本發(fā)明涉及化合物及其藥學應用。

背景技術(shù)：

宮頸癌是婦女癌癥死亡的第二大原因，估計每年有529,000個宮頸癌新病例和275,000個死亡病例。2013年估計有12,340例浸潤性宮頸癌新病例有望被診斷出來。然而，美國食品和藥物管理局(fda)批準的治療宮頸癌的藥物數(shù)量很少，甚至過去十年呈現(xiàn)遞減的趨勢(www.cancer.gov)，這表明迫切需要開發(fā)用于治療宮頸癌的新化合物。通過改進篩查和診斷所獲得的宮頸癌病例預測的上升使得該需要更加迫切，宮頸癌的各個方面和各個階段的增長幅度從百分之幾到10％(www.bccresearch.com)。正在進行的抗hpv疫苗試驗也不會使這種情況得到緩解，因為要在幾十年后才會看到結(jié)果。

宮頸癌的主要危險因素是致癌性人乳頭狀瘤病毒(hpv)。hpv干擾受感染上皮細胞正常生命周期的機制在高危和低危基因型之間差異很大。在高危基因型的病例中，認為晚期表達的病毒e6癌蛋白特異性結(jié)合由幾個基因(p53和視網(wǎng)膜母細胞瘤腫瘤抑制基因)編碼的蛋白質(zhì)，其在細胞周期的調(diào)節(jié)中起到主要作用。

高危e6還激活端粒酶，其防止了端粒的侵蝕，并允許宿主細胞繼續(xù)多輪分裂而不損害dna。還報道了e6激活核因子κb(nf-κb)，其增強了hpv16e6永生化的人口腔角質(zhì)形成細胞和原代人氣道上皮細胞中的凋亡蛋白2(iap2)抑制劑的表達。還觀察到c-iap2的消耗導致細胞死亡，這表明hpv16誘導的c-iap2表達對于維持永生化表型是必需的。

e7癌蛋白與hpv介導的癌癥也是密切相關(guān)的。e7癌蛋白與細胞周期調(diào)節(jié)劑prb相互作用，誘導其蛋白水解降解，從而阻止其結(jié)合和抑制細胞周期促進轉(zhuǎn)錄因子e2f，從而對細胞周期進程產(chǎn)生刺激作用。此外，e7刺激s期細胞周期蛋白e和a的表達，與細胞周期蛋白激酶復合物相互作用，并消除ckis(如p21cip和p27kip)的抑制活性。

因此，阻斷e6和e7癌蛋白的活性是hpv介導的癌癥的主要治療目標。除宮頸癌之外，越來越多的證據(jù)表明在許多其他重要癌癥，包括口腔癌、各種頭頸部癌癥以及肛門生殖器癌中，hpv也是主要病因。e6和e7癌蛋白與許多主要類型癌癥的確立關(guān)聯(lián)強調(diào)了對這些病毒癌蛋白靶向治療的需求。

fda只批準3種藥物(博萊霉素，順鉑以及和美新)用于宮頸癌，并且眾所周知，其都具有差的特異性和嚴重的副作用(www.cancer.gov)。

在hpv介導的癌癥的長期治療中，疫苗提供了有效的策略。有兩種疫苗(gardasil和cervarix)被許可并已進入市場(www.cancer.gov)。這些疫苗在預防感染和疾病方面都是有效的，但是需要數(shù)十年才能顯示實際效果，疫苗接種覆蓋范圍也僅限于一些發(fā)達國家。未接種疫苗的，已經(jīng)患有hpv介導的癌癥或?qū)l(fā)展為癌癥的患者迫切需求更有效的抗癌藥物。由于疫苗行業(yè)最近不幸事件的發(fā)生，公眾對疫苗接種的接受度也可能變化。疫苗不會有100％的外顯率，因為它們的靶標不能覆蓋所有介導癌癥的hpv。

因此，只能期望癌癥的部分保護。最后，這些疫苗是昂貴的，對于各個國家，特別是發(fā)展中國家的公共衛(wèi)生管理來說，這些疫苗是負擔不起的。所有這些方面都迫切需要實施新的和負擔得起的策略，以便在后疫苗時代治療hpv介導的癌癥。

wo2014/033366公開了防風草酸(anisomelicacid)，一種從anisomelesmalabarica(l.)r.br中分離出來的二萜在抗病毒癌癥治療中的應用。在wo2014/033366中，可以看出，防風草酸在誘導hpv16陽性宮頸癌細胞的細胞凋亡中顯示出良好的效果。防風草酸抑制了e6和e7的蛋白水平的表達，因此能夠起到抗hpv藥物的作用。

防風草酸是一種疏水化合物，其溶解于dmso和熱乙醇中，基本上不溶于水或其它水溶劑。藥物的低水溶性可能是一個問題，因為它導致生物利用度差，個體自身/個體間變異性高和缺少劑量均衡性。為了解決這個問題，wo2014/033366公開了用于實現(xiàn)含有防風草酸的口服藥物的成功給藥的各種方法，例如固體分散劑，反溶劑制劑，環(huán)糊精絡合制劑和脂質(zhì)基的制劑，包括脂質(zhì)基乳液給藥系統(tǒng)，例如自微乳化給藥系統(tǒng)(smedds)。

涉及天然物質(zhì)的另一個問題是為了工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的目的，分子的合成通常需要多步法，而多個分離和純化步驟會影響收率。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

