本發(fā)明屬于基因工程和心血管學(xué)領(lǐng)域，涉及一種用于冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)的內(nèi)參。

背景技術(shù)：

冠心病是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病。早期診斷和治療可顯著提高治療效果并改善預(yù)后?，F(xiàn)有的冠心病診斷方法主要包括血液標(biāo)志物、心電圖及影像學(xué)檢查。其中，心電圖、心電圖負(fù)荷試驗(yàn)等屬于輔助性診斷，敏感性、特異性不高。冠狀動(dòng)脈造影、血管內(nèi)超聲等影像學(xué)方法多屬于有創(chuàng)檢查，費(fèi)用高昂，且對(duì)于較小病變不易發(fā)現(xiàn)，難以用于早期診斷。因此尋找特異性、敏感性高的生物標(biāo)志物，建立早期非侵入、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的血清/血漿學(xué)診斷方法是冠心病診斷的發(fā)展方向。

microRNA（miRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)約18～25個(gè)核苷酸的小分子非編碼RNA，主要通過(guò)與靶mRNA3'-非翻譯區(qū)（UTR）的堿基互補(bǔ)配對(duì)抑制靶RNA翻譯，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因表達(dá)。廣泛參與各種病理、生理活動(dòng)，與許多疾病的發(fā)生、發(fā)展存在著緊密的聯(lián)系。心血管系統(tǒng)有著特別豐富的miRNA資源，miRNA在冠心病中充當(dāng)多種多樣的角色，可反映心臟和血管對(duì)損傷的易感性，及生物體對(duì)于持久心血管功能的依賴(lài)性。miRNA不僅存在于組織細(xì)胞中，也廣泛的存在于血清血漿等體液中，其種類(lèi)和數(shù)量可隨著生理狀況或疾病而不同。生化分析顯示，miRNA性質(zhì)穩(wěn)定，可以抵抗血漿和血清中存在的核糖核酸酶，對(duì)極端的pH值和溫度、長(zhǎng)期的儲(chǔ)存及反復(fù)的凍融均不敏感，具備成為優(yōu)質(zhì)生物標(biāo)志物的潛質(zhì)。而且miRNA還擁有以蛋白質(zhì)為代表的傳統(tǒng)生物標(biāo)志物所不具備的特質(zhì)，即無(wú)需抗體制備且易于精確定量。因此，利用血清/血漿miRNA進(jìn)行疾病診斷或預(yù)測(cè)疾病發(fā)生的非侵入式檢測(cè)方式是近年來(lái)生物醫(yī)學(xué)家研究的重點(diǎn)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于miRNA的表達(dá)分析。該方法需要選擇合適的內(nèi)參進(jìn)行校正和標(biāo)準(zhǔn)化，以減少檢測(cè)標(biāo)本間的差異。所選內(nèi)參的穩(wěn)定性決定了檢測(cè)結(jié)果的可靠與否。相對(duì)于組織/細(xì)胞而言，血清/血漿miRNA豐度低。組織/細(xì)胞中常用的RNU6等內(nèi)參在血清/血漿的表達(dá)很低，無(wú)法作為血清/血漿miRNA檢測(cè)的內(nèi)參。目前研究者常用三種方法控制實(shí)驗(yàn)差異：一是在提取 RNA 時(shí)取等量的血清/血漿，二是在提取 RNA 之前向血清/血漿加入人工合成miRNA(如線(xiàn)蟲(chóng)-39，即cel-miR-39)作為外參。三是采用一個(gè)或多個(gè)內(nèi)源性分子作為檢測(cè)血清/血漿miRNA表達(dá)的內(nèi)參。然而，取等量的血清/血漿很難保證在逆轉(zhuǎn)錄中加入的miRNA是等量的，而加入人工合成miRNA僅能控制在 RNA 提取以及cDNA合成過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)誤差，由此可以看出這兩種方法都不能有效控制樣本本身的生物學(xué)誤差。與前兩者不同的是，采用一個(gè)或多個(gè)內(nèi)源性分子作為檢測(cè)血清/血漿miRNA表達(dá)的內(nèi)參不僅可以控制實(shí)驗(yàn)操作中的誤差，還可以控制樣本本身的生物學(xué)誤差，具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，因而成為業(yè)界所公認(rèn)的最佳標(biāo)準(zhǔn)化方法。

