本發(fā)明涉及一種芽孢桿菌抗菌肽的制備方法和在畜禽養(yǎng)殖中的應用，尤其適用于畜禽飼料添加劑，屬于飼用微生物添加劑
技術領域：
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背景技術：
：抗生素在畜禽飼料中的長期使用帶來的畜禽類產品的食品安全性問題已經越來越受到人們的關注，因為濫用抗生素導致動物腸道的正常菌群平衡受到破壞，同時，濫用導致耐藥性的產生以及藥物殘留等問題給動物和人類的健康帶來了巨大的威脅和危害，所以尋求有效、安全、綠色、天然的飼用抗生素替代產品，成為了畜禽養(yǎng)殖行業(yè)關注的熱點問題?？咕氖巧矬w產生一種天然的活性免疫多肽，具有抗菌、抗病毒、抗真菌及提高機體免疫的作用。近年來，抗菌肽作為一種新型飼料添加劑在畜牧中得到了部分應用，其提高養(yǎng)殖動物的健康水平和生產性能的功效已經得到人們的普遍認可，是公認的飼用抗生素的最佳替代品之一?？咕牡纳a制備方法有三種，分別為化學合成，生物提取和微生物發(fā)酵方法生產。而產用微生物發(fā)酵方法生產是一種低廉和高效的制備和生產抗菌肽的方法。許多通過發(fā)酵法生產的抗菌肽已經在食品中得到應用，如乳鏈球菌產生的Nisin目前廣泛應用在食品保鮮和防腐。但抗菌肽作為飼料添加劑應用較少，本研究就是針對飼料添加劑方而開發(fā)的一種抗菌肽。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一個目的是提供了淀粉液化芽孢桿菌（Bacillusamylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1的高效制備方法，按照此方法生產抗菌肽WJ-1的發(fā)酵分泌量可達到4.5g/L。所述制備方法的具體步驟如下：（1）斜面菌種的活化：從淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4的保藏甘油管中挑一環(huán)菌液劃線于營養(yǎng)瓊脂平板，于32-37℃，培養(yǎng)15-20h，使芽孢桿菌復壯，并長出單菌落，挑單菌落劃線于斜面培養(yǎng)基進行活化，所述斜面培養(yǎng)基同樣是營養(yǎng)瓊脂，配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15-20g，pH值為7.2-7.4，常規(guī)滅菌。（2）種子搖瓶的制備：從上述活化好的斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250-300mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37℃，振蕩培養(yǎng)20-30h，即得淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4的搖瓶種子液，活菌數(shù)為1×109CFU/mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀1g，一水合硫酸錳0.1g，pH值為7.4，常規(guī)滅菌。（3）種子罐的培養(yǎng)：將上述制備好的搖瓶種子液按照1%（v/v）的接種量接入裝有50L種子發(fā)酵培養(yǎng)基的100L種子發(fā)酵罐中，于35-37℃，培養(yǎng)20-25h，攪拌轉速為250-300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑。得到二級種子發(fā)酵液，活菌數(shù)為3.2×109CFU/mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致。（4）生產發(fā)酵：將上述制備好的種子發(fā)酵液按照1-2%（v/v）的接種量接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L生產發(fā)酵罐中，于35-37℃，發(fā)酵25-30h，攪拌轉速為250-300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑。發(fā)酵結束獲得淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4的活菌發(fā)酵液。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏5g，葡萄糖10g，三水合磷酸氫二鉀1g，一水合硫酸錳0.15g，七水合硫酸鎂0.3g，pH值為7.2。