本發(fā)明涉及一種純化
技術(shù)領(lǐng)域：
，且特別涉及一種細(xì)胞色素c及其內(nèi)毒素的去除方法。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞色素是各種生物體中都很常見的蛋白質(zhì)，它是一類含有鐵卟啉基團(tuán)的電子傳遞蛋白，只存在于缺氧細(xì)胞中，廣泛存在于真核生物的線粒體內(nèi)膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，植物的葉綠體中，以及光合成微生物和細(xì)菌中。細(xì)胞色素在線粒體內(nèi)膜上起傳遞電子的作用。細(xì)胞色素c是細(xì)胞色素中的一種，它在線粒體呼吸鏈上位于細(xì)胞色素b和細(xì)胞色素氧化酶之間，是呼吸鏈的一種重要的組成部分。每分子細(xì)胞色素c含有一個(gè)血紅素和一條多肽鏈，細(xì)胞色素c是一種穩(wěn)定的可溶性蛋白，它易溶于水及酸性溶液。在酶存在的情況下，細(xì)胞色素c對(duì)組織的氧化、還原有迅速的酶促作用。通常外源性細(xì)胞色素c不能進(jìn)入健康細(xì)胞，但在缺氧時(shí)，細(xì)胞膜的通透性增加，細(xì)胞色素c可用于組織缺氧的急救和輔助用藥，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克缺氧、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難、高山缺氧、腦缺氧、心臟病引起的缺氧等。然而，細(xì)胞色素c中的內(nèi)毒素存在制約著細(xì)胞色素c的應(yīng)用。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分，叫做脂多糖。脂多糖對(duì)宿主是有毒性的。內(nèi)毒素只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后才釋放出來，所以叫做內(nèi)毒素。其毒性成分主要為類脂質(zhì)a。內(nèi)毒素位于細(xì)胞壁的最外層、覆蓋于細(xì)胞壁的黏肽上。各種細(xì)菌的內(nèi)毒素的毒性作用較弱，大致相同，可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。內(nèi)毒素耐熱而穩(wěn)定，抗原性弱。目前，去除細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的方法，操作過程復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，內(nèi)毒素合格率低。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法，此方法制備的細(xì)胞色素c內(nèi)毒素的合格率高，且制備過程簡單，分離效果好，重復(fù)性高，樣品回收率高，分離條件溫和，具有較高的工業(yè)推廣前景。本發(fā)明的另一目的在于提供一種細(xì)胞色素c，通過此細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法去除內(nèi)毒素后制得，此細(xì)胞色素c純度與安全性更高。本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明提出一種細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法，其包括：將陰離子樹脂置入層析柱內(nèi)；用緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；調(diào)節(jié)內(nèi)毒素不合格的細(xì)胞色素c的精品溶液的ph值和電導(dǎo)率至與緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致后過濾得到澄清的上樣液；將上樣液過柱后得到流穿液。將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾。本發(fā)明提出一種細(xì)胞色素c，通過上述的細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法去除內(nèi)毒素后制得。本發(fā)明實(shí)施例的一種細(xì)胞色素c及其內(nèi)毒素的去除方法的有益效果是：本發(fā)明提供的細(xì)胞色素c主要通過陰離子樹脂層析技術(shù)去除內(nèi)毒素后制得，層析技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)主要通過以下幾方面進(jìn)行體現(xiàn)：1)層析操作簡單，只需將陰離子樹脂裝入層析柱后再用緩沖液進(jìn)行過柱處理就能制得，相比現(xiàn)有技術(shù)的制備方法，此制備方法更加的簡單便捷。