技術(shù)問題

本發(fā)明的一個目的是提供可用于抗癌治療，特別是宮頸癌治療的有機分子。

本發(fā)明的另一個目的是提供具有至少與防風草酸一樣好的藥效，并具有潛在更高的治療指數(shù)的有機分子。

本發(fā)明的第三個目的是提供具有至少與防風草酸一樣好的藥效，具有潛在更高的治療指數(shù)，并且更易溶于水的有機分子。

本發(fā)明的第四個目的是提供滿足上述任何目的并容易合成的有機分子。

解決問題的方案

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)式1所示的化合物在宮頸癌細胞中誘導細胞凋亡，表現(xiàn)出良好的效果。

在式1中，

x表示烷基、亞烷基、烯基、亞烯基、炔基或亞炔基，任選具有至少一個選自含-or¹和-nr¹r²的組的取代基；

y表示-otbs、-or¹和-nr¹r²；

z表示-or³或＝o；和

r¹、r²和r³各自獨立地代表h、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基。

x和y還可以包含任選取代的亞胺基團。

式1所示的化合物可以通過文獻中描述的合成路線從合適的起始原料合成。

式1所示的化合物也適合作為其它藥物活性化合物的中間體、前藥和前體。

在本發(fā)明中使用的動詞“包括”和“包含”是開放性的限制，既不排除也不要求未引用特征的存在。除非另有明確說明，從屬權(quán)利要求中所列的特征是可互相組合的。此外，應當理解，在本發(fā)明中使用的“一”、“一個”，即單數(shù)形式不排除多個。

發(fā)明的有益效果

本發(fā)明化合物在宮頸癌細胞，更具體地在hpv16陽性宮頸癌細胞中誘導程序性細胞死亡或細胞凋亡的效果較好，下面將更詳細地討論。本發(fā)明化合物對口咽癌也表現(xiàn)出良好的效果。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)細胞死亡的機制是hpv特異性的，因為相同的化合物還抑制hpv6陽性細胞的hpv特異性靶標e6和ciap2的蛋白質(zhì)水平的表達。因此，該化合物作為hpv陽性細胞中的抗hpv藥物。

除了細胞研究之外，在本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，至少一部分本發(fā)明的化合物可以有效地抑制體內(nèi)雞絨毛尿囊膜(cam)上的宮頸腫瘤的生長。

對于一些實施方式，已經(jīng)顯示抗癌和抗病毒活性在早期時間點(2小時)是高效的。

基于這些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了可用于抗癌治療，特別是宮頸癌以及頭頸癌如口咽癌治療的化合物的新組合物。

該化合物還可用于治療人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，例如良性或腫瘤性生殖器官人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，特別是人乳頭狀瘤病毒介導的疣，生殖器疣以及非生殖器疣的方法中，該方法包括給予哺乳動物治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物。

式1所示的化合物或其鹽或其衍生物可以局部給予哺乳動物。

此外，合成方法可用于合成具有前所未有的效果的本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物可溶于水。納米載體可用于靶向給藥。

附圖說明

圖1a是本發(fā)明化合物(式1)的通式；圖1b是化合物i至iv的結(jié)構(gòu)。

圖2.(a)將siha細胞用40μm的化合物i至iv培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)完成后，流式細胞儀檢測碘化丙啶(pi)凋亡的細胞百分比。(b)siha細胞中，化合物iii誘導的細胞凋亡百分比(a)和細胞壞死百分比(b)的劑量-時間依賴性。(c)在2小時時，siha細胞中化合物iii對半胱天冬酶3的活化情況。

圖3.在2小時時，用40μm化合物iii處理后各種蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡westernblot分析。

圖4.(a)在體內(nèi)腫瘤生長模型中，化合物iii抑制cam中siha細胞的生長。(b)在卵內(nèi)腫瘤生長模型中，不同濃度的化合物iii處理(±s.e.m.；n＝4)后，cam中的siha腫瘤細胞的h&e染色的代表性圖像。(c)平板中所示的siha腫瘤尺寸的定量。

具體實施方式

如上所述，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式1所示的化合物在宮頸癌細胞和其它癌細胞中誘導細胞凋亡的效果很好。

在式1中，x表示烷基、亞烷基、烯基、亞烯基、炔基或亞炔基，任選具有至少一個選自-or¹和-nr¹r²的取代基；

y表示-otbs、-or¹和-nr¹r²；

z表示-or³或＝o；和

r¹、r²和r³各自獨立地代表h、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基。

還包括異構(gòu)體，例如對映異構(gòu)體，以及外消旋形式，以及化合物和對映異構(gòu)體和外消旋形式的藥學上可接受的鹽。

本發(fā)明中，術(shù)語“烷基”是指具有1至10個碳原子，優(yōu)選1至5個碳原子的飽和直鏈(無支鏈)或支鏈、環(huán)烴、非環(huán)烴。

烷基可進一步舉例為甲基、乙基、正丙基、異丙基、異丁基、叔丁基、戊基、新戊?；⒏?、金剛烷基和環(huán)戊基。烷基可以是未取代的或被一個或多個取代基取代，上述取代基，例如，可以是鹵素、烷基、烷氧基、烷硫基、三氟甲基、酰氧基、羥基、巰基、羧基、芳氧基、芳氧基、芳基、芳烷基、雜芳基、氨基、烷氨基、二烷基氨基、嗎啉基、哌啶基、吡咯烷-1-基、哌嗪-1-基或其它官能團。