（5）發(fā)酵液后處理：發(fā)酵結束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機（15000-20000rpm）分離菌體和上清液，上清液后轉移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質量比為3:1的比例向混合攪拌罐中加入載體，載體配方為50%的麥芽糊精+20%海藻糖+30%淀粉，與上清液混合均勻。同時將噴霧干燥設備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進口溫度達到180-200℃，出口溫度達到110-140℃，塔內壓力保持在-12-18Pa，然后打開進料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90℃時，打開打漿泵，將上清液和載體混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內壓力及進出口溫度的穩(wěn)定，干燥后的干粉為活性抗菌肽干燥菌粉。利用抑菌圈法和高效液相法定性和定量干粉抗菌肽的含量。本發(fā)明的第二個目的是提供抗菌肽WJ-1作為畜禽飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖中的應用，是將該添加劑成品菌粉以0.05-0.1‰的比例拌入畜禽全價飼料，用于畜禽養(yǎng)殖全程。經畜禽飼喂試驗證明，本發(fā)明的飼料添加劑可以顯著提高畜禽生產性能，促進畜禽生長，增強機體的抗病能力，降低幼齡動物死亡率，減少抗生素的使用，降低糞便排泄量，減少糞臭，改善養(yǎng)殖環(huán)境?；谏鲜鎏匦?，本發(fā)明提供的淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1具有顯著的促生長和減少藥物使用的作用。由該菌株制備的抗菌肽可以用作畜禽微生物飼料添加劑，具有提高畜禽生產性能，減少用藥，促進畜禽生長，增強畜禽機體免疫力，降低幼齡動物死亡率，降低糞便排泄量，減少糞臭，改善養(yǎng)殖環(huán)境的有益功效。附圖說明圖1為抗菌肽WJ-1對人工胃液的耐受性。圖2為抗菌肽WJ-1對腸液的耐受性。圖3為淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1對金黃色葡萄球菌和沙門氏桿菌的抑菌效果，其中無抑菌圈的是空白培養(yǎng)基對照組；有抑菌圈的是淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1的培養(yǎng)液的上清液。圖4為淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4在5000L生產發(fā)酵罐條件下抗菌肽WJ-1的含量。具體實施方式以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實施例一：淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1的抑菌活性的測定1.培養(yǎng)液上清的制備從淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4的保藏斜面挑一環(huán)菌苔接種于肉湯培養(yǎng)基中，37℃，180rpm振蕩培養(yǎng)22h，取1mL菌液12000rpm離心1min，取上清液。2.抑菌活性檢測平板的制備將15mL完全熔化的LB瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，待其凝固后垂直放上牛津杯；另取完全熔化的LB瓊脂培養(yǎng)基，待其冷卻到55℃時加入指示菌混勻，取10mL混有指示菌的培養(yǎng)基倒入放有牛津杯的培養(yǎng)皿中，待完全凝固后拔出牛津杯，制成檢測平板。所述指示菌包括大腸桿菌、沙門氏菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌。3.抑菌活性的測定取200μL培養(yǎng)液上清加入檢測平板的孔中，4℃放置24h后放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h，測得抑菌圈直徑大小為20-30mm。實施例二：淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1的定量測定從淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4的保藏斜面挑一環(huán)菌苔接種于肉湯培養(yǎng)基中，37℃，180rpm振蕩培養(yǎng)22h，取1mL菌液12000rpm離心1min，取上清液?？