由于血清/血漿miRNA表達(dá)具有很強(qiáng)的疾病特異性，不存在可以用于所有疾病的血清/血漿miRNA表達(dá)檢測(cè)的共同內(nèi)參。對(duì)于冠心病而言，目前仍缺乏公認(rèn)的理想內(nèi)參分子。以往的研究者主要根據(jù)自身經(jīng)驗(yàn)或者參考文獻(xiàn)來(lái)選擇內(nèi)參分子，在不同的實(shí)驗(yàn)中選取的內(nèi)參通常并不一致，因而制約了研究成果的轉(zhuǎn)化和不同實(shí)驗(yàn)室之間研究成果的比較。因此，如果能夠篩選出適用于冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)的內(nèi)參，并研制相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒，對(duì)血清/血漿miRNA相關(guān)研究成果的臨床轉(zhuǎn)化及提高冠心病的臨床診療水平必將是一次有力的推動(dòng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，為解決現(xiàn)有技術(shù)中尚無(wú)一種穩(wěn)定的冠心病血清/血漿miRNA內(nèi)參分子的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種用于冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)的內(nèi)參，并提供了檢測(cè)該內(nèi)參的引物、專(zhuān)用試劑盒、檢測(cè)方法，以及在診斷、檢測(cè)冠心病中的應(yīng)用，為冠心病血清/血漿miRNA研究的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提供了實(shí)用可靠的標(biāo)準(zhǔn)化依據(jù)。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

hsa-miR-6090和/或hsa-miR-4516在冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)中作為內(nèi)參的應(yīng)用。

hsa-miR-6090和/或hsa-miR-4516的引物在制備冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述hsa-miR-6090的引物為：

hsa-miR-6090-F：GTCAGCGCGGGGAGCGAGGG（SEQ ID NO：1），

hsa-miR-6090-R：CAGTGCAGGGTCCGAGGTAT（SEQ ID NO：2）。

優(yōu)選的，所述hsa-miR-4516的引物為：

hsa-miR-4516-F：GTCAGCGCGGGAGAAGGGTC（SEQ ID NO：4），

hsa-miR-4516-R：CAGTGCAGGGTCCGAGGTAT（SEQ ID NO：5）。

一種用于冠心病血清/血漿miRNA的檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包含內(nèi)參hsa-miR-6090和/或hsa-miR-4516的引物序列。

優(yōu)選的，hsa-miR-6090的引物為SEQ ID NO： 1～2。

優(yōu)選的，hsa-miR-4516的引物為SEQ ID NO：4～5。

本發(fā)明的有益效果是：

1）血清/血漿miRNAs是一種新型生物標(biāo)志物，區(qū)別于傳統(tǒng)生物標(biāo)志物，不僅穩(wěn)定、微創(chuàng)、而且易于檢測(cè)，定量精確，將大大提高疾病診斷的敏感性和特異性。本發(fā)明公開(kāi)了一種用于冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)的內(nèi)參（包括內(nèi)參hsa-miR-6090、內(nèi)參 hsa-miR-4516及內(nèi)參 hsa-miR-4516 和 hsa-miR-6090的組合），本發(fā)明的內(nèi)參能夠穩(wěn)定、高效地在冠心病病人和健康對(duì)照中表達(dá)，有助于反映不同受試者內(nèi)參miRNA的基線(xiàn)表達(dá)水平，用于消除個(gè)體生物學(xué)誤差及實(shí)驗(yàn)操作所導(dǎo)致的miRNA表達(dá)水平差異，以凸顯真正與冠心病相關(guān)的miRNA差異表達(dá)。

