專利名稱：新型肽，其制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型肽及其衍生物，與Dolastatin-10相比，其在醫(yī)療上治療腫瘤疾病中具有潛在的廣泛的實(shí)用性。并且，它不象dolastatin-10那樣，必須通過實(shí)驗從少量的天然資源中提純，本發(fā)明的化合物可以按下文詳述的方法方便地進(jìn)行合成。而且，Dolastatin-10對酸不穩(wěn)定。據(jù)悉一點(diǎn)微小的結(jié)構(gòu)上的變化就會導(dǎo)致其活性的完全喪失(Biochemical Pharmacology，Vol，40，No.8，1859-64，1990)。
本發(fā)明的化合物包括通式Ⅰ所示的新型肽及其生理上可接受的酸形成的鹽，
其中R1為烷氧基，優(yōu)選的為C1-4烷氧基;烷基，優(yōu)選的為C1-7烷基;環(huán)烷基，優(yōu)選的為C3-6環(huán)烷基;烷基磺?；?，優(yōu)選的為C1-C6磺酰基;三氟乙基;氟乙基;二氟乙基;三氟乙?；?脒基;脲基;哌啶子磺?；?嗎啉代磺酰基;芐氧羰基;烷氧羰基，優(yōu)選的為C1-4烷氧羰基;可被烷基，優(yōu)選C1-5的烷基取代的氨基磺?；?羥基;至多可被三個取代基取代的苯磺酰基，取代基可單獨(dú)選自烷基(優(yōu)選的為C1-4)，N(CH3)2，硝基，鹵素和CF3;或NR8R9，其中R8和R9可以分別為氫或烷基，優(yōu)選的為C1-4烷基;
R2為氫;烷基，優(yōu)選C1-4烷基;環(huán)烷基，優(yōu)選C3-7環(huán)烷基;?；瑑?yōu)選C1-8?；?苯甲酰基或至多可被三個取代基取代的芐基，取代基可單獨(dú)選自硝基，鹵素，CF3，烷基(優(yōu)選C1-4)和烷氧基(優(yōu)選C1-4);或R1-N-R2共同形成5-或6元的雜環(huán)，其中雜環(huán)為未被取代的或者為被一個或多個取代基所取代的環(huán)，取代基可單獨(dú)選自苯基，芐基，烷基((優(yōu)選C1-4)，N(CH3)2，硝基，氧代基，噻吩基，CONH2，COOMe和COOEt;
X是氫;烷基(優(yōu)選為C1-5);環(huán)烷基(優(yōu)選環(huán)己基);-CH2-環(huán)己基或芐基;
A是選自由下列殘基組成的基團(tuán)纈氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，別異亮氨酰，α-氨基異丁酰，3-叔丁基丙氨酰，2-叔丁基甘氨酰，3-環(huán)己丙氨酰，2-乙基甘氨?；颦h(huán)己基甘氨酰;
R3是氫或烷基(優(yōu)選C1-5);
B是氫，烷基(優(yōu)選C1-5)，環(huán)烷基(優(yōu)選環(huán)己基);-CH2-環(huán)己基或芐基;
D是氫，乙酸基;羥基或烷氧基(優(yōu)選C1-5);
E是氫，或烷基(優(yōu)選C1-5);或B和E一起為-(CH2)3-，-(CH2)2-，-CH(CH3)CH2CH2-，-CH(CH3)-CH2-，-C(CH3)2CH2CH2-，或-C(CH3)2-CH2-;
R7為-NR4-CHG-CHK-CHL-CO-或
其中V是氧或硫;Y1是氫;Z1是氫或低級烷基(優(yōu)選C1-4);或Y1和Z1共同形成一個鍵;
W1是氫，烷基(優(yōu)選C1-6)和苯基;
R4是氫或烷基(優(yōu)選C1-5);
G是氫，烷基(優(yōu)選C1-5)，環(huán)己基，-CH2-環(huán)己基，或芐基;
K是氫，乙酸基，羥基或烷氧基(優(yōu)選C1-5);
L是氫，或烷基(優(yōu)選C1-5);或R4和G一起為-(CH2)4-，-(CH2)3-，或CH2-CH(OH)-CH2-;
M是選自由下列殘基組成的基團(tuán)1-氨基-戊基-1-羰基，纈氨酰，2-叔-丁基甘氨酰;脯氨酰，羥基脯氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，3-環(huán)己基丙氨酰，苯丙氨酰，四氫異喹啉基-2-羰基，3-噻唑基丙氨酰，3-噻吩基丙氨酰，組氨酰，2-氨基吲哚基-2-羰基，酪氨酰，3-吡啶丙氨酰，3-叔丁基丙氨酰，2-環(huán)己基甘氨酰，或3-萘基丙氨酰;
或R1R2N-CHX-CO和A一起形成
其中T為氫或低級烷基(優(yōu)選的是甲基或乙基);U為氫或低級烷基(優(yōu)選C1-5);n為1，2或3，V為氧或硫;Y為氫;Z為氫或低級烷基(優(yōu)選的是甲基);或Y和Z一起形成一個鍵;W為氫，低級烷基(優(yōu)選的為C1-4)或苯基;
a，b和d分別為0或1;
Q為羥基，烷氧基(優(yōu)選的是C1-5)，苯氧基，芐氧基或者是被取代的或未被取代的氨基;若當(dāng)b和d為0時，Q不應(yīng)為羥基或烷氧基。
本發(fā)明還提供了制備通式Ⅰ所示化合物的方法，含上述化合物和藥物上可接受的載體的藥物組合物，以及利用其治療哺乳動物癌癥的方法。
本發(fā)明的一亞類化合物包括，其中R1-N-R2是下式所示的5-或6-元雜環(huán)的通式Ⅰ化合物
這些雜環(huán)可以是未被取代的或已被一個或多個取代基取代的雜環(huán)，取代基可單獨(dú)選自苯基，芐基和烷基(優(yōu)選C1-4)，N(CH3)2，硝基，噻吩基，CONH2，COOEt或氧代基。
本發(fā)明的另一亞類化合物為包括其中Q為式R5-N-R6的氨基部分的通式Ⅰ所示化合物，其中R5是H，或羥基，或C1-7-烷氧基或芐氧基或C1-7-烷基，或氟乙基或二氟乙基，或三氟乙基或C3-7-環(huán)烷基，R6是H，或C1-7-烷基，或苯基(其至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基或C1-7-烷基-磺?；?;或芐基(可至多被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或萘基(可至多被兩個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，芐氧基，苯氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或二苯甲基(可至多被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基);或二苯基(至多可被兩個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或三苯甲基(至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或二苯甲基乙基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或二苯甲基甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或萘甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或苊基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)被選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或苊基甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或吡啶基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或吡啶甲基(可至多被二個取代基取代，取代基分別為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或苯并噻唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或苯并異噻唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或苯并吡唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或苯并噁唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基);或芴基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或氨芴基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基);或嘧啶基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，COOEt、CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?;或五元的雜芳基[至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，氰基，COOMe、COOEt，硫甲基，硫乙基，硫苯基，吡啶甲基，乙?