咕姆郯凑?%溶到去離子水溶液中。采用高效液相色譜法測定枯草菌素抗菌肽WJ-1含量。色譜柱：Poroshell120EC-C82.7μm3.0*50mm；色譜方法：流速0.8mL/min，柱壓200bar；流動相A：水+0.1%TFA，流動相B：80%乙腈+0.085%TFA；柱溫：30℃；進樣體積為50μl，每個樣品檢測3次，樣品檢測完后再次檢測內控品，洗脫程序見表1。其出峰時間為3.932min。根據(jù)樣品峰面積與濃度之間的正比關系，通過制作標準曲線測定出不同菌株發(fā)酵上清液中的枯草菌素抗菌肽WJ-1的含量。表1梯度洗脫程序實施例三：淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1耐受人工胃腸消化液。從淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4發(fā)酵液離心后，得到發(fā)酵代謝產物抗菌肽WJ-1。吸取10mL發(fā)酵代謝產物抗菌肽WJ-1分別接于裝有90mLpH3=3.5的人工胃液以及pH=6.5人工胰液三角瓶中。然后在37℃，靜置培養(yǎng)2h，分別通過抑菌圈法測定0、0.5、1、1.5、2h對培養(yǎng)物的抑菌活性，即抑菌圈的直徑，初步推斷人工胃液和胰液處理后抗菌肽的抗菌活性。測定結果顯示，淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1在人工胃液和胰液處理后，仍然具有抗菌活性，說明其能夠耐受胃液和胰液的消化。實施例四：淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1作為畜禽飼料添加劑的制備根據(jù)淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4產抗菌肽的特性，經過培養(yǎng)基優(yōu)化和發(fā)酵條件優(yōu)化，最終形成了最優(yōu)的制備工藝。具體如下：（1）斜面菌種的活化：從淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1的保藏甘油管中挑一環(huán)菌液劃線于營養(yǎng)瓊脂平板，于32-37℃，培養(yǎng)15-20h，使芽孢桿菌復壯，并長出單菌落，挑單菌落劃線于斜面培養(yǎng)基進行活化，所述斜面培養(yǎng)基同樣是營養(yǎng)瓊脂，配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15-20g，pH值為7.2-7.4，常規(guī)滅菌。（2）種子搖瓶的制備：從上述培養(yǎng)好的斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37℃，振蕩培養(yǎng)20-30h，即得淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4的搖瓶種子液，活菌數(shù)為2×109CFU/mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀1g，一水合硫酸錳0.1g，pH值為7.4，常規(guī)滅菌。（3）種子罐的培養(yǎng)：將上述制備好的搖瓶種子液按照1%（v/v）的接種量接入裝有50L種子發(fā)酵培養(yǎng)基的100L種子發(fā)酵罐中，于35-37℃，培養(yǎng)20-25h，攪拌轉速為250-300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑，得到一級種子發(fā)酵液，活菌數(shù)為3.2×109CFU/mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致。（4）生產發(fā)酵：將上述制備好的種子發(fā)酵液按照1-2%（v/v）的接種量接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L生產發(fā)酵罐中，于35-37℃，發(fā)酵25-30h，攪拌轉速為250-300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑。發(fā)酵結束獲得淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4發(fā)酵液。