本發(fā)明涉及一種O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物及其在制備抗人胃癌藥物中的應(yīng)用。(二)
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的常見病之一。據(jù)最新報道，全世界有4000多萬人患惡性腫瘤，其中每年新增患者900多萬、死亡700多萬，我國每年惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)約160萬、死亡約130萬。目前惡性腫瘤發(fā)生與死亡還有日趨嚴(yán)重的趨勢，有些地區(qū)已經(jīng)成為人口死亡的首要原因。因此，開發(fā)新穎的抗腫瘤藥物具有重要的意義。中國專利CN102557983A《一種(4-取代苯甲酰)氟苯水楊酰胺類化合物及應(yīng)用》、CN102603559A《一種苯乙酰氟苯水楊酰胺類化合物及應(yīng)用》分別介紹了二氟尼柳為水楊酸母體所制備的O-苯甲酰、O-苯乙酰氟苯水楊酰胺類化合物及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。苯磺?；c苯甲酰相比較，具有更大的空間體積、更強的分子極性，使其對部分細胞的特定空間結(jié)構(gòu)具有更好的選擇性；與苯乙?；啾容^，具有更為完整的大π鍵電子結(jié)構(gòu)，將適度改變目標(biāo)分子的藥學(xué)性能?？紤]到三氟甲基(CF3)同樣具有強吸電子性、親脂性和穩(wěn)定的C-F鍵等特性，當(dāng)在藥效分子中引入三氟甲基后能夠有效的改變化合物的酸性、偶極距、極性和親脂性，同時可以增強生物分子的代謝穩(wěn)定性；而且，三氟甲基水楊酸相對便宜、易得。人胃癌是一種最為常見的惡性腫瘤。因此，本專利通過對三氟甲基水楊酸進行結(jié)構(gòu)修飾，制備具有抗人胃癌活性的含氟新藥，具有非常重大的意義。(三)技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是提供一種O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物，及其在制備抗癌藥物、尤其在制備抗人胃癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種如式(Ⅰ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物：式(Ⅰ)中，R1～R5各自獨立為H、甲基、氟、氯、硝基、甲氧基或乙氧基。進一步，結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物為表1中化合物之一：表1：化合物R1R2R3R4R5Ⅰ-1HHHHHⅠ-2CH3HHHHⅠ-3HCH3HHHⅠ-4HHCH3HHⅠ-5HHFHHⅠ-6ClHHHHⅠ-7HClHHHⅠ-8HHClHHⅠ-9NO2HHHHⅠ-10OCH3HHHHⅠ-11HHOCH3HHⅠ-12OC2H5HHHHⅠ-13FHFHH進一步，本發(fā)明還提供所述如式(Ⅰ)所示O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物的制備方法：如式(Ⅱ)所示的4-三氟甲基水楊酸與式(Ⅲ)所示的苯磺酰氯反應(yīng)，得到式(Ⅳ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酸；然后，與SOCl2經(jīng)酰氯化得到式(Ⅴ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰氯；最后，與式(Ⅵ)所示胺類化合物經(jīng)過酰胺化反應(yīng)，制得如(Ⅰ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物。所述反應(yīng)的方程式如下式所示。式(Ⅰ)中，R1～R5各自獨立為H、甲基、氟、氯、硝基、甲氧基或乙氧基。相關(guān)的合成方法，可參照中國專利CN102010366A、CN102557983A、CN102603559A及在Bioorg.Med.Chem.Lett.19(2),516-519上公開的內(nèi)容。具體的，所述方法推薦按如下步驟進行：(1)將式(Ⅲ)所示的苯磺酰氯用丙酮溶解，備用；將式(Ⅱ)所示的4-三氟甲基水楊酸、丙酮、氫氧化鈉加入到反應(yīng)瓶中，常溫下攪拌1.5h。冰浴下緩慢滴加苯磺酰氯-丙酮溶液，常溫攪拌過夜，得到反應(yīng)液A，將所述反應(yīng)液A抽濾得到濾液，向所述濾液中加入水，攪拌1h，抽濾，所得濾餅分別用乙醇-水溶液(EtOH:H2O＝7:3)、甲苯洗滌，干燥，得式(Ⅳ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酸粗品；(2)將步驟(1)所得式(Ⅳ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酸粗品(Ⅳ)、二氯亞砜、甲苯和DMF投入反應(yīng)瓶中，于70℃下反應(yīng)6小時，得到反應(yīng)液B，經(jīng)減壓蒸干，加入丙酮溶解，得到式(Ⅴ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰氯溶液，備用；(3)在冰浴下，將式(Ⅵ)所示胺類化合物與丙酮混合得到混合液加入到步驟(2)所述式(Ⅴ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰氯溶液中，在常溫下反應(yīng)10h，得到反應(yīng)液C，將反應(yīng)液C過濾，向所得濾液中加入水，經(jīng)攪拌、結(jié)晶，過濾，乙醇洗滌，丁酮重結(jié)晶，得到式(Ⅰ)所示的O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物。再進一步，本發(fā)明還提供了所述O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，尤其是制備抗人胃癌藥物中的應(yīng)用。經(jīng)測試，本發(fā)明O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物在一定濃度下可明顯抑制人胃癌細胞的生長，可作為抗腫瘤藥物應(yīng)用于人胃癌的治療。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：(1)提供了一種O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺類化合物及其制備方法；(2)提供了一種新的、具有明顯抗腫瘤活性的抗人胃癌藥物，為新藥篩選提供研究基礎(chǔ)，具有重大應(yīng)用前景；(3)所述化合物的制備流程簡單，利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。(四)具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此：實施例1：制備O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酸(Ⅳ)將35.3g(0.2mol)苯磺酰氯用30mL丙酮溶解，備用；將20.6g(0.1mol)4-三氟甲基水楊酸、200mL丙酮、8.0g(0.2mol)氫氧化鈉加入到反應(yīng)瓶中，常溫下攪拌1.5h。冰浴下緩慢滴加苯磺酰氯-丙酮溶液，常溫攪拌過夜。抽濾，向濾液加入200mL水，攪拌1h，析出白色固體，抽濾，濾餅分別用乙醇-水溶液(EtOH:H2O＝7:3)、甲苯洗滌，干燥，得O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酸粗品(Ⅳ)，收率：85.6％，熔點：120-124℃(未校正)。