；?，-CH2-COOEt，CONH2，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，苯基(至多可被四個取代基取代，取代基或單獨(dú)為硝基，CF3，鹵素或C1-4-烷基)，芐基(可至多被四個取代基取代，取代基分別為硝基，CF3，鹵素，C1-4-烷基，萘基，C1-7-烷基-磺?；?，苯磺?；?，或C1-4-二烷基氨基)];或-CHR7-5元的雜芳基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，COOMe，COOEt，COOCH(CH3)2，CONH2，COOBzl，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，苯基，芐基，萘基，或C1-7-烷基-磺?；鵞R7＝H，直鏈或支鏈的C1-5-烷基，芐基或R7和R5一起形成基團(tuán)-(CH2)3-或-(CH2)4-])。
在本發(fā)明的另一亞類化合物中，R5-N-R6一起形成的結(jié)構(gòu)選自下列組成的基團(tuán)
這些基團(tuán)是未被取代的或者是被一個或多個取代基取代的，取代基可單獨(dú)選自由CF3，硝基，鹵素，氧代，氰基，N，N-二甲基氨基，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-6-烷基(可形成環(huán)系)，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，萘基，嘧啶基，COOEt，COOBzl，C3-6-環(huán)烷基，吡咯烷基，哌啶基，噻吩基，吡咯基，-CH2-CO-NCH(CH3)2，-CH2-CO-N(CH2)4，-CH2-CO-N(CH2)4O，芐基(至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自硝基，鹵素，CF3，硫甲基或相應(yīng)的亞砜或砜，硫乙基或相應(yīng)的亞砜或砜，C1-4-烷基，和C1-4烷氧基)，和苯基(至多可被三個取代基取代，取代基單獨(dú)選自硝基，鹵素，CF3，硫甲基，硫乙基，C1-4-烷基和C1-4-烷氧基。
本發(fā)明另一亞類化合物包括其中b為零的通式Ⅰ化合物。
本發(fā)明另一亞類化合物包括通式Ⅰ化合物，其中d為零，b是-NR4-CHG-CHK-CHL-CO-，和Q不是羥基或烷氧基。
本發(fā)明另一亞類化合物包括通式Ⅰ化合物，其中b和d為零，Q不是羥基或烷氧基。
本發(fā)明另一亞類化合物包括通式Ⅰ化合物，其中d為零，R7是
本發(fā)明另一亞類化合物包括其中a為零的通式Ⅰ所示化合物。
本發(fā)明另一亞類化合物包括通式Ⅰ所示化合物，其中a和d為零。
本發(fā)明另一亞類化合物包括通式Ⅰ所示化合物，其中b和d為1，Q是羥基，C1-4-烷氧基或芐氧基。
優(yōu)選的化合物其取代基如下R1為乙基，甲基，三氟乙基，氟乙基，二氟乙基，異丙基，正-丙基，正-丁基，正-戊基，環(huán)丙基，環(huán)戊基，脲基，甲磺酰基，甲苯磺酰基，萘磺酰基，苯磺酰基，2，4，6-三甲基磺?；S氧羰基，叔-丁氧羰基，甲氧羰基，嗎啉代磺酰基，叔-丁氨磺?；?，甲氨磺?；?，三氟乙?；?，NH2，N(CH3)2，N(CH2CH3)2，N[CH(CH3)2]2，脒基或CH3O-，R2是H，甲基，乙基，異丙基，正-丙基，正-丁基，環(huán)丙基，甲?；阴；?，丙?；?，(CH3)2CHCO-，新戊?；郊柞；?
或R1-N-R2一起為
X是氫，甲基，乙基，異丙基，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)CH2CH3，叔丁基，-CH2-環(huán)己基，或芐基;
A是纈氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，別異亮氨酰，3-叔丁基丙氨酰，2-叔丁基甘氨酰，3-環(huán)己基丙氨酰，2-乙基甘氨酰，或2-環(huán)己基甘氨酰;
R3是氫，甲基，或乙基;
B是氫，甲基，乙基，異丙基，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)CH2CH3-，叔丁基，-CH2-環(huán)己基，或芐基;
D是氫，羥基，甲氧基，乙氧基，異丙氧基或叔-丁氧基;
E是氫，甲基，乙基，異丙基或叔丁基;或B和E一起形成基團(tuán)-(CH2)2-，(CH2)3-，-CH(CH3)-CH2-，或-C(CH3)2-CH2-;
R7是-NR4-CHG-CHK-CHL-CO-，或
其中V是氧或硫;Y1是氫;Z1是氫或甲基;或Y1和Z1可共同形成一個鍵;W1是氫，甲基，乙基，異丙基，叔-丁基或苯基;
R4是氫或甲基;
G是氫，甲基，乙基，異丙基，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)CH2CH3，叔丁基，-CH2-環(huán)己基，或芐基;
K是氫，羥基，甲氧基，乙氧基，異丙氧基或叔-丁氧基;
L是氫，甲基，乙基或異丙基;或R4和G一起為-(CH2)4-，-(CH2)3-，或CH2-CH(OH)-CH2-，M選自由下列基團(tuán)組成的基團(tuán)纈氨酰，2-叔-丁基甘氨酰，脯氨酰，羥脯氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，3-環(huán)己基丙氨酰，苯丙氨酰，四氫異喹啉-2-羰基，3-噻唑基丙氨酰，3-噻吩基丙氨酰，2-氨基吲哚基-2-羰基，酪氨酰，3-吡啶丙氨酰，3-叔丁基甘氨酰，2-環(huán)己基甘氨酰，或3-萘基-丙氨酰;
a，b和d分別為0或1;
或R1R2N-CHX-CO和A一起為
Q是羥基，C1-5烷氧基，芐氧基或氨基部分NR5R6其中R5是氫，甲基，乙基，三氟乙基，氟乙基，二氟乙基，丙基，異丙基或
R6是氫，甲基，乙基，三氟乙基，丙基，異丙基，叔-丁基或
或R5-N-R6一起為
更為優(yōu)選的化合物的取代基具有下列含義R1是乙基，甲基，三氟乙基，氟乙基，二氟乙基，異丙基，丙基，環(huán)丙基，芐氧羰基，甲氧羰基，乳酰基，甲基氨基磺酰基，甲苯磺?；寤谆酋；琋(CH3)2，脒基或CH3O-;
R2是H，甲基，乙基，異丙基，丙基，丁基，環(huán)丙基，甲?；?，乙?；?，丙酰基，新戊?；郊柞；蚱S基;或R1-N-R2一起為
X是氫，甲基，異丙基，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)CH2CH3，叔-丁基，或芐基;
A是纈氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，2-叔-丁基甘氨?；?-乙基甘氨酰;