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：每1000mL水中含有：蛋白胨20g，酵母膏5g，葡萄糖10g，三水合磷酸氫二鉀1g，一水合硫酸錳0.15g，七水合硫酸鎂0.3g，pH值為7.2。（5）發(fā)酵液后處理：發(fā)酵結束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機（15000-20000rpm）分離菌體和上清液，上清液后轉移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質量比為3:1的比例向混合攪拌罐中加入載體，載體配方為50%的麥芽糊精+20%海藻糖+30%淀粉，與上清液混合均勻。同時將噴霧干燥設備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進口溫度達到180-200℃，出口溫度達到110-140℃，塔內壓力保持在-12-18Pa，然后打開進料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90℃時，打開打漿泵，將上清液和載體混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內壓力及進出口溫度的穩(wěn)定，干燥后的干粉為活性抗菌肽干燥菌粉。利用抑菌圈法和高效液相法定性和定量干粉抗菌肽的含量。實施例五：淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1作為畜禽飼料添加劑對于蛋雞生產性能的影響試驗選用北京郊區(qū)某蛋雞養(yǎng)殖場提供的150日齡海蘭褐蛋雞7200只，分為4組，每組6個重復，每個重復300只雞。對照組飼喂基礎日糧（表2），試驗1、2、3組分別飼喂在基礎日糧中添加0.05‰、0.1‰和0.15‰本發(fā)明提供的淀粉液化芽孢桿菌（B.amylolique）ES-2-4代謝產物抗菌肽WJ-1成品粉劑的日糧。試驗期所有實驗條件保持一致，密閉式雞舍，階梯式兩層籠養(yǎng)，每籠15只，專人負責，每天光照恒定16h，自然通風，自由采食、飲水，保持欄舍清潔衛(wèi)生，同時按照雞場保健程序進行免疫和保健。預飼期7天，正試期56天，試驗在提供試驗動物的蛋雞養(yǎng)殖場進行。試驗期間每天觀察雞群健康狀況及采食狀況，測定并記錄各項參數(shù)指標，結果見表3和表4。由表3的結果可以看出抗菌肽WJ-1對于蛋雞產蛋性能的影響。與對照組相比，試驗1、2組的全期平均蛋重、平均日產蛋量、產蛋率顯著提高，死淘率、破蛋率和料蛋比顯著降低，表明抗菌肽WJ-1的成品菌粉在基礎日糧中的添加劑量為0.05-0.1‰時，可以明顯提高蛋雞對飼料的消化利用率和生產性能。然而，當添加劑量增加至0.15‰時，與對照組相比，蛋雞的全期平均蛋重顯著降低，死淘率明顯升高，平均日產蛋量、產蛋率和平均日耗料量均沒有顯著改善，雖然破蛋率明顯低于對照組，但是卻顯著高于其余兩個劑量組，這些結果表明，抗菌肽WJ-1成品菌粉在基礎日糧中的添加劑量過高（>0.1‰）并不能對蛋雞的產蛋性能產生更好的影響。由表4的結果可以看出抗菌肽WJ-1對于蛋雞蛋品質的影響。與對照組相比，試驗1、2組的A級蛋的比例、蛋比重、蛋黃比率、蛋殼厚度均有顯著增加，蛋形指數(shù)更適合孵化率的提高。但是當成品菌粉的添加劑量增加至0.15‰時，這些指標與對照組相比均沒有顯著差異，表明抗菌肽WJ-1成品菌粉在蛋雞基礎日糧中的添加劑量不是越高越好，最佳劑量可以控制在0.05-0.1‰。表2基礎日糧組成及營養(yǎng)水平項目含量項目含量日糧組成（%）營養(yǎng)成分玉米62.05粗蛋白（%）15.8豆粕25代謝能（MJ/Kg）11.6大豆油1鈣（%）3.8石粉9有效磷（%）0.35磷酸氫鈣1.5賴氨酸（%）0.83蛋氨酸0.15蛋氨酸（%）0.4食鹽0.3預混料*1注：*預混料可為每kg全價料提供：VA8800IU，VD31980IU，VE11IU，VK31.1mg，VB11.65mg，VB26.6mg，VB32.42mg，VB522mg，VB62.2mg，VB120.033mg，生物素0.88mg，葉酸0.88mg，Cu24mg，F(xiàn)e1.08mg，Mn84mg，Zn72mg，I0.456mg，Se0.24mg。