2）本發(fā)明通過(guò)篩選血清/血漿中穩(wěn)定表達(dá)的miRNA，尋找并驗(yàn)證了可用作冠心病血清/血漿miRNA研究的內(nèi)參。通過(guò)血清/血漿miRNAs內(nèi)參試劑盒的研制和應(yīng)用，促進(jìn)血清/血漿miRNAs相關(guān)研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化和不同實(shí)驗(yàn)室間研究結(jié)果的比較，為臨床醫(yī)生快速掌握患者病情，準(zhǔn)確評(píng)估治療效果和預(yù)后奠定了基礎(chǔ)，并為發(fā)現(xiàn)具有潛在治療價(jià)值的新型小分子藥物靶標(biāo)提供幫助。

3）本發(fā)明采用嚴(yán)密的設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)體系，首先通過(guò)Agilent Human miRNA芯片檢測(cè)獲取穩(wěn)定表達(dá)的血清/血漿miRNA，然后經(jīng)qRT-PCR檢測(cè)和軟件計(jì)算得到最穩(wěn)定的候選內(nèi)參，并再次進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證。通過(guò)應(yīng)用上述研究方法，保證了冠心病血清/血漿miRNA內(nèi)參檢測(cè)試劑盒研發(fā)的嚴(yán)謹(jǐn)性和可靠性。

附圖說(shuō)明

圖1 候選內(nèi)參miRNA在對(duì)照組及冠心病患者血清/血漿中的表達(dá)水平比較；

圖 2 hsa-miR-6090，hsa-miR-4516及二者組合在對(duì)照組、及冠心病患者血清/血漿中的表達(dá)水平比較。

具體實(shí)施方式

hsa-miR-6090和/或hsa-miR-4516在冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)中作為內(nèi)參的應(yīng)用。

hsa-miR-6090和/或hsa-miR-4516的引物在制備冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述hsa-miR-6090的引物為：

hsa-miR-6090-F：GTCAGCGCGGGGAGCGAGGG（SEQ ID NO：1），

hsa-miR-6090-R：CAGTGCAGGGTCCGAGGTAT（SEQ ID NO：2）。

優(yōu)選的，所述hsa-miR-6090的引物還包括逆轉(zhuǎn)錄引物：

hsa-miR-6090-RT：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACGCCCCG（SEQ ID NO：3），

優(yōu)選的，所述hsa-miR-4516的引物為：

hsa-miR-4516-F：GTCAGCGCGGGAGAAGGGTC（SEQ ID NO：4），

hsa-miR-4516-R：CAGTGCAGGGTCCGAGGTAT（SEQ ID NO：5）。

優(yōu)選的，所述hsa-miR-4516的引物還包括逆轉(zhuǎn)錄引物：

hsa-miR-4516-RT：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACGCCCCG（SEQ ID NO：6）。

一種用于冠心病血清/血漿miRNA的檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包含內(nèi)參hsa-miR-6090和/或hsa-miR-4516的引物序列。

優(yōu)選的，hsa-miR-6090的引物為SEQ ID NO：1～3。

優(yōu)選的，hsa-miR-4516的引物為SEQ ID NO：4～6。

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述，但不限于此。

實(shí)施例1：樣品的收集和樣品資料的整理

研究樣本的選擇： (1)經(jīng)病理學(xué)明確診斷的冠心病病人，包括內(nèi)參篩選階段和內(nèi)參驗(yàn)證階段的病例；(2) 健康男性、女性對(duì)照。

發(fā)明人自2014年6月起從湖南省內(nèi)多個(gè)三級(jí)甲等醫(yī)院收集了大量血清/血漿樣品，通過(guò)整理，選擇120例經(jīng)病理學(xué)明確診斷的心血管病人的血清/血漿作為實(shí)驗(yàn)用樣本，另外選擇120例健康對(duì)照樣本，并系統(tǒng)采集了這些樣本的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)資料、臨床病理資料等情況。調(diào)查情況見(jiàn)表1。