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,DMSO,δppm):7.25(s,1H,3-H),7.69(t,2H,J＝8.5Hz,3′,5′-H),7.84(dd,2H,J＝8.0Hz,2′,6′-H),7.86(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.87(m,1H,J＝8.5Hz,4′-H),8.03(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),13.69(s,1H,-COOH)。實施例2：制備N-苯基-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-1)將5.2g(0.015mol)O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酸粗品(Ⅳ)、3.6g(0.03mol)二氯亞砜、40mL甲苯和4滴DMF投入反應(yīng)瓶中，于70℃(未校正)下反應(yīng)6小時，減壓蒸干，得油狀濃縮液，加入40mL丙酮溶解，制得O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰氯(Ⅴ)溶液，備用。冰浴下，將2.8g(0.03mol)苯胺/10mL丙酮的混合液加入到已制備的Ⅴ溶液中，常溫反應(yīng)10h；過濾，向濾液加入100mL水，攪拌、結(jié)晶，過濾，乙醇洗滌，丁酮重結(jié)晶，得白色N-苯基-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-1)，熔點：128-131℃(未校正)，收率：66.2％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):7.21(t,1H,J＝7.5Hz,4″-H),7.40(t,2H,J＝8.0Hz,3″,5″-H),7.45(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.54(s,1H,3-H),7.59(dd,2H,J＝8.0Hz,2″,6″-H),7.68(m,1H,J＝7.5Hz,4′-H),7.69(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.77(dd,2H,J＝8.0Hz,2′,6′-H),8.05(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.38(s,1H,-NH-)。實施例3：制備N-(2-甲基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-2)以0.03mol2-甲基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(2-甲基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-2)，熔點：108-111℃(未校正)，收率：53.8％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):2.35(s,3H,-CH3),7.15(t,1H,J＝7.0Hz,4″-H),7.25(d,1H,J＝7.0Hz,6″-H),7.27(t,1H,J＝7.5Hz,5″-H),7.44(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.52(s,1H,3-H),7.68(t,1H,J＝7.5Hz,4′-H),7.69(d,1H,J＝7.5Hz,3″-H),7.72(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),7.99(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),8.06(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.19(s,1H,-NH-)。實施例4：制備N-(3-甲基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-3)以0.03mol3-甲基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(3-甲基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-3)，熔點：137-140℃(未校正)，收率：72.3％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):2.40(s,3H,-CH3),7.03(d,1H,J＝7.5Hz,4″-H),7.28(t,1H,J＝8.0Hz,5″-H),7.37(d,1H,J＝8.0Hz,6″-H),7.41(s,1H,2″-H),7.47(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.54(s,1H,3-H),7.69(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.70(t,1H,J＝9.0Hz,4′-H),7.78(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),8.05(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.32(s,1H,-NH-)。實施例5：制備N-(4-甲基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-4)以0.03mol4-甲基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(4-甲基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-4)，熔點：195-197℃(未校正)，收率：60.0％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):2.38(s,3H,-CH3),7.20(d,2H,J＝8.0Hz,3″,5″-H),7.46(t,2H,J＝7.0Hz,3′,5′-H),7.47(d,2H,J＝8.0Hz,2″,6″-H),7.54(s,1H,3-H),7.68(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.69(t,1H,J＝8.0Hz,4′-H),7.77(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),8.05(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.32(s,1H,-NH-)。