R3是氫，甲基，或乙基;
B是氫，甲基，異丙基，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)CH2CH3，叔-丁基，或芐基;
D是氫，羥基，甲氧基或叔-丁氧基;
E是氫，甲基，異丙基，叔-丁基，或乙基;或B和E一起為-(CH2)3-或-(CH2)2-;
R7是
M選自由下列殘基組成的基團(tuán)脯氨酰，羥脯酰，纈氨酰，異亮氨酰，2-叔-丁基甘氨酰，苯丙氨酰，四氫異喹啉-2-羰基，2-氨基吲哚基-2-羰基，酪氨酰，3-萘基丙氨酰;
a，b和d分別為0或1;
或R1R2N-CHX-CO和A一起為
Q是羥基，C1-4烷氧基，芐氧基或氨基部分-NR5R6其中R5是氫，甲基，乙基，三氟乙基，氟乙基，二氟乙基，丙基，異丙基，環(huán)丙基，環(huán)戊基，環(huán)己基;
R6是氫，甲基，乙基，丙基，異丙基，叔丁基，芐基，4-苯氧芐基，4-芐氧芐基，3，4，5-三甲氧芐基，苯基，4-苯氧苯基，4-芐氧苯基，3，4，5-三甲氧苯基或
或R5-N-R6一起為
這些例子只用來說明本發(fā)明，并不能限制本發(fā)明的范圍。
通式Ⅰ所示的化合物最好是由L型氨基酸或L型氨基酸的衍生物組成，但它們也可包含一個或多個D型氨基酸或D型氨基酸的衍生物。
特別地，適宜的生理上可接受的酸為鹽酸，檸檬酸，酒石酸，乳酸，磷酸，甲磺酸，乙酸，甲酸，馬來酸，富馬酸，蘋果酸，琥珀酸，丙二酸，硫酸，L-谷氨酸，L-天冬氨酸，丙酮酸，粘酸，苯甲酸，葡萄糖醛酸，草酸，抗壞血酸和N-乙酰甘氨酸。
新型化合物可用已知方法制備。因此，這些化合物可以通過逐個按序連接或?qū)⒑线m的片段進(jìn)行連接的方法制得。采用逐個連接方式時，從肽鏈羧末端開始每次連接一個氨基酸或一個結(jié)構(gòu)單元。采用片段偶聯(lián)時，可以連接不同長度的片段，這些片段是按序?qū)被峄蚪Y(jié)構(gòu)單元連接來制成的。
無論是按序逐個連接還是片段偶聯(lián)，其單元之間必須是以形成酰胺鍵為連接方式的。酶法及化學(xué)方法均適用于此。
在下列文章中詳細(xì)描述了化學(xué)法形成酰胺鍵Müller，Methodender organischen Chemie Vol.XV/2，pp1-364，Thieme Verlag，Stuttgart，1974;Stewart，Young，Solid Phase Peptide Synthesis，pp31-34，71-82，Pierce Chemical Company，Rockford，1984;Bodanszky，Klausner，Ondetti，Peptide Synthesis，pp85-128，John Wiley & Sons，New York，1976和其他肽化學(xué)方面的常規(guī)工作。特別優(yōu)選的方法是疊氮法，對稱和混合酸酐法，在原位發(fā)生或完成的活化酯法，利用脲烷保護(hù)的氨基酸的N-羧酸酐和使用偶聯(lián)劑形成酰胺鍵，偶聯(lián)劑特別是二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)，二異丙基碳化二亞胺(DIC)，1-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDCI)，正-丙烷磷酸酐(PPA)，N，N-雙(2-氧代-3-噁唑烷基)-酰胺磷酰氯(BOP-Cl)，溴代-三-吡咯烷基鏻六-氟磷酸鹽(Py Brop)，二苯磷酰疊氮(DPPA)，Castro′s試劑(BOP，PyBop)，鄰-苯并三唑基-N，N，N′，N′-四甲基尿鎓鹽(HBTU)，二乙基磷?；杌?DEPCN)，2，5-二苯基-2，3-二氫-3-氧代-4-羥基噻吩二氧化物(Steglich′s試劑，HOTDO)和1，1′-羰基二咪唑(CDI)。偶聯(lián)劑可單獨(dú)使用或與諸如N，N′-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)，N-羥基-苯并三唑(HOBt)，N-羥基苯并三嗪(HOOBt)，N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)或2-羥基吡啶等添加劑一起使用。
在酶法肽合成中通常可以免除保護(hù)基，但在化學(xué)合成時對反應(yīng)物必須使用可逆的保護(hù)基，使其在形成酰胺鍵時不帶有這些被保護(hù)基團(tuán)?；瘜W(xué)合成的三種優(yōu)選的經(jīng)典的保護(hù)基技術(shù)芐氧羰基(Z)，叔-丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)技術(shù)。肽鏈延伸中的每一步都要確定鏈擴(kuò)展單元的α-氨基的保護(hù)基。對氨基酸保護(hù)基技術(shù)的詳細(xì)描述可見Müller，Methoden der Organischen Chemic Vol.XV/l，pp20-906，Thieme Verlag Stuttgart，1974。構(gòu)建肽鏈所用的單元可以在溶液中，也可在懸浮液中反應(yīng)，或用相似于Merrifield在J.Amer.Chem.Soc，85(1963)2149中所描述的方法。特別優(yōu)選的方法是制備肽時，利用Z，Boc或Fmoc保護(hù)技術(shù)進(jìn)行按序逐個連接或片段偶聯(lián)，其和Merrifield技術(shù)中的一種鍵合在不溶性的聚合物支持體上(后文中也稱之為樹脂)的反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)，這就使用Boc或Fmoc保護(hù)技術(shù)順序構(gòu)成的肽固定于聚合的支持體上，使生長的肽鏈(見

圖1或2)的羧基末端與不溶性樹脂顆粒呈共價鍵合。這種步驟可以通過過濾的方法除去反應(yīng)試劑和副產(chǎn)物，并且不必重結(jié)晶中間體。
被保護(hù)氨基酸或結(jié)構(gòu)單元能與任一適宜的聚合物連結(jié)，這些聚合物不溶于所用的溶劑并且具有穩(wěn)定的物理形式從而使其易于過濾。聚合物必須含有一個功能基團(tuán)，使第一個被保護(hù)氨基酸可以通過共價鍵與其能牢固結(jié)合。有許多聚合物適于此目的，例如纖維素，聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯，磺化的聚苯乙烯，氯甲基化的苯乙烯/二乙烯基苯共聚物(Merrified樹脂)，4-甲基二苯甲基胺樹脂(MBHA-樹脂)、苯乙酰胺甲基樹脂(Pam-樹脂)，對-芐氧-芐基-醇-樹脂、二苯甲基胺樹脂(BHA樹脂)，4-羥甲基苯甲酸-甲基樹脂，Breipohl樹脂等等(Tetrahedron Letters 28(1987)565;BACHEM提供)。4-(2，4-二甲氧苯氨甲基)苯氧-樹脂(Novabiochem提供)或鄰-氯三苯甲基-樹脂(Biohellas提供)。
反應(yīng)條件下穩(wěn)定的所有溶劑都適于溶液體系中酰胺鍵的形成，尤其是水，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲基亞砜(DMSO)，乙腈，二氯甲烷(DCM)，1，4-二噁烷，四氫呋喃(THF)，N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)和這些溶劑的混合物。在聚合支持體上的合成可以在所有隋性有機(jī)溶劑中進(jìn)行，這時所有氨基酸衍生物應(yīng)是可溶的。然而，優(yōu)選的溶劑還應(yīng)具有樹脂-溶脹的性質(zhì)。如DMF，DCM，NMP，乙腈和DMSO，和這些溶劑的混合物。合成完成后，化合物從聚合物支持體上裂解下。裂解條件針對不同類型的樹脂在文獻(xiàn)中均有說明。裂解反應(yīng)通常大多需用酸，和Pd催化，尤其是在液體無水氟化氫中，在無水三氟甲烷磺酸中，在稀釋或濃縮的三氟乙酸中裂解;在如嗎啉這樣的弱堿存在條件下，在THF或THF-DCM混合物中需以Pd-催化裂解，或在乙酸/二氯甲烷/三氟乙醇混合物中裂解。