表1 收集樣本情況調(diào)查表

實(shí)施例2：血清/血漿Agilent Human miRNA芯片檢測(cè)

取上述符合條件的樣本包括24例冠心病病例（每種冠心病類(lèi)型各6例，其中男性3例女性3例，一共24例）和24例健康對(duì)照樣本，進(jìn)行 Agilent Human miRNA芯片檢測(cè)試驗(yàn)，用于內(nèi)參的初步篩選。具體步驟為：

1.樣本的抽提與質(zhì)檢

1.1 RNA的抽提與純化

采用miRNeasy試劑盒 (Qiagen，德國(guó))，根據(jù)生產(chǎn)廠(chǎng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行樣品的total RNA抽提，抽提所得total RNA經(jīng)Agilent Bioanalyzer 2100(Agilent technologies, Santa Clara, CA, US)電泳質(zhì)檢合格后備用。

1.2 RNA質(zhì)檢說(shuō)明

芯片實(shí)驗(yàn)起始樣本為 total RNA，total RNA經(jīng)NanoDrop ND-2000分光光度計(jì)及Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent technologies, Santa Clara, CA, US)進(jìn)行質(zhì)檢，質(zhì)檢合格的RNA可進(jìn)行后續(xù)的芯片實(shí)驗(yàn)。

2.樣品RNA的標(biāo)記

實(shí)驗(yàn)樣品RNA(100ng)采用Agilent miRNA芯片配套的試劑盒，miRNA Complete Labeling and Hyb Kit(Agilent technologies, Santa Clara, CA, US)，按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程的標(biāo)記部分對(duì)樣品中的miRNA分子進(jìn)行熒光標(biāo)記。

3.芯片雜交

按照Agilent miRNA芯片配套提供的標(biāo)準(zhǔn)操作流程和配套試劑盒，miRNA Complete Labeling and Hyb Kit (Agilent technologies, Santa Clara, CA, US)的雜交部分，進(jìn)行樣品的雜交實(shí)驗(yàn)。在滾動(dòng)雜交爐中（Hybridization Oven, Agilent technologies, US），55℃，20rpm，滾動(dòng)雜交20小時(shí)。雜交完成后在洗缸（Thermo Shandon, Waltham, US）中洗片，洗片所用的試劑為 Gene Expression Wash Buffer Kit (Agilent technologies, US)。

4.芯片掃描

芯片結(jié)果采用Agilent Microarray Scanner (Agilent technologies, US) 進(jìn)行掃描，軟件設(shè)置Scan resolution = 3μm (人類(lèi), PMT 100%，用Feature Extraction software 10.7.1.1 (Agilent technologies, US) )讀取數(shù)據(jù)，最后采用Gene Spring Software 12.6 (Agilent technologies, US) 進(jìn)行歸一化處理，所用的算法為Quantile。

5.數(shù)據(jù)分析與處理：利用生物信息學(xué)方法，對(duì)所得血清/血漿miRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析。

根據(jù)芯片結(jié)果，選擇在心血管患者及健康對(duì)照中均穩(wěn)定表達(dá)，且組間之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)的miRNA分子，包括hsa-miR-6090，hsa-miR-4516，hsa-miR-6089，hsa-miR-3960，hsa-miR-16-5p，hsa-miR-484。

實(shí)施例3：血清/血漿miRNA的qRT-PCR篩選及驗(yàn)證

根據(jù)上述結(jié)果，選擇在心血管患者及健康對(duì)照中均穩(wěn)定表達(dá)，且組間之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)的miRNA分子（hsa-miR-6090，hsa-miR-4516，hsa-miR-6089，hsa-miR-3960，hsa-miR-16-5p，hsa-miR-484）作為候選內(nèi)參。此外，由于RNU6常被作為組織miRNA檢測(cè)的內(nèi)參分子，為驗(yàn)證其在血清/血漿中可否作為內(nèi)參，RNU6也作為候選分子被納入篩選。hsa-let-7d-5p，hsa-miR-191-5p，hsa-miR-423-5p曾被報(bào)道可以作為血液miRNA檢測(cè)的內(nèi)參，為與新內(nèi)參進(jìn)行效果對(duì)比，也作為候選分子納入篩選。通過(guò)對(duì)上述9個(gè)miRNA及RNU6采用qRT-PCR方法在一組受試者（包括冠心病患者24例，其中每種冠心病類(lèi)型各6例，男性3例女性3例；健康對(duì)照24例）中進(jìn)行驗(yàn)證。