在整個說明書中，術(shù)語“烯基”是指具有2至10個碳原子，優(yōu)選1至5個碳原子并具有至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈的非環(huán)烴。直鏈或支鏈(c2至c10)烯基的典型實例包括-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、-1-己烯基、-2-己烯基、-3-己烯基、-1-庚烯基、-2-庚烯基、-3-庚烯基、-1-辛烯基、-2-辛烯基、-3-辛烯基、-1-壬烯基、-2-壬烯基、-3-壬烯基、-1-癸烯基、-2-癸烯基和-3-癸烯基。烯基可以是被取代或未被取代的。

在整個說明書中，術(shù)語“炔基”是指具有2至10個碳原子，優(yōu)選2至5個碳原子并具有至少一個碳-碳三鍵的直鏈或支鏈的非環(huán)烴。直鏈或支鏈(c2至c10)炔基的典型實例包括-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、-3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、-5-己炔基、-1-庚炔基、-2-庚炔基、-6-庚炔基、-1-辛炔基、-2-辛炔基、-7-辛炔基、1-壬炔基、-2-壬炔基、-8-壬炔基、-1-癸炔基、-2-癸炔基和-9-癸炔基。炔基可以是被取代或未被取代的。

“亞烷基”、“亞烯基”和“亞炔基”分別表示與上述|“烷基”、“烯基”和“炔基”對應的雙官能基團。

特別優(yōu)選的基團是被-or¹或-nr¹r²取代的亞乙基(-ch2ch2-x¹，其中x¹代表-or¹或-nr¹r²，其中r¹和r²具有與上述相同的含義)和烯基，例如乙烯基(-ch＝ch2)。

在整個說明書中，術(shù)語“芳基”是指具有5至10個環(huán)原子的碳環(huán)芳族基團。其典型實例包括但不限于苯基、甲苯基、蒽基、芴基、茚基、薁基、吡啶基和萘基，并且還包括苯并稠合的碳環(huán)基團如5,6,7,8-四氫萘基。碳環(huán)芳基可以是被取代或未被取代的。在一個實施方式中，碳環(huán)芳基是苯基。

在整個說明書中，術(shù)語“雜芳基”是指具有至少一個選自氮，氧和硫原子的雜原子并且具有至少一個碳原子的5至10元芳族雜環(huán)，包括單環(huán)和雙環(huán)。雜芳基的典型實例包括三唑基、四唑基、惡二唑基、吡啶基、呋喃基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、吡咯基、吲哚基、惡唑基、苯并惡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異惡唑基、吡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶堿基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、嘧啶基、氧雜環(huán)丁烷基、氮雜卓基、哌嗪基、嗎啉基、二惡烷基、硫代乙酰基和惡唑基。

在整個說明書中，術(shù)語“雜環(huán)基”是指具有1至4個獨立地選自氮、氧和硫原子的雜原子的飽和或不飽和5至7元單環(huán)或7至10元雙環(huán)雜環(huán)，其中氮和硫雜原子任選地被氧化，氮雜原子任選地被季銨化，并且包括通過這些雜環(huán)基與苯環(huán)縮合形成的雙環(huán)。雜環(huán)基可以通過合適的雜原子或碳原子鍵合。

上面定義的雜芳基包括在雜環(huán)基中。雜環(huán)基的典型實例包括嗎啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、己內(nèi)酰脲基、戊內(nèi)酰胺基、環(huán)氧乙烷基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、四氫噻吩基和四氫噻喃基。

在一個實施方式中，在式1中，otbs表示甲硅烷基，特別是叔丁基二甲基甲硅烷氧基。

在另一個能夠與上述內(nèi)容結(jié)合的實施方式中，otbs表示保護基。

特別優(yōu)選的實施方式包括式1所示的化合物，其中x代表一個羥基取代的亞乙烷基或乙烯基，y代表-otbs和z代表-or³或＝o，其中r³是具有1至4個碳原子的直連或支鏈烷基。

特別感興趣的化合物表示為式1a所示的化合物，

其中，x¹表示-or¹和-nr¹r²；

y表示-otbs、-or²和-nr¹r²；

z表示-or³或＝o；和

r¹、r²和r³各自獨立地代表h、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基。

基于上述，四個特別感興趣的實施例包括式i至iv所示的分子：

化合物i：-5-[(e)-5-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-甲基-戊-1-烯基]-4-[(3e)-3-甲基六-3,5-二烯基]四氫呋喃-2-醇；

化合物ii：-叔丁基-[(e)-5-[5-甲氧基-3-[(3e)-3-甲基六-3,5-二烯基]四氫呋喃-2-基]-4-甲基-戊-4-烯氧基]-二甲基-硅烷；

化合物iii：-(e)-6-[2-[(e)-5-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-甲基-戊-1-烯基]-5-甲氧基-四氫呋喃-3-基]-4-甲基-己-3-烯-1-醇；

化合物iv：-(4s,5s)-5-[(e)-5-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-2-甲基-戊-1-烯基]-4-[(3e)-3-甲基六-3,5-二烯基]四氫呋喃-2-酮和其對映異構(gòu)體。

在化合物i至iii中，otbs表示叔丁基二甲基甲硅烷氧基，通常用作保護基的甲硅烷基。該基團可以被除去并在相應部位產(chǎn)生羥基。因此，化合物i至iv以及通常為式1所示的化合物也適合作為治療活性化合物的前體和前藥。