2)層析的設(shè)備簡單，僅僅需要一根層析柱就能進(jìn)行。3)層析的分離效果好，通過緩沖液過柱、上樣液的過柱以及洗脫作業(yè)能使得內(nèi)毒素被吸附在陰離子樹脂上，從而有效地去除了細(xì)胞色素c中的內(nèi)毒素，提高細(xì)胞色素c的純度。4)層析的重復(fù)性高，樣品的回收率高，層析是在層析柱中進(jìn)行的，此層析柱經(jīng)過消毒殺菌后能多次重復(fù)利用。并且，層析柱為作業(yè)主要進(jìn)行的場所，經(jīng)過層析柱后的樣品均能被回收，因此樣品的回收率得到提高。5)層析的分離條件溫和，大多都在中性條件下進(jìn)行的。6)層析所得產(chǎn)品回收率達(dá)96％以上。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的一種細(xì)胞色素c及其內(nèi)毒素的去除方法進(jìn)行具體說明。一種細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法，其包括：將陰離子樹脂置入層析柱內(nèi)；用緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；調(diào)節(jié)內(nèi)毒素不合格的細(xì)胞色素c的精品溶液的ph值至與緩沖液的ph值一致后過濾得到澄清的上樣液；將上樣液過柱后得到流穿液；將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾。具體地，將陰離子樹脂置入層析柱內(nèi)。其中，陰離子樹脂又稱為陰離子交換樹脂是在分子中含有堿性基團(tuán)的離子交換樹脂。在水或極性溶劑中能溶脹，在水中具有堿性，能以其氫氧根離子或非金屬離子交換溶液中的陰離子。含有氫氧根離子的樹脂，根據(jù)電離常數(shù)的大小，可分為強(qiáng)堿性、中等堿性和弱堿性三類。強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂，主要是分子中含有季銨基-n(ch3)3oh的樹脂。弱堿性陰離子交換樹脂，有間苯二胺-甲醛樹脂、三聚氰胺-胍·甲醛樹脂等。在本發(fā)明的實(shí)施例中，陰離子樹脂包括qxl以及deae中的任一種。qxl以及deae均可以作為此方法中的陰離子樹脂。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，陰離子樹脂還可以選擇為其他種類，例如可以為間苯二胺-甲醛樹脂以及三聚氰胺-胍·甲醛樹脂中的任一種。間苯二胺-甲醛樹脂以及三聚氰胺-胍·甲醛樹脂均呈現(xiàn)弱堿性，能減小對(duì)細(xì)胞色素c中其他蛋白的損傷性。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，在裝柱前可以對(duì)陰離子樹脂進(jìn)行溶脹，溶脹是高分子聚合物在溶劑中體積發(fā)生膨脹的現(xiàn)象。聚合物溶解時(shí)先經(jīng)過吸收溶劑從而使聚合物膨脹的過程。聚合物溶解時(shí)先溶脹的原因是：1.聚合物蜷曲的形狀能提供溶劑分子擴(kuò)散進(jìn)去的空間；2.溶劑分子較小，擴(kuò)散速度較快，在聚合物擴(kuò)散至溶劑中引起它溶解之前，溶劑分子已擴(kuò)散到聚合物分子間引起它的溶脹。并且，溶劑可以選擇為乙醇，乙醇較為環(huán)保，殘留在聚合物上的乙醇可揮發(fā)，不會(huì)帶入多于的雜質(zhì)。其中，層析柱是層析技術(shù)中的主體，一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。將陰離子樹脂置入層析柱內(nèi)的過程稱為裝柱，裝柱是一次性置入柱內(nèi)，一次性置入避免了柱內(nèi)產(chǎn)生氣體或斷層。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，裝柱的具體步驟可以根據(jù)需求進(jìn)行調(diào)整，本發(fā)明不做限定。在本發(fā)明的實(shí)施例中，層析柱的柱比為25～100:1，在此柱比下，細(xì)胞色素c中分子量相差不大的大分子物質(zhì)可以得到有效地分離，從而有效地去除內(nèi)毒素。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，柱比可以根據(jù)需求進(jìn)行調(diào)整，本發(fā)明不做限定。