1.星形聚合物接枝多肽和聚乙烯亞胺的基因載體的制備方法,其特征是包括如下步驟:
(1)將山梨醇、LA和MMD放入干燥的聚合管中,再加入辛酸亞錫作催化劑,密封;
所述山梨醇、LA、MMD和辛酸亞錫的摩爾比為33-66:616:62-616:20-25;
所述LA為丙交酯的簡稱,所述MMD為3(S)-甲基-嗎啉-2,5-二酮的簡稱;
(2)對聚合管抽真空,通氮氣;
(3)重復(fù)步驟(2)8-12次,于140-150℃反應(yīng)24-28小時,得到P(LA-co-MMD)粗品;
(4)將P(LA-co-MMD)粗品用三氯甲烷溶解得到溶液1,將溶液1滴加入攪拌下的正己烷中,有沉淀生成;固液分離,所述三氯甲烷和正己烷的體積比為1:8-12;
(5)重復(fù)步驟(4)2-3次,得到的沉淀在真空干燥箱中干燥至恒重,得到P(LA-co-MMD);
(6)按摩爾比為1:15-30:15-30的比例,將P(LA-co-MMD)、丁二酸酐和二甲氨基吡啶,以及三乙胺溶解在干燥的1,4-二氧六環(huán)中,在25-30℃、氮氣保護下反應(yīng)20-25小時,得到溶液2,將溶液2滴加入攪拌下的0-10℃的乙醇中,有沉淀生成;固液分離,固體溶解于三氯甲烷中,依次用飽和NaHCO3水溶液洗滌2-3次,稀鹽酸洗滌3-4次,飽和NaCl水溶液洗滌4-5次,得到的溶液加入無水硫酸鈉干燥,抽濾,濾液滴加入攪拌下的正己烷中,有沉淀生成,固液分離,固體真空干燥至恒重,得端基為羧基的P(LA-co-MMD);所述三乙胺為P(LA-co-MMD)質(zhì)量的1-3倍;
(7)按摩爾比為1:15-30:15-30的比例,將端基為羧基的P(LA-co-MMD)、EDC和NHS溶解在DMSO中,室溫攪拌1-2小時,加入PEI的二甲基亞砜溶液中,使端基為羧基的P(LA-co-MMD)和PEI的摩爾比為1:15-30,室溫攪拌反應(yīng)20-24小時,置于截留分子量為1.4萬的透析袋中,用超純水透析2-3天,透析液冷凍干燥得P(LA-co-MMD)-g-PEI;
所述EDC為(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)的簡稱;
所述NHS為(N-羥基丁二酰亞胺)的簡稱;
所述PEI為(聚乙烯亞胺)的簡稱;
所述DMSO為二甲基亞砜的簡稱;
(8)將P(LA-co-MMD)-g-PEI溶解于二甲基亞砜中得溶液3,向溶液3中逐滴加入MAL-PEG-NHS的DMSO溶液和CREDVW多肽的DMSO溶液;在25℃下攪拌10-15小時,置于截留分子量為7000的透析袋中,用超純水透析2-3天,透析液冷凍干燥得P(LA-co-MMD)-g-PEI-g-PEG-CREDVW多肽;
所述P(LA-co-MMD)-g-PEI、MAL-PEG-NHS和CREDVW多肽的摩爾比為1:6-12:9-18;
(9)以DMSO為溶劑,配制濃度為2-5毫克/毫升的P(LA-co-MMD)-g-PEI-g-PEG-CREDVW多肽溶液為溶液4,將溶液4以10秒一滴的速度滴入攪拌的pH=7.4的PBS緩沖溶液中,密封、靜置10-14小時,移入截留分子量為3500的透析袋中,透析2-3天,得到星形聚合物接枝多肽和聚乙烯亞胺的基因載體;
溶液4與pH=7.4的PBS緩沖溶液的體積比為1:5-20。
2.權(quán)利要求1的方法制備的星形聚合物接枝多肽和聚乙烯亞胺的基因載體。
3.權(quán)利要求2的星形聚合物接枝多肽和聚乙烯亞胺的基因載體在制備促進內(nèi)皮細胞遷移和增殖藥物的應(yīng)用。