式i至iv中的虛線表示分子是外消旋混合物。

然而，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，還包括式1所示化合物的對映體純的異構(gòu)體，特別是通式1所示化合物的r-和s-異構(gòu)體，例如式i到iv所示化合物的r-和s-異構(gòu)體。

在整個說明書中，術(shù)語“藥學上可接受的鹽”是指由藥學上可接受的無毒酸或堿制備的鹽，其實例包括無機酸和堿以及有機酸和堿。適用于本發(fā)明化合物的藥學上可接受的堿加成鹽的實例包括但不限于由鋁，鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅形成的金屬鹽；和由賴氨酸、n,n’-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)和普魯卡因形成的有機鹽。

合適的無毒酸的實例包括但不限于無機酸和有機酸，例如乙酸、海藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富馬酸酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、對氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸和對甲苯磺酸。無毒酸的具體實例包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，鹽的具體實例包括鹽酸鹽和甲磺酸鹽。其它鹽是本領(lǐng)域已知的，描述于，例如，remington'spharmaceuticalsciences,18theds.

本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽可以是溶劑化物、水合物、包合物或前藥形式。

在本發(fā)明中，術(shù)語“溶劑化物”是指本發(fā)明的化合物或其鹽，還包括化學計量或非化學計量的由非共價分子間力結(jié)合的溶劑。溶劑優(yōu)選是揮發(fā)性的，無毒的和/或在非常少量對人給藥后相容的溶劑。

術(shù)語“水合物”是指本發(fā)明的化合物或其鹽進一步包括化學計量或非化學計量的由非共價分子間力結(jié)合的水。

術(shù)語“對映異構(gòu)體”是指具有彼此呈鏡像的兩種立體異構(gòu)體之一。

術(shù)語“外消旋體”是指手性分子的等量對映異構(gòu)體的混合物。

術(shù)語“非對映異構(gòu)體”是指一類立體異構(gòu)體之一，立體異構(gòu)體不是對映異構(gòu)體，而是在一個或多個等價手性中心處具有不同的構(gòu)型。非對映異構(gòu)體的實例是在僅一個手性中心的構(gòu)型上不同的差向異構(gòu)體。

術(shù)語“立體異構(gòu)體”是指具有相同分子式和鍵合原子順序的異構(gòu)體分子之一，但它們在空間中原子的三維取向不同。

術(shù)語“互變異構(gòu)體”是指易于通過化學反應相互轉(zhuǎn)化的異構(gòu)體分子。該反應通常導致氫原子的遷移，從而導致單鍵和相鄰雙鍵的轉(zhuǎn)換。

當與“人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病”一詞使用時，術(shù)語“相關(guān)”意味著hpv與疾病之間存在因果關(guān)系。因此，“相關(guān)”涵蓋了各種hpv誘導和hpv介導的疾病。這些疾病，例如，是由hpv感染引起的。

前藥是指作為無活性(或少于全活性的)化學衍生物給藥的藥物，其隨后通過正常的代謝過程轉(zhuǎn)化為身體中的活性藥理學藥物。

根據(jù)結(jié)果部分顯而易見的是，本發(fā)明化合物，例如化合物i至iv在hpv16陽性癌細胞(包括宮頸癌細胞和口咽癌細胞)中誘導細胞凋亡，表現(xiàn)出好的效果。

本發(fā)明化合物在下調(diào)引起hpv介導的宮頸癌的病毒癌蛋白e6和e7也是有效的，因此用作抗hpv抗癌藥物。類似地，本發(fā)明化合物在治療其他hpv介導的癌癥(包括口咽癌)也是有效的。

此外，本發(fā)明化合物，特別是化合物iii，通過在早期時間點(2小時)下調(diào)ciap2來誘導細胞凋亡。

化合物iii還通過在早期時間點(2小時)激活半胱天冬酶3和parp分裂來誘導細胞凋亡?；衔飅ii有效抑制cam模型的腫瘤生長。

此外，本發(fā)明化合物可以用于治療或預防哺乳動物癌癥或類似病癥的方法中，其中p53通路被病毒癌蛋白調(diào)控，該方法包括將治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物給予所述哺乳動物。

該化合物也可用于下調(diào)癌蛋白和凋亡蛋白2(c-iap2)的細胞抑制劑。

細胞周期停滯可通過激活p53-p21通路并誘導p53非依賴性細胞凋亡而重新激活。

本發(fā)明化合物可以通過marshall&dehoff先前描述的立體選擇性方法制備和表征。

方案1(下文)說明了合成本公開的各種化合物的機理的廣泛介紹。

方案2(下文)說明了合成本公開化合物iv的機理的廣泛介紹。

活性組分以有效量使用。

根據(jù)受試者的情況選擇給藥方式，劑量以及精確制劑。因此，可以單獨調(diào)整間隔以使血漿中活性化合物的水平足以維持并獲得期望的治療效果。然而，用于人的劑量通常在每日0.001mg/kg至約1000mg/kg的范圍內(nèi)，優(yōu)選每劑抑制劑在約0.1mg/kg至約500mg/kg的范圍內(nèi)。

通常，本發(fā)明化合物以0.001至100mg/kg體重給藥，例如以0.01至50mg/kg體重給藥。在一些實施方式中，可以以約0.1至約50mg/kg，約0.5至約40mg/kg或約0.7至約30mg/kg的劑量使用。預期的具體劑量包括上述范圍的0.1mg/kg增量的子范圍。