根據(jù)所選保護(hù)基，在裂解條件下可以維持保護(hù)基或裂解保護(hù)基。當(dāng)進(jìn)行某些衍生反應(yīng)時肽的部分脫保護(hù)也是很有意義的。N-末端的二烷基化化合物可以通過偶聯(lián)溶液中或聚合支持物上的適宜的N，N-二烷基氨基酸進(jìn)行制備，或在溶液中進(jìn)行還原烷基化反應(yīng)(例如和甲醇中的NaCNBH3反應(yīng))進(jìn)行制備或通過樹脂鍵合的化合物的還原烷基化反應(yīng)，即與NaCNBH3和適宜的醛在DMF/1%乙酸中反應(yīng)制備。可以將合適的內(nèi)酰胺鍵連接的二肽單元插入肽鏈制備具有γ或δ-內(nèi)酰胺鍵的化合物(R.Freidinger，J.Org.Chem.(1982)104～109)。將適合的二肽單元插入肽鏈，制得具有噻唑-，噁唑-，噻唑啉或噁唑啉的含有二肽結(jié)構(gòu)部分的化合物(U.Schmidt等人，Synthesis(1987)，233-236;P.Jouin等人，Tetrahedron Letters(1992)，2807～2810，P.Wipf等人，Tetrahedron Letters(1992)，907～910;W.R.Tully，J.Med.Chem.(1991)，2065;Synthesis(1987)，235;T.Shioiri等人，J.Org.Chem.(1987)，1252～1255;R.Pettit等人.，J.Am.Chem.Soc.(1989)，5463-65)。具有-NR3-CHB-CHD-CHE-CO-和NR4-CHG-CHK-CHL-CO-的結(jié)構(gòu)單元可按文獻(xiàn)所述方法，例如通過相應(yīng)的被保護(hù)氨基酸醛與適當(dāng)?shù)耐榛噭┓磻?yīng)，如膦酸鹽、膦內(nèi)鎓鹽Evan′s試劑等制備(S.Shibuya等人.，Heterocycles(1990)，1597～1600;M.Braun等人.，Angew.Chem(1987)，24-37;Angew.Chem.1992，104，No.10;T.Shioiri等人.，Peptide Chemistry 1989，N.Yanaihara(Ed.)，291～296;Pettit等人，J.Am.Chem.Soc，1989，111，5463;T.Shioiri;Tetrahedron Letters 1991，931-934;K.Koga，Tetrahedron Letters 1991，2395-2398;)。
通過給哺乳動物體服用本發(fā)明化合物，該化合物可用來抑制或治療固體腫瘤(例如肺，胸，結(jié)腸，前列腺，膀胱，直腸，或子宮膜內(nèi)腫瘤)或血液學(xué)上的惡性腫瘤(例如白血病，淋巴瘤)?？梢圆捎萌我怀Ｒ?guī)的藥學(xué)上(尤其是腫瘤學(xué)，藥劑學(xué))的方法給藥，包括口服和非腸道給藥如皮下，靜脈內(nèi)，肌肉和腹內(nèi)幾種方式。這些化合物可以單獨(dú)服用或以藥物組合物的形式服用，該組合物包含通式Ⅰ所示化合物及藥物上可接受的適于所用的給藥方法的載體。這些藥物組合物可以是混合產(chǎn)品，即也可含有其它治療用活性成分。
哺乳動物所服劑量，應(yīng)含有有效量的抑制腫瘤的活性成分，這取決于常規(guī)因素，包括所用特定化合物的生物活性;給藥方法，受治療者的年齡、健康狀況及體重，原來的和后來的癥狀;治療的頻率;接受的其它療法以及所希望產(chǎn)生的效果。典型的日用劑量為口服約5～250mg/Kg體重，非腸道給藥約1～100mg/Kg體重。
適宜的劑量形式含有約10～500mg活性成份/每單位，這樣，活性成份一般占組合物總重的1～90%。
這些新型化合物能夠以常規(guī)的固態(tài)或液態(tài)狀藥物形式服用，例如無包衣或包衣的片劑，膠囊，粉末，顆粒，栓劑或溶液。這些均是以常規(guī)方法生產(chǎn)。為此，活性物質(zhì)可以和常規(guī)的藥物輔劑一同進(jìn)行加工，藥物輔劑如片劑結(jié)合劑，填充劑，防腐劑，藥片崩解劑，流體調(diào)節(jié)劑，增塑劑，潤濕劑，分散劑，乳化劑，溶劑，緩釋劑，抗氧化劑和/或助進(jìn)氣體(參見H.Sucker等人Pharmazeutische Technologie，Thieme-Verlag，Stuttgart，1978)。這樣的給藥形式通常含有1～90%的(重量百分比)活性物質(zhì)。
下列實(shí)施例用以說明本發(fā)明。生成蛋白質(zhì)的氨基酸在實(shí)施例中縮寫為公知的三字碼。其它字符所代表的意思是TFA＝三氟乙酸，Ac＝乙酸，Bu＝丁基，Et＝乙基，Me＝甲基，Bzl＝芐基。
A.一般步驟Ⅰ.權(quán)利要求1的化合物以上述的標(biāo)準(zhǔn)Z-和Boc-技術(shù)進(jìn)行經(jīng)典液相合成，也可用人工或在APPLIED BIOSYSTEMS提供的431A型全自動合成儀上進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)固相合成。使用Boc和Fmoc保護(hù)基不同的合成循環(huán)步驟如下a)以Boc保護(hù)的合成循環(huán)步驟1.30%TFA溶于DCM 1×3分2.50%TFA溶于DCM 1×1分3.以DCM洗滌 5×1分4.5%二異丙基乙胺(DIA)溶于DCM 1×1分5.5%二異丙基乙胺(DIA)溶于NMP 1×1分6.以NMP洗滌 5×1分7.加入預(yù)活化的保護(hù)氨基酸(與1當(dāng)量的DCC和在NMP/DCM中的1當(dāng)量的HOBt活化)肽偶聯(lián)(第一部分) 1×30分8.加DMSO到反應(yīng)混合物中至其體積含量為20%9.肽偶聯(lián)(第二部分) 1×16分10.加入3.8當(dāng)量的二異丙基乙胺至反應(yīng)混合物中11.肽偶聯(lián)(第三部分) 1×7分12.DCM洗滌 3×1分13.若轉(zhuǎn)化非完全，重復(fù)偶聯(lián)步驟(返回第5步)14.10%的乙酸酐，5%二異丙基乙胺溶于DCM 1×2分15.10%的乙酸酐溶于DCM 1×4分16.DCM洗滌 4×1分17.返回1Boc-Cl和PyBrop被用作在N-甲基氨基酸或含N-甲基的結(jié)構(gòu)單元后偶聯(lián)氨基酸的試劑。反應(yīng)時間相應(yīng)增長。在液相合成時，分別使用Boc-氨基酸NCAs(N-叔-丁基氧羰基-氨基酸-N-羧酸酐)或Z-氨基酸-NCAs(N-芐氧羰基-氨基酸-N-羧酸酐)于這種偶合方式最為有利。
b)以Fmoc保護(hù)基的合成循環(huán)步驟1.DMF洗滌 1×1分2.20%哌啶溶于DMF 1×4分3.20%哌啶溶于DMF 1×16分4.DMF洗滌 5×1分5.加入預(yù)活化的保護(hù)氨基酸(以1當(dāng)量的TBTU和1.5當(dāng)量的DIPEA在DMF活化);肽偶聯(lián) 1×61分6.DMF洗滌 3×1分7.若轉(zhuǎn)化反應(yīng)未完全，重復(fù)偶聯(lián)(返回5)8.10%的乙酸酐溶于DMF 1×8分9.DMF洗滌 3×1分10.返回2Boc-Cl和PyBrop用作在N-甲基氨基酸或含N-甲基的結(jié)構(gòu)單元后偶聯(lián)氨基酸的試劑。反應(yīng)時間相應(yīng)增長。
Ⅱ.N末端的還原烷基化AⅠa或AⅠb中制備的肽-樹脂在N端脫去保護(hù)(AⅠb的2-4步或AⅠa的1-6步)然后與3倍過量的醛或酮在加入3當(dāng)量的NaCNBH3的DMF/1%的乙酸溶液反應(yīng)。反應(yīng)完全后(Kaiser陰性實(shí)驗)用水，異丙醇，DMF和二氯甲烷洗滌樹脂數(shù)次。
