本發(fā)明涉及一種海產(chǎn)品中小分子多肽的提取方法，具體是一種小分子貝類多肽的提取方法。

背景技術(shù)：

隨著科技的飛速發(fā)展和營(yíng)養(yǎng)知識(shí)的普及，以及人均收入水平的增加和消費(fèi)水平的提高，人類對(duì)于食品的要求已經(jīng)從溫飽過渡到了營(yíng)養(yǎng)水平，天然、健康、營(yíng)養(yǎng)、安全已經(jīng)成為21世紀(jì)食品工業(yè)發(fā)展的主要議題。膠原蛋白作為一種重要的生物體組織結(jié)構(gòu)蛋白多肽，越來越引起人們的關(guān)注和興趣，市場(chǎng)潛力巨大，經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高。與大分子蛋白質(zhì)相比，膠原蛋白小分子活性多肽不僅具有合成成本低、利用率高、毒性和免疫原性低等特點(diǎn)，還具有高效的抗氧化、抗菌和抗癌等藥理作用，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、美容保健和食品行業(yè)。

海洋中的生物種類繁多，資源極其豐富，而且生物鏈基本健全，再生能力強(qiáng)。海洋生物含有豐富的有益于人類健康的蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、牛磺酸，其微量元素譜系也大大優(yōu)于陸地生物，是人類健康食品極好的來源。海洋環(huán)境與陸地環(huán)境有很大的不同，如高壓、低溫、高溫(海底火山口及附近)和高鹽等。為了適用海洋環(huán)境，海洋生物蛋白質(zhì)無論氨基酸的組成還是氨基酸的序列都與陸地生物蛋白質(zhì)有很大的區(qū)別。同時(shí)，海洋生物蛋白資源無論在種類還是數(shù)量上都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于陸地蛋白質(zhì)資源。種類繁多的蛋白氨基酸序列，用特異的蛋白酶水解，可釋放出具有生理功能的功能肽。因此，采用現(xiàn)代分離技術(shù)對(duì)這些資源進(jìn)行開發(fā)利用，將是當(dāng)今科學(xué)研究最具發(fā)展前景的領(lǐng)域之一。

從不同原料中提取多肽的傳統(tǒng)工藝主要可分為五類，即酸法、堿法、酶法、鹽法以及熱水浸提法，其基本原理都是根據(jù)多肽的特性，改變蛋白質(zhì)的外界環(huán)境，把多肽從其他蛋白質(zhì)中分離出來。酸法和堿法是分別將多肽在酸性和堿性環(huán)境下提取出來的方法，酸法在多肽的提取工藝中應(yīng)用比較廣泛，而堿法報(bào)道很少；鹽法是將原料在一定濃度的鹽溶液中提取出來，主要使用的鹽有氯化鈉、氯化鉀和乙酸鈉。以上三種方法雖然工藝簡(jiǎn)單，成本也較低，但是由于提取過程中需要使用大量的淡水和酸堿鹽，屬于高能耗的提取方法，排放的酸堿鹽會(huì)對(duì)周圍生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生不利影響，不符合綠色經(jīng)濟(jì)和可持續(xù)性發(fā)展理念。而熱水浸提法需要使用大量的淡水和能源，不符合國(guó)家及世界經(jīng)濟(jì)發(fā)展的主流。生物酶法是利用酶反應(yīng)的溫和高效性在一定的環(huán)境條件下將多肽從不同的原料中提起出來的方法，可克服上述其他工藝的不足，是一種升級(jí)的工藝。

貝類是最常見的海洋軟體動(dòng)物，絕大多數(shù)貝類可食用，其肉質(zhì)肥嫩，鮮美可口，富含優(yōu)質(zhì)的高活性膠原蛋白。目前對(duì)于貝類的食用，主要以鮮食、干制、腌制、罐藏為主，而以貝類為原料的高附加值產(chǎn)品較少，業(yè)內(nèi)尚未開發(fā)出針對(duì)小分子貝類多肽提取的行之有效的方法，工業(yè)化提取小分子貝類多肽，在技術(shù)和應(yīng)用上還是空白。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：提供一種小分子貝類多肽的提取方法，該提取方法可操作性強(qiáng)，制備得到的小分子貝類多肽的純度高，可有效保證小分子貝類多肽的生物活性。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種小分子貝類多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)粗洗：以新鮮的貝類為原料，用清水洗盡表面泥沙；

(2)去殼：將洗凈的帶殼原料和燒至100℃的自來水以1:1的重量比混合后，燒煮10～20分鐘后，取出貝肉；

(3)浸泡、精洗：用0～5℃的自來水浸泡貝肉24小時(shí)，然后采用0～5℃的自來水反復(fù)清洗3～6次；

(4)晾干：用風(fēng)扇以6級(jí)風(fēng)力吹風(fēng)6～20小時(shí)，至貝肉含水量低于40％；

(5)酶解：將晾干后的貝肉和自來水或純凈水以1:1～3的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入膠原蛋白酶和木瓜蛋白酶，膠原蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.1～3％，木瓜蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.2～3％，以40～60℃的溫度酶解3～16小時(shí)，得到酶解產(chǎn)物；