藥物組合物包含作為主要或唯一治療有效成分(或藥物)的本發(fā)明化合物。因此，在本技術(shù)的范圍內(nèi)，還提供了組合物，其中有效藥物包括或基本包括式1所示的化合物及其鹽。自然地，可以將式1所示的化合物與其它抗癌化合物，如酪氨酸激酶抑制劑(如帕唑帕尼)，血管生成劑如血管內(nèi)皮生長因子抑制劑(如貝伐單抗)，防風草酸及其衍生物組合。

藥物組合物可以是任何合適的形式。典型的藥物形式包括水懸浮液，油懸浮液，分散液以及用于臨時制備注射液或分散液的無菌粉末。其可局部(例如陰道內(nèi))給藥，例如以陰道乳膏的形式或通過緩釋固體制劑(例如緩釋膏藥)給藥。組合物也可以是無毒稀釋劑或溶劑的溶液或懸浮液，例如作為1,3-丁二醇溶液。

或者，它們可以作為微乳液制備并且，例如，口服給藥。

載體可以是含有，例如，水、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)，乙醇和指定組分的混合物，各種植物油，林格氏液和等滲氯化鈉溶液的溶劑或分散介質(zhì)。此外，固定油也可以用作溶劑或懸浮介質(zhì)。可以使用的固定油包括合成甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸(如油酸)可用于制備注射劑。

常規(guī)地，藥物組合物可以含有用于改變，維持或保持組合物的，例如，ph、重量摩爾滲透壓濃度、粘度、透明度、顏色、等滲性、氣味、無菌、穩(wěn)定性、溶解或釋放速率、吸附或滲透的制劑材料。

藥物組合物還可以通過吸入或通過消化道給藥，例如口服給藥。這種藥學上可接受的組合物的制備在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物可以存在于相同的藥物組合物中。它們也可以包含在，例如，以相同包裝提供的不同藥物組合物中。

盡管上述描述主要涉及的對象是人，但也包括獸用藥物組合物。

以下非限制性實施例說明本技術(shù)的實施方式。

實施例

實施例1.化合物的制備

除非另有說明，化學試劑來自商業(yè)供應商，不經(jīng)進一步純化即可使用。在即將使用前用二苯甲酮鈉法干燥thf。使用標準脈沖序列的brukeravance600mhz光譜儀記錄nmr光譜。使用配備了以正模式運行的esi(電噴射電離)的離子阱質(zhì)量檢測器的agilent1100獲得lcms數(shù)據(jù)。通過tlc監(jiān)測反應。使用鋁基tlc板(merck)硅膠60f254。

基于marshall&dehoff先前所述的立體選擇性方法，使用方案1中的結(jié)構(gòu)單元a或b的化合物作為起始原料制備化合物i至iii。a和b均由用文獻中已知的方法?；南闳~基制備。

化合物iv(方案2)的制備。

中間體int1：將化合物iii(680mg，1.723mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，一次加入氯鉻酸吡啶鎓(431mg，2mmol)。將混合物在室溫下攪拌3小時。然后將混合物用30ml乙醚稀釋并通過硅藻土(celite)墊過濾，將濾液蒸干。殘余物在氯仿中通過快速色譜法純化，得到化合物int1(570mg，產(chǎn)率84.2％)，為無色油狀物。

中間體int2：將化合物int1(570mg，1.45mmol)溶于四氫呋喃(50ml)中，一次加入1m四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(2.9ml，2.9mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。然后將反應混合物用50ml飽和氯化銨水溶液稀釋，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。將合并的有機萃取液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜純化(洗脫液為氯仿/丙酮10:1)，得到化合物int2(309mg，收率76％)，為無色油狀物。

化合物iv：將中間體int2(200mg，0.68mmol)溶于二甲基甲酰胺(3ml)中并冷卻至-20℃。然后滴加1m雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰的四氫呋喃溶液(0.68ml，0.68mmol)。將反應混合物在-20℃下攪拌20分鐘，然后加入4-甲氧基-芐基溴(128mg，0.75mmol)。停止冷卻，將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然后用水(15ml)稀釋，并用乙醚(3×15ml)萃取。合并有機萃取液，用水(3×30ml)和鹽水(30ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，然后濃縮至干。殘余物通過硅膠柱色譜純化(洗脫劑為乙酸乙酯/己烷1:10)，得到化合物iv(110mg，產(chǎn)率41.3％)，為無色油狀物。

¹hnmr(600mhz,cdcl3)δppm1.41-1.52(m,1h)，1.61-1.71(m,1h)，1.71-1.74(m,2h)，1.75(s,3h)，1.76(d,j＝1.13hz,3h)，1.98-2.12(m,2h)，2.16(t,j＝7.37hz,2h)，2.19-2.27(m,1h)，2.34-2.39(m,1h)，2.70(dd,j＝17.00,7.93hz,1h)，3.45(t,j＝6.42hz,2h)，3.82(s,3h)，4.41-4.46(m,2h)，4.79(t,j＝8.69hz,1h)，4.97-5.07(m,1h)，5.13(d,j＝16.62hz,1h)，5.19(d,j＝8.69hz,1h)，5.84(d,j＝10.58hz,1h)，6.56(dt,j＝16.71,10.53hz,1h)，6.90(dt,j＝8.69,2.27hz,2h)，7.27(dt,j＝8.70,2.27hz,2h)。