表3不同添加劑量組對蛋雞產蛋性能的影響對照組試驗1組試驗2組試驗3組全期平均蛋重（g/個）61.24±0.38a62.89±0.56b63.02±0.23b60.55±0.78c平均日產蛋量（g/（只·日））50.59±0.72a51.87±1.39a52.42±0.92b51.62±1.02a產蛋率（%）82.19±3.22a83.79±4.56b84.43±6.24c81.78±5.82a死淘率（%）1.49±0.59a0.75±0.34b0.79±0.92b1.99±0.78c平均日耗料量（g/只·日）113.09±4.88a112.49±5.62a114.55±6.13a111.97±6.22a破蛋率（%）2.25±0.89a1.78±0.22b1.98±0.34b2.10±0.72c料蛋比2.19±0.45a2.16±0.31b2.18±0.64b2.16±0.83b注：同行數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著（P<0.05），肩標相同字母表示差異不顯著（P>0.05）表4不同添加劑量組對蛋品質的影響對照組試驗1組試驗2組試驗3組蛋顏色（A級蛋比例%）52.65±0.34a54.78±0.56b55.82±0.83c51.99±0.12a蛋形指數(shù)1.26±0.22a1.3±0.38b1.33±0.43b1.28±0.55a蛋比重（g/cm3）1.072±0.66a1.097±0.72b1.103±0.98b1.088±0.83a哈夫單位83.78±1.34a83.12±1.25a83.55±0.91a84.05±1.97a蛋黃比率（%）23.45±1.77a25.62±2.34b26.13±1.82b24.01±2.57a蛋殼厚度（mm）0.387±0.066a0.402±0.083b0.408±0.072b0.397±0.025a注：同行數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著（P<0.05），肩標相同字母表示差異不顯著（P>0.05）實施例八：抗菌肽WJ-1作為畜禽飼料添加劑對斷奶仔豬的影響本次飼喂試驗在北京郊區(qū)某生豬養(yǎng)殖場進行，并從該豬場選用25日齡杜洛克×長白×大白三元雜交健康斷奶仔豬240頭，所有仔豬的出生日期相差3天以內，且21日齡左右斷奶，體重相近，母豬的胎次、仔豬的性別比例盡量保持一致，隨機分為4組，每組6個重復，每個重復10頭，組間體重差異不顯著，每組的性別比例盡量一致。對照組飼喂基礎日糧（表5），試驗1、2、3組分別飼喂在基礎日糧中添加0.025‰、0.05‰和0.1‰本發(fā)明提供的抗菌肽WJ-1成品菌粉的日糧。飼喂時間共37天，預飼期7天，正試期30天，試驗期間，試驗豬和對照豬在相同環(huán)境和管理條件下飼養(yǎng)，自由采食，自由飲水，按照豬場正常程序注射疫苗、驅蟲和去勢。試驗起始和結束時早晨空腹稱重，記錄每天的飼料實際消耗量，每天上午定時觀察仔豬健康狀況和排便情況，并做記錄。于實驗結束時的早晨8點，對空腹仔豬進行前腔靜脈采血15mL，用于測定血清免疫學指標，同時收集仔豬糞便，利用相應的分離培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件對糞便中不同微生物進行活菌計數(shù)，利用復合式氣體自動檢測儀測定糞樣中氨氣含量。試驗結果見表6-表9。由表6的結果可以看出抗菌肽WJ-1對于斷奶仔豬生長性能的影響。與對照組相比，當抗菌肽WJ-1的成品菌粉添加劑量在0.05-0.1‰的范圍內時，斷奶仔豬的體重增加量明顯高于對照組，而添加劑量為0.025‰時仔豬的體重增加與對照組沒有顯著差異，表明抗菌肽WJ-1對于斷奶仔豬具有促生長作用，且最適添加劑量為0.05-0.1‰。同樣地，試驗1組與對照組的頭均耗料量差異不顯著，但是試驗2、3組的頭均耗料量比對照組明顯增加，說明飼料中添加一定劑量的抗菌肽WJ-1有助于提高斷奶仔豬的采食量，增進豬只的食欲；從料重比的結果來看，抗菌肽WJ-1的成品菌粉添加劑量在0.05-0.1‰的范圍內時，料重比顯著優(yōu)于試驗1組和對照組，說明本發(fā)明的芽孢桿菌制劑還可以促進斷奶仔豬對于飼料營養(yǎng)成分的消化吸收，大大提高了豬場的養(yǎng)殖效率。由表7的結果可以看出抗菌肽WJ-1對于斷奶仔豬健康水平的影響。在整個試驗期間，對照組豬只的皮毛膚色相對實驗組暗，且有疾病和因病死亡的情況發(fā)生，而實驗組的豬只則皮紅毛亮、食欲旺盛，體型均勻，整齊度良好，雖然試驗1組也出現(xiàn)疾病和因病死亡的情況，但是發(fā)病率和死亡率均明顯低于對照組，而試驗2、3組均沒有出現(xiàn)疾病和死亡的情況。另外，從腹瀉率的統(tǒng)計結果來看，豬只食用抗菌肽WJ-1后腹瀉率均比對照組顯著下降，而且以試驗2、3組最低。說明抗菌肽WJ-1能夠顯著提高斷奶仔豬的健康水平和疾病抵抗能力，能夠顯著降低幼齡動物的死亡率，添加劑量以0.05-0.1‰為最佳。由表8的結果可以看出抗菌肽WJ-1對于斷奶仔豬機體免疫力的影響。通過測定對照組與試驗組的IgG、IgM和IgA，以及補體C3和C4的含量水平，結果表明，雖然實驗組的補體水平與對照組沒有顯著差異，但是三種抗體的水平尤其是試驗2、3組顯著高于對照組，說明抗菌肽WJ-1可以顯著提高斷奶仔豬體液特異性免疫功能，而且添加劑量以0.05-0.1‰為最佳。