整個(gè)研究過(guò)程均實(shí)施嚴(yán)格質(zhì)控，每個(gè)樣本做3個(gè)復(fù)孔進(jìn)行檢測(cè)，且所有檢測(cè)均采用盲法。

具體步驟為：

1.制備 RNA 樣品：a) 取 300μl血清/血漿；b) 加3倍體積的Trizol LS，室溫靜置5min，然后加入250μl的氯仿，震蕩50s，室溫靜置15min，12,000rpm，4℃，離心15min；c)取500μl水相轉(zhuǎn)移到新的1.5ml的離心管，加入250μl異丙醇，輕微晃動(dòng)后，室溫靜置10min； d) 4℃，12000g，離心10min；e）棄置上清液，加入1ml 75%乙醇，用于洗滌，4℃，7500g，離心5min，棄上清液。重復(fù)該步驟1次；f）空氣干燥，加入23 μl DEPC水溶解。

2.逆轉(zhuǎn)錄：逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為All-in-OnemiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit (GeneCopoeia公司)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系包括 1μl逆轉(zhuǎn)錄酶(2.5U/μl)、5μl 5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、 1μlRTase Mix。加入18μl的總RNA。反應(yīng)步驟為37℃反應(yīng)60分鐘，85℃孵育5分鐘。

3.q-PCR ：試劑盒為All-in-OnemiRNAqPCR Kit（(GeneCopoeia公司)）。Universal Adaptor PCR primer 0.5μl，PCR primer 0.5μl，cDNA 1μl，50×ROX Reference Deg 0.4μl，2×All-in-one qPCR Mix 10μl，RNase-free Water7.6μl，總反應(yīng)體系20μl。儀器使用的是熒光定量PCR儀。

4.數(shù)據(jù)處理與分析：對(duì)每個(gè)樣本血清/血漿各個(gè)miRNA分子三次檢測(cè)結(jié)果（Ct 值）取平均值，分析結(jié)果見(jiàn)圖1。

從圖1可知有5個(gè)候選分子因表達(dá)水平較低而被排除（hsa-miR-3960、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-423-5p、RNU6）。對(duì)剩余5個(gè)miRNA(hsa-miR-6090，hsa-miR-4516，hsa-miR-6089，hsa-miR-16-5p，hsa-miR-484)采用One-way ANOVA方法分析各個(gè)miRNA在不同樣本組之間是否有表達(dá)差異，運(yùn)用NormFinder及BestKeeper軟件計(jì)算各個(gè)miRNA的穩(wěn)定性（見(jiàn)表2）。

表2. 候選內(nèi)參的穩(wěn)定性評(píng)分

由表2可知，若采用單個(gè)miRNA作為血清/血漿內(nèi)參，hsa-miR-6090的穩(wěn)定性最好，hsa-miR-4516的穩(wěn)定性較好。hsa-miR-6090及hsa-miR-4516的組合穩(wěn)定性更佳。

實(shí)施例4：hsa-miR-6090 和hsa-miR-4516表達(dá)穩(wěn)定性驗(yàn)證

根據(jù)qRT-PCR篩選結(jié)果，hsa-miR-6090為表達(dá)最穩(wěn)定的候選內(nèi)參分子，其次是hsa-miR-4516，而hsa-miR-6090及hsa-miR-4516的組合穩(wěn)定性更佳。采用qRT-PCR方法在更大規(guī)模的受試者(其中包括冠心病患者72例，健康對(duì)照72例)中對(duì)hsa-miR-6090、hsa-miR-4516以及hsa-miR-6090和hsa-miR-4516的組合的穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證。