Ⅲ.Ⅰa和Ⅱ的肽-樹脂處理減壓干燥肽-樹脂，并將其放入-TEFLON HF裝置(由PENINSULA提供)的反應(yīng)器中。加入清洗劑，優(yōu)選的是苯甲醚(1ml/g樹脂)，在肽鏈中含色氨酸情況下用硫醇移去吲哚甲?；?優(yōu)選的是乙二硫醇(0.5ml/g樹脂)，然后液氮冷卻下在HF中縮合?；旌衔餆嶂?℃，在此溫下攪拌45min。氟化氫被減壓除去，為除去殘留的清洗劑用乙酸乙酯洗滌剩余物，化合物以30%強(qiáng)醋酸提取并過濾，濾液凍干。
Ⅳ.Ⅰb和Ⅱ的肽-樹脂處理減壓干燥-樹脂并針對氨基酸組合物按下列裂解步驟之一操作(Wade，Tregear，Howard Florey Fmoc Workshop Manual，Melbourne 1985)。
裂解條件TFA 清洗劑 反應(yīng)時間1 95% 5%H2O 1.5h2 95% 5%乙二硫醇/苯甲醚 1.5h(1:3)室溫下攪拌適宜的TFA混合物中的肽-樹脂懸浮液一定時間，然后樹脂被濾掉，以TFA和DCM洗滌。濾液和洗滌液被濃縮，加入二乙醚沉淀化合物，冰浴冷卻后，沉淀物被濾掉，放入含30%乙酸中并凍干。
Ⅴ.當(dāng)使用鄰-氯三苯甲基-樹脂(Biohellas提供)時，將在乙酸/三氟乙醇/二氯甲烷混合物(1∶1∶3)的肽-樹脂懸浮液室溫下攪拌1h?？瘴鼮V去樹脂并用裂解溶液洗滌。合并濾液在真空中濃縮并以水處理。沉淀的固體通過過濾或離心除去，以二乙醚洗滌并減壓干燥。
Ⅵ.化合物的純化和鑒定使用或不用后序中壓色譜(固定相HD-SIL C-18，20～45μ，100A;流動相梯度A＝0.1%TFA/甲醇，B＝0.1TFA/H2O)以凝膠色譜法(SEPHADEX G-10 G-15/10%醋酸;SEPHADEX LH20/甲醇)進(jìn)行純化。產(chǎn)物純度以分析HPLC法測定(固定相100 2.1mm VYDAC C-18，51，300
;流動相CH3CN/H2O梯度，1%的TFA緩沖，40℃)。用快速原子轟擊質(zhì)譜和1H或13C-譜進(jìn)行鑒定。
B.具體步驟實(shí)施例1
0.4g鹽酸苯丙氨酰胺(2mmol)和0.55gBoc-N(CH3)-CH[CH(CH3)2]-CH(OCH3)-CH2-COOH(2mmol;以文獻(xiàn)方法合成S.Shibuya，等人，Heterocycles，Vol.31，no，9，1597-1600(1990))溶于DMF中。加入0.4g DEPCN(2.2mmol)和1.4ml二異丙基胺(DIPEA)，反應(yīng)混合物室溫下攪拌一晝夜，減壓蒸發(fā)溶劑，剩余物溶于乙酸乙酯并以5%檸檬酸水溶液，水，5%NaHCO3和NaCl溶液徹底洗滌。有機(jī)層以Na2SO4充分干燥，過濾，并蒸發(fā)至干燥狀態(tài)。剩余物(0.66g)真空干燥，以5ml TFA/DCM(1∶1)去保護(hù)2小時并蒸發(fā)至干燥狀態(tài)。這樣得到的去保護(hù)片斷溶于DMF中并在45℃下與0.44gN-叔丁氧羰基-纈氨酸-N-羧酸酐(1.8mmol)反應(yīng)。攪拌5h后，溶劑在真空蒸發(fā)，加入乙酸乙酯，有機(jī)層以5%檸檬酸水溶液，5% NaHCO3水溶液，水，NaCl水溶液徹底洗滌有機(jī)層，以Na2SO4干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，并用5ml TFA/DCM(1∶1)處理剩余物(0.7g，1.3mmol)2h。溶劑混合物蒸發(fā)之后，用KOH干燥，剩余物溶于DMF和0.19g N，N-二甲基纈氨酸(1.3mmol);按文獻(xiàn)方法合成參見，例如R.E.Bowmann，J.Chem.Soc.1959，1342)中，加入0.25gDEPCN(1.5mmol)和0.7ml DIPEA。室溫下攪拌反應(yīng)混合物一晝夜，蒸發(fā)至干燥并以SEPHADEXLH-20柱層析。收集各鎦分產(chǎn)品并蒸發(fā)掉溶劑，化合物1的產(chǎn)量為0.46g。
實(shí)施例2
0.29g芐胺(2mmol)和0.55g Boc-N(CH3)-CH[CH(CH3)2]-C(OCH3)-CH2-COOH(2mmol，按下列文獻(xiàn)所述方法合成S.Shibuya等人，Heterocycles，Vol.31，no.9，1597-1600(1990))溶于DMF。加入0.4g DEPCN(2.2mmol)和1.4ml DIPEA后，室溫下攪拌反應(yīng)混合物一晝夜，減壓蒸發(fā)溶劑，剩余物溶于乙酸乙酯，并以5%檸檬酸溶液，水，5% NaHCO3，和NaCl溶液充分洗滌。有機(jī)層以Na2SO4干燥，過濾，并蒸發(fā)至干燥狀態(tài)。剩余物(0.51g)真空干燥，以5ml TFA/DCM(1∶1)脫去保護(hù)2h并蒸發(fā)至干燥狀態(tài)。將這樣得到的脫保護(hù)片段溶于DMF，并與0.4g N-叔丁氧羰基-纈氨酸-N-羧酸酐(1.6mmol)在45℃反應(yīng)。攪拌5h后，真空蒸發(fā)溶劑，加入乙酸乙酯，并以5%的檸檬酸水溶液，5%的NaHCO3水溶液，水和NaCl水溶液充分洗滌有機(jī)層，并以Na2SO4干燥。減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.51g，1.1mmol)以5ml TFA/DCM(1∶1)處理2h。蒸發(fā)溶劑混合物后，用KOH干燥，殘余物溶于DMF，并加入0.16g N，N-二甲基纈氨酸(1.1mmol)。
0.23g DEPCN(1.4mmol)和0.7ml DIPEA。室溫下攪拌反應(yīng)混合物一晝夜，蒸發(fā)至干燥狀態(tài)，并以SEPHADEX LH-20柱層析。收集產(chǎn)物餾分，蒸發(fā)溶劑，獲得0.36g化合物1。
可以制備下述化合物，且可以根據(jù)實(shí)施例1和2的方法制備下列化合物3. Xaa Val Xdm Xcx Xab4. Xaa Val Xdm Xcx Xac5. Xaa Val Xdm Xcx Xat6. Xaa Val Xdm Xcx Xbp7. Xaa Val Xdm Xcx Xbt8. Xaa Val Xdm Xcx Xbu9. Xaa Val Xdm Xcx Xbv10. Xaa Val Xdm Xcx Xbw11. Xaa Val Xdm Xcx Xby12. Xaa Val Xdm Xcx Xca13. Xaa Val Xdh Xcx Xbq14. Xaa Val Xdh Xcx Xbs15. Xaa Val Xdm Xat16. Xaa Val Xdm Xbp17. Xav Val Xdm Xbq18. Xav Val Xdm Xbs19. Xbo Val Xdm Xbt20. Xbo Val Xdm Xbu21. Xaa Xaf Xdm Xbv22. Xaa Xaf Xdm Xbw
23. Xav Leu Xdm Xby24. Xaa Leu Xdm Xca25. Xaa Val Xdm Xcx Xcf26. Xaa Val Xdm Xcx Xao27. Xax Val Xdm NH228. Xax Val Xdm Xcf29. Xax Val Xdm Xao30. Xaa Xdm NH231. Xax Xdm NH232. Xaa Xdm Xcf33. Xax Xdm Xcf34. Xaa Xdm Phe Xcf35. Xax Xdm Phe Xcf36. Xaa Val Xda Xda NH237. Xaa Val Xda Xda Phe NH238. Xaa Val Xdh Xdh NH239. Xaa Val Xdh Xdh Phe NH240. Xaa Val Xda NH241. Xaa Val Xdb NH242. Xaa Val Xdc NH243. Xaa Val Xdd NH244. Xaa Val Xde NH245. Xaa Val Xdf NH246. Xaa Val Xdg NH247. Xaa Val Xdh NH248. Xaa Val Xdi NH249. Xaa Val Xdk NH250. Xaa Val Xdl NH251. Xaa Val Xdn NH252. Xaa Val Xdo NH253. Xaa Val Xdp NH254. Xaa Val Xdq NH255. Xaa Val Xdm Xcx NH256. Xaa Val Xdm Xcy NH257. Xaa Val Xdm Xcz NH258. Xaa Val Xdm Xds NH259. Xaa Val Xdm Xcw NH260. Xaa Val Xdm Xda NH261. Xaa Val Xar NH262. Xaa Val Xdm Xdc NH263. Xaa Val Xdm Xbf NH264. Xaa Val Xdm Xbg NH265. Xaa Val Xdm Xck66. Xaa Val Xdm Xcl67. Xaa Val Xdm Xcx Phe NH268. Xaa Val Xdm Xcx Phe Xcf69. Xaa Val Xdm Xcx Phe Xao