具體地，用緩沖液平衡層析柱使得上樣液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致。其中，緩沖液是使得層析柱內(nèi)介質(zhì)的保持物理與化學(xué)平衡的一類物質(zhì)。在本發(fā)明的實(shí)施例中，緩沖液包括pbs沖液、tris緩沖液、hepes緩沖液、tes緩沖液以及mops緩沖液中的任一種。pbs緩沖液是常用的用于生物學(xué)研究的一個(gè)緩沖溶液。有助于保持恒定的ph值和電導(dǎo)率。tris緩沖液中的tris為弱堿，在25℃下，它的pka為8.1；根據(jù)緩沖理論，tris緩沖液的有效緩沖范圍在ph為7.0到9.2之間，tris緩沖液能有效地維持層析柱內(nèi)的ph值和電導(dǎo)率。mops緩沖液是一類生物緩沖劑，有助于保持恒定的ph值和電導(dǎo)率。其中，利用緩沖液平衡層析柱至少需要3～5個(gè)柱體積，柱體積為樹脂樁柱后，從柱的底板到樹脂沉積表面的體積。經(jīng)過3～5個(gè)柱體積的緩沖液平衡至基線變得平穩(wěn)，并且流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，緩沖液的用量可以根據(jù)具體情況進(jìn)行相應(yīng)地調(diào)整，本發(fā)明不做限定。具體地，調(diào)節(jié)內(nèi)毒素不合格的細(xì)胞色素c的精品溶液的ph值至與緩沖液的ph值一致后過濾得到澄清的流穿液。本發(fā)明的實(shí)施例中，采用濃度為0.1～0.2m的鹽酸進(jìn)行ph的調(diào)節(jié)，此濃度的鹽酸調(diào)節(jié)ph的效率高，且對(duì)蛋白質(zhì)的損傷較小。細(xì)胞色素c的精品溶液與緩沖液的ph一致，標(biāo)志著精品溶液的ph與陰離子樹脂的ph相同，這樣上樣液進(jìn)行過柱時(shí)，細(xì)胞色素c中的內(nèi)毒素的分離的效果更好。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，鹽酸的濃度可以根據(jù)需求進(jìn)行調(diào)整，并且調(diào)節(jié)ph的試劑也可以根據(jù)需求進(jìn)行選擇，例如可以選擇為醋酸等，本發(fā)明不做限定。其中，澄清的上樣液通過濾孔尺寸為0.2～0.53μm的第一濾膜過濾得到。濾膜是處理溶液中溶質(zhì)的分離和增濃，也常用于膠狀懸浮液的分離，其應(yīng)用領(lǐng)域在不斷擴(kuò)大。在膜的一側(cè)施以適當(dāng)壓力，就能篩出小于孔徑的溶質(zhì)分子，以分離分子量大于500道爾頓(原子質(zhì)量單位)、粒徑大于10納米的顆粒。經(jīng)過濾膜過濾后的上樣液中的大顆粒雜質(zhì)被過濾掉，間接地提高了細(xì)胞色素c的精品溶液的純度。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，濾孔的尺寸可以根據(jù)需求進(jìn)行調(diào)整，本發(fā)明不做限定。具體地，將上樣液過柱后得到流穿液。經(jīng)過上樣過程后，細(xì)胞色素c的內(nèi)毒素被穩(wěn)定地吸附在陰離子樹脂上，流穿液則為去除了內(nèi)毒素后的細(xì)胞色素c。作為優(yōu)選的方案，上樣液以2～4ml/min的速度勻速過柱，流速低，洗脫峰窄，從而增加了分辨率。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，流速也可以根據(jù)需求進(jìn)行選擇，本發(fā)明不做限定。勻速過柱可減小層析柱內(nèi)氣泡以及斷層的產(chǎn)生。具體地，將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾。其中，流穿液用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率小于500μs。5kd膜的截流率小，截流的的效果更好，當(dāng)溶液的電導(dǎo)率小于500μs時(shí)，標(biāo)志著溶液當(dāng)中的雜質(zhì)離子被去除干凈，從而保證了純化的效果。其中，過濾是通過濾孔尺寸為0.2～0.3μm的第二濾膜進(jìn)行的。采用比第一濾膜的濾孔尺寸更小的第二濾膜能有效地去除第一濾膜未去除的雜質(zhì)，提高分離效果與純化度。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法還包括在用緩沖液平衡層析柱之前用0.1～2.0m的naoh溶液以2～4ml/min的流速?zèng)_洗放入層析柱內(nèi)的陰離子樹脂4～24h后，再以2～4ml/min的流速用注射用水洗滌至層析柱內(nèi)的ph為7～8。