具體步驟為：

1. 制備 RNA 樣品：a) 取 300μl血清/血漿；b) 加3倍體積的Trizol LS，室溫靜置5min，然后加入250μl的氯仿，震蕩50s，室溫靜置15min，12,000rpm，4℃，離心15min；c)取500μl水相轉(zhuǎn)移到新的1.5ml的離心管，加入250μl異丙醇，輕微晃動(dòng)后，室溫靜置10min； d) 4℃，12000g，離心10min；e）棄置上清液，加入1ml 75%乙醇，用于洗滌，4℃，7500g，離心5min，棄上清液。重復(fù)該步驟1次；f）空氣干燥，加入23 μl DEPC水溶解。

2. 逆轉(zhuǎn)錄：逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為All-in-OnemiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit (GeneCopoeia公司)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系包括 1μl逆轉(zhuǎn)錄酶(2.5U/μl)、5μl 5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、1μlRTase Mix。加入18μl的總RNA。反應(yīng)步驟為37℃反應(yīng)60分鐘，85℃孵育5分鐘。

3. q-PCR ：試劑盒為All-in-OnemiRNAqPCR Kit（(GeneCopoeia公司)）。Universal Adaptor PCR primer 0.5μl，PCR primer 0.5μl，cDNA 1μl，50×ROX Reference Deg 0.4μl，2×All-in-one qPCR Mix 10μl，RNase-free Water7.6μl，總反應(yīng)體系20μl。儀器使用的是熒光定量PCR儀， PCR的反應(yīng)條件是： 95℃、5分鐘進(jìn)行1個(gè)循環(huán)→95℃、10秒， 60℃、30s進(jìn)行45個(gè)循環(huán)。

4.數(shù)據(jù)處理與分析：各miRNA在不同樣本組之間表達(dá)分析，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2結(jié)果表明：hsa-miR-6090、hsa-miR-4516或是hsa-miR-6090及hsa-miR-4516的組合，在健康人群的血清/血漿（對(duì)照）和冠心病人（病例）樣本中，他們的表達(dá)水平?jīng)]有差異（P＞0.05），三者均有較好的穩(wěn)定性。

實(shí)施例5：用于冠心病人血清 / 血漿miRNA內(nèi)參檢測(cè)試劑盒的制作

miRNA試劑盒的制作和操作流程是基于芯片檢測(cè)，RT-PCR 和real-time PCR 等技術(shù)。試劑盒包括血清/血漿miRNA引物 (包括單獨(dú)的hsa-miR-6090的引物或者h(yuǎn)sa-miR-4516的引物或者h(yuǎn)sa-miR-6090的引物與hsa-miR-4516的引物組合，其中：hsa-miR-6090的引物為SEQ ID NO：1～3；hsa-miR-4516的引物為SEQ ID NO：4～6)，還可以有相應(yīng)PCR反應(yīng)所需的常用酶和/或試劑，如：逆轉(zhuǎn)錄酶，緩沖液，dNTPs， MgCl₂，去核酸酶水，熒光染料或探針、Taq酶等，可根據(jù)具體采用的實(shí)驗(yàn)方法選用，這些常用酶和/或試劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，另外還可以有標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照 (如定量標(biāo)化的線(xiàn)蟲(chóng) cel-miR-39 樣本等)。

此試劑盒的價(jià)值在于可檢測(cè)冠心病人血清/血漿miRNA的內(nèi)參，為不同實(shí)驗(yàn)室間研究結(jié)果的比較提供依據(jù)，以促進(jìn)相關(guān)研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化，因此將此試劑盒投入實(shí)踐，可以幫助指導(dǎo)臨床準(zhǔn)確做出診斷和更有效的個(gè)體化治療。

<110> 湖南中醫(yī)藥大學(xué)

<120> 一種用于冠心病血清/血漿miRNA檢測(cè)的內(nèi)參

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<170> PatentIn version 3.5

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