實施例6：制備N-(4-氟苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-5)以0.03mol4-氟苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(4-氟苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-5)，熔點：150-153℃(未校正)，收率：86.5％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):7.10(t,2H,J＝9.0Hz,3″,5″-H),7.46(s,1H,3-H),7.50(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.58(t,2H,J＝9.0Hz,2″,6″-H),7.69(d,1H,J＝9.0Hz,5-H),7.72(t,1H,J＝8.0Hz,4′-H),7.79(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),8.07(d,1H,J＝8.5Hz,6-H),8.41(s,1H,-NH-)。實施例7：制備N-(2-氯苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-6)以0.03mol2-氯苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(2-氯苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-6)，熔點：130-133℃(未校正)，收率：74.6％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):7.13(t,1H,J＝7.5Hz,4″-H),7.31(t,1H,J＝8.0Hz,5″-H),7.36(t,2H,J＝7.5Hz,3′,5′-H),7.44(d,1H,J＝8.0Hz,3″-H),7.60(t,1H,J＝7.5Hz,4′-H),7.66(s,1H,3-H),7.71(d,1H,J＝7.5Hz,5-H),7.72(dd,2H,J＝7.5Hz,2′,6′-H),8.04(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.36(d,1H,J＝8.0Hz,6″-H),8.69(s,1H,-NH-)。實施例8：制備N-(3-氯苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-7)以0.03mol3-氯苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(3-氯苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-7)，熔點：167-170℃(未校正)，收率：86.3％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):7.19(d,1H,J＝8.5Hz,4″-H),7.32(t,1H,J＝8.5Hz,5″-H),7.41(d,1H,J＝8.5Hz,6″-H),7.49(s,1H,3-H),7.50(t,2H,J＝8.5Hz,3′,5′-H),7.69(s,1H,2″-H),7.70(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.73(t,1H,J＝8.5Hz,4′-H),7.79(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),8.06(d,1H,J＝8.5Hz,6-H),8.42(s,1H,-NH-)。實施例9：制備N-(4-氯苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-8)以0.03mol4-氯苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(4-氯苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-8)，熔點：153-156℃(未校正)，收率：83.3％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):7.37(m,2H,J＝8.5Hz,3″,5″-H),7.48(s,1H,3-H),7.49(t,2H,J＝7.5Hz,3′,5′-H),7.56(t,2H,J＝9.0Hz,2″,6″-H),7.70(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.73(t,1H,J＝8.0Hz,4′-H),7.78(dd,2H,J＝8.0Hz,2′,6′-H),8.06(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.45(s,1H,-NH)。實施例10：制備N-(2-硝基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-9)以0.03mol2-硝基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(2-硝基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-9)，熔點：160-163℃(未校正)，收率：73.0％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):7.29(t,1H,J＝8.0Hz,4″-H),7.42(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.47(s,1H,3-H),7.61(t,1H,J＝7.5Hz,4′-H),7.71(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.72(t,1H,J＝8.0Hz,5″-H),7.78(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),8.02(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.25(d,1H,J＝8.0Hz,3″-H),8.80(d,1H,J＝9.0Hz,6″-H),11.04(s,1H,-NH-)。實施例11：制備N-(2-甲氧基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-10)以0.03mol2-甲氧基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(2-甲氧基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-10)，熔點：131-133℃(未校正)，收率：73.9％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):3.97(s,3H,-CH3-),6.96(d,1H,J＝8.0Hz,3″-H),7.00(t,1H,J＝8.0Hz,5″-H),7.14(t,1H,J＝8.0Hz,4″-H),7.31(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.57(t,1H,J＝8.0Hz,4′-H),7.64(dd,2H,J＝8.0Hz,2′,6′-H),7.67(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.72(s,1H,3-H),8.04(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.28(dd,1H,J＝8.0Hz,6″-H),8.96(s,1H,-NH-)。