本發(fā)明涉及制備煙用提取物的技術(shù)領(lǐng)域，具體地指一種煙用紫羅蘭花提取物的制備方法。

背景技術(shù)：

隨著人們消費(fèi)水平的不斷提高，高品質(zhì)卷煙的需求量也隨之日益增加，但由于上等原料的產(chǎn)量有限，從而限制了高品質(zhì)卷煙的生產(chǎn)。目前生產(chǎn)者們主要通過加香加料強(qiáng)化煙草香味，改善煙葉品質(zhì)，提高煙葉的使用率，來解決上等原料的不足的難題。在卷煙制品中，卷煙的香氣和吸味是非常重要的，添加香料是卷煙工業(yè)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，也是完善產(chǎn)品風(fēng)格和提高卷煙香氣質(zhì)量的有效手段之一。傳統(tǒng)的煙用添加香料方法，即以天然提取物單體和合成單體混合調(diào)配，這種方法存在香氣單調(diào)，不豐滿，與煙草搭配不協(xié)調(diào)，改善卷煙評吸品質(zhì)不明顯等缺點(diǎn)。

紫羅蘭(matthiolaincana(l.)r.br.)是十字花科紫羅蘭屬兩年生或者多年生植物，原產(chǎn)于地中海沿岸，是歐洲名花之一，在中國南部也有栽培。紫羅蘭花中含有2-β-蒎烯、α-紫羅蘭酮、β-紫羅蘭酮、苯乙醛、苯甲醇、l-芳樟醇等香氣物質(zhì)，這些香氣物質(zhì)具有特征的清甜香韻和較好的飄逸感。如果用現(xiàn)有的制備方法獲得紫羅蘭花香料，香料中香氣物質(zhì)的得率較低，使得紫羅蘭花提取物在卷煙中的煙香不明顯，從而限制了紫羅蘭花提取物在卷煙中的應(yīng)用。

β-葡萄糖苷酶(β-d-glucosidase)，又稱β-d-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，別名龍膽二糖酶、纖維二糖酶(cellobias)和苦杏仁苷酶。它屬于纖維素酶類，是纖維素分解酶系中的重要組成成分，能夠水解糖苷類，同時(shí)釋放出β-d-葡萄糖和香氣成分。

固定化酶(immobilizedenzyme)是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一種新技術(shù)，是用物理或化學(xué)方法處理水溶性的酶使之變成不溶于水或固定于固相載體的但仍具有酶活性的酶衍生物。與游離酶相比，固定化酶可以較長時(shí)間內(nèi)反復(fù)分批反應(yīng)和裝柱連續(xù)反應(yīng)，從而提高了酶的使用效率，增加產(chǎn)物的收率，降低了成本；在反應(yīng)完成后固定化酶極易與產(chǎn)物分開，簡化提純工藝，提高了產(chǎn)物的質(zhì)量。因此，廣泛應(yīng)用于污水治理、醫(yī)藥工程、化工合成等領(lǐng)域，但在煙用紫羅蘭花提取物制備中卻未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種煙用紫羅蘭花提取物的制備方法。該方法制備的煙用紫羅蘭花提取物具有清新的紫羅蘭花香氣，并帶有宜人的紫羅蘭花香韻和較好的飄逸感。

一種煙用紫羅蘭花提取物的制備方法，包括如下步驟：

(1)取干紫羅蘭花，加入其4～8倍重量的水，微波提取2～3次，每次2～3h，將提取液靜置冷卻后過濾，收集濾液得到紫羅蘭花提取液；

(2)將0.1～0.3g固體β-葡萄糖苷酶溶于1ml檸檬酸緩沖液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入15～20ml質(zhì)量濃度為2％的海藻酸鈉溶液，攪拌均勻，再加入20～30ml質(zhì)量濃度為2％的氯化鈣溶液，4℃包埋1～3h后，用緩沖溶液洗滌，得固定化β-葡萄糖苷酶，其承載量為10～20u/g；

(3)取固定化β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固體用量20g/l～50g/l，酶處理的ph值6～8，酶處理溫度35℃～45℃，酶處理時(shí)間3h～5h，處理完成后在4℃～6℃沉降處理24h～48h；