¹³cnmr(151mhz,cdcl3)δppm166.4，17.0，27.7，30.0，30.2，30.3，35.5，36.0，55.3，69.2，72.6，82.2，113.8，113.8，115.6，122.0，126.3，129.3，129.3，130.6，132.9，137.7，143.9，159.2，176.4。

lcms

使用lc-ms(agilentzorbaxeclipsexdb-c8柱；流動相：乙腈(a)，0.5％tfa的h2o溶液(b)；流速：0.7ml/min)分析化合物iv樣品，線性梯度為50％-95％。ms最強離子范圍(+)-esi-ms(m/z200-1600)(tr10.8min)為m/z399[m+h]。

實施例2.細胞培養(yǎng)和處理

將siha宮頸癌細胞在dmem(sigma-aldrich，stlouis，mo，usa)中培養(yǎng)。培養(yǎng)基中還添加有10％胎牛血清(bioclear，wiltshire，uk)，2mml-谷氨酰胺，100u/ml青霉素(penciliin)，100μg/ml鏈霉素(sigma-aldrich)。

實施例3.凋亡參數(shù)的檢測

用0-40μm化合物處理siha細胞。24小時后，收集細胞并分析凋亡和/或壞死情況。根據(jù)制造商的方案(pe活性半胱天冬酶-3凋亡試劑盒；bdpharmingen，sandiego，ca)，用藻紅蛋白結(jié)合的抗體標記細胞中活化的半胱天冬酶-3，并通過facscalibur流式細胞儀(fl-2，fsc，bdpharmingen)進行分析。

將接種在96孔板上的一式三份樣品的細胞進行細胞凋亡流式細胞分析。細胞用不同濃度的化合物iii預處理0-6小時，然后用培養(yǎng)板旋轉(zhuǎn)器將板離心(1000rpm，5分鐘)。為了分析細胞核碎裂，向孔中加入碘化丙啶(pi)緩沖液(40mm檸檬酸鈉，0.3％tritonx-100，50μg/mlpi；sigma)。在室溫下培養(yǎng)10分鐘后，用具有hts平臺(pe-a通道)的lsrii流式細胞儀分析板。亞g0/g1事件(細胞核碎裂)的分數(shù)為凋亡細胞死亡的量度。

實施例4.蛋白質(zhì)印跡(westernblotting)分析

通過在laemmli樣品緩沖液中裂解懸浮和貼壁細胞并將樣品煮沸10分鐘來制備全細胞裂解物。通過sds-page分離蛋白質(zhì)并轉(zhuǎn)移到pvdf膜(millipore)上。使用半胱天冬酶3抗體(cellsignalingtechnology)，聚(adp-核糖)聚合酶(clonec-2-10；sigma-aldrich)，hpv16e6(n-17)(santacruz)，ciap2(santacruz)和肌動蛋白(cloneac-40；sigma-aldrich)進行蛋白質(zhì)印記(westernblotting)分析。hrp結(jié)合二抗來自southernbiotechnologyassociates，promega和amershambiosciences。使用ecl方法(amershambiosciences)在x射線膠片上顯現(xiàn)結(jié)果。

實施例5.卵內(nèi)絨毛尿囊膜(cam)模型

cam根據(jù)前述方法制備。受精的白來亨雞蛋從芬蘭的lskpoultyoy獲得。雞蛋用70％乙醇消毒，并在37℃65％相對濕度下轉(zhuǎn)入孵化培養(yǎng)箱(savimatmg200，chauffry，fr)，自動轉(zhuǎn)動3天。在胚胎發(fā)育日(edd)3，在蛋殼上鉆一個直徑約3mm的孔并用(pechiney，menasha，usa)覆蓋，然后放回培養(yǎng)箱中直至使用。在edd8，將蛋殼上的孔擴大到約3cm，以便更好地進行腫瘤細胞植入。在cam上沉積聚乙烯環(huán)(厚度約0.5毫米，內(nèi)徑7毫米)。然后，將1.5×10⁵個siha細胞與生長因子減少的matrigel(bdbiosciences，usa)接種在cam上的環(huán)內(nèi)，matrigel以1:1的比例與無血清dmem培養(yǎng)基混合。植入后，再次覆蓋蛋殼并放回培養(yǎng)箱。為了cam測定，從edd9-13將不同劑量(0-6mg/kg)的化合物iii局部(20μl)加入到cam腫瘤中，在每天的同一時間進行添加。在edd14，從cam膜收獲腫瘤異種移植物并稱重。結(jié)果重復至少3次。在每個實驗中，對于每個化合物劑量，評估7-10個蛋的結(jié)果。

實施例6.形態(tài)染色和免疫組織化學

從石蠟固定的cam腫瘤樣品中垂直取5微米厚的切片，并進行h&e染色。使用安裝到dmlb顯微鏡(leica)上的dc300f數(shù)碼相機拍攝圖像。在組織切片的免疫組織化學分析中，基于抗原啟示，組織用hrp結(jié)合抗體進行免疫組織化學染色，并使用abc染色系統(tǒng)(vectorlab，ca，usa)顯現(xiàn)。最后所有切片用mayers蘇木精(histolab，gothenburg，sweden)進行復染。

