專利名稱：含萘基的新藥物化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥學領域和有機化學領域并提供了用于治療與絕經(jīng)后綜合征有關的醫(yī)學適應癥以及子宮纖維瘤病，子宮內(nèi)膜異位和主動脈平滑肌細胞增生的含萘基的新化合物。
“絕經(jīng)后綜合征”是一種用于描述常影響已進入或完成稱作絕經(jīng)的生理變形的婦女的各種病理狀態(tài)的術語。盡管使用這一術語包括了許多病理情況，但是絕經(jīng)后綜合征的三個主要影響是從對以下疾病的最長期醫(yī)學護理中產(chǎn)生的骨質(zhì)疏松，對心血管的作用如高血脂和雌激素依賴性癌癥，特別是乳腺癌和子宮癌。
骨質(zhì)疏松包括一組由不同病因產(chǎn)生的疾病，而它們的特征在于每單位體積的骨質(zhì)網(wǎng)下降。這種骨質(zhì)下降及導致的骨折的結果使得支撐身體結構的骨胳損壞。骨質(zhì)疏松的最常見類型之一與絕經(jīng)有關。在停經(jīng)3至6年內(nèi)，大多數(shù)婦女骨的小梁間隔中的骨質(zhì)下降約20％至約60％。這種快速下降一般與骨吸收和形成的增加有關。然而，吸收循環(huán)更明顯且結果是骨質(zhì)的網(wǎng)狀下降。在絕經(jīng)后的婦女中，骨質(zhì)疏松是一種常見并且嚴重的疾病。
據(jù)估計僅在美國患這種疾病的婦女就有兩千五百萬人。骨質(zhì)疏松的結果對個人是有害的，并且由于它是慢性病且需要昂貴和長期的資助(住院和家庭護理)以避免疾病的后遺癥，因此也會造成巨大的經(jīng)濟損失。這對于上了年紀的病人尤其實際。此外，盡管一般認為骨質(zhì)疏松不是一種有生命危險的疾病，但是在上了年紀的婦女中，有20％至30％的死亡率與髖部骨折有關。這一死亡率的大百分數(shù)可能與絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松有直接關系。
對于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的影響來說，骨中最易損的組織是小梁骨。這種組織通常稱作海綿狀骨或網(wǎng)狀骨并且它特別集中在骨的末端附近(在關節(jié)附近)和脊柱的椎骨中。小梁組織的特征在于它是相互內(nèi)連的小骨樣結構，并且更堅固，它還形成骨的外表面和中軸的致密皮層組織。這種小梁的內(nèi)連網(wǎng)狀構造給外皮層結構以橫向支撐并且對整個結構的生物機械強度來說也是關鍵。在絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松中，主要是導致骨的損壞和骨折的網(wǎng)狀吸收和小梁減少。鑒于絕經(jīng)后婦女的小梁減少，最常見的骨質(zhì)疏松與高度依賴于小梁支撐的骨，例如，椎骨，諸如股骨和前臂這樣的承重骨的頸端有關是并不令人驚奇的。實際上，髖部骨折，科勒斯氏(colles)骨折和椎骨粉碎性骨折都是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的特點。
在這種情況，一般用于治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的唯一可接受的方法是雌激素替代療法。盡管該療法一般是成功的，但是因為雌激素治療常常產(chǎn)生不需要的副作用，所以主要依賴該療法的病人很少。
在絕經(jīng)前的全部時間內(nèi)，大多數(shù)婦女心血管疾病的發(fā)生率比同年齡的男性少。然而，在絕經(jīng)后，婦女的心血管疾病的發(fā)生率漸漸增加到與男性中的發(fā)病率一樣高。這種防護的降低與雌激素的缺少相聯(lián)，且特別是與雌激素調(diào)節(jié)血清脂類水平的能力相關。雖然還不了解雌激素調(diào)節(jié)血清脂類的能力這一特性，但是到目前為止的證據(jù)表明雌激素可以在肝臟中向上調(diào)節(jié)低密度脂類(LDL)受體以除去過量的膽固醇。此外，一般認為雌激素對膽固醇的生物合成有一定作用并對心血管的健康有其它的有利作用。
據(jù)文獻報導，使用雌激素替代療法的絕經(jīng)后婦女的血清脂類水平可以恢復到絕經(jīng)前狀態(tài)的血清脂類濃度的水平。所以，一般認為雌激素療法是一種治療這種疾病的合適療法。然而，對于許多婦女來說，雌激素替代療法的副作用是不可接受的，所以限制了該療法的使用。用于這種疾病的一種理想的療法是使用一種可用為雌激素使用而調(diào)節(jié)血清脂類水平的藥劑，該藥劑沒有與雌激素療法有關的副作用和危險。
第三種與絕經(jīng)后綜合征有關的主要病理情況是雌激素依賴性乳腺癌，在更小程度上，是其它器官(尤其是子宮)的雌激素依賴性癌癥。盡管這類腫瘤不只限于絕經(jīng)后的婦女，但是這類腫瘤在年老的絕經(jīng)后的人群中更為普遍。目前這些癌癥的化學療法大量依賴于使用諸如他莫昔芬(例如)這樣的抗雌激素化合物。盡管這類混合的興奮劑-拮抗物對這些癌癥的治療具有有利的影響，并且雌激素的副作用在有生命危險的緊急情況中是可以允許的，但是它們卻不理想。例如，由于這樣藥劑的雌激素(興奮劑)的特性，它們可以對某些癌細胞群體有刺激作用，由此它們可以在某些情況中對抗生成。一種用于治療這些癌癥的較好療法是使用一種對再生組織有可忽略或無雌激素興奮劑特性的抗雌激素化合物的藥劑。
根據(jù)對能夠緩解絕經(jīng)后綜合征(特別是癌癥)的藥劑的需求，本發(fā)明提供了含有萘基的新化合物，它的藥物組合物以及使用這類化合物用于治療絕經(jīng)后綜合征和諸如下述的其它與雌激素有關的病理狀態(tài)的方法。
子宮纖維變性(子宮纖維瘤疾病)是一個較長的且經(jīng)常存在的并在下列各種病名中產(chǎn)生的臨床難題，這些病名包括子宮纖維瘤疾病，子宮肥大，子宮平滑肌瘤，子宮肌層肥大，子宮纖維變性和纖維化子宮炎。實際上，子宮纖維變性是一種子宮壁上有不合適的纖維組織沉積物的疾病。
這種疾病是婦女痛經(jīng)和不育癥的原因。這種疾病的確切原因難以了解，但有證據(jù)表明它是一種纖維組織對雌激素的不適反應。通過每日對家免使用雌激素，持續(xù)3個月，在它們中已經(jīng)產(chǎn)生了這類疾病。在豚鼠中，通過每日使用雌激素，持續(xù)4個月，也已經(jīng)產(chǎn)生了這種疾病。此外，在鼠中，雌激素可以導致類似的子宮肥大。
最常見的子宮纖維變性的治療方法包括外科手術，這種方法既昂貴而有時又可產(chǎn)生諸如腹部粘連和感染這樣的并發(fā)癥。在有些病人中，初起的外科治療僅是一種暫時的治療，而纖維瘤又會再生長。在這些病例中，進行子宮切除術可有效地終止纖維瘤疾病，而且可使病人重新獲得生命。此外，可以給予促性腺激素釋放激素拮抗劑，但是由于它們能導致骨質(zhì)疏松，所以應暫緩使用它們。因此，目前需要一種治療子宮纖維變性的新方法，而本發(fā)明的方法滿足了這一需求。
子宮內(nèi)膜異位是一種嚴重的痛經(jīng)疾病，它伴有劇痛，同時出現(xiàn)流出的血滲入子宮內(nèi)膜樣物質(zhì)或腹腔中，并?？蓪е虏挥Y。一般認為這種病癥的原因是在不適組織中對正常激素調(diào)節(jié)有不適反應并確定位置的異位子宮內(nèi)膜生長。由于子宮內(nèi)膜生長的不合適位置，似乎組織開始出現(xiàn)導致巨噬細胞浸潤的局部炎癥樣反應和導致出現(xiàn)疼痛反應的一連串情況。這種疾病的確切病因不好了解，而用激素療法對它的治療是各種各樣的(難以確定)，并且這些治療方法都有大量不需要的和可能產(chǎn)生危險的副作用。
這種疾病的治療方法之一是通過一種負反饋對主要的促性腺激素的釋放的影響以及隨即對卵巢產(chǎn)生雌激素的影響，使用低劑量的雌激素來抑制子宮內(nèi)膜生長，然而，有時需要使用連續(xù)的雌激素來控制癥狀。這種雌激素的使用經(jīng)?？梢詫е虏恍枰母弊饔貌⑶疑踔劣袑е伦訉m內(nèi)膜癌癥的危險。
另一種治療方法由連續(xù)給藥可誘發(fā)閉經(jīng)的孕激素組成，通過抑制卵巢雌激素的產(chǎn)生，這種方法可以導致子宮內(nèi)膜生長的退化。使用這種慢性孕激素療法經(jīng)常伴有不適的孕激素的CNS副作用，并且由于抑制了卵巢功能，這種療法經(jīng)?？蓪е虏挥Y。
第三種治療方法由給藥弱的雄激素組成，所述的雄激素可有效地控制子宮內(nèi)膜異位；然而，它們可產(chǎn)生嚴重的男性化作用。用于子宮內(nèi)膜異位的這些治療方法中的幾種與使用連續(xù)療法而導致骨質(zhì)輕度下降有關。因此，需要一種治療子宮骨膜異位的新方法。
主動脈平滑肌細胞增生在諸如動脈粥樣硬化和再狹窄這樣的疾病中起著重要作用。在經(jīng)皮穿腔冠脈血管成形術(PTCA)之后，血管的再狹窄已經(jīng)表現(xiàn)出特征為早期和晚期的組織反應。在PTCA后，發(fā)生在小時至天期間的早期組織反應是由于具有一些血管痙攣的血栓形成，而認為晚期組織反應可以通過主動脈平滑肌細胞的過量增生和遷移來控制。在這種疾病中，由這類肌細胞和巨噬細胞產(chǎn)生的增生細胞的活力和移生顯然是疾病的發(fā)病機理。主動脈血管平滑肌細胞的過量增生和遷移是使用下述PTCA的冠狀動脈再閉合的主要機理，所述的PTCA有動脈粥樣切除術(atherectomy)，激光血管成形術和主動脈分路移植外科術。參見Austin等在《美國心臟病學院學報》(Journal of the AmericanCollege of Cardiology)，8369-375(1985年8月)中的“用平滑肌細胞的內(nèi)膜增生來解釋經(jīng)皮穿腔冠脈血管成形術后冠狀動脈狹窄的復發(fā)”。
血管再狹窄為用下列外科手術封閉的動脈遺留了較長期的并發(fā)癥，所述的外科手術有經(jīng)皮穿腔冠脈血管成形術(PTCA)，動脈粥樣切除術(atherectomy)，激光血管成形術和主動脈分路移植外科術。在經(jīng)受PTCA的約35％的病人中，再閉合發(fā)生在手術后的3至6個月內(nèi)。目前治療血管再狹窄的方法包括使用諸如斯坦特固定模這樣裝置的機械處理法或包括肝素，低分子量肝素，香豆素，阿司匹林，魚油，鈣拮抗劑，類固醇和前列環(huán)素的藥物療法。這些對策已經(jīng)不能控制再閉合率且對治療和預防血管再狹窄已經(jīng)無效。參見Hermans等在《美國心臟雜志》(American Heart Journal)，122171-187(1991年7月)中的“預防經(jīng)皮穿腔冠脈血管成形術后的再狹窄一種‘魔彈’的研究”。
在再狹窄的發(fā)病機理中，過量的細胞增生和遷移發(fā)生是由于血液中的細胞成分產(chǎn)生生長因子和在血管再狹窄中傳遞增生的平滑肌細胞的主動脈壁受損的結果。
將抑制主動脈平滑肌細胞增生和/或遷移的藥劑用于治療和預防再狹窄。本發(fā)明提供了用作主動脈平滑肌細胞增生抑制劑以及這樣的再狹窄抑制劑的化合物。
本發(fā)明涉及通式I的化合物及其藥學上可接受的鹽。
其中R1是H，OH，鹵素，OCO(C1-C6的烷基)，OCO(芳香基)，OSO2(C4-C6的烷基)，OCOO(C1-C6的烷基)，OCOO(芳香基)，OCONH(C1-C6的烷基)或OCON(C1-C6的烷基)2；R2是芳香基，C1-C6的烷基，C3-C6的環(huán)烷基，或4-環(huán)己醇；R3是O(CH2)2或O(CH2)3；R4和R5可以是CO(CH2)2CH3，CO(CH2)3CH3，C1-C6的烷基，或R4和R5與連接它們的氮結合形成哌啶，嗎啉，吡咯烷，3-甲基吡咯烷，3，3-二甲基吡咯烷，3，4-二甲基吡咯烷，吖庚因，或2-甲基哌啶；R6是
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，
(C1-C5的烷基)，
(芳香基)，
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，
芳香基。
本發(fā)明進一步涉及含有通式I化合物的藥物組合物，該藥物組合物可以含有雌激素或孕激素，并且本發(fā)明還提供了這類化合物單獨或與雌激素或孕激素一起用于緩解絕經(jīng)后綜合征的癥狀，尤其是骨質(zhì)疏松，與心血管相關的病理狀態(tài)和雌激素依賴性癌癥的用途。作為本文中所使用的，名詞“雌激素”包括具有雌激素樣活性的甾類化合物，例如，17β-雌二醇，雌酮，共軛雌激素(Premarin)，血清雌激素，17β-乙炔基雌二醇等。作為本文中所使用的，名詞“孕激素”包括具有促孕活性的化合物，例如，孕酮，異炔諾酮，壬孕酮(nongestrel)，醋酸甲地孕酮，炔諾酮等。
本發(fā)明的化合物還用于抑制婦女的子宮纖維瘤疾病和子宮內(nèi)膜異位以及人體主動脈平滑肌細胞增生，尤其是再狹窄。
本發(fā)明的一個方面包括通式I的化合物及其藥物上可接受的鹽。
其中R1是H，OH，鹵素，OCO(C1-C6的烷基)，OCO(芳香基)，OSO2(C4-C6的烷基)，OCOO(C1-C6的烷基)，OCOO(芳香基)，OCONH(C1-C6的烷基)或OCON(C1-C6的烷基)2；R2是芳香基，C1-C6的烷基，C3-C6的環(huán)烷基，或4-環(huán)己醇；
R3是O(CH2)2或O(CH2)3；R4和R5可以是CO(CH2)2CH3，CO(CH2)3CH3，C1-C6的烷基，或R4和R5與連接它們的氮結合形成哌啶，嗎啉，吡咯烷，3-甲基吡咯烷，3，3-二甲基吡咯烷，3，4-二甲基吡咯烷，吖庚因，或2-甲基哌啶；R6是
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，
(C1-C5的烷基)，
(芳香基)，
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，
芳香基。
在本說明書使用的本文所述化合物的一般名詞有它們的常用含義。例如，“烷基”指的是2-6個碳原子的直鏈或支鏈的脂族基，包括乙基，丙基，異丙基，丁基，正丁基，戊基，異戊基，己基，異己基等。同樣，名詞“C2-C6的烯烴”代表具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈烯烴并包括丙烯，乙烯，異丙烯，丁烯，正丁烯，己烯，戊烯等。
名詞“芳香基”包括可以用C1-C6的烷基，C1-C6的烷氧基，鹵素，氨基，硝基或羥基取代1-3次的苯基。
萘基的制備基本上如美國專利4,230,862(1980年10月28日出版)中所述來制作制備本發(fā)明化合物途徑中的原料，將上述文獻引入本文作為參考。
一般來說，下列通式中易得到的是四氫萘酮或其鹽
其中R7是羥基的保護基，將通式中的四氫萘酮或其鹽與一種諸如下列通式中的苯甲酸苯酯這樣的?；瘎┓磻?
其中R3，R4和R5如上所述。該反應一般在有中等強度的堿的情況下進行并在室溫或低于室溫時進行。優(yōu)選的羥基保護基是C1-C4的烷基，且特別優(yōu)選的是甲基。參見，例如，上述所引的美國專利，J.W.Barton，“有機化學中的保護基”第二章，J.G.W.McOmie(編輯)，Plenum出版社，紐約，NY，1973和T.W.Green，“有機化學中的保護基”第七章，John Wiley和Sons，紐約，NY，1981。
下一步驟，將產(chǎn)物轉化成一種烯醇磷酸酯衍生物，該衍生物通過將烯醇與一種諸如ClP(O)(OPh)2這樣的膦酸酯前體和合適的堿反應而在原處生成。接著與格利雅試劑(R2MgBr)或銅酸鹽試劑(R22CuLi)或其它親核碳類物質(zhì)反應，得到下列通式III的化合物及其藥物上可接受的鹽，其中有些是本領域公知的(參見，例如上述美國專利4,230,862)
其中R2，R3，R4，R5和R7如上所述。此后，將化合物III進行3，4-脫氫的選擇性脫氫作用。在溫度為約50℃至約100℃時，通過用2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)處理可以完成上述這一過程。這一過程產(chǎn)生通式II的化合物。
通式II的化合物表示用于制備通式I藥物活性化合物的一種方法的原料。當R6是
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)或
芳香基時，可以將α-碳(羧基)修飾成由R6定義的基團。在溫度為0至-85℃時，將諸如Rli，RMgX這樣的基團或碳上的親核類部分在合適的溶劑中按照預先確定的方法添加到通式II化合物上，其中R是C1-C5的烷基，C2-C5的鏈烯基，或芳香基。在提供足夠的時間(15分鐘至20小時)而使反應完全后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，并將混合物進行萃取，然后將混合的萃取物進行洗滌，干燥，過濾，濃縮及純化，從而產(chǎn)生一種通式Ia的化合物。
對于基團來說，其中R6是
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，或
(芳香基)，使用一種諸如三乙基硅的還原劑，隨即通過加入一種諸如三氟乙酸的酸，可以將α-羥基從上述化合物Ia中還原。在足夠的時間(15分鐘至24小時)后，諸如通過使用一種乙酸乙酯/飽和碳酸氫鈉水溶液的混合物而將反應驟冷。將混合物進行萃取，并將含有機溶劑的部分進行洗滌，干燥，過濾，濃縮和純化，從而產(chǎn)生一種通式Ib的化合物。用于完成這一過程的其它方法包括(a)將三烴基硅與諸如Et2AlCl2或BF3·Et2O(醚合三氟化硼)的路易斯酸反應；(b)在碳上用諸如鈀的催化劑氫解。此外，在碘化鈉之后的二氯二甲基硅也是有效的。
當R6是一種通式
(C1-C5烷基)中的基團時，將一種溶于適當溶劑中的適當?shù)耐ㄊ絀a的化合物冷卻至10℃至-25℃。此后，將羥基消除。通過加入一種諸如二甲氨基吡咯(DMAP)的堿，隨即加入甲磺酰氯，并再次加入DMAP，可以完成上述這樣的消除。另一方面，通過將羰基化合物與一種諸如R2+P-CH(C1-C5的烷基)的膦內(nèi)鎓鹽反應，可以制備所需的鏈烯烴。也可以使用諸如Ar2P(O)CHR或(RO)2P(O)CHR的其它有機磷化合物(Boutagy等，《化學綜述》(Chem.Reviews)，74，87(1974))。
采用公知的步驟用通式-O-CO-(C1-C6的烷基)，其中Ar是任意取代的苯基的-O-CO-Ar，或-O-SO2-(C4-C6的烷基)取代R1和R2羥基來制備其它化合物。參見，例如，上述美國專利4,358,593。
例如，當需要-O-CO(C1-C6的烷基)或-O-CO＝Ar基團時，將通式I的二羥基化合物與一種諸如?；?，?；?，?；瑁蝓；B氮的試劑反應，或與一種合適的酐反應，或與酐混合。在一種諸如吡啶，盧剔啶，喹啉或異喹啉的堿性溶劑中，或在一種諸如三乙胺，三丁胺，甲基哌啶等的叔胺溶劑中，上述反應可以很容易地進行。該反應也可以在一種惰性溶劑中進行，諸如乙酸乙酯，二甲基甲酰胺，二甲亞砜，二噁烷，二甲氧基乙烷，乙腈，丙酮，甲基乙基酮等，向反應體系中加入至少一種等量的酸的清除劑，諸如一種叔胺。如果需要，可以使用酸化作用的催化劑，諸如4-二甲氨基吡啶或4-吡咯烷基吡啶。參見，例如，Haslam等，《四面體》(Tetrahedron)，362409-2433(1980)。
在約-25℃至約100℃范圍的中等溫度時，通常在一種諸如氮氣的惰性氣體環(huán)境中，產(chǎn)生上述R1和R2基團的?；磻梢赃M行。然而，室溫通常足以使反應進行。
在惰性有機溶劑中或加熱條件下，通過合適的羧酸的酸催化反應也可以進行這樣的羥基?；饔?。所用的是諸如硫酸，多磷酸，甲磺酸等的酸催化劑。
上述R1和R2基團還可以通過形成一種適當酸的活性酯來生成，所述的活性酯諸如由象二環(huán)己基碳二亞胺，?；溥颍趸椒?，五氯苯酚，N-羥基琥珀酰亞胺和1-羥基苯并三唑這樣的公知試劑形成的酯。參見，例如，《日本化學協(xié)會?？?Bull.Chem.soc.Japan)，381979(1965)，和《Chem.Ber》，788和2024(1970)。
上述產(chǎn)生-O-CO-(C1-C6烷基)和-O-CO-Ar基團的各種技術都可以在如上所述的溶劑中進行。當然，這些在反應過程中不產(chǎn)生酸性產(chǎn)物的技術不再需要在反應混合物中使用酸的清除劑。
正如King和Monoir在《美國化學會雜志》(J.Am.Chem.Soc.)，972566-2567(1975)中所教導的，當需要一種通式I的化合物時，其中R1和R2是-O-SO2-(C4-C6的烷基)，將通式I的二羥基化合物與(例如)一種適當磺酸的衍生物反應，諸如磺酰氯，磺酰溴，或磺酰銨鹽。二羥基化合物也可以與適當?shù)幕撬狒磻?。這類反應可以在諸如上述討論與酰基鹵等反應的條件下進行。
制備通式I的化合物，使得R1和R2含有不同的生物保護基，或優(yōu)選制備通式I的化合物，使得R1和R2每個都含有相同的生物保護基。優(yōu)選的保護基包括-OCH3，-O-CO-C(CH3)3，-O-CO-C6H5，和-O-SO2-(CH2)3-CH3。
盡管在本發(fā)明的方法中可以使用自由基形的通式I的化合物，但是優(yōu)選制備和使用一種藥學上可接受的鹽的形式。所以，本發(fā)明方法中所用的化合物主要與各種有機和無機酸形成藥學上可接受的酸加成的鹽，并且包括在藥物化學中常使用的生理上可接受的鹽。這類鹽也是本發(fā)明的一部分。所用形成這類鹽的常用無機酸包括鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，連二磷酸等。也可以使用來源于有機酸的鹽，所述的有機酸諸如脂族的單和二羧酸，苯基取代的鏈烷酸，羥基鏈烷酸和羥基鏈烷雙酸，芳香酸，脂族和芳香磺酸。這類藥物上可接受的鹽包括乙酸鹽，苯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，丙烯酸鹽，抗壞血酸鹽，苯甲酸鹽，氯代苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，鄰乙酸基苯甲酸鹽，萘-2-苯甲酸鹽，溴酸鹽，異丁酸鹽，苯基丁酸鹽，β-羥基丁酸鹽，丁炔-1，4-二酸鹽(dioate)，己炔-1，4-二酸鹽(dioate)，癸酸鹽，辛酸鹽，鹽酸鹽，肉桂酸鹽，檸檬酸鹽，甲酸鹽，延胡索酸鹽，乙醇酸鹽，庚酸鹽，馬尿酸鹽，乳酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，羥基馬來酸鹽，丙二酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，煙酸鹽，異煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，對苯二甲酸鹽，磷酸鹽，磷酸一氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，丙炔酸鹽，丙酸鹽，苯基丙酸鹽，水楊酸鹽，癸二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，焦硫酸鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磺酸鹽，苯磺酸鹽，對溴苯基磺酸鹽，氯代苯磺酸鹽，乙基磺酸鹽，2-羥基乙烷磺酸鹽，甲磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，酒石酸鹽等。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
通過將通式I的化合物與等摩爾或過量的酸反應一般可形成藥物上可接受的酸加成的鹽。反應劑通常與諸如二乙基乙醚或乙酸乙酯這樣的互溶劑結合。在約1小時至10天內(nèi)，鹽一般從溶液中析出，并且通過過濾可以分離出鹽或可以通過常規(guī)方法將溶劑除去。
藥學上可接受的鹽與它們所來源于的化合物相比一般具有增加的溶解性，因此，它們通常適合于制成液體或乳劑的劑型。
下面的實施例用來進一步說明本發(fā)明化合物的制備。下面的任何實施例不用來限定本發(fā)明的范圍。
1H NMR和13C NMR分別是在300和75進行測定的。據(jù)報道相對于所應用的NMR溶劑來說，1H NMR的化學位移是用ppm表示的δ值。據(jù)報導1H NMR的偶合常數(shù)用赫茲(Hz)表示且它指的是表觀多重性。多重性如下所示s(單峰)；δ(雙峰)，t(三重峰)，q(四重峰)；m(多重峰)；comp(復合峰)，br(寬峰)，和app(表觀峰)。除非另有說明，根據(jù)Still法(Still，W.C.；Kahn，M.；Mitra《美國有機化學雜志》(A.J.Org.Chem.)1978，43，2923)，使用EM科學硅膠(230-400目ASTM)進行柱色譜。在一種色譜圓筒(Chromatotron)上，使用1，2，或4mm的塔板進行徑向色譜。在經(jīng)嚴格干燥的玻璃儀器中，所有空氣和/或濕度敏感性反應都在氬或氮氣環(huán)境中進行。在所有的情況中，在減壓條件下，使用一種旋轉式汽化器進行濃縮。
制備1
在室溫時，向不斷攪拌的帶有4′和6′未保護羥基的化合物II(R2＝ArOH)(1.00g)的THF(20ml)溶液中，加入N，N-二甲氨基吡啶(1.00g)，隨后加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(0.90g)。12小時后，將反應物用水稀釋并用氯仿萃取。將混合的有機萃取物干燥(硫酸鈉)并濃縮。將油相溶于乙酸乙酯并將所得的沉淀物濾除。將濾液濃縮并用熒光色譜法(硅膠，乙酸乙酯)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
實施例1
在-78℃時，向不斷攪拌的來自制備1產(chǎn)物(2.04g)的THF(10ml)溶液中，逐滴加入MeLi(4.16ml的1.4M二乙基乙醚溶液)。15分鐘后，用過量的飽和碳酸氫鈉水溶液將反應驟冷，并用乙酸乙酯將反應物進行萃取。將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所得的物質(zhì)用徑向色譜法(硅膠，4mm，正己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺∶甲醇＝2.5∶2.5∶0.1∶0.1)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
實施例2
在0℃時，向不斷攪拌的來自實施例1產(chǎn)物(0.50g)的THF(5ml)溶液中，加入氟化四丁銨(1.74ml的1.0M THF溶液)。15分鐘后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液并將所得的混合物用乙酸乙酯萃取。將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所得的物質(zhì)用徑向色譜法(硅膠，2mm，正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶三乙胺＝2.5∶2.5∶0.1∶0.1)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
實施例3
在0℃時，向不斷攪拌的來自實施例1產(chǎn)物(1.77g)的CH2Cl2(50ml)溶液中，加入三乙基硅烷(2.36ml)，隨后加入三氟乙酸(4.72ml)。15分鐘后，通過將反應混合物小心地傾入乙酸乙酯/飽和碳酸氫鈉水溶液的混合物中而使反應驟冷。將兩相混合物用乙酸乙酯萃取并將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所得的物質(zhì)用徑向色譜法(硅膠，2mm，正己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺∶甲醇＝2.5∶2.5∶0.1∶0.1)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
實施例4
在0℃時，向不斷攪拌的來自實施例3產(chǎn)物(0.50g)的THF(5ml)溶液中，加入氟化四丁銨(1.78ml的1.0M THF溶液)。15分鐘后，通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液而使反應驟冷。將所得的反應混合物用乙酸乙酯萃取，接著將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所得的物質(zhì)用徑向色譜法(硅膠，2mm，正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶三乙胺＝2.5∶2.5∶0.75∶0.25)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
實施例5
在0℃時，向不斷攪拌的來自實施例1產(chǎn)物(1.70g)的CH2Cl2(2ml)溶液中，加入N，N-二甲氨基吡啶(461mg)，隨后加入甲磺酰氯(0.27ml)。0.5小時后，加入第二部分的N，N-二甲氨基吡啶(461mg)，并將溶液升溫至室溫。20小時后，將反應混合物傾入鹽水中，接著用乙酸乙酯萃取。將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過徑向色譜法(硅膠，2mm，正己烷∶乙酸乙酯∶三乙胺∶甲醇＝2.5∶2.5∶0.1∶0.1)進行的純化得到所需的產(chǎn)物。
實施例6
在0℃時，向不斷攪拌的實施例5的產(chǎn)物(0.42g)的THF(5ml)溶液中，加入氟化四丁銨(1.51ml的1.0M THF溶液)。15分鐘后，向反應物中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，接著將混合物用乙酸乙酯萃取。將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所得的物質(zhì)用徑向色譜法(硅膠，2mm，正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶三乙胺＝2.5∶2.5∶0.70∶0.30)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
實施例7
在-78℃時，在不斷攪拌下，向一種制備1產(chǎn)物(1.00g)的溶液中加入PhLi(1.6ml的1.8M溶液)。15分鐘后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液并將所得的混合物用乙酸乙酯萃取。將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。通過徑向色譜法(4mm，硅膠，乙酸乙酯∶正己烷∶三乙胺∶甲醇＝2.5∶2.5∶0.01∶0.005)純化粗物質(zhì)而得到所需的產(chǎn)物。
實施例8
在0℃時，向不斷攪拌的實施例7產(chǎn)物(0.50g)的THF(5ml)的溶液中，加入氟化四丁銨(1.60ml的1.0M THF溶液)。15分鐘后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液并將所得的混合物用乙酸乙酯萃取。將混合的有機萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾并濃縮。將所得的物質(zhì)用徑向色譜法(硅膠，2mm，正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶三乙胺＝2.5∶2.5∶0.1∶0.1)純化，從而得到所需的產(chǎn)物。
試驗過程一般準備過程在實施例說明的方法中，使用的是絕經(jīng)后的模型，其中所測定的是不同治療方法對脂類循環(huán)的效果。
從Charles River實驗室(Portage，MI)中獲得成活75天的雌性Sprague Dawley鼠(體重在200至225g范圍)。在Charles River實驗室中，將動物進行雙側卵巢切除(OVX)或進行一種Sham手術，一周后將它們裝船發(fā)送。在到達時，將它們分組封裝在金屬吊籠中，每個籠中有3或4只，并且使它們可以隨意吃食(鈣的含量約為0.5％)和飲水，時間持續(xù)一周。將室溫控制在22.2℃±1.7℃，最小相對濕度為40％。室中的光周期為12小時光亮和12小時黑暗。
給藥區(qū)組織的收集。在一周的馴化期(所以，是OVX后兩周)后，開始每天用試驗用化合物進行給藥。除非另有說明，將17α-乙炔基雌二醇或試驗用化合物以1％的羧甲基纖維素的懸浮液形式或將它們?nèi)苡?0％的環(huán)糊精的形式進行口服給藥。將動物每天進行給藥，持續(xù)4天。在經(jīng)過上述給藥制度后，將動物稱重并用氯銨酮∶賽拉嗪(2∶1，V∶V)的混合物將它們麻醉，通過心臟穿刺來收集血樣。然后通過用CO2窒息來處死動物，通過一種中線切開術將子宮切除，并測定濕子宮的重量。
膽固醇分析。在室溫時，將血樣凝結2小時，并在3000rpm時，經(jīng)離心10分鐘后得到血清。使用一種Boehringer Mannheim Diagnostics高效膽固醇測定儀來測定血清膽固醇。概括地說，將膽固醇氧化或膽甾-4-烯-3-酮和過氧化氫。然后在有過氧化物酶的情況下，將過氧化氫與苯酚和4-氨基非那宗反應，從而產(chǎn)生一種對醌亞胺染料，將該物質(zhì)在500nm處讀取分光光度計上的數(shù)據(jù)。然后根據(jù)標準曲線來計算膽固醇的濃度。使用一種Biomek自動工作臺而自動進行整個測定。
子宮嗜曙紅細胞過氧化物酶(EPO)的測定。將子宮在4℃下保存到酶分析時。然后，將子宮在50個體積的含0.005％Triton X-100的50mM Tris緩沖液(pH-8.0)中攪勻。在Tris緩沖液中加入0.01％的過氧化氫和10mM鄰苯二胺(最終濃度)時，在450nm處監(jiān)測吸收度的增加，時間是1分鐘。子宮中存在的嗜曙紅細胞表明化合物的雌激素樣活性。在起始、線性部分的反應曲線中測定15秒間隔的最大速度。
化合物的來源17α-乙炔基雌二醇從Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO得到。
骨質(zhì)疏松試驗過程在上述一般的準備過程后，將鼠每天進行治療，持續(xù)35天(每個治療組6只鼠)，并在第36天時，通過二氧化碳窒息將鼠處死。正如本文所確定的，35天的期限足以使骨的密度得到最大的下降。在處死動物時，切除子宮，解剖內(nèi)部組織，并在測定濕重前將所含的液體排出以證實與全部卵巢切除有關的雌激素缺乏。由于進行了卵巢切除術，所以子宮的重量通常下降了約75％。然后將子宮放入10％的中性緩沖福爾馬林中以便繼續(xù)進行組織學分析。將右側股骨切下，并在干骺端遠側通過一種像分析程序(NIH像)對它進行X-射線分析而獲得數(shù)據(jù)。也用定量計算的X射線斷層照相術對來自這些動物的脛骨的最近面進行掃描。
根據(jù)上述過程，將溶于20％的羥丙基β-環(huán)糊精的本發(fā)明的化合物和乙炔基雌二醇(EE2)對試驗動物進行口服給藥。
總之，與未受損的，以載體治療的對照組相比，實行卵巢切除術的試驗動物在股骨的密度上產(chǎn)生了顯著下降?？诜o予乙炔基雌二醇(EE2)可以防止這種下降，但是使用這種治療方法經(jīng)常存在刺激子宮的危險。
本發(fā)明的化合物以一種常規(guī)的劑量依賴方式可以預防骨質(zhì)下降。因此，可將本發(fā)明的化合物用于治療絕經(jīng)后綜合征，特別是骨質(zhì)疏松。
MCF-7增生的測定將MCF-7乳腺癌細胞(ATCC HTB22)維持在補充了10％胎牛血清(FBS)(V/V)，L-谷氨酰胺(2mM)，丙酮酸鈉(1mM)，HEPES{(N-[2-羥乙基]哌嗪-N′-[2-乙基磺酸]10mM}，非必要的氨基酸和牛胰島素(1μg/ml)的MEM(最小基本培養(yǎng)基，不含酚紅，Sigma，St.Louis，MO)(維持培養(yǎng)基)中。在測定前10天，將MCF-7細胞轉到補充了10％葡聚糖包裹的活性炭脫色的胎牛血清(DCC-FBC)測定培養(yǎng)基以替代10％FBS的維持培養(yǎng)基中，從而排空內(nèi)部的類固醇貯存。使用細胞脫離培養(yǎng)基(補充了10mM HEPES和2mM EDTA的無Ca++/Mg++的HBSS(不含酚紅))將MCF-7細胞從維持瓶中脫離。用測定培養(yǎng)基將細胞洗滌兩次并將細胞的濃度調(diào)至80,000細胞/ml。將約100μl(8,000細胞)加到平底微量培養(yǎng)孔(Costar 3596)中并在37℃，5％CO2加濕培養(yǎng)箱中保溫48小時，使得細胞在轉化后貼壁并平衡。在測定培養(yǎng)基中制備一系列稀釋的藥物或作為稀釋對照的PMSO，并取50μl制成一式三份的微量培養(yǎng)物，隨后加入50μl測定培養(yǎng)基以使最終體積為200μl。在37℃時，在5％CO2加濕培養(yǎng)箱中再進行48小時后，將微量培養(yǎng)物用含氚的胸苷(1μCi/孔)脈沖4小時。經(jīng)-70℃冷凍24小時，隨后通過使用Skatron Semiautomatic細胞收集儀使微量培養(yǎng)物復蘇并收集而將培養(yǎng)終止。使用Wallac BetaPlace β-計數(shù)器，通過液體閃爍法將樣品進行計數(shù)。DMBA誘發(fā)的乳腺腫瘤的抑制在從Harlan J，Indianapolis，Indiana購買的雌性Sprague-Dawley鼠中產(chǎn)生雌激素依賴性乳腺腫瘤。在成活約55天時，將鼠給予單一口服形式的20mg 7，12-二甲基苯并蒽(DMBA)。在給DMBA約6周后，每間隔一周觸摸乳腺以檢查腫瘤的外觀。每當一個或多個腫瘤出現(xiàn)，用一種米制卡尺測量每個腫瘤的最長和最短的直徑，記錄測量值，并選擇該動物做實驗。在治療組和對照組中做一種使不同大小的腫瘤均勻分布的嘗試，使得在試驗組之間所測定的平均大小的腫瘤分布相當。對于每次實驗來說，對照組和試驗組都有5至9只動物。
將溶于2％阿拉伯膠的通式I的化合物通過腹膜內(nèi)注射進行給藥或以口服形式給藥。將口服給藥的化合物溶于或懸浮于0.2ml的玉米油中。對于每次治療(包括用阿拉伯膠和玉米油的對照組的治療)來說，對每只試驗動物每天給藥一次。在測量初期的腫瘤并選擇試驗動物之后，通過上述方法每周測量一次腫瘤。動物的治療和測量持續(xù)3至5周，此時測定腫瘤的最終面積。對于每個化合物和對照組的治療來說，測定平均腫瘤面積的改變。子宮纖維變性的試驗過程試驗1對3個至20個患有子宮纖維變性的婦女給予本發(fā)明的化合物。化合物的給藥量是0.1至1000mg/天，且給藥期是3個月。
在給藥期間并在中斷給藥后達3個月時觀察這些婦女，以檢驗藥物對子宮纖維變性的作用。試驗2除了給藥期是6個月外，使用與試驗1中相同的過程。試驗3除了給藥期是1年外，使用與試驗1中相同的過程。試驗4A.豚鼠中纖維瘤的誘發(fā)將長期的雌激素刺激用于誘發(fā)性成熟雌性豚鼠中的平滑肌瘤。通過注射給予動物雌二醇，每周3-5次，持續(xù)2-4個月或直到腫瘤產(chǎn)生。由本發(fā)明的化合物或載體組成的治療是每天給藥，持續(xù)3-16周，然后將動物處死并收集和分析子宮以檢查腫瘤的消退情況。B.將人體子宮纖維瘤組織植入去毛的小鼠中將來自人體平滑肌瘤的組織植入性成熟，去除生殖腺的雌性去毛小鼠的腹腔和/或子宮肌層中。加入外源的雌激素以誘發(fā)植入組織的生長。在有些情況中，植入前將收集的腫瘤細胞在試管內(nèi)培養(yǎng)。由本發(fā)明的化合物或載體組成的治療是每日通過灌胃進行給藥，時間持續(xù)3-16周，將植入物取出并測量以檢查它的生長或消退情況。在處死動物時，收集子宮以評價器官的情況。試驗5A.收集來自人體子宮纖維瘤的組織并將它們保存在試管中而作為初期未轉化的培養(yǎng)物。將手術得到的樣品壓過一種無菌篩或篩，或另外將它們剝離周圍組織，從而產(chǎn)生一種單一細胞懸浮液。將細胞維持在含有10％血清和抗菌素的培養(yǎng)基中。在有雌激素和沒有雌激素的情況下，測定生長速率。檢測細胞產(chǎn)生補體成分C3的能力和對生長因子和生長激素的反應。在用孕激素，GnRH，本發(fā)明的化合物和載體治療后，在試管中評價培養(yǎng)物的增殖反應。每周評價類固醇激素受體的水平以確定重要的細胞特性在試管中是否得到了保持。所應用的是來自5-25個病人的組織。
上述試驗中的至少一種中的活性表明本發(fā)明的化合物具有治療子宮纖維變性的潛力。子宮內(nèi)膜異位試驗過程在試驗1和2中，可以檢查將本發(fā)明的化合物給藥14天和21天后對植入的子宮內(nèi)膜組織生長的影響。試驗1將12至30只成熟CD血緣的雌性鼠用作試驗動物。將它們分成數(shù)量相等的三組。監(jiān)測所有動物的發(fā)情周期。在發(fā)情前期的那天，對每只雌性鼠進行手術。將每組中的雌性鼠切除左側的子宮角質(zhì)，將這些子宮角質(zhì)切成小方片，并將這些小方片松散地縫在各種與腸系膜血流鄰近的位置上。此外，將第2組中的雌性鼠的卵巢切除。
在手術后的那天，將第1和第2組中的動物給予腹膜內(nèi)注射水，持續(xù)14天，而將第3組中的動物給予腹膜內(nèi)注射每千克體重1.0mg本發(fā)明的化合物，持續(xù)相同的時間。治療14天后，處死每只雌性鼠，如果能應用，將子宮內(nèi)膜移植物，腎上腺，殘留的子宮和卵巢切除并將它們用于組織學檢查。將卵巢和腎上腺稱重。試驗2將12至30只成熟的CD血緣的雌性鼠用作試驗動物。將它們分成等數(shù)量的兩組。監(jiān)測所有動物的發(fā)情周期。在發(fā)情前期的那天，將每只雌性鼠進行手術。將每組中的雌性鼠的左側的子宮角質(zhì)切除，切成小方片，并將這些小方片松散地縫在各種與腸系膜血流相鄰的位置上。
手術后約50天，將配給第1組中的動物給予腹膜內(nèi)注射水，持續(xù)21天，而將第2組中的動物給予腹膜內(nèi)注射每千克體重1.0mg本發(fā)明的化合物，持續(xù)相同的時間。在治療21天后，處死每只雌性鼠并將子宮內(nèi)膜移植物和腎上腺切除和稱重。測定植入物的生長狀況。監(jiān)測發(fā)情周期。試驗3A.子宮內(nèi)膜異位的手術誘發(fā)將子宮內(nèi)膜組織的自體移植物用于誘發(fā)鼠和/或家兔的子宮內(nèi)膜異位。將生殖成熟的雌性動物進行雙側卵巢切除術，并從外部給予它們雌激素以產(chǎn)生一種特異性和恒定水平的激素。將自體子宮內(nèi)膜組織植入5-150只動物的腹膜內(nèi)并給予雌激素以誘發(fā)植入組織的生長。由本發(fā)明的化合物組成的治療方法是每日通過灌胃進行給藥，時間持續(xù)3-16周，并且將移植物切除并測量以檢查它們的生長或消退情況。在處死動物時，收集子宮的未受損的角質(zhì)以評價子宮內(nèi)膜的情況。B.將人體子宮內(nèi)膜組織植入去毛的小鼠中將來自人體子宮內(nèi)膜損害的組織植入性成熟的、去除生殖腺的雌性去毛小鼠的腹膜中。給予外源雌激素以誘發(fā)植入組織的生長。在有些情況中，植入前將收集的子宮內(nèi)膜細胞在試管內(nèi)進行培養(yǎng)。由本發(fā)明的化合物組成的治療方法是依據(jù)每天的給藥量對動物進行灌胃給藥，持續(xù)3-16周，并將移植物切除和測量以檢查它們的生長或消退情況。在處死動物時，收集子宮以評價未受損子宮內(nèi)膜的情況。試驗4A.收集來自人體子宮內(nèi)膜損害的組織并將它們保存在試管中而作為初期未轉化的培養(yǎng)物。將手術得到的樣品壓過一種無菌篩或篩，或另外將它們剝離周圍組織以產(chǎn)生一種單一細胞懸浮液。將細胞保存在含有10％的血清和抗菌素的培養(yǎng)基中。在有雌激素和沒有雌激素的情況下測定生長速率。測定細胞產(chǎn)生補體成分C3的能力和它們對生長因子和生長激素的反應。在用孕激素，GnRH，本發(fā)明的化合物和載體進行治療后，在試管內(nèi)評價培養(yǎng)物的增殖反應。每周評價類固醇激素受體的水平，從而確定重要的細胞特性是否在試管中得到了保存。所應用的是來自5-25個病人的組織。
上述測定中任何一種的活性表明本發(fā)明的化合物用于治療子宮內(nèi)膜異位。抑制主動脈平滑肌細胞增生/再狹窄的試驗過程本發(fā)明的化合物有能力抑制主動脈平滑肌細胞的增生。這一結果可以通過使用所培養(yǎng)的來源于家兔主動脈的平滑肌細胞，通過測定DNA合成而確定的增生來證明。通過如Ross在《細胞生物學雜志》(J.of CellBio)50172(1971)中所述的移植法獲得細胞。將細胞涂在96孔的微量滴定平板中5天。培養(yǎng)物開始融合而生長受到抑制。然后將細胞轉至含有0.5-2％的血小板的不良血漿，2mM L-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100mg/ml鏈霉素，1mC/ml3H-胸苷，20ng/ml血小板衍生生長因子和可變濃度的本發(fā)明化合物的Dulbecco改進的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中。在二甲基亞砜中制備化合物的儲備溶液，然后在上述測定培養(yǎng)基中將該溶液稀釋至適當?shù)臐舛?0.01-30mM)。在37℃時，將細胞在5％CO2/95％空氣中保溫24小時。在24小時結束時，將細胞用甲醇固定。然后通過如Bonin等在《細胞實驗研究》(Exp.CellRes.)181475-482(1989)中所述的閃爍計數(shù)法來測定DNA中結合的3H-胸苷。
用本發(fā)明的化合物抑制主動脈平滑肌細胞增生這一事實通過測定所述化合物對成指數(shù)規(guī)律生長的細胞的作用而進一步得到了證實。將來自家兔主動脈的平滑肌細胞接種在DMEM中的12孔的組織培養(yǎng)平板上，其中DMEM含有10％的胎牛血清，2mM的L-谷氨酰胺，100U/ml的青霉素和100mg/ml的鏈霉素。24小時后，細胞被吸附，用含有10％血清，2mM L-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100mg/ml鏈霉素和所需濃度的化合物的DMEM來替代上述培養(yǎng)基。使細胞生長4天。將細胞用胰蛋白酶處理，通過使用一種2M-Coulter計數(shù)器進行計數(shù)來測定每個培養(yǎng)物中的細胞數(shù)。
上述試驗中的活性表明本發(fā)明的化合物有治療再狹窄的潛力。
本發(fā)明還提供了緩解婦女絕經(jīng)后綜合征的方法，該方法包括使用通式I化合物的上述方法并進一步包括給予婦女有效量的雌激素或孕激素。因為病人會服用每種有用的藥劑，而本發(fā)明的化合物可抑制雌激素和孕激素的不需要的副作用，所以上述這些治療方法特別適用于治療骨質(zhì)疏松和降低血清膽固醇。上述任何一種絕經(jīng)后試驗中這些組合治療方法的活性表明這些組合的治療方法適用于緩解婦女絕經(jīng)后綜合征的癥狀。
各種形式的雌激素和孕激素是市售可得的。以雌激素為主的藥劑包括，例如，乙炔基雌激素(0.01-0.03mg/天)，乙炔雌二醇甲酯(0.05-0.15mg/天)，和諸如Premarin(Wyeth-Ayerst；0.3-2.5mg/天)這樣的共軛雌激素。以孕激素為主的藥劑包括，例如，諸如Provera(Upjohn；2.5-10mg/天)這樣的甲羥孕酮，乙炔諾酮(1.0-10.0mg/天)，和炔諾酮(0.5-2.0mg/天)。優(yōu)選以雌激素為主的化合物是Premarin，且優(yōu)選以孕激素為主的藥劑是乙炔諾酮和炔諾酮。
每種以雌激素和孕激素為主藥劑的給藥方法與本領域公知的給藥方法一致。對于大多數(shù)本發(fā)明的方法來說，將通式I的化合物連續(xù)給藥，每天1至3次。然而，周期療法特別適用于治療子宮內(nèi)膜異位或在疾病的疼痛發(fā)作期間緊急使用。在再狹窄的情況中，在進行諸如血管成形術這樣的醫(yī)療過程后，這種療法限于短期(1-6個月)間隔的治療。
作為本文所使用的，術語“有效量”指的是能夠緩解本文所述各種病理狀態(tài)癥狀的本發(fā)明化合物的量。當然，通過圍繞著某種情況的特殊情況來確定本發(fā)明所給予的化合物的特殊劑量，其中所述的某種情況包括，例如，所給予的化合物，給藥途徑，病人的情況以及所治療的病理狀態(tài)。一般的每日劑量包括一種非中毒劑量標準，為約5mg/天至約600mg/天的本發(fā)明的化合物。優(yōu)選的每日劑量一般是約15mg/天至約80mg/天。
本發(fā)明的化合物可以通過包括口服，直腸，經(jīng)皮，皮下，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)和鼻內(nèi)在內(nèi)的各種途徑進行給藥。給藥前，優(yōu)選將這些化合物進行配制，化合物的選擇由主治醫(yī)師來決定。因此，本發(fā)明的另一個方面是一種包括有效量通式I的化合物，或其藥物上可接受的鹽和藥物上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑的藥物組合物，該藥物組合物可以含有有效量的雌激素和孕激素。
這類配方中包括的總活性成分按配方的重量計為0.1％至99.9％。所謂“藥學上可接受”指的是載體，稀釋劑，賦形劑和鹽必須適合于配方的其它成分，而對其受體無害。
通過本領域公知的步驟，使用眾所周知且易得的成分，可以制備本發(fā)明的藥物制劑。例如，可以將通式I的化合物(含有或不含雌激素或孕激素的化合物)與常用的賦形劑，稀釋劑或載體進行配制，并制成片劑，膠囊，懸浮液，粉劑等。適合于這類制劑的賦形劑，稀釋劑和載體的實例包括下列物質(zhì)諸如淀粉，糖，甘露糖醇和硅酸衍生物這樣的填充劑和補充劑；諸如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物，藻酸鹽，明膠和聚乙烯吡咯烷酮這樣的粘合劑；諸如甘油這樣的濕潤劑；諸如碳酸鈣和碳酸氫鈉這樣的崩解劑，諸如石蠟這樣的緩溶劑；諸如季銨化合物這樣的回吸促進劑；諸如鯨蠟醇，硬脂酸單甘油酯這樣的表面活性劑；諸如高嶺土和膨潤土這樣的吸附載體；和諸如滑石，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇這樣的潤滑劑。
還可以將這些化合物配制成易于口服給藥的酏劑或溶液或將它們配成適于非腸道給藥的溶液，所述的非腸道給藥例如，通過肌內(nèi)，皮下或靜脈內(nèi)的途徑給藥。此外，這些化合物很適于將配方制成可持續(xù)釋放的劑型等。這樣構成的制劑可使它們能夠在一般時間內(nèi)僅在或優(yōu)選在特殊的生理部位釋放活性成分。例如，可以由聚合物或蠟制成包衣層，包裹物和保護基質(zhì)。
一般來說，將通式I的化合物單獨或與本發(fā)明的藥劑一起以一種合適的配方進行給藥。下面的配方實例僅用于說明而不用來限定本發(fā)明的范圍。
制劑下列制劑中，“活性成分”指的是通式I的化合物或其鹽或其溶劑化物。制劑1膠囊用下列成分制備硬膠囊成分量(mg/膠囊)活性成分 0.1-1000淀粉，NF 0-650可流動的淀粉粉末 0-650350厘沲的硅氧烷流體 0-15上述配方可以根據(jù)所提供的適當變化而改變。
用下列成分制備片劑制劑
制劑2片劑成分 量(mg/片)活性成分 2.5-1000微晶纖維素 200-650霧狀二氧化硅 10-650硬脂酸 5-15將上述成分混合并壓成片劑。
另一方面，如下所述制成每片含2.5-1000mg活性成分的片劑制劑3片劑成分 量(mg/片)活性成分 25-1000淀粉 45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(為10％的水溶液)4羧甲基纖維素鈉4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1將活性成分，淀粉和纖維素過45號篩目的美國篩并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與得到的后又通過14號篩目美國篩的粉末混合。在50℃-60℃時，將這樣產(chǎn)生的顆粒干燥并將它們過18號篩目的美國篩。將預先通過60號美國篩的羧甲基淀粉鈉，硬脂酸鎂和滑石加入到上述顆粒中，在混合后，將它們在一種壓片機上壓成片劑。
如下所述制成每支含有0.1-1000mg藥物/5ml劑量的懸浮液
制劑4懸浮液成分 量(mg/5ml)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液 0.10ml食用香料 適量色素 適量凈化水加至 5ml將藥物過45號篩目的美國篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合以形成一種均勻的漿糊。將苯甲酸溶液，食用香料和色素用一定量的水稀釋并通過攪拌將它們加入上述漿糊。然后將足量的水加入以產(chǎn)生所需的體積。
制備含有下列成分的氣霧劑溶液制劑5氣霧劑成分量(按重量計的％)活性成分 0.25乙醇 25.75拋射劑22(氯二氟代甲烷)70.00將活性成分與乙醇混合，并將混合物加入到一部分的拋射劑22中，將它們冷卻至30℃并轉至一種裝填裝置中。然后，將所需的量裝入一種不銹鋼容器并用剩余的拋射劑進行稀釋。將閥門部件裝在容器上。
如下所述制備栓劑制劑6栓劑成分 量(mg/栓劑)活性成分250飽和脂肪酸甘油酯2,000將活性成分過60號篩目的美國篩并懸浮在預先用必需的最低溫度加熱熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物傾入一種標稱2g容量的栓劑模型中并冷卻。
如下所述制備靜脈內(nèi)給藥的配方制劑7靜脈給藥溶液成分 量活性成分 50mg等滲鹽水 1,000ml將上述成分的溶液以每分鐘約1ml的速率從靜脈內(nèi)對病人進行給藥。
制劑8混合膠囊I成分 量(mg/膠囊)活性成分 50共軛雌激素(Premarin) 1微晶纖維素pH101(Avicel pH101)50淀粉1500 117.50硅油 2吐溫80 0.50亞微觀硅石(Cab-O-Sil)0.25制劑9混合膠囊II成分 量(mg/膠囊)活性成分 50異炔諾酮 5微晶纖維素pH101(Avicel pH101)82.50淀粉1500 90硅油 2吐溫80 0.50
制劑10混合片劑成分量(mg/膠囊)活性成分 50共軛雌激素(Premarin) 1玉米淀粉NF 50聚維酮K29-32(Povidone K29-32) 6微晶纖維素pH101(Avicel pH101 41.50微晶纖維素pH102(Avicel pH102 136.50交聯(lián)聚維酮(Crospovidone) 2.50硬脂酸鎂 0.50亞微觀硅石(Cab-O-Sil) 0.50
權利要求
1.一種通式I的化合物及其藥學上可接受的鹽，
其中R1是H，OH，鹵素，OCO(C1-C6的烷基)，OCO(芳香基)，OSO2(C4-C6的烷基)，OCOO(C1-C6的烷基)，OCOO(芳香基)，OCONH(C1-C6的烷基)或OCON(C1-C6的烷基)2；R2是芳香基，C1-C6的烷基，C3-C6的環(huán)烷基，或4-環(huán)己醇；R3是O(CH2)2或O(CH2)3；R4和R5可以是CO(CH2)2CH3，CO(CH2)3CH3，C1-C6的烷基，或R4和R5與連接它們的氮結合形成哌啶，嗎啉，吡咯烷，3-甲基吡咯烷，3，3-二甲基吡咯烷，3，4-二甲基吡咯烷，吖庚因，或2-甲基哌啶；R6是
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，
(C1-C5的烷基)，
(芳香基)，
(C1-C5的烷基)，
(C2-C5的鏈烯基)，
芳香基。
2.一種根據(jù)權利要求1的化合物，其中R3是-O(CH2)2。
3.一種根據(jù)權利要求2的化合物，其中R4和R5形成哌啶子基。
4.一種根據(jù)權利要求3的化合物，其中R1是-OH且R2是4-羥苯基。
5.一種根據(jù)權利要求4的化合物，其中R6是
甲基，
＝CH2，
苯基，
苯基或
6.一種藥物組合物，包括權利要求1的一種化合物或一種其藥學上可接受的鹽并可以包括一種有效量的雌激素或孕激素以及一種藥學上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑。
7.一種用于緩解絕經(jīng)后綜合征癥狀的方法，包括對需要這類治療的婦女給予有效量的一種權利要求1的化合物或一種其藥學上可接受的鹽。
8.一種根據(jù)權利要求7的方法，其中絕經(jīng)后綜合征的病理狀態(tài)是骨質(zhì)疏松。
9.一種根據(jù)權利要求7的方法，其中絕經(jīng)后綜合征的病理狀態(tài)與心血管疾病相關。
10.一種根據(jù)權利要求9的方法，其中心血管疾病是高血脂。
11.一種根據(jù)權利要求7的方法，其中所述的絕經(jīng)后綜合征的病理狀態(tài)是雌激素依賴性癌癥。
12.一種用于抑制子宮纖維瘤疾病的方法，包括對需要這類治療的婦女給予有效量的一種權利要求1的化合物或一種其藥學上可接受的鹽。
13.一種用于抑制子宮內(nèi)膜異位的方法，包括對需要這類治療的婦女給予有效量的一種權利要求1的化合物或一種其藥學上可接受的鹽。
14.一種用于抑制主動脈平滑肌細胞增生的方法，包括對需要這類治療的人給予有效量的一種權利要求1的化合物或一種其藥學上可接受的鹽。
15.一種用于抑制再狹窄的方法，包括對需要這類治療的人給予有效量的一種權利要求1的化合物或一種其藥學上可接受的鹽。
16.一種緩解用于絕經(jīng)后綜合征癥狀的方法，包括權利要求7的方法并進一步包括對所述的婦女給予一種有效量的雌激素。
17.一種用于緩解絕經(jīng)后綜合征癥狀的方法，包括權利要求7的方法并進一步包括對所述的婦女給予一種有效量的孕激素。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種通式(Ⅰ)的化合物及其藥學上可接受的鹽,其中R
文檔編號C07C233/05GK1177923SQ96192457
公開日1998年4月1日 申請日期1996年3月7日 優(yōu)先權日1996年3月7日
發(fā)明者H·U·布賴恩特, J·A·道奇 申請人:伊萊利利公司