本發(fā)明涉及生物，具體涉及一種鴿蛋清功能肽及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、鴿蛋自古以來便是益氣補(bǔ)血、美容養(yǎng)顏的佳品，其中富含高質(zhì)量蛋白、人體所需的微量元素及多種維生素。目前鴿蛋的加工處理方法較為單一，多為直接煮制，鴿蛋中的營養(yǎng)成分在人體內(nèi)的吸收利用較為有限。同時，鴿蛋中的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)資源也未被發(fā)掘。因此，提供一種鴿蛋清功能肽的制備方法，有利于鴿蛋營養(yǎng)物質(zhì)的進(jìn)一步開發(fā)利用。

2、生物活性肽又叫功能肽，來源于微生物或動植物，具有一定的生物學(xué)活性或生理功能，其相對分子量通常低于60000，易于被機(jī)體吸收利用。隨著人們對小分子功能肽的研究愈發(fā)深入，各行各業(yè)展現(xiàn)除對功能肽的需求。在化妝品、保健品和藥物領(lǐng)域，尋找具有抗氧化、輔助鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)吸收的天然活性物質(zhì)一直是研究的重點(diǎn)。酶解法是制備功能肽最常用的方法，因?yàn)槊附夥磻?yīng)條件溫和、反應(yīng)速度快、成本較低且反應(yīng)易于控制，使用該方法制備活性肽不僅能提高蛋白質(zhì)的功能性質(zhì)和生物學(xué)特性，同時也能提高蛋白質(zhì)的商業(yè)價值。然而，鴿蛋清來源的功能肽還未被挖掘，因此以鴿蛋清作為原料制備功能肽具有重要意義。

3、鐵元素缺乏易導(dǎo)致嬰幼兒、孕婦以及老年人等敏感人群發(fā)生營養(yǎng)不良的癥狀，包括影響免疫系統(tǒng)、生長發(fā)育遲緩及智力低下等，但目前的補(bǔ)鐵制劑存在一定的不足，以氯化亞鐵為代表的無機(jī)鐵鹽吸收率低，胃腸道刺激強(qiáng)；