使用同種型和濃度匹配的一抗作為陰性對照，均為陰性。

結(jié)果

本發(fā)明的實施方式涉及式i所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其衍生物作為活性成分的新用途；并用于哺乳動物中的抗宮頸癌和抗口咽癌治療和抗病毒治療。

為了發(fā)現(xiàn)化合物敏感hpv介導的siha宮頸癌細胞凋亡的能力，我們測定了四種化合物i，ii，iii和iv(圖1b)。最初用化合物處理細胞24小時，然后分析細胞的半胱天冬酶3活化情況。本發(fā)明報道的結(jié)果表明，這四種化合物對siha都具有細胞毒性(圖2a)。

然而，發(fā)現(xiàn)化合物iii是高度有效的，因此使用96孔形式的lsrii流式細胞儀hts-單元進行細胞核碎裂測定，以分析時間和劑量的依賴性。碘化丙啶標記的dna片段的形成(圖2)用作凋亡細胞死亡的主要指標。為了進一步證實化合物iii在siha細胞中的凋亡作用，我們進行了蛋白質(zhì)印跡(westernblot)，以評估半胱天冬酶原-3，parp的水解酶切，和hpv腫瘤蛋白hpv16e6的表達。

結(jié)果表明，40μm復合物iii自身裂解半胱天冬酶-3，parp，并在2小時時下調(diào)e6和ciap2(圖3)，表明化合物iii在較早時間點的作用。這些結(jié)果清楚地表明化合物iii在誘導細胞凋亡方面是非常有效的。

cam模型可用于研究化合物iii的初步體內(nèi)功效。通過局部給藥在cam上生長的宮頸腫瘤(siha)測試化合物iii的功效。siha的劑量依賴性抑制，化合物iii對cam上的宮頸腫瘤生長如圖4所示。雖然cam模型中的siha細胞迅速形成突出的腫瘤，但4mg/kg的劑量會抑制腫瘤生長，6mg/kg的劑量能夠消耗已經(jīng)形成的腫瘤(圖4a)。蘇木精/伊紅(h&e)染色以及使用增殖和凋亡標記物的免疫組化進一步證實了化合物iii對腫瘤生長抑制的作用(圖4b-c，數(shù)據(jù)未顯示)。如圖4b所示，代表性對照切片在cam組織上顯示密集的腫瘤細胞，而在劑量為2mg/ml的化合物iii時，腫瘤生長的消退開始很明顯。

化合物iii的效果是劑量依賴性的，如4mg/ml時的腫瘤大小明顯小于對照樣品，在6mg/ml時，腫瘤幾乎完全消退。圖4c的定量結(jié)果進一步證實，在卵內(nèi)腫瘤模型中，化合物iii以劑量依賴的方式誘導細胞凋亡。

以下實施例是本發(fā)明的特征：

1.一種作為藥物使用的式1所示的化合物，

其中，x表示烷基，亞烷基，烯基，亞烯基，炔基或亞炔基，任選具有至少一個選自含有-or¹和-nr¹r²的組的取代基；

y表示-otbs、-or¹和-nr¹r²；

z表示-or³或＝o；和

r¹、r²和r³各自獨立地代表h、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基。

2.一種式1所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，

其中，x表示烷基、亞烷基、烯基、亞烯基、炔基或亞炔基，任選具有至少一個選自含有-or¹和-nr¹r²的組的取代基；

y表示-otbs、-or¹和-nr¹r²；

z表示-or³或＝o；和

r¹、r²和r³各自獨立地代表h、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，

其用于治療哺乳動物的抗病毒癌癥，用于治療人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，例如良性或腫瘤性生殖器官人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，或用于治療非生殖器疣。

3.根據(jù)實施方式2所述的化合物，其用于治療人乳頭狀瘤病毒介導的生殖器疣。

4.根據(jù)實施方式2或3所述的化合物，其中，x表示羥基，y表示-otbs，z表示-or³或＝o，其中r³表示具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基。

5.根據(jù)實施方式2至4中任一項所述的化合物，其選自

-5-[(e)-5-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-甲基-戊-1-烯基]-4-[(3e)-3-甲基六-3,5-二烯基]四氫呋喃-2-醇；

-叔丁基-[(e)-5-[5-甲氧基-3-[(3e)-3-甲基六-3,5-二烯基]四氫呋喃-2-基]-4-甲基-戊-4-烯氧基]-二甲基-硅烷；

-(e)-6-[2-[(e)-5-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基-2-甲基-戊-1-烯基]-5-甲氧基-四氫呋喃-3-基]-4-甲基-己-3-烯-1-醇；和

-(4s,5s)-5-[(e)-5-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-2-甲基-戊-1-烯基]-4-[(3e)-3-甲基六-3,5-二烯基]四氫呋喃-2-酮和其對映異構(gòu)體。

6.根據(jù)實施方式1至5中任一項所述的化合物，其以外消旋混合物或?qū)τ钞悩?gòu)體形式存在，特別是r-或s-對映異構(gòu)體。

7.一種用于治療哺乳動物抗病毒癌癥的藥物組合物，其包含治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物，所述化合物任選以外消旋混合物或?qū)τ丑w形式存在，具體地，所述組合物的治療有效化合物基本上包括治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物，所述化合物任選以外消旋混合物或?qū)τ丑w形式存在。

8.一種用于治療良性或腫瘤性生殖器官人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，特別是人乳頭狀瘤病毒介導的生殖器疣，以及用于治療非生殖器疣的藥物組合物，其包括治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物，所述化合物任選以外消旋混合物或?qū)τ钞悩?gòu)體的形式存在。