(4)將酶處理后的提取液過濾，得澄清的紫羅蘭花提取液，將過濾后的紫羅蘭花提取液減壓濃縮，濃縮至相對密度為1.30～1.35，收集濃縮液得到煙用紫羅蘭花提取物a；

(5)取步驟(4)的紫羅蘭花提取物a，加入丙二醇，在壓力6～20pa，進(jìn)料溫度為60℃～75℃，進(jìn)料速度為5～30ml/min，刮板轉(zhuǎn)速為60～130rpm的條件下進(jìn)行分子蒸餾，取輕組分為紫羅蘭花提取物；其中丙二醇的加入量占分子蒸餾物總質(zhì)量的百分比為10％～30％。

進(jìn)一步的，所述步驟(1)中微波提取的微波功率為500～900w，溫度為60～100℃。

進(jìn)一步的，所述步驟(4)中酶處理后的提取液過濾時(shí)，用濾紙過濾去大顆粒的雜質(zhì)，得澄清的紫羅蘭花提取液。

進(jìn)一步的，所述步驟(4)減壓濃縮時(shí)，濃縮溫度為50～75℃，濃縮壓力為0.01～0.1個(gè)大氣壓。

本發(fā)明的有益效果：

(1)本發(fā)明采用微波提取的方法對紫羅蘭花進(jìn)行提取，產(chǎn)率高，產(chǎn)品質(zhì)量好，反應(yīng)和提取速率快，且無污染，能得到純凈的提取物，條件溫和，操作安全，設(shè)備簡單，成本低。

(2)本發(fā)明采用β-葡萄糖苷酶溶液處理紫羅蘭花提取物，可以水解紫羅蘭花中的香氣前體物質(zhì)，釋放出潛在的芳香成分，大大增加紫羅蘭花中的芳香物質(zhì)的提取得率，得到香氣更豐富、品質(zhì)更好的特色煙用香原料。

(3)本發(fā)明所制備的煙用紫羅蘭花提取物具有清新的紫羅蘭花香氣，并帶有宜人的紫羅蘭花香韻和較好的飄逸感，將紫羅蘭花提取物添加到卷煙中，具有豐富煙香、透發(fā)煙香、飄逸性較好、增加特征紫羅蘭甜香韻的作用。

利用固定化β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭提取物，釋放紫羅蘭花提取物中2-β-蒎烯、α-紫羅蘭酮、β-紫羅蘭酮、苯乙醛、苯甲醇、l-芳樟醇等芳香物質(zhì)，制備特色的煙用紫羅蘭花提取物，該方法工藝簡單，成本低，提取得率高，香料品質(zhì)好。與游離β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取物相比，固定化處理后，不需要通過膜分離去除游離酶，簡化了生產(chǎn)工藝，便于工業(yè)化生產(chǎn)轉(zhuǎn)化；紫羅蘭花提取物中主要香氣物質(zhì)2-β-蒎烯、α-紫羅蘭酮、β-紫羅蘭酮、苯乙醛、苯甲醇、l-芳樟醇總的相對含量提高了25％～48％，添加到卷煙中，卷煙香氣更加豐富，甜香韻更加明顯。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的有關(guān)技術(shù)問題作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。

實(shí)施例1

(1)取干紫羅蘭花，加入其4倍重量的水，微波提取2次，每次2.5h，微波功率為550w，溫度為65℃，將提取液靜置冷卻后過濾，收集濾液得到紫羅蘭花提取液；

(2)將0.15g固體β-葡萄糖苷酶溶于1ml檸檬酸緩沖液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入16ml質(zhì)量濃度為2％的海藻酸鈉溶液，攪拌均勻，再加入23ml質(zhì)量濃度為2％的氯化鈣溶液，4℃包埋1.5h后，用緩沖溶液洗滌，得固定化β-葡萄糖苷酶，其承載量為12u/g；

(3)取固定化β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固體用量28g/l，酶處理的ph值6，酶處理溫度38℃，酶處理時(shí)間3.5h，處理完成后在4℃沉降處理28h；

(4)將酶處理后的提取液用濾紙過濾去大顆粒的雜質(zhì)，得澄清的紫羅蘭花提取液，將過濾后的紫羅蘭花提取液減壓濃縮，濃縮溫度為52℃，濃縮壓力為0.03個(gè)大氣壓，濃縮至相對密度為1.31，收集濃縮液得到煙用紫羅蘭花提取物a；

(5)取步驟(4)的紫羅蘭花提取物a，加入丙二醇，在壓力8pa，進(jìn)料溫度為62℃，進(jìn)料速度為10ml/min，刮板轉(zhuǎn)速為65rpm的條件下進(jìn)行分子蒸餾，取輕組分為紫羅蘭花提取物；其中丙二醇的加入量占分子蒸餾物總質(zhì)量的百分比為12％。

