一種白頭翁素的提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種白頭翁素的提取工藝，具體涉及一種超聲、生物酶解輔助醇提的方法。其處理步驟：原材料的處理→酶解→超聲提取→精制→超臨界流體結(jié)晶，即得白頭翁素成品。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，提取效率高，節(jié)約能源，成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說(shuō)明】一種白頭翁素的提取工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種白頭翁素的提取技術(shù)，特別是涉及一種超聲輔助醇提結(jié)合生物酶解技術(shù)提取天然植物中的有效成分，以及應(yīng)用超臨界流體結(jié)晶技術(shù)對(duì)白頭翁素的精制，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]白頭翁素(英文名稱:Anemonin)，別名:銀蓮花素、白頭翁腦。分子式=CltlH2O4，分子量:192.16，熔點(diǎn)157?158°C。物理性質(zhì):微溶于冷水，較易溶于熱水，溶于熱乙醇及氯仿醚，遇堿呈黃色，有顯著的抗菌作用。
[0003]經(jīng)現(xiàn)代研究證明，有顯著的抗菌作用。對(duì)葡萄球菌、鏈球菌、白喉?xiàng)U菌的抑菌濃度為1: 12500，對(duì)結(jié)核桿菌為1:50000，對(duì)大腸桿菌也有類(lèi)似抑菌作用。對(duì)革蘭區(qū)陰性菌有效，與鏈霉素有協(xié)同作用，而對(duì)球菌的作用卻報(bào)道不一。對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)是先興奮后麻痹，有鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)揪作用，還有強(qiáng)的釘真菌活性。
[0004]臨床曾有作治療痢疾及鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛藥。本品刺激性很強(qiáng)，內(nèi)服可引起惡心、嘔吐和下瀉，還可刺激腎臟產(chǎn)生血尿、蛋白尿等副作用。
[0005]目前，在我國(guó)關(guān)于提取白頭翁素的專利和文獻(xiàn)中主要采用超臨界CO2萃取法。在授權(quán)公開(kāi)的發(fā)明專利“一種白頭翁素的制備方法”(專利號(hào)200910232990.0 )中采用工藝步驟為:取白頭翁全草粗粉，加入到0)2超臨界萃取器中，得萃取物，減壓回收溶劑，得油狀物，冷藏，析出結(jié)晶，分離結(jié)晶，加入熱乙醇溶解，趁熱過(guò)濾，取濾液，放置析晶，分離結(jié)晶加入氯仿重結(jié)晶。該法制備過(guò)程復(fù)雜，CO2萃取技術(shù)適合于親脂性的和相對(duì)分子質(zhì)量較小的物質(zhì)的萃取，對(duì)極性偏大或相對(duì)分子質(zhì)量偏大的有效成分的提取效率卻較差，還需要加入合適的夾帶劑，而夾帶劑在產(chǎn)品中有可能殘留，這就會(huì)影響產(chǎn)品的質(zhì)量。此外，超臨界技術(shù)研究在我國(guó)僅僅經(jīng)歷了 20多年的發(fā)展，很多研究?jī)H限于萃取工藝的改進(jìn)，對(duì)超臨界萃取的基礎(chǔ)研究不夠深入，基礎(chǔ)數(shù)據(jù)不夠完善，很多時(shí)候以萃取物的得率為指標(biāo)，未能明確目的產(chǎn)物，導(dǎo)致萃取物的有效物質(zhì)成分含量低，產(chǎn)品等級(jí)就相應(yīng)降低；對(duì)產(chǎn)物的產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)、產(chǎn)品的溶解度等的研究都還很缺乏。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明是針對(duì)現(xiàn)有制備白頭翁素方法所存在的缺陷而進(jìn)行的研究，主要是為了提供一種操作簡(jiǎn)單、提取效率高、成本低、可工業(yè)化實(shí)現(xiàn)的提取方法。
[0007]本發(fā)明采用的具體步驟如下:
(O原材料的處理:將新鮮原材料放在溫度為60-70°C的烘箱中干燥1-3小時(shí)，粉碎過(guò)40-60目篩，收集粗粉備用；
(2)酶解:稱取一定量的材料粗粉置于提取器中，加入碎片重量1°/Γ5%的生物酶解試齊U，并同時(shí)加入料液比為1:5?10的乙醇，在pH值4?5，溫度為45?50°C的條件下酶解l?3h ；
(3)超聲提取:酶解完成后，將提取器中的混合物在溫度為5(T60°C的條件下超聲提取3(T60min，過(guò)濾，收集提取液備用；