(6)分離：將酶解產(chǎn)物用孔徑3000～80000道爾頓的超濾膜分離，取下清液；

(7)濃縮：對(duì)步驟(6)中得到的下清液用孔徑小于100道爾頓的納濾膜濃縮，取上清液；

(8)干燥：對(duì)步驟(7)中得到的上清液采用噴霧干燥機(jī)或凍干機(jī)進(jìn)行干燥，即得到小分子貝類多肽成品。

作為優(yōu)選，所述的膠原蛋白酶和所述的木瓜蛋白酶的重量比為1:1。

作為優(yōu)選，所述的新鮮的貝類為海紅、文蛤和縊蟶中的至少一種。

作為優(yōu)選，所述的噴霧干燥機(jī)干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為120～150℃，所述的凍干機(jī)干燥的溫度為零下60℃。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明提供的一種小分子貝類多肽的提取方法，將生物酶解技術(shù)和膜技術(shù)進(jìn)行科學(xué)合理的整合，通過膠原蛋白酶和木瓜蛋白酶復(fù)配而成的復(fù)合酶對(duì)原料進(jìn)行生物酶解，再先后經(jīng)過特定截留分子量的超濾膜和納濾膜分離濃縮提純，得到含有小分子貝類多肽的濃縮液，最后對(duì)該濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得到小分子貝類多肽成品。本發(fā)明提取方法可操作性強(qiáng)，制備得到的小分子貝類多肽的純度高，可有效保證小分子貝類多肽的生物活性，后續(xù)可作為各種高附加值產(chǎn)品的原料，具有廣闊的市場(chǎng)空間和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1的小分子貝類多肽的色譜圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實(shí)施例1的小分子貝類多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)粗洗：以新鮮的海紅和文蛤?yàn)樵?，用清水洗盡表面泥沙；

(2)去殼：將洗凈的帶殼原料和燒至100℃的自來水以1:1的重量比混合后，燒煮12分鐘后，取出貝肉；

(3)浸泡、精洗：用2℃的自來水浸泡貝肉24小時(shí)，然后采用2℃的自來水反復(fù)清洗3次；

(4)晾干：用風(fēng)扇以6級(jí)風(fēng)力吹風(fēng)10小時(shí)，至貝肉含水量低于40％；

(5)酶解：將晾干后的貝肉和自來水或純凈水以1:2的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入膠原蛋白酶和木瓜蛋白酶，膠原蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.6％，木瓜蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.6％，以50℃的溫度酶解12小時(shí)，得到酶解產(chǎn)物；

(6)分離：將酶解產(chǎn)物用孔徑3000～80000道爾頓的超濾膜分離，取下清液；

(7)濃縮：對(duì)步驟(6)中得到的下清液用孔徑80道爾頓的納濾膜濃縮，取上清液；

(8)干燥：對(duì)步驟(7)中得到的上清液采用噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為135℃，即得到實(shí)施例1的小分子貝類多肽成品。

實(shí)施例2的小分子貝類多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)粗洗：以新鮮的縊蟶為原料，用清水洗盡表面泥沙；

(2)去殼：將洗凈的帶殼原料和燒至100℃的自來水以1:1的重量比混合后，燒煮15分鐘后，取出貝肉；

(3)浸泡、精洗：用4℃的自來水浸泡貝肉24小時(shí)，然后采用4℃的自來水反復(fù)清洗4次；

(4)晾干：用風(fēng)扇以6級(jí)風(fēng)力吹風(fēng)8小時(shí)，至貝肉含水量低于40％；

(5)酶解：將晾干后的貝肉和自來水或純凈水以1:1的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入膠原蛋白酶和木瓜蛋白酶，膠原蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.5％，木瓜蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.4％，以55℃的溫度酶解8小時(shí)，得到酶解產(chǎn)物；

(6)分離：將酶解產(chǎn)物用孔徑3000～80000道爾頓的超濾膜分離，取下清液；

(7)濃縮：對(duì)步驟(6)中得到的下清液用孔徑50道爾頓的納濾膜濃縮，取上清液；

(8)干燥：對(duì)步驟(7)中得到的上清液采用噴霧干燥機(jī)進(jìn)行干燥，噴霧干燥機(jī)干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為130℃，即得到實(shí)施例2的小分子貝類多肽成品。

實(shí)施例3的小分子貝類多肽的提取方法，包括以下步驟：

(1)粗洗：以新鮮的海紅、文蛤和縊蟶為原料，用清水洗盡表面泥沙；

(2)去殼：將洗凈的帶殼原料和燒至100℃的自來水以1:1的重量比混合后，燒煮10～20分鐘后，取出貝肉；

(3)浸泡、精洗：用1℃的自來水浸泡貝肉24小時(shí)，然后采用1℃的自來水反復(fù)清洗5次；

(4)晾干：用風(fēng)扇以6級(jí)風(fēng)力吹風(fēng)18小時(shí)，至貝肉含水量低于40％；

(5)酶解：將晾干后的貝肉和自來水或純凈水以1:3的重量比加至生物酶解罐中，并向生物酶解罐中加入膠原蛋白酶和木瓜蛋白酶，膠原蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.9％，木瓜蛋白酶的加入量為晾干后的貝肉重量的0.9％，以45℃的溫度酶解15小時(shí)，得到酶解產(chǎn)物；

(6)分離：將酶解產(chǎn)物用孔徑3000～80000道爾頓的超濾膜分離，取下清液；

(7)濃縮：對(duì)步驟(6)中得到的下清液用孔徑90道爾頓的納濾膜濃縮，取上清液；

(8)干燥：對(duì)步驟(7)中得到的上清液采用凍干機(jī)進(jìn)行干燥，凍干機(jī)干燥的溫度為零下60℃，即得到實(shí)施例3的小分子貝類多肽成品。

對(duì)于實(shí)施例1的小分子貝類多肽成品，通過高效液相色譜儀并依據(jù)GB/T 22729-2008《海洋魚低聚肽粉》檢測(cè)肽分子量分布，得到的色譜圖見圖1，分子量檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1實(shí)施例1的小分子貝類多肽成品的分子量檢測(cè)結(jié)果

從表1可見，實(shí)施例1的小分子貝類多肽成品中，分子量小于2000道爾頓的多肽的重量比為98.52％。