的植物提取物及其活性成分
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及從朝鮮黃楊(Buxus microphylla var.koreanaNakai)的葉子提取分離得到具有體外抗腫瘤活性的總生物堿及其制備方法，以及從朝鮮黃楊葉子總生物堿中分離得到五種具有體外抗腫瘤活性的黃楊生物堿類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃楊生物堿為僅分布于黃楊科(Buxaceae)黃楊屬(Buxus)植物中的一系列具有降環(huán)阿爾廷型三萜基本骨架的生物堿類化合物。該類化合物目前報道已有220余種[Yu-xin Yan, Current Bioactive Compound, 2011,47-64],大多具有治療心肌缺血、抗老年癡呆和抗菌等活性。其中環(huán)維黃楊星D (cyclovirobuxin D)被收錄于2010年《中國藥典》一部，用于治療冠心病、心律失常等，臨床制劑有黃楊寧片。
[0003]黃楊屬植物全世界有70余種。分布于亞洲、歐洲、熱帶非洲以及古巴、牙買加等處。我國已知約17種及幾個亞種和變種，西自西藏，東至臺灣，南自海南島，西北至甘肅南部均產(chǎn)，但主要分布于我國西部和西南部[中國植物志]。朝鮮黃楊(Buxus microphyllavar.koreana Nakai)為小葉黃楊的變種,原產(chǎn)朝鮮半島，于二十世紀(jì)三四十年代引種于我國遼寧省各地。不同于分布于我國的黃楊屬其他植物，其具有高度耐寒(_35°C)的特性，從而廣泛用于遼寧和吉林省的園林綠化，目前已經(jīng)在遼寧省沈陽市周邊地區(qū)有大量人工栽培。而對朝鮮黃楊中三職類生物堿的報道卻僅有一篇1966年的文獻(xiàn)[Nakano T.,Journalof the Chemical Society C:0rganic, 1966,1805-1810],從其中分離得到 8 個生物喊。
[0004]近年來，有報道從小葉黃楊中分離得到的具有體外抗腫瘤作用的黃楊生物堿[Yu-xin Yan, Journal of Natu`ral Products, 2009, 308-311],但據(jù)文獻(xiàn)[王玲玲，哈爾濱師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報，2008，74-76]中報道的朝鮮黃楊在過氧化物酶和酯酶同工酶酶譜上和小葉黃楊以及錦熟黃楊存在明顯差異以及朝鮮黃楊在生長環(huán)境上與該屬其他植物鮮明的差異性，可以預(yù)見朝鮮黃楊在化學(xué)成分及生物活性方面與該屬其他植物存在區(qū)別。
[0005]本發(fā)明所涉及的朝鮮黃楊葉子中提取分離得到的總生物堿及其抗腫瘤活性，迄今為止國內(nèi)外尚未見有與此雷同的相關(guān)專利或文獻(xiàn)報道。本發(fā)明所涉及的從朝鮮黃楊葉子總生物堿中分離得到的5個新黃楊生物堿類化合物，迄今在國內(nèi)外尚未見有與此雷同的化合物及抗腫瘤活性的相關(guān)專利或文獻(xiàn)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供一種以朝鮮黃楊葉子為原料制備得到的總生物堿及制備方法，以及其在制備人宮頸癌HeLa細(xì)胞株，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株，人肺癌A549細(xì)胞株，人肝癌H印G-2細(xì)胞株和人白血病K562細(xì)胞株抑制劑中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明又提供五種僅從朝鮮黃楊葉子總生物堿中分離得到的新黃楊生物堿類化合物及制備方法，以及其在制備人宮頸癌HeLa細(xì)胞株抑制劑中的應(yīng)用。[0008]本發(fā)明所述五種僅從朝鮮黃楊葉子總生物堿中分離得到的新黃楊生物堿類化合物的結(jié)構(gòu)如式I-V所示:
[0009]
【權(quán)利要求】
1.黃楊生物堿類化合物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式如I-V所示:
2.含有權(quán)利要求1所述的黃楊生物堿類化合物的提取物。
3.一種制備如權(quán)利要求2所述提取物的方法，其特征在于，以朝鮮黃楊Ofera1Smicrophylla var.koreana )干燥葉子I kg為原料，用15-20升0.1%-0.3%鹽酸水溶液滲漉提取，提取液用1%-5%的氫氧化鈉水溶液堿化至pH = 10-11后，采用大孔吸附樹脂I-2 kg動態(tài)吸附，用 pH = 10-11的氫氧化鈉水溶液洗脫3-5個保留體積后,用95%乙醇洗脫4-6個保留體積，95%乙醇洗脫部分回收溶劑得到朝鮮黃楊葉子的總生物堿提取物。
4.一種制備權(quán)利要求1所述的化合物的方法，其特征在于，以權(quán)利要求3制備的朝鮮黃楊葉子的總生物堿提取物為原料，經(jīng)200-300目硅膠柱色譜分離，分別以體積配比為3:1，1:1和O:1的石油醚-丙酮的混合溶劑梯度洗脫，將其中石油醚-丙酮體積配比為3:1的洗脫部分再經(jīng)過200-300目氧化鋁柱色譜分離，以體積配比為100:2的石油醚-丙酮的混合溶劑洗脫得到如式IV化合物，以體積配比為100:10的石油醚-丙酮的混合溶劑洗脫得到如式III化合物，將其中石油醚-丙酮體積配比為1:1的洗脫部分再經(jīng)過開放ODS柱色譜分離，以5%-80%的甲醇水溶液梯度洗脫，其中35%-50%甲醇水溶液洗脫物中得到式II化合物，將其中石油醚-丙酮體積配比為O:1的洗脫部分經(jīng)HPD-100型大孔吸附樹脂柱色譜分離，以35%和80%的乙醇水溶液梯度洗脫，其中35%乙醇水溶液洗脫物中得到式V化合物，85%乙醇水溶液洗脫物中得到式I化合物。
5.一種藥物組合物，包括權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利要求2所述的提取物。
6.權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利要求2所述的提取物或權(quán)利要求5所述的組合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利 要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的癌癥為人宮頸癌HeLa細(xì)胞株，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株，人肺癌A549細(xì)胞株，人肝癌H印G-2細(xì)胞株和人白血病K562細(xì)胞株。
【文檔編號】C07J75/00GK103450314SQ201310397499
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月3日
【發(fā)明者】李占林, 華會明, 王麗偉, 李丹毅 申請人:沈陽藥科大學(xué)