(4)精制:將上述提取液上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用31倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3飛倍柱體積、10%的乙醇溶液洗脫,最后用3?8倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；
(5)超臨界流體結(jié)晶:將洗脫液減壓濃縮至原體積的1/5?1/2，濃縮液通過(guò)溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為5?200ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的白頭翁素晶體。
[0008]步驟I)中所述的原材料為毛茛、石龍芮、打破碗花花、白頭翁、威靈仙中的一種或兩種。
[0009]步驟2)中所述的生物酶解試劑為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的混合物。
[0010]步驟3)中所述的超聲提取的功率為2(Γ50ΚΗζ。
[0011]步驟4)中所述的大孔吸附樹(shù)脂為 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD中的一種。
[0012]步驟5)中所述結(jié)晶釜工作壓力為l(T20MPa，溫度為3(T60°C，結(jié)晶時(shí)間為3(Tl80min。
[0013]本發(fā)明采用超聲輔助醇提結(jié)合生物酶解技術(shù)提取天然植物中的有效成分，以及應(yīng)用超臨界流體結(jié)晶技術(shù)對(duì)所得產(chǎn)品進(jìn)行純化的過(guò)程。其中超聲提取具有:1)提取效率高；2)提取時(shí)間短；3)提取溫度低；4)適應(yīng)性廣；5)提取藥液雜質(zhì)少，有效成分易于分離、純化；6)提取工藝運(yùn)行成本低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著；7)操作簡(jiǎn)單易行，設(shè)備維護(hù)、保養(yǎng)方便等優(yōu)點(diǎn)。生物酶解技術(shù)的使用，破壞了植物細(xì)胞壁，增大了植物細(xì)胞里面有效成分的流出，從而提高了白頭翁素的提取率。超臨界流體結(jié)晶技術(shù)，具有純化效率高，無(wú)溶劑殘留，天然活性成分和熱敏性成分不易被分解破壞，能最大限度保持提取物的天然特性，具有工業(yè)化意義。
[0014]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
[0015]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1:
將新鮮的毛茛置于溫度為60°c的烘箱中干燥I小時(shí)，粉碎過(guò)40目篩，稱取Ikg兩者的混合材料碎段置于提取器中，加入碎片重量1%的纖維素酶和果膠酶混合物試劑，并同時(shí)加入5L的乙醇，在pH值為4，溫度為45°C的條件下酶解Ih ;酶解完成后，將提取器中的混合物在溫度為50°C的條件下，采用20KHz超聲提取30min，過(guò)濾，收集提取液；將提取液上X_5型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3倍柱體積、10%的乙醇溶液洗脫，最后用3倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；將洗脫液減壓濃縮至原體積的1/5，濃縮液通過(guò)溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為5ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的白頭翁素晶體，結(jié)晶釜工作壓力為lOMPa，溫度為30°C，結(jié)晶時(shí)間為30min。經(jīng)檢測(cè)，所得白頭翁素樣品的純度為88.19%，白頭翁素的提取率為50.32%。
[0016]實(shí)施例2:
將新鮮的毛茛置于溫度為65°C的烘箱中干燥2小時(shí)，粉碎過(guò)60目篩，稱取Ikg兩者的混合材料碎段置于提取器中，加入碎片重量3%的纖維素酶和果膠酶混合物試劑，并同時(shí)加入料液比為6L的乙醇，在pH值為5，溫度為48°C的條件下酶解2h ;酶解完成后，將提取器中的混合物在溫度為55°C的條件下，采用20KHz超聲提取40min，過(guò)濾，收集提取液；將提取液上AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用5倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用4倍柱體積、10%的乙醇溶液洗脫，最后用4倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；將洗脫液減壓濃縮至原體積的1/3，濃縮液通過(guò)溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為50ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的白頭翁素晶體，結(jié)晶釜工作壓力為15MPa，溫度為50°C，結(jié)晶時(shí)間為60min。經(jīng)檢測(cè)，所得白頭翁素樣品的純度為88.58%，白頭翁素的提取率為50.78%。