9.式1所示的化合物或其鹽或衍生物作為藥物的應用，其中取代基x、y、z、r¹、r²和r³具有與上述相同的含義，所述化合物任選以外消旋混合物或?qū)τ丑w的形式存在。

10.式1所示的化合物或其鹽或衍生物治療哺乳動物的抗病毒癌癥，治療人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，例如良性或腫瘤性生殖器官人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，或治療非生殖器疣的應用，其中取代基x、y、z、r¹、r²和r³具有與上述相同的含義，所述化合物任選以外消旋混合物或?qū)τ丑w的形式存在。

11.一種用于治療或預防哺乳動物癌癥或類似病癥的方法，其中所述p53通路通過病毒癌蛋白解除調(diào)控(deregulated)，包括給予所述哺乳動物治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物，其中取代基x、y、z、r¹、r²和r³具有與上述相同的含義，所述化合物任選地以外消旋混合物或光學純對映異構(gòu)體的形式存在。

12.根據(jù)實施方式11所述的方法，其包括治療或預防子宮頸癌或口咽癌。

13.根據(jù)實施方式11或12所述的方法，其包括下調(diào)癌蛋白和凋亡蛋白2(c-iap2)的細胞抑制劑。

14.根據(jù)實施方式11至13中任一項所述的方法，其包括通過激活p53-p21通路并且誘導不依賴于p53的細胞凋亡重新激活細胞周期停滯。

15.根據(jù)實施方式11至14中任一項所述的方法，其包括治療人乳頭狀瘤病毒介導的癌癥。

16.根據(jù)實施方式11至15中任一項所述的方法，其包括給予哺乳動物式1所示的化合物或其鹽或衍生物，其中取代基x、y、z、r¹、r²和r³具有與上述相同的含義，其劑量為每日0.001mg/kg至約1000mg/kg體重，優(yōu)選約0.1mg/kg至約500mg/kg體重，特別是0.001至100mg/kg體重，有利地為0.01至50mg/kg體重。

17.一種治療人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，例如良性或腫瘤性生殖器官人乳頭狀瘤病毒相關(guān)疾病，特別是人乳頭狀瘤病毒介導的疣，生殖器和非生殖器疣的方法，包括給予所述哺乳動物治療有效量的式1所示的化合物或其鹽或衍生物，其中取代基x、y、z、r¹、r²和r³具有與上述相同的含義，所述化合物任選以外消旋混合物或光學純對映體形式存在。

18.根據(jù)實施方式17所述的方法，其包括局部給予哺乳動物式1所示的化合物或其鹽或衍生物，其中取代基x、y、z、r¹、r²和r³具有與上述相同的含義。

應當理解，所公開的本發(fā)明的實施方式不限于本發(fā)明公開的特定結(jié)構(gòu)，工藝步驟或材料，而是延伸到其相關(guān)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以認識到的等同物。還應當理解，本發(fā)明采用的術(shù)語僅用于描述特定實施方式，而不是限制性的。

在本說明書中，對“一個實施方式”或“實施方式”的引用意味著結(jié)合實施方式描述的特定特征，結(jié)構(gòu)或特性包括在本發(fā)明的至少一個實施方式中。因此，貫穿本說明書的各個地方的短語“在一個實施方式中”或“在實施方式中”不一定都指代相同的實施方式。

如本發(fā)明所使用的，為了方便起見，可以在公用列表中呈現(xiàn)多個項目，結(jié)構(gòu)元件，組成元件和/或材料。然而，這些列表應該被解釋為列表中的每個成員單獨地標識為獨立且唯一的成員。因此，僅基于他們呈現(xiàn)在一個共同組中，而沒有相反的指示的情況下，該列表的任何成員都不應視為同一列表中任何其他成員事實上的等同物。另外，本發(fā)明的各種實施方式和實施例也可以是各種組分的替代方案。

應當理解，這樣的實施方式，實施例和替代方案不應被解釋為彼此的事實上的等同物，而是被認為是本發(fā)明的單獨且自主的表示。此外，所描述的特征，結(jié)構(gòu)或特性可以以任何合適的方式組合在一個或多個實施方式中。在下面的描述中，提供了許多具體細節(jié)，例如長度，寬度，形狀等的實例，以便透徹地理解本發(fā)明的實施方式。然而，相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，可以在沒有一個或多個具體細節(jié)的情況下，或與其他方法，組件，材料等一起實踐本發(fā)明。在其他情況下，公知的結(jié)構(gòu)，材料或操作未詳細示出或描述以避免模糊本發(fā)明。

雖然前述實例在一個或多個特定應用中說明了本發(fā)明的原則，但是對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明的原則和思想的情況下，對實施的形式，用途和細節(jié)方面進行的不經(jīng)創(chuàng)造性的修改是顯而易見的。因此，除了下面所提出的權(quán)利要求之外，并不意圖限制本發(fā)明。

工業(yè)實用性

如上所述，本發(fā)明的分子適用于制備用于哺乳動物抗宮頸癌和抗病毒治療的藥物活性組合物。此外，本發(fā)明的分子適用于治療和預防頭頸癌，特別是hpv介導的癌癥，如口咽癌。本發(fā)明的分子也可用作具有這種活性的化合物的中間體，前體和前藥。

引用列表

專利文獻

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非專利文獻

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