此步驟主要是對(duì)陰離子樹脂的處理，一方面使得樹脂的層析分離效果更加好，另一方面減小了上樣液的負(fù)擔(dān)，減小了ph對(duì)于分離提純的影響。其中，注射用水指符合中國藥典注射用水項(xiàng)下規(guī)定的水。注射用水以2～4ml/min的速度過柱，流速低，洗脫峰窄，進(jìn)一步增加了分辨率。為蒸餾水或去離子經(jīng)蒸餾所得的水，故又稱重蒸餾水。注射用水能有效控制微生物污染且同時(shí)控制細(xì)菌內(nèi)毒素的水平。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法還包括在將上樣液過柱后得到流穿液之后，用緩沖液對(duì)上樣液勻速過柱后的層析柱進(jìn)行洗滌，并對(duì)洗滌液依次進(jìn)行透析以及過濾。此步驟采用緩沖液過柱，可以洗脫粘附在介質(zhì)上的細(xì)胞色素c，避免細(xì)胞色素c的浪費(fèi)，相應(yīng)地提高了產(chǎn)品率。作為優(yōu)選地方案，洗滌液可以與流穿液混合后同時(shí)進(jìn)行透析以及過濾，這樣設(shè)計(jì)可以減少器材的使用，節(jié)約成本。當(dāng)然，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，細(xì)胞色素c的精制方法還可以包括其他步驟，例如將過濾后得到的流穿液進(jìn)行冷凍以及干燥處理等。進(jìn)行冷凍干燥處理能進(jìn)一步地抑制細(xì)菌增長與繁殖，便于除去內(nèi)毒素后的精品的細(xì)胞色素c的保存與工業(yè)化利用。一種細(xì)胞色素c，通過上述的細(xì)胞色素c中內(nèi)毒素的去除方法去除內(nèi)毒素后制得。以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。實(shí)施例1本實(shí)施例提供了一種細(xì)胞色素c，通過以下方法去除內(nèi)毒素后制得：將qxl置入層析柱內(nèi)；用pbs緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；用0.1m鹽酸調(diào)節(jié)內(nèi)毒素不合格的細(xì)胞色素c的精品溶液的ph至與緩沖液的ph值一致后用濾孔尺寸為0.3～0.5μm的第一濾膜過濾得到澄清的上樣液；將上樣液以2ml/min的速度勻速過柱后得到流穿液；將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾，透析是用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率為500μs。過濾是通過濾孔尺寸為0.2μm的第二濾膜進(jìn)行的。實(shí)施例2本實(shí)施例提供了一種細(xì)胞色素c，與實(shí)施例1提供的細(xì)胞色素c的區(qū)別在于，本實(shí)施例提供的細(xì)胞色素c通過以下方法去除內(nèi)毒素后制得：將deae置入層析柱內(nèi)；用tris緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；用0.15m鹽酸調(diào)節(jié)細(xì)胞色素c的精品溶液的ph至與緩沖液的ph值一致后用濾孔尺寸為0.45μm的第一濾膜過濾得到澄清的上樣液；將上樣液以3ml/min的速度勻速過柱得到流穿液；將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾，透析是用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率為480μs。過濾是通過濾孔尺寸為0.22μm的第二濾膜進(jìn)行的。實(shí)施例3本實(shí)施例提供了一種細(xì)胞色素c，與實(shí)施例1提供的細(xì)胞色素c的區(qū)別在于，本實(shí)施例提供的細(xì)胞色素c通過以下方法去除內(nèi)毒素后制得：將間苯二胺-甲醛樹脂置入層析柱內(nèi)；用tris緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；用0.2m鹽酸調(diào)節(jié)細(xì)胞色素c的精品溶液的ph至與緩沖液的ph值一致后用濾孔尺寸為0.5μm的第一濾膜過濾得到澄清的上樣液；將上樣液以4ml/min的速度勻速過柱得到流穿液；將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾，透析是用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率為470μs。