實(shí)施例2

(1)取干紫羅蘭花，加入其5倍重量的水，微波提取2次，每次2.7h，微波功率為750w，溫度為80℃，將提取液靜置冷卻后過濾，收集濾液得到紫羅蘭花提取液；

(2)將0.2g固體β-葡萄糖苷酶溶于1ml檸檬酸緩沖液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入20ml質(zhì)量濃度為2％的海藻酸鈉溶液，攪拌均勻，再加入28ml質(zhì)量濃度為2％的氯化鈣溶液，4℃包埋2h后，用緩沖溶液洗滌，得固定化β-葡萄糖苷酶，其承載量為15u/g；

(3)取固定化β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固體用量35g/l，酶處理的ph值7，酶處理溫度42℃，酶處理時(shí)間4.2h，處理完成后在5℃沉降處理35h；

(4)將酶處理后的提取液用濾紙過濾去大顆粒的雜質(zhì)，得澄清的紫羅蘭花提取液，將過濾后的紫羅蘭花提取液減壓濃縮，濃縮溫度為68℃，濃縮壓力為0.05個(gè)大氣壓，濃縮至相對密度為1.32，收集濃縮液得到煙用紫羅蘭花提取物a；

(5)取步驟(4)的紫羅蘭花提取物a，加入丙二醇，在壓力12pa，進(jìn)料溫度為70℃，進(jìn)料速度為18ml/min，刮板轉(zhuǎn)速為95rpm的條件下進(jìn)行分子蒸餾，取輕組分為紫羅蘭花提取物；其中丙二醇的加入量占分子蒸餾物總質(zhì)量的百分比為21％。

實(shí)施例3

(1)取干紫羅蘭花，加入其7倍重量的水，微波提取3次，每次2h，微波功率為900w，溫度為95℃，將提取液靜置冷卻后過濾，收集濾液得到紫羅蘭花提取液；

(2)將0.3g固體β-葡萄糖苷酶溶于1ml檸檬酸緩沖液(0.1mol/l，ph4.5)中，加入20ml質(zhì)量濃度為2％的海藻酸鈉溶液，攪拌均勻，再加入30ml質(zhì)量濃度為2％的氯化鈣溶液，4℃包埋3h后，用緩沖溶液洗滌，得固定化β-葡萄糖苷酶，其承載量為20u/g；

(3)取固定化β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取液，固定化β-葡萄糖苷酶固體用量46g/l，酶處理的ph值8，酶處理溫度45℃，酶處理時(shí)間5h，處理完成后在6℃沉降處理45h；

(4)將酶處理后的提取液用濾紙過濾去大顆粒的雜質(zhì)，得澄清的紫羅蘭花提取液，將過濾后的紫羅蘭花提取液減壓濃縮，濃縮溫度為72℃，濃縮壓力為0.08個(gè)大氣壓，濃縮至相對密度為1.35，收集濃縮液得到煙用紫羅蘭花提取物a；

(5)取步驟(4)的紫羅蘭花提取物a，加入丙二醇，在壓力18pa，進(jìn)料溫度為75℃，進(jìn)料速度為28ml/min，刮板轉(zhuǎn)速為125rpm的條件下進(jìn)行分子蒸餾，取輕組分為紫羅蘭花提取物；其中丙二醇的加入量占分子蒸餾物總質(zhì)量的百分比為27％。

本發(fā)明采用固定化β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取液，將其與其他步驟與本發(fā)明相同，而采用游離β-葡萄糖苷酶處理紫羅蘭花提取液的處理方式比較，如表1所示，為不同處理方式紫羅蘭花提取物中香氣物質(zhì)相對含量比較，如表2所示，將不同處理方式下的紫羅蘭花提取物，添加到卷煙中的卷煙評吸結(jié)果。

表1香氣物質(zhì)相對含量比較

表2不同處理方式的紫羅蘭花提取在卷煙中的感官評價(jià)效果

本發(fā)明的制備方法使紫羅蘭花提取物中主要香氣物質(zhì)2-β-蒎烯、α-紫羅蘭酮、β-紫羅蘭酮、苯乙醛、苯甲醇、l-芳樟醇總的相對含量提高了25％～48％，將其添加到卷煙中，卷煙香氣更加豐富，甜香韻更加明顯。充分說明了采用本發(fā)明的提取方法制備出了產(chǎn)量更高、品質(zhì)更好的紫羅蘭花提取物。

以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方案的詳細(xì)描述，并不以此限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的設(shè)計(jì)思路上所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。