[0017] 實(shí)施例3:
將新鮮的毛茛置于溫度為70°C的烘箱中干燥3小時(shí)，粉碎過(guò)60目篩，稱取Ikg兩者的混合材料碎段置于提取器中，加入碎片重量5%的纖維素酶和果膠酶混合物試劑，并同時(shí)加入料液比為1L的乙醇，在pH值為5，溫度為50°C的條件下酶解3h ;酶解完成后，將提取器中的混合物在溫度為60°C的條件下，采用20KHz超聲提取60min，過(guò)濾，收集提取液；將提取液上NK-2型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用8倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用6倍柱體積、10%的乙醇溶液洗脫，最后用8倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；將洗脫液減壓濃縮至原體積的1/2，濃縮液通過(guò)溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為200ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的白頭翁素晶體，結(jié)晶釜工作壓力為20MPa，溫度為60°C，結(jié)晶時(shí)間為180min。經(jīng)檢測(cè)，所得白頭翁素樣品的純度為89.19%,白頭翁素的提取率為51.32%。
【權(quán)利要求】
1.一種白頭翁素的提取工藝，其特征在于采用以下步驟: (O原材料的處理:將新鮮原材料放在溫度為60-70°C的烘箱中干燥1-3小時(shí)，粉碎過(guò)40-60目篩，收集粗粉備用； (2)酶解:稱取一定量的材料粗粉置于提取器中，加入碎片重量1°/Γ5%的生物酶解試齊U，并同時(shí)加入料液比為1:5?10的乙醇，在pH值4?5，溫度為45?50°C的條件下酶解l?3h ； (3)超聲提取:酶解完成后，將提取器中的混合物在溫度為5(T60°C的條件下超聲提取3(T60min，過(guò)濾，收集提取液備用； (4)精制:將上述提取液上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用31倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用3飛倍柱體積、10%的乙醇溶液洗脫,最后用3?8倍柱體積的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； (5)超臨界流體結(jié)晶:將洗脫液減壓濃縮至原體積的1/5?1/2，濃縮液通過(guò)溶液泵以高壓狀態(tài)急速噴入結(jié)晶釜內(nèi)，流速為5?200ml/min，在結(jié)晶釜底部收集析出的白頭翁素晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白頭翁素的提取工藝，其特征在于:步驟I)中所述的原材料為毛茛、石龍芮、打破碗花花、白頭翁、威靈仙中的一種或兩種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白頭翁素的提取工藝，其特征在于:步驟2)中所述的生物酶解試劑為果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶中的一種或兩種以上的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白頭翁素的提取工藝，其特征在于:步驟3)中所述的超聲提取的功率為2(Γ50ΚΗζ。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白頭翁素的提取工藝，其特征在于:步驟4)中所述的大孔吸附樹(shù)脂為 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD 中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白頭翁素的提取工藝，其特征在于:步驟5)中所述結(jié)晶釜工作壓力為l(T20MPa，溫度為3(T60°C，結(jié)晶時(shí)間為3(Tl80min。
【文檔編號(hào)】C07D493/10GK104230949SQ201410445558
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月4日
【發(fā)明者】張金芳, 楊存 申請(qǐng)人:南京標(biāo)科生物科技有限公司