實施例12：制備N-(4-甲氧基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-11)以0.03mol4-甲氧基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(4-甲氧基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-1)，熔點：166-168℃(未校正)，收率：79.8％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):3.86(s,3H,-CH3),6.93(d,2H,J＝9.0Hz,3″,5″-H),7.48(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.50(d,2H,J＝9.0Hz,2″,6″-H),7.51(s,1H,3-H),7.68(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.70(t,1H,J＝7.5Hz,4′-H),7.78(dd,2H,J＝8.5Hz,2′,6′-H),8.06(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.30(s,1H,-NH-)。實施例13：制備N-(2-乙氧基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-12)以0.03mol2-乙氧基苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(2-乙氧基苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-12)，熔點：92-95℃(未校正)，收率：64.5％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):1.54(t,3H,J＝7.0Hz,-CH3),4.18(q,2H,J＝7.0Hz,-CH2-),6.94(d,1H,J＝7.5Hz,3″-H),6.97(t,1H,J＝8.0Hz,5″-H),7.11(t,1H,J＝8.0Hz,4″-H),7.27(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.55(t,1H,J＝8.0Hz,4′-H),7.61(dd,2H,J＝8.0Hz,2′,6′-H),7.68(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.73(s,1H,3-H),8.03(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.29(d,1H,J＝9.0Hz,6″-H),8.96(s,1H,-NH-)。實施例14：制備N-(2,4-二氟苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-13)以0.03mol2,4-二氟苯胺代替實施例2中的苯胺，其他操作同實施例2，得到N-(2,4-二氟苯基)-O-苯磺酰-4-三氟甲基水楊酰胺(Ⅰ-13)，熔點：119-122℃(未校正)，收率：80.2％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):6.93(m,1H,J＝9.0Hz,3″-H),6.95(t,1H,J＝8.5Hz,5″-H),7.46(t,2H,J＝8.0Hz,3′,5′-H),7.53(s,1H,3-H),7.68(t,1H,J＝7.5Hz,4′-H),7.70(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.78(dd,2H,J＝8.0Hz,2′,6′-H),8.07(d,1H,J＝8.0Hz,6-H),8.26(q,1H,J＝9.0Hz,6″-H),8.39(s,1H,-NH-)。實施例15～27：抗腫瘤活性測試體外抗腫瘤活性測試(注：本測試方法，稱為MTT法，為一種成熟的方法。)A.原理：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性噻唑蘭(MTT)還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定甲瓚吸光值，可間接反映細胞的增殖情況和數(shù)量變化。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。B.細胞：人胃癌細胞株(SGC-7901、HGC227，均購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院)C.實驗步驟1)樣品的制備：取實施例2～14所制備的化合物I-1～I-13，每1mg樣品用20μLDMSO溶解，再取2μL用1000μL培養(yǎng)液(見下面步驟(2)細胞的培育中培養(yǎng)液的配制)稀釋，配成100μg/mL的樣品液，再用培養(yǎng)液連續(xù)稀釋至使用濃度10μg/mL和1μg/mL。5mg/mLMTT的配制：用生理鹽水配置MTT溶液，濃度為5mg/mL。2)細胞的培養(yǎng)培養(yǎng)液的配制：每1000mLDMEM培養(yǎng)液(Gibco公司)中含80萬單位青霉素、1.0g鏈霉素、10％滅活小牛血清。細胞的培養(yǎng)：將腫瘤細胞SGC-7901、HGC227接種于培養(yǎng)液中，置37℃(未校正)、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～5d傳代。3)測定樣品對腫瘤細胞生長的抑制作用將細胞用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰酶消化液(0.25％胰酶，0.02％EDTA，用Hank’s緩沖液配置)消化，并用培養(yǎng)液稀釋成細胞濃度為1×106/mL，加到96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100μL，置37℃(未校正)、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，傾去培養(yǎng)液，加入用培養(yǎng)液稀釋的樣品，每孔200μL，每個濃度加3孔，置37℃(未校正)、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，72h后在細胞培養(yǎng)孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃(未校正)孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振蕩器(海門麒麟醫(yī)療儀器廠，QL-9001)振蕩，使甲瓚完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀(美國BIO-RAD公司，680型)在490nm波長處檢測吸光值。以同樣條件下含順鉑對照樣品及同樣濃度DMSO的培養(yǎng)液培養(yǎng)的細胞作為空白對照，按照公式(1)計算樣品對腫瘤細胞生長的抑制率，以及各個濃度下化合物對細胞生長的抑制率，用SPSS軟件(購自美國SPSS公司)計算各樣品的半數(shù)抑制濃度(IC50)，結(jié)果如表1所示：計算公式：抑制率(％)＝(OD空白-OD樣品)/OD空白×100％公式(1)表2：各化合物對SGC-7901、HGC227的IC50(mg/L)從表2可以看出，按照抗癌活性的評價標(biāo)準(zhǔn)，式Ⅰ-8所示的化合物具有顯著的抗HGC227人胃癌細胞活性，式Ⅰ-5、Ⅰ-7及Ⅰ-13所示的化合物具有較好的抗HGC227人胃癌細胞活性。當(dāng)前第1頁1 2 3