70. Xaa Val Xdm Xcx Xad NH271. Xaa Val Xdm Pro NH272. Xaa Val Xdm Xcx Xdr NH273. Xaa Val Xdm Xcx Xcu NH274. Xav Val Xdm Xcx Phe NH275. Xax Val Xdm Xcx Phe NH276. Xaa Val Xdm Phe NH277. Xav Val Xdm Phe NH278. Xax Val Xdm Phe NH279. Xas Val Xdm Phe NH280. Xaa Val Xdm Xab81. Xaa Val Xdm Xac82. Xbh Xdm NH283. Xbi Xdm Xcx NH284. Xbk Xdm Xcx Phe NH285. Xbl Xdh NH286. Xbm Xdh Xcx NH287. Xbn Xdh Xcx Phe NH288. Xaa Xdm Phe NH289. Xas Xdm Phe Xao90. Xav Xdm Phe Xcf91. Xax Xdm Phe NH292. Xaa Val Xdm OH93. Xaa Val Xdm OBzl94. Xaa Val Xdm NH295. Xaa Val Xdm Xan96. Xaa Val Xdm Xao97. Xaa Val Xdm Xap98. Xaa Val Xdm Xau99. Xaa Val Xdm Xaq100. Xaa Val Xar Pro NH2101. Xaa Val Xdm Xbz102. Xaa Val Xdm Xcb103. Xaa Val Xdm Xcc104. Xaa Val Xdm Xcd105. Xaa Val Xdm Xce106. Xaa Val Xdm Xcf107. Xaa Val Xdm Xcg108. Xaa Val Xdm Xch109. Xaa Val Xdm Xci110. Xaa Val Xdm Xcm111. Xaa Val Xdm Xcn112. Xaa Val Xdm Xco113. Xaa Val Xdm Xcp114. Xaa Val Xdm Xcq115. Xaa Val Xdm Xcr116. Xaa Val Xdm Xao
117. Xag Val Xdm NH2118. Xah Val Xdm NH2119. Xag Val Xdm NH2120. Xai Val Xdm NH2121. Xak Xaf Xdm NH2122. Xal Xaf Xdm NH2123. Xam Xaf Xdm NH2124. Xas Xaf Xdm NH2125. Xav Xaf Xdm NH2126. Xaw Val Xdm NH2127. Xax Val Xdm NH2128. Xay Val Xdm NH2129. Xaz Val Xdm NH2130. Xba Xaf Xdm Xcf131. Xbb Xaf Xdm Xcf132. Xbc Val Xdm NH2133. Xbd Val Xdm NH2134. Xbe Val Xdm NH2135. Xbo Xaf Xdm NH2136. Xcs Xaf Xdm NH2137. Xct Val Xdm NH2138. Xcv Val Xdm NH2139. Xaa Val Xdt Xcx Phe NH2140. Xaa Val Xdt Xcx NH2141. Xaa Val Xdt NH2142. Xaa Val Xdu Xcx NH2143. Xaa Val Xdu NH2144. Xdv Val Xdm Xcf145. Xdw Val Xdm Xcf146. Xdx Val Xdm Xcf147. Xaa Val Xar Xae148. Xaa Val Xar Xdy
表Ⅰ 按實(shí)施例1和2制備的化合物的序列鑒定
符號Xaa…的含義歸納如下XaaN，N-二甲基纈氨酸
Xad四氫異喹啉羧酸Xae
Xaf叔-亮氨酸或2-叔-丁基甘氨酸
XagN，N-二甲基異亮氨酸XahN，N-二甲基亮氨酸XaiN，N-二甲基-叔-亮氨酸XakN-脒基-纈氨酸XalN-乙酰基-N-甲基纈氨酸XamN-甲基-N-芐基纈氨酸
XasN-甲基-N-異丙基纈氨酸
XavN，N-二乙基纈氨酸XawN-氟乙基纈氨酸XaxN，N-二丙基纈氨酸XayN-環(huán)丙基纈氨酸
XcsN-脲基-纈氨酸XctN，N-二甲基苯丙氨酸Xcu3-噻吩基丙氨酸XcvN-甲基-N-異丙基-叔-亮氨酸
Xdr3-萘丙氨酸
XdvN-甲基氨基磺酰-纈氨酸XdwN-甲基-N-甲基磺酰-纈氨酸XdxN-乳酰-N-甲基-纈氨酸
末端的-NH2表示C-末端氨基酸或結(jié)構(gòu)單元呈酰胺形式。
用常規(guī)方法對本發(fā)明化合物進(jìn)行抗癌活性分析，例如包含下述方法。
A.體外實(shí)驗方法細(xì)胞毒性可以通過附著細(xì)胞系的標(biāo)準(zhǔn)方法測定，如微培養(yǎng)四唑鎓分析(MTT)。這種分析方法的細(xì)節(jié)已公開(Alley，Mc等人，Cancer Research48589-601，1988)。指數(shù)生長培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞如HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞或LX-I肺腫瘤可用于制備微滴平板培養(yǎng)物。96個小井的平板中(在150μl培養(yǎng)基中)每個小井接種5000-20，000個細(xì)胞，37℃下生長一晝夜。加入于10倍稀釋液中，濃度從10-4M到10-10M的要測試的化合物。然后培養(yǎng)細(xì)胞48小時。為確定每個小井中活細(xì)胞數(shù)，加入MTT染料(50μl的3mg/ml的3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑鎓鹽水溶液)。此混合物于37℃培養(yǎng)5h，然后在每個小井中加入50μl的25%pH2 SDS。培養(yǎng)一晝夜之后，以ELISA讀數(shù)器讀出每一小井中550nm下的吸收值，利用公式%T/C計算平行的每個小井的+/-SD平均值(處理成活細(xì)胞/對照成活細(xì)胞%)。
(處理細(xì)胞的OD值)/(對照細(xì)胞的OD值) ×100%＝%T/C以生長抑制為50%的T/C時給出的實(shí)驗化合物的濃度，稱為ⅠC50。
B.活體內(nèi)實(shí)驗本發(fā)明化合物可以進(jìn)一步用任何一種不同的活體活性的預(yù)診斷分析方法測試，活體活性可表明其在診斷上的實(shí)用性。使用裸鼠進(jìn)行這種診斷分析實(shí)驗，以本領(lǐng)域公知的方法將原本是人類的腫瘤組織移入小鼠體內(nèi)，通過給帶有移植腫瘤的小鼠服藥，來評價這種實(shí)驗化合物的抗腫瘤效果。