過濾是通過濾孔尺寸為0.3μm的第二濾膜進(jìn)行的。實(shí)施例4本實(shí)施例提供了一種細(xì)胞色素c，與實(shí)施例1提供的細(xì)胞色素c的區(qū)別在于，本實(shí)施例提供的細(xì)胞色素c通過以下方法去除內(nèi)毒素后制得：將三聚氰胺-胍·甲醛樹脂置入層析柱內(nèi)；用0.1m的naoh溶液以2ml/min的流速?zèng)_洗放入層析柱內(nèi)的三聚氰胺-胍·甲醛樹脂4h后，再以2ml/min的流速用注射用水洗滌至層析柱內(nèi)的ph為7。用tris緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；用0.1m鹽酸調(diào)節(jié)細(xì)胞色素c的精品溶液的ph至與緩沖液的ph值一致后用濾孔尺寸為0.45μm的第一濾膜過濾得到澄清的上樣液；將上樣液以2ml/min的速度勻速過柱得到流穿液；將收集到的流穿液依次進(jìn)行透析以及過濾，透析是用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率為460μs。過濾是通過濾孔尺寸為0.22μm的第二濾膜進(jìn)行的。實(shí)施例5本實(shí)施例提供了一種細(xì)胞色素c，與實(shí)施例1提供的細(xì)胞色素c的區(qū)別在于，本實(shí)施例提供的細(xì)胞色素c通過以下方法去除內(nèi)毒素后制得：將三聚氰胺-胍·甲醛樹脂置入層析柱內(nèi)；用0.15m的naoh溶液以3ml/min的流速?zèng)_洗放入層析柱內(nèi)的三聚氰胺-胍·甲醛樹脂10h后，再以3ml/min的流速用注射用水洗滌至層析柱內(nèi)的ph為7.5。用tris緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；用0.1m鹽酸調(diào)節(jié)細(xì)胞色素c的精品溶液的ph至與緩沖液的ph值一致后用濾孔尺寸為0.45μm的第一濾膜過濾得到澄清的上樣液；將上樣液以2ml/min的速度勻速過柱得到流穿液；用tris緩沖液過柱洗滌殘留的細(xì)胞色素c并得到洗滌液，將洗滌液與流穿液混合。將收集到的混合液依次進(jìn)行透析以及過濾，透析是用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率為455μs。過濾是通過濾孔尺寸為0.22μm的第二濾膜進(jìn)行的。實(shí)施例6本實(shí)施例提供了一種細(xì)胞色素c，與實(shí)施例1提供的細(xì)胞色素c的區(qū)別在于，本實(shí)施例提供的細(xì)胞色素c通過以下方法去除內(nèi)毒素后制得：將三聚氰胺-胍·甲醛樹脂置入層析柱內(nèi)；用0.2m的naoh溶液以4ml/min的流速?zèng)_洗放入層析柱內(nèi)的三聚氰胺-胍·甲醛樹脂24h后，再以4ml/min的流速用注射用水洗滌至層析柱內(nèi)的ph為8。用tris緩沖液平衡層析柱使得流出液的ph值和電導(dǎo)率與上柱的緩沖液的ph值和電導(dǎo)率一致；用0.1m鹽酸調(diào)節(jié)細(xì)胞色素c的精品溶液的ph至與緩沖液的ph值一致后用尺寸為濾孔0.45μm的第一濾膜過濾得到澄清的上樣液；將上樣液以2ml/min的速度勻速過柱得到流穿液；用tris緩沖液過柱洗滌殘留的細(xì)胞色素c并得到洗滌液，將洗滌液與流穿液混合。將收集到的混合液依次進(jìn)行透析以及過濾，透析是用5kd膜透析至溶液電導(dǎo)率為450μs。過濾是通過濾孔尺寸為0.22μm的第二濾膜進(jìn)行的。實(shí)驗(yàn)例1將實(shí)施例1～6所制備的細(xì)胞色素c各取十份，利用鱟試劑進(jìn)行內(nèi)毒素合格測試，此測試?yán)明c試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝膠反應(yīng)的特點(diǎn)，測試結(jié)果如表1所示。表1.測試結(jié)果編號(hào)試劑最終狀態(tài)實(shí)施例1十份均為陰性實(shí)施例2十份均為陰性實(shí)施例3十份均為陰性實(shí)施例4十份均為陰性實(shí)施例5十份均為陰性實(shí)施例6十份均為陰性根據(jù)表1所示的數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明的實(shí)施例提供的精制后的細(xì)胞色素c的內(nèi)毒素含量均完全合格。由此可知，通過本發(fā)明實(shí)施例提供的精制方法，可以有效地去除細(xì)胞色素c中的內(nèi)毒素。以上所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁12