專利名稱：豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肝素鈉生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝。
背景技術(shù)：
肝素鈉又稱肝素，是一種含有硫酸基的酸性粘多糖類天然抗凝血物質(zhì)。肝素鈉為白色或類白色粉末，無臭無味，有引濕性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑。肝素鈉廣泛存在于哺乳動物肝、肺、腸黏膜中，多與蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合體存在。酶解蛋白可分離肝素鈉，肝素鈉是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在PH8-9時，帶負(fù)電荷，可與陰離子交換劑進(jìn)行離子交換，進(jìn)行粗分離，多糖液在高濃度乙醇中沉淀進(jìn)行精純。肝素鈉是血液化學(xué)成分測定中最好的抗凝劑。肝素鈉是一種含硫酸基團(tuán)的黏多糖，分子量為1.5萬，其抗凝機(jī)制是與抗凝酶II一起，在低濃度能抑制因子IX a、VDI和PF3之間的作用，并能加強(qiáng)抗凝血酶III滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成；還有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X的作用。傳統(tǒng)的肝素鈉的酶解生產(chǎn)方法往往以豬小腸的腸粘膜為原料提取，腸衣往往棄做它用，存在的缺陷是:豬小腸無法有效利用，生產(chǎn)周期長，能耗大，收率低，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品需2800-3000根豬小腸的粘膜，產(chǎn)品純度低，肝素鈉的效價至多為80U/mg，并產(chǎn)生大量的腸渣和廢水，污染環(huán)境。CN1308088A的發(fā)明公開了一種利用生物發(fā)酵工藝生產(chǎn)肝素鈉的方法。該方法采用2709蛋白酶作為催化劑，D204強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂作為離子交換樹脂，并采用150-180目多層布篩進(jìn)行過濾。該方法存在如下缺陷:產(chǎn)品收率、純度也較低，并產(chǎn)生大量的腸渣和廢水，污染環(huán)境；豬小腸取腸粘膜后剩余的腸衣、腸皮無法有效利用來獲取肝素鈉，豬小腸的利用效率低
發(fā)明內(nèi)容
`本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，能對豬小腸進(jìn)行綜合利用，提高了豬小腸的利用率，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品收率、純度較高，減少了腸渣和廢水的排放，利于環(huán)保。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，所述的工藝步驟如下:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)中，獲得豬小腸粘膜漿液待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨用于提取肝素鈉。腸皮提取肝素鈉的工藝采用發(fā)明人在先申請的公告號CN101891842A發(fā)明專利公開的方法進(jìn)行。(2)腸衣泡把:將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小時，取出浙干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小時,第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液,二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時，每IOOOL浸泡液均浸泡160±5把腸衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液。第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液的體積相同。豬小腸經(jīng)過刮腸機(jī)處理后，得到的腸衣上仍會殘留小部分腸粘膜(無法提取肝素鈉造成浪費)，且腸衣中也含有部分肝素鈉，以往直接將腸衣經(jīng)過簡單腌制后就當(dāng)制作香腸的原料使用，這樣往往造成腸衣無法有效利用，降低了豬小腸獲得肝素鈉的收率。本發(fā)明通過第一次浸泡，可將大部分在腸衣中存在的肝素鈉提取出(包括腸粘膜中的)，第一次浸泡的浸出液用于下一步酶解時調(diào)節(jié)豬小腸粘膜漿液鹽度的原料，無需外加氯化鈉溶液，節(jié)約氯化鈉溶液的用量，第一次浸泡的浸出液中也含有部分肝素鈉，能與酶解獲得的肝素鈉匯合，無需各自提純操作。這樣節(jié)省步驟，第一次浸泡的浸出液若有多余可暫時儲存用于下次提取。第一次浸泡后對腸衣把腌制處理，這樣加工后腸衣可以滿足做香腸的需求。再對腸衣進(jìn)行二次浸泡，能把腸衣中殘存的肝素鈉溶出，增加肝素鈉的收率。腌制處理后的腸衣把含有大量的鹽分，因此只需控制二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°，加入腌制處理后的腸衣把浸泡，二次浸泡的浸泡液即可達(dá)到飽和鹽水的程度，這樣鹽能多次利用，節(jié)約了鹽的用量。

二次浸泡后的浸出液(即含有小部分肝素鈉的飽和鹽水)作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液，通過這樣操作，二次浸泡的原料即浸泡液還能再次利用，無需新配飽和氯化鈉溶液作為第一次浸泡的浸泡液，大大節(jié)約了鹽的用量。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。(3)酶解:將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1: 2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5 ;接著按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53±3°C，鹽度4.2±0.2°，pH 7.0±0.5保持3±0.5小時；最后升溫至85_88°C，保持20_25min得酶解液，過濾去殘渣。本步驟最后酶解液過濾去殘渣時，往往采用布袋過濾去殘渣，這樣效率往往較低，發(fā)明人通過實踐探索，發(fā)明了采用振動篩過濾去殘渣的方式，大大提高了過濾速度，提高了生產(chǎn)效率，是代替布袋過濾的好方法。(4)吸 附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至57±3°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制pH 7.0-7.5，按每1000L酶解液加3_8kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附6-8小時后，收集樹脂。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液，攪拌至少I小時進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.3-1.7 (w/V)?？刂坡然c溶液溫度在55-60°C，便于將樹脂表面油脂類的附著物清洗干凈，便于洗脫。(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時，樹月旨:氯化鈉溶液=1:1-1.4 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:0.8-1.2 (w/v);合并兩次收集的洗脫液?？刂苾纱蜗疵撓疵摃r的氯化鈉溶液溫度在55_60°C，便于將油脂狀的肝素鈉從樹脂上洗脫下來，增加得率。(7)沉淀:將步驟(6)收集到的洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時以上，收集沉淀物。(8)干燥:步驟(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精進(jìn)行脫水1-3小時，濾干后做烘干處理即得肝素鈉產(chǎn)品。本發(fā)明中的w/v為質(zhì)量體積比具體為:kg:L。本發(fā)明將腸衣與腸粘膜聯(lián)合制取肝素鈉，提高了豬小腸的利用率，增加了豬小腸的附加值，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，產(chǎn)品純度高，肝素鈉的效價> 110U/mg。同時，剩余的腸皮也能得到有效利用。作為優(yōu)選，步驟(2)中腸衣繞把具體為:將腸衣按1±0.2米的長度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100±1米腸衣合成一把腸衣把；腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動。將腸衣繞把，方便對腸衣的處理，形成的腸衣把采用吊掛的方式在浸泡池中浸泡。兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動，使得在腸衣中殘留的肝素鈉充分洗出，增加了浸泡液中肝素鈉的含量，有效提高肝素鈉的收率。作為優(yōu)選，步驟(2)中腌制處理具體為:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1-1.2kg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時以上，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5-0.6kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12-14小時。本發(fā)明有別于傳統(tǒng)的簡單腌制處理，采用兩步法腌制處理，先第一步抹鹽，滿足腸衣做香腸的要求；再第二步復(fù)鹽，可以保證腸衣的色澤好，韌性更好，提高了作為香腸加工原料的品質(zhì)，增加了經(jīng)濟(jì)效益。作為優(yōu)選，步驟(3)處理得到的酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20-40min后，再進(jìn)入下一步的吸附。酶解后得到乳濁狀液體，濾去殘渣后進(jìn)入離心機(jī)，啟動離心機(jī)，酶解液在離心力作用下，使乳濁狀酶解液進(jìn)入離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓后，固體顆粒或密度較大的液體(含蛋白)向轉(zhuǎn)鼓壁沉降，形成沉洛，密度較小的肝素鈉分解液向轉(zhuǎn)鼓中心方向聚集，流至溢流口排出，成為分離液。沉渣通過蝸桿傳動把沉渣從排渣口擠壓出來，分離液通過離心機(jī)從出料口排出，輸送到吸附罐內(nèi)進(jìn)行下一步樹脂吸附工序。
增加本步驟后在分解工段中直接清除了部分雜質(zhì)，使吸附工序中的樹脂能充分吸附肝素鈉，提高樹脂吸附有效性。在分解工序中直接進(jìn)行雜質(zhì)的分離，提高最終產(chǎn)品的純度。控制離心速度和時間，保證離心分離的效果。作為優(yōu)選，將步驟(4)收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在57±3°C，pH 7.0-7.5，按每1000L料液加2_3kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附6-8小時后，收集樹脂，然后與步驟(4)收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。
本步驟將樹脂吸附后的料液重新進(jìn)行吸附，可以提高肝素鈉的收率，減少浪費，同時能減少廢液中蛋白的含量，利于廢水處理。作為優(yōu)選，所述羅門哈斯FPA98CL型樹脂活化處理后再使用，活化處理為:樹脂用50-60°C溫水浸泡20小時以上后用清水沖洗干凈并浙干,再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計；活化后的樹脂在4000-5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-30min,再用于吸附。將活化處理后待使用的樹脂通過離心機(jī)進(jìn)料口進(jìn)入離心機(jī)。啟動離心機(jī)，樹脂在4000-5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速作用下，樹脂進(jìn)入離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓后，固體顆粒樹脂向轉(zhuǎn)鼓壁沉降，粘附在鼓壁內(nèi)。離心作用甩出的液體或密度較小的物質(zhì)向轉(zhuǎn)鼓中心方向聚集，流至溢流口排出，成為廢物。收集留在鼓壁的樹脂，準(zhǔn)備用于吸附工序。本步驟樹脂孔內(nèi)水分得到充分甩干，以增加樹脂的吸附空間，提高樹脂的吸附能力。作為優(yōu)選，步驟(6)收集的洗脫液進(jìn)入超濾機(jī)超濾后再進(jìn)入下一步沉淀，超濾機(jī)的超濾膜孔徑在0.45 μ m-0.6 μ m ;或步驟(6)收集的洗脫液在8000-10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-20min后，再進(jìn)入下一步沉淀。經(jīng)過超濾，可將洗脫液中的廢水和雜質(zhì)排除，有效提高產(chǎn)品的純度，并能減少下一步酒沉工藝中的酒精使用量，節(jié)約成本。把洗脫液通過離心機(jī)進(jìn)料口進(jìn)入離心機(jī)，啟動離心機(jī)，洗脫液在分解液在離心力(8000-10000轉(zhuǎn)/分)作用下，使乳濁狀洗脫液進(jìn)入離心機(jī)轉(zhuǎn)鼓后，固體顆?；蛎芏容^大的液體(含蛋白)向轉(zhuǎn)鼓壁沉降，形成沉渣，密度較小的肝素鈉洗脫液向轉(zhuǎn)鼓中心方向聚集，流至溢流口排出，成為分離液。沉渣通過蝸桿傳動把沉渣從排渣口擠壓出來，分離液通過離心機(jī)從出料口排出，輸送到沉淀罐內(nèi)進(jìn)行下一步酒精沉淀工序。本步驟增加對洗脫液離心的工序，從而在洗脫工序中直接去除部分雜質(zhì)和蛋白，從而提高最終產(chǎn)品的純度，并能減少下一步酒沉工藝中的酒精使用量，節(jié)約成本。

作為優(yōu)選，步驟(7)收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9-10，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.5-0.7，靜置沉淀8-12小時后，收集沉淀，然后與步驟(7)得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥步驟。本步驟對第一次酒沉后的上清液再次進(jìn)行酒沉，可有效提高肝素鈉的收率，減少浪費，利于廢水處理。更為優(yōu)選，將上述合并后的沉淀物進(jìn)入下一步干燥前進(jìn)行重溶再沉淀:將沉淀物:水=1:8-10的重量比混合，充分溶解形成沉淀物溶液，向沉淀物溶液中加入腸衣專用鹽，攪拌均勻，腸衣專用鹽的用量為沉淀物溶液質(zhì)量的1-3%;再加入酒精度85±5°的酒精再次沉淀，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時以上，收集沉淀物，再進(jìn)入下一步干燥。通過增加了重溶再沉淀步驟，能有效解決高濃度的酒精和洗脫液容易形成鹽結(jié)晶混在肝素鈉產(chǎn)品中導(dǎo)致產(chǎn)品純度較低的問題。作為優(yōu)選，步驟(8)烘干處理的溫度為60_80°C。作為優(yōu)選，收集步驟(3)酶解液過濾獲得的殘渣，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘渣重新加入酶解罐中，殘渣與鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5-6，控制料液的pH在8.5±0.5，接著按每IOOOL料液加1.0-1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在55 ± I °C，保溫6-7小時；最后升溫至88-90°C，保持20-25min，再靜置20_30min后得酶解液，酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20-40min后,進(jìn)入下一步的吸附?，F(xiàn)有工藝中，酶解剩余的殘渣即腸渣往往棄之不用，這樣較浪費且增加了環(huán)境的負(fù)擔(dān)。而本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過多年實踐探索，發(fā)明了一條有效再利用殘渣的工藝步驟，通過對殘渣的再次酶解處理，能更進(jìn)一步分解殘渣，提取肝素鈉，增加了肝素鈉的收率，減少了廢物排放，利于環(huán)保。本發(fā)明的有益效果是:
1、本發(fā)明將腸衣與腸粘膜聯(lián)合制取肝素鈉，提高了豬小腸的利用率，增加了豬小腸的附加值，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品只需1300-1400根左右豬小腸，產(chǎn)品純度高，肝素鈉的效價> 110U/mg。同時，剩余的腸皮也能得到有效利用。2、殘渣的再次酶解提取，能更進(jìn)一步分解殘渣，提取肝素鈉，增加了肝素鈉的收率，減少了廢物排放，利于環(huán)保。
具體實施例方式下面通過具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。本發(fā)明中，若非特指，所采用的原料和設(shè)備等均可從市場購得或是本領(lǐng)域常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。樹脂活化處理:
將新的羅門哈斯FPA98CL型樹脂(市售進(jìn)口樹脂，經(jīng)銷商北京博賽斯生物技術(shù)有限公司)用50°C溫水浸泡20小時后用清水沖洗干凈并浙干，再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液PH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計。研究表明，樹脂活化處理中采用的溫水溫度在50-60°C之間，浸泡時間在16-24小時之間，對樹脂的活化處理效果是等同的，在此不做——贅述?；罨蟮臉渲?000-5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-30min，再用于吸附。
實施例1:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)(華運(yùn)牌280B型刮腸機(jī))中，獲得豬小腸粘膜漿液(豬小腸粘膜:水=1: 2.5的重量比的混合物)待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨用于提取肝素鈉。(2)腸衣泡把:將腸衣按I ±0.2米的長度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100± I米腸衣合成一把腸衣把，接著將腸衣把放入飽和氯化鈉溶液中第一次浸泡4小時，取出浙干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽Ikg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將 腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.6kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12小時；之后，將腸衣把放入鹽度15° -18°的氯化鈉溶液中二次浸泡6小時,第一次浸泡及二次浸泡時,每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把，第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液體積相等，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動。(3)酶解:將2000L豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8左右；接著按每1000L料液加0.8kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在56°C，鹽度4.2±0.2° ,pH 6.5保持2.5小時；最后升溫至85°C，保持25min得酶解液，過濾去殘渣；然后酶解液在6000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理40min后，再進(jìn)入下一步的吸附。收集酶解液過濾獲得的殘渣，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘渣重新加入酶解罐中，殘渣與鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5，控制料液的pH在8左右，接著按 每1000L料液加1.0kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在56°C，保溫6小時；最后升溫至88°C，保持25min，再靜置30min后得酶解液，酶解液在6000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理40min后，進(jìn)入下一步的吸附。(4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至54°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制PH 7.0，按每1000L酶解液加3kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附8小時后，收集樹脂；將收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在54°C, pH 7.0，按每1000L料液加2kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附8小時后，收集樹脂，然后與吸附酶解液收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度55°C的氯化鈉溶液，攪拌3小時進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.3 (w/v)；
(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55°C的氯化鈉溶液中攪拌5小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:1 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55°C的氯化鈉溶液中攪拌5小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:0.8 (w/v);合并兩次收集的洗脫液；
收集的洗脫液進(jìn)入超濾機(jī)超濾后再進(jìn)入下一步沉淀，超濾機(jī)的超濾膜孔徑在
0.45 μ m-0.6 μ m。(7)沉淀:將洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度80°的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到45°為準(zhǔn)，靜置沉淀20小時，收集沉淀物；收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.5，靜置沉淀12小時后，收集沉淀，然后與洗脫液沉淀得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥。(8)干燥:向沉淀物加入酒精度85°的酒精進(jìn)行脫水3小時，濾干后60°C烘干即得肝素鈉產(chǎn)品。經(jīng)檢測，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，肝素鈉的效價>110U/mg。
實施例2:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)(華運(yùn)牌280B型刮腸機(jī))中，獲得豬小腸粘膜漿液(豬小腸粘膜:水=1: 4的重量比的混合物)待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨用于提取肝素鈉。(2)腸衣泡把:將腸衣按1±0.2米的長度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100± I米腸衣合成一把腸衣把，接著將腸衣把放入飽和氯化鈉溶液中第一次浸泡5小時，取出浙干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1.2kg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12小時；之后，將腸衣把放入鹽度15° -18°的氯化鈉溶液中二次浸泡8小時，第一次浸泡及二次浸泡時，每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把,第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液體積相等,收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動。(3)酶解:將1000L豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在9左右；接著按每1000L料液加1.6kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在50°C，鹽度4.2±0.2。，pH 7.5保持3.5小時；最后升溫至88°C，保持20min得酶解液，過濾去殘渣；然后酶解液在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20min后，再進(jìn)入下一步的吸附。收集酶解液過濾獲得的殘渣，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘渣重新加入酶解罐中，殘渣與鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:6，控制料液的pH在9左右，接著按每1000L料液加1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在54°C，保溫7小時；最后升溫至90°C，保持20min，再靜置20min后得酶解液，酶解液在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn) 速下，離心處理20min后，進(jìn)入下一步的吸附。(4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至60°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制PH7.5，按每1000L酶解液加8kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附6小時后，收集樹脂；將收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在60°C，pH 7.5,按每1000L料液加3kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附6小時后，收集樹脂，然后與吸附酶解液收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度60°C的氯化鈉溶液,攪拌I小時進(jìn)行洗漆，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1: 1.7 (w/v)；
(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度60°C的氯化鈉溶液中攪拌3小時，樹脂:氯化鈉溶液=1: 1.4 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度60°C的氯化鈉溶液中攪拌3小時，樹脂:氯化鈉溶液=1: 1.2 (w/v);合并兩次收集的洗脫液；
收集的洗脫液在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20min后，再進(jìn)入下一步沉淀。(7)沉淀:將洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度90°的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時，收集沉淀物；收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為10，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.7，靜置沉淀8小時后，收集沉淀，然后與洗脫液沉淀得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥。(8)干燥:向沉淀物加入酒精度90°的酒精進(jìn)行脫水I小時，濾干后80°C烘干即得肝素鈉產(chǎn)品。經(jīng)檢測，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，肝素鈉的效價>110U/mg。
實施例3:
(O前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)(華運(yùn)牌280B型刮腸機(jī))中，獲得豬小腸粘膜漿液(豬小腸粘膜:水=1: 3的重量比的混合物)待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨用于提取肝素鈉。(2)腸衣泡把:將腸衣按I ±0.2米的長度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100± I米腸衣合成一把腸衣把，接著將腸衣把放入飽和氯化鈉溶液中第一次浸泡
4.5小時，取出浙干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1.1kg ;第一步抹鹽完成后腌制50小時，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制14小時；之后，將腸衣把放入鹽度15° -18°的氯化鈉溶液中二次浸泡7小時，第一次浸泡及二次浸泡時，每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把,第一次浸泡的浸泡液與二次浸泡的浸泡液體積相等,收集第一次浸泡的浸出液待用，收集 二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液。二次浸泡后剩余的腸衣可以作為加工香腸的原料出售。腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動。(3)酶解:將1500L豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5左右；接著按每1000L料液加1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53°C，鹽度4.2±0.2° ,pH 7.0左右保持3小時；最后升溫至86°C，保持22min得酶解液，過濾去殘渣；然后酶解液在7000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理30min后，再進(jìn)入下一步的吸附。收集酶解液過濾獲得的殘渣，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘渣重新加入酶解罐中，殘渣與鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5.5，控制料液的pH在8.5，接著按每1000L料液加1.1kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在55°C，保溫6.5小時；最后升溫至89°C，保持22min，再靜置25min后得酶解液，酶解液在7000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理30min后，進(jìn)入下一步的吸附。(4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至57°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制PH 7.0左右，按每1000L酶解液加5kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹月旨，攪拌吸附7小時后，收集樹脂；將收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在57°C，pH 7.0左右，按每1000L料液加2.5kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附7小時后，收集樹脂，然后與吸附酶解液收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。(5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度58°C的氯化鈉溶液，攪拌2小時進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.5 (w/v)；(6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度58°C的氯化鈉溶液中攪拌4小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.2 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度58°C的氯化鈉溶液中攪拌4小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:1 (w/v);合并兩次收集的洗脫液；
收集的洗脫液在10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理IOmin后，再進(jìn)入下一步沉淀。(7)沉淀:將洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85°的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到50°為準(zhǔn)，靜置沉淀18小時，收集沉淀物；收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.6，靜置沉淀10小時后，收集沉淀，然后與洗脫液沉淀得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥。作為優(yōu)選可將步驟(7)最后合并得到的沉淀物:水=1:8-10的重量比混合，充分溶解形成沉淀物溶液，向沉淀物溶液中加入腸衣專用鹽，攪拌均勻，腸衣專用鹽的用量為沉淀物溶液質(zhì)量的1-3%;再加入酒精度85±5°的酒精再次沉淀，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時以上，收集沉淀物，再進(jìn)入下一步干燥。通過增加了重溶再沉淀步驟，能有效解決高濃度的酒精和洗脫液容易形成鹽結(jié)晶混在肝素鈉產(chǎn)品中導(dǎo)致產(chǎn)品純度較低的問題。
(8)干燥:向沉淀物加入酒精度85°的酒精進(jìn)行脫水2小時，濾干后80°C烘干即得肝素鈉產(chǎn)品。經(jīng)檢測，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，肝素鈉的效價>110U/mg。以上所述的實施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。
權(quán)利要求
1.一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:所述的工藝步驟如下: (1)前處理:將豬小腸放入刮腸機(jī)中，獲得豬小腸粘膜漿液待用，剩余腸衣、腸皮，腸皮單獨用于提取肝素鈉； (2)腸衣泡把:將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小時，取出浙干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小時,第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液,二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時，每IOOOL浸泡液均浸泡160 ±5把腸衣把,收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液； (3)酶解:將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1:2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步驟(2)收集的第一次浸泡的浸出液調(diào)節(jié)酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的pH在8.5±0.5 ;接著按每1000L料液加1.2 + 0.4kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53±3°C，鹽度4.2±0.2°，pH 7.0±0.5保持3±0.5小時；最后升溫至85_88°C，保持20_25min得酶解液,過濾去殘渣； (4)吸附:將酶解液輸入吸附罐，降溫至57±3°C，加水調(diào)節(jié)鹽度至3.0±0.5°，控制pH7.0-7.5，按每1000L酶解液加3-8kg的樹脂量，向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂，攪拌吸附6-8小時后，收集樹脂； (5)洗滌:將收集的樹脂用水洗滌至pH為中性，再將樹脂放入鹽度4±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液，攪拌至少I小時進(jìn)行洗滌，其中，樹脂:氯化鈉溶液=1:1.3-1.7 (w/V); (6)洗脫:將步驟(5)洗滌后的樹脂倒入洗脫罐中進(jìn)行兩次洗脫，其中，第一次洗脫為:將樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:1-1.4 (w/v);第二次洗脫為:將第一次洗脫后的樹脂加入到鹽度為21 ±1°、溫度55-60°C的氯化鈉溶液中攪拌至少3小時，樹脂:氯化鈉溶液=1:0.8-1.2 (w/v);合并兩次收集的洗脫液； (7)沉淀:將步驟(6)收集到的洗脫液倒入沉淀罐中，攪拌條件下向沉淀罐中加入酒精度85±5°的酒精，酒精用量以實測沉淀罐中混合液的酒精度到45° -60°為準(zhǔn)，靜置沉淀15小時以上，收集沉淀物； (8)干燥:步驟(7)得到的沉淀物加入酒精度85°以上的酒精進(jìn)行脫水1-3小時，濾干后做烘干處理即得肝素鈉產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(2)中腸衣繞把具體為:將腸衣按I±0.2米的長度來回折疊，疊完后在中間捆扎形成腸衣把，每100 ± I米腸衣合成一把腸衣把；腸衣把兩次浸泡過程中，均用氣泵向浸泡液中充空氣使浸泡液上下翻滾流動。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(2)中腌制處理具體為:第一步抹鹽:將腸衣專用鹽均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽1-1.2kg ;第一步抹鹽完成后腌制48小時以上，接著進(jìn)行第二步復(fù)鹽:將腸衣專用鹽再次均勻涂抹在腸衣表面，腸衣專用鹽的用量為每I把腸衣把用鹽0.5-0.6kg ;第二步復(fù)鹽完成后腌制12-14小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(3)處理得到的酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20-40min后，再進(jìn)入下一步的吸附。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:將步驟(4)收集樹脂后剩余的料液重新輸送至吸附罐，控制溫度在57±3°C，pH 7.0-7.5，按每1000L料液加2-3kg的樹脂量向吸附罐內(nèi)加入羅門哈斯FPA98CL型樹脂再次吸附6_8小時后，收集樹月旨，然后與步驟(4)收集的樹脂合并后，進(jìn)入下一步的洗滌步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:所述羅門哈斯FPA98CL型樹脂活化處理后再使用，活化處理為:樹脂用50-60°C溫水浸泡20小時以上后用清水沖洗干凈并浙干，再加入質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液攪拌I個小時以上，最后用清水沖洗至洗液pH為中性，所述氫氧化鈉溶液的加入量為每千克樹脂加入IL氫氧化鈉溶液的量計；活化后的樹脂在4000-5000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-30min，再用于吸附。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(6)收集的洗脫液 進(jìn)入超濾機(jī)超濾后再進(jìn)入下一步沉淀，超濾機(jī)的超濾膜孔徑在0.45μ m-0.6μ m ;或步驟(6)收集的洗脫液在8000-10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理10-20min后，再進(jìn)入下一步沉淀。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(7)收集沉淀物后剩余的上清液輸入另一空沉淀罐中，向另一空沉淀罐中加入飽和氯化鈉溶液攪拌均勻，并調(diào)節(jié)PH為9-10，上清液與飽和氯化鈉溶液的體積比為1:0.5-0.7，靜置沉淀8-12小時后，收集沉淀，然后與步驟(7)得到的沉淀物合并后進(jìn)入下一步的干燥步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:步驟(8)烘干處理的溫度為60-80°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或5所述的豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝，其特征在于:收集步驟(3)酶解液過濾獲得的殘渣，向酶解罐中加入鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液，然后將殘渣重新加入酶解罐中，殘渣與鹽度5±0.5°的氯化鈉溶液的重量比為1:5-6，控制料液的pH在8.5 + 0.5，接著按每1000L料液加1.0-1.2kg的酶量向酶解罐內(nèi)加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在55 土 1°C，保溫6-7小時；最后升溫至88-90 V，保持20_25min，再靜置20-30min后得酶解液，酶解液在6000-8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心處理20_40min后，進(jìn)入下一步的吸附。
全文摘要
本發(fā)明涉及肝素鈉生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種豬小腸綜合提取肝素鈉的工藝。本發(fā)明主要步驟為前處理、腸衣泡把、酶解、吸附、洗滌、洗脫、沉淀和干燥。本發(fā)明將腸衣與腸粘膜聯(lián)合制取肝素鈉，提高了豬小腸的利用率，增加了豬小腸的附加值，生產(chǎn)一億國際單位肝素鈉粗品只需1400根左右豬小腸，產(chǎn)品純度高，肝素鈉的效價＞110U/mg。同時，剩余的腸皮也能得到有效利用。
文檔編號C08B37/10GK103183746SQ20121034734
公開日2013年7月3日 申請日期2012年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月19日
發(fā)明者花瑞華, 潘為群, 潘為中 申請人:杭州龍揚(yáng)生物科技有限公司