由表9的結果可以看出抗菌肽WJ-1對于斷奶仔豬糞便微生物組成及糞臭的影響。與對照組相比，試驗組糞便中的大腸桿菌數(shù)量明顯降低，乳酸菌與雙歧桿菌的數(shù)量顯著增加，表明腸道中的有益菌數(shù)量明顯升高。試驗2、3組的糞便氨氣含量明顯低于對照組和試驗1組，而且試驗期間，觀察豬舍的衛(wèi)生情況，試驗2、3組的糞便排泄量、糞臭及豬舍環(huán)境均好于對照組，試驗1組略好于對照組。說明豬只服用抗菌肽WJ-1后，對于降低斷奶仔豬的糞便排泄量，減少糞臭，改善豬舍養(yǎng)殖環(huán)境有顯著的功效。表5基礎日糧組成及營養(yǎng)水平項目含量項目含量日糧組成（%）營養(yǎng)成分玉米70.15粗蛋白（%）2146%豆粕24代謝能（MJ/Kg）13魚粉2鈣（%）1.26植物油1磷（%）0.75多維5000.04賴氨酸（%）1.298%甜味劑0.04蛋氨酸+胱氨酸（%）0.75香味劑0.04防霉劑0.1抗氧化劑0.03通用多礦0.15賴氨酸980.4石粉0.4食鹽0.45表6不同添加劑量組對斷奶仔豬生長性能的影響對照組試驗1組試驗2組試驗3組試驗頭數(shù)（頭）60606060試驗天數(shù)（d）30303030初始均重（kg）7.65±0.22a7.73±0.34a7.58±0.28a7.69±0.37a終末均重（kg）21.78±0.75a22.09±0.82a23.62±0.93b23.39±0.88b平均凈增重（kg）14.13±2.25a14.36±1.96a16.04±2.33b15.7±2.18b平均日增重（g）471±0.33a478.7±0.19a534.7±0.22b523.3±0.15b總耗料（kg）18151834.81966.82007.6頭均耗料（kg）30.25a30.58a32.78b32.82b料重比2.14a2.13a2.04b2.09b注：同行數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著（P<0.05），肩標相同字母表示差異不顯著（P>0.05）表7不同添加劑量組對斷奶仔豬健康水平的影響對照組試驗1組試驗2組試驗3組發(fā)病率（%）12.34±1.58a1.29±0.55b00腹瀉率（%）8.95±1.22a7.62±0.89b6.14±0.73c5.98±0.92c死亡率（%）5.25±0.23a2.47±0.28b00注：同行數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著（P<0.05），肩標相同字母表示差異不顯著（P>0.05）表8不同添加劑量組對斷奶仔豬血清免疫學指標的影響對照組試驗1組試驗2組試驗3組IgG（g/L）2.07±0.032a2.32±0.045b3.15±0.078c3.21±0.086cIgM（g/L）3.25±0.054a3.38±0.071a3.88±0.069b3.97±0.103bIgA（g/L）1.23±0.091a1.29±0.082b1.45±0.033c1.39±0.048cC3（g/L）0.53±0.021a0.54±0.032a0.54±0.041a0.55±0.058aC4（g/L）0.32±0.038a0.31±0.022a0.33±0.045a0.34±0.051a注：同行數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著（P<0.05），肩標相同字母表示差異不顯著（P>0.05）表9不同添加劑量組對斷奶仔豬糞便微生物數(shù)量及糞便氨氣產量的影響對照組試驗1組試驗2組試驗3組大腸桿菌（LogCFU/g）8.3a8.1b7.6c7.5c乳酸菌（LogCFU/g）8.0a8.6b8.9b9.1b雙歧桿菌（LogCFU/g）8.1a8.8b9.2c9.2c氨氣產生量（μL/L）12.5±0.14a11.6±0.89a10.1±0.18b9.7±0.32b注：同行數(shù)據(jù)肩標不同字母表示差異顯著（P<0.05），肩標相同字母表示差異不顯著（P>0.05）綜合實施例七和例八的結果可以看出，本發(fā)明提供的抗菌肽WJ-1的活性粉產品適合用作畜禽微生物飼料添加劑，當以日糧的0.05-0.1‰的劑量添加時，可以提高畜禽生產性能，促進畜禽生長，增強畜禽機體免疫力，降低幼齡動物死亡率，降低糞便排泄量，減少糞臭，改善養(yǎng)殖環(huán)境。N-LysGlyValArgLysG1yA1aLysArgGlnGlyCysLysLysLeuAlaArgLysAlaLeuLys-C當前第1頁1 2 3