更具體地，將上述生長于無胸腺nede裸鼠中的人體腫瘤用約50mg大小的腫瘤片斷，移植入一新的受體動物中，移植那天記為0天，6～10天之后，靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)注射此實(shí)驗化合物治療病鼠，每次劑量5～10只老鼠為一組。每天給藥，劑量從10～100mg/Kg體重，給5天，10天或15天，每周兩次測定腫瘤直徑和體重，用Vernier Capliper測得的直徑并用下面公式計算腫瘤體積(長×寬2)/2＝腫瘤重量mg相對于未治療的腫瘤，每組治療都要計算腫瘤重量的平均值，確定每組的T/C值。
序列清單(1)一般信息(ⅰ)申請人(A)姓名BASF Aktiengesellschaft(B)街道Carl-Bosch-Strasse 38(C)城市Ludwigshafen(E)國家聯(lián)邦德國(F)郵政編碼(ZIP)D-67056(G)電話0621/6048526(H)傳真0621/6043123(I)電傳1762175170(ⅱ)發(fā)明名稱新型肽，其制備及應(yīng)用(ⅲ)序列數(shù)目9(ⅳ)計算機(jī)可讀方式(A)介質(zhì)軟盤(B)計算機(jī)IBM PC 兼容機(jī)
(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件Patent In Release ＃1.0，＃125版(EPO)(2)I DNo∶1序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述序列IDNo∶1Xaa Val Xaa Xaa Xaa1 5(2)I DNo∶2序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶2序列Xaa Val Xaa Xaa Xaa1 5(2)I DNo∶3序列的信息
(ⅰ)序列特征(A)長4個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶3序列Xaa Xaa Xaa Xaa1(2)I DNo∶4序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長4個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo4序列Xaa Leu Xaa Xaa1(2)I DNo∶5序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長5個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈
(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶5序列Xaa Val Xaa Xaa Phe1 5(2)I DNo∶6序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長4個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶6序列Xaa Xaa Phe Xaa1(2)I DNo∶7序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長4個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶7序列Xaa Val Xaa Phe
(2)I DNo∶8序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長4個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶8序列Xaa Xaa Xaa Phe1(2)I DNo∶9序列的信息(ⅰ)序列特征(A)長4個氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈數(shù)單鏈(D)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)線性(ⅱ)分子類型肽(ⅹⅰ)序列描述I DNo∶9序列Xaa Val Xaa Pro1
流程圖1在聚合物支持體上的Boc保護(hù)基技術(shù)
Boc＝叔-丁氧羰基保護(hù)基PG＝側(cè)鏈保護(hù)基R＝氨基酸側(cè)鏈流程圖2在聚合物支持體上的Fmoc保護(hù)基技術(shù)
Fmoc＝9-芴甲氧羰基保護(hù)基PG＝側(cè)鏈保護(hù)基R＝氨基酸側(cè)鏈
權(quán)利要求
1.通式所示的肽及其與生理上可接受的酸形成的鹽
式中R1是烷氧基；烷基；環(huán)烷基；烷基磺?；蝗一?；氟乙基；二氟乙基；三氟乙?；?；脒基；脲基；哌啶子磺?；粏徇酋；?；芐氧羰基；烷氧羰基；可被烷基取代的氨基磺?；?；羥基；可被一個或多個取代基取代的苯磺?；?，這些取代基選自烷基，-N(CH3)2，硝基，鹵素，和CF3；或者是NR8R9，其中R8和R9分別為氫或烷基；R2是氫；烷基；環(huán)烷基；?；?；苯甲酰基或芐基，其至多可被三個取代基取代，這些取代基選自硝基，鹵素，CF3，烷基和烷氧基(優(yōu)選的為C1-4)；或者R1-N-R2一起形成5-或6-元的雜環(huán)，其可以是非取代的，或可以被一個或多個取代基取代，這些取代基選自苯基，芐基，烷基，N(CH3)2，氧代基，硝基，噻吩基，CONH2，COOMe和COOEt；X是氫，烷基，環(huán)烷基，-CH2-環(huán)己基或芐基；A選自由下列殘基組成的基團(tuán)纈氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，別異亮氨酰，α-氨基異丁酰，3-叔丁基丙氨酰，2-叔丁基甘氨酰，3-環(huán)己基丙氨酰，2-乙基甘氨酰或2-環(huán)己基甘氨酰；R3是氫或烷基；B是氫或烷基，環(huán)烷基，-CH2-環(huán)己基或芐基；D是氫，羥基，乙酸基，或烷氧基；E是氫或烷基；或B和E一起形成-(CH2)3-，-(CH2)2-，-CH(CH3)CH2CH2-，-CH(CH3)CH2-，-C(CH3)2CH2CH2-，或-C(CH3)2CH2-；R7是-NR4-CHG-CHK-CHL-CO-；或
其中V是氧或硫；Y1是H；Z1是H或低級烷基；或Y1和Z1一起形成一個鍵；W1是H，烷基或苯基；R4是氫或烷基；G是氫，烷基，環(huán)己基，-CH2-環(huán)己基，或芐基；K是氫，羥基，乙酸基，或烷氧基；L是氫，或烷基，或R4和G一起形成-(CH2)4-，-(CH2)3-或-CH2-CH(OH)-CH2-；M選自由下列基團(tuán)組成的一組殘基1-氨基-戊基-1-羰基，纈氨酰，2-叔丁基甘氨酰，脯氨酰，羥基脯氨酰，異亮氨酰，亮氨酰，3-環(huán)己基丙氨酰，苯丙氨酰，四氫異喹啉基-2-羰基，3-噻唑基丙氨酰，3-噻吩基丙氨酰，組氨酰，2-氨基吲哚基-2-羰基，酪氨酰，3-吡啶基丙氨酰，3-叔丁基丙氨酰，2-環(huán)己基甘氨酰，或3-萘基丙氨酰；或者R1R2N-CHX-CO-和A一起形成
其中T是氫或低級烷基；U是氫或低級烷基；n是1，2或3；V是氧或硫；Y是氫；Z是氫或低級烷基；或Y和Z一起形成一個鍵；W是氫，低級烷基或苯基；a，b和d分別為0或1；Q是羥基，烷氧基，苯氧基，芐氧基或取代的或未被取代的氨基；條件是b和d為0時，Q不能是羥基或烷氧基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1通式Ⅰ所示的化合物，其中R1-N-R2為5-或6-元的雜環(huán)，其結(jié)構(gòu)式如下
其可以為非取代的或者被一個或多個取代基取代，這些取代基可單獨(dú)選自苯基，芐基，烷基，N(CH3)2，硝基，噻吩基，CONH2，COOEt或一個氧代基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中Q是R5-N-R6中的一個氨基部分，其中R5是H，或羥基，或C1-7的烷氧基，或芐氧基，或C1-7的烷基，或氟乙基，或二氟乙基，或三氟乙基，或C3-7的環(huán)烷基;R6是H，或C1-7的烷基，或三氟乙基，或苯基(其可以至多被三個取代基取代，這些取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或芐基(至多可被三個取代基取代，取代基單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基)，或萘基(至多可被二個取代基取代，取代基或單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或二苯甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或二苯基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或三苯甲基(至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或二苯甲基乙基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基)，或二苯甲基甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基)，或萘甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或苊基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或苊甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基)，或吡啶基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或吡啶甲基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或苯并噻唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或苯并異噻唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基)，或苯并吡唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或苯并噁唑基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或芴基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或氨芴基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺酰基)，或吡啶基(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，COOEt，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，或C1-7-烷基-磺?；?，或5-元雜芳基[至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，氰基，COOMe，COOEt，硫代甲基，硫代乙基，硫代苯基，吡啶甲基，乙?；?CH2-COOEt，CONH2，CONHBzl，CON(Bzl)2，可形成環(huán)系的C1-4-烷基，C1-4烷氧基，苯氧基，芐氧基，苯基(至多可被四個取代基取代，取代基可單獨(dú)為硝基，CF3，鹵素，或C1-4烷基)，芐基(至多可被四個取代基取代，取代基可單獨(dú)為硝基，CF3，鹵素，C1-4烷基，萘基，C1-7-烷基-磺酰基，苯磺酰基，或C1-4-二烷基氨基)]，或-CHR7-5-元雜芳環(huán)(至多可被二個取代基取代，取代基可單獨(dú)為CF3，硝基，鹵素，CONHBzl，CON(Bzl)2，COOMe，COOEt，COOCH(CH3)2，CONH2，COOBzl，C1-4-烷基，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，苯基，芐基，萘基，或C1-7-烷基-磺?；鵞R7＝H，直鏈或支鏈的C1-5-烷基，芐基;或R7和R5一起形成-(CH2)3-或-(CH2)4-])。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中Q是式R5-N-R6的氨基部分，其形成的結(jié)構(gòu)選自由下列組成的基團(tuán)
上述基團(tuán)可以是未被取代的或可被一個或多個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自CF3，硝基，鹵素，氧代基，氰基，N，N-二甲基氨基，CONHBzl，CON(Bzl)2，C1-6-烷基(可以形成一環(huán)系)，C1-4-烷氧基，苯氧基，芐氧基，萘基，嘧啶基，COOEt，COOBzl，C3-6環(huán)烷基，吡咯烷基，哌啶基，噻吩基，吡咯基，-CH2-CO-NCH(CH3)2，-CH2-CO-N(CH2)4，-CH2-CO-N(CH2)4O，芐基(至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自硝基，鹵素，CF3，硫代甲基，或相應(yīng)的亞砜或砜，硫代乙基，或相應(yīng)的亞砜或砜，C1-4-烷基，和C1-4烷氧基)，和苯基(至多可被三個取代基取代，取代基可單獨(dú)選自硝基，鹵素，CF3，硫代甲基，硫代乙基，C1-4-烷基，和C1-4烷氧基)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中b為零。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中d為零，b為-NR4-CHG-CHK-CHL-CO，且Q不為羥基或烷氧基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中b和d為零，且Q不為羥基或烷氧基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中d為零，R7為
9.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中a為零。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中a和d為零。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物，其中b和d為1，Q為羥基，C1-6-烷氧基或芐氧基部分。
12.一種藥物組合物，包括藥物上可接受的載體和一種于治療上有效量的權(quán)利要求1的化合物。
13.一種治療哺乳動物腫瘤的方法，包括對生有此腫瘤的哺乳動物體給藥抑制腫瘤量的權(quán)利要求1的化合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ所示的化合物的制備方法，其特征在于按肽化學(xué)中公知的方法制備上述化合物。
全文摘要
公開了以上通式所示的新型肽。其中R
文檔編號C07K5/02GK1095724SQ9311264
公開日1994年11月30日 申請日期1993年12月16日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月16日
發(fā)明者A·豪特, B·揚(yáng)森, K·里特, D·克林格, G·凱爾豪爾, C·羅默達(dá)爾, T·巴羅扎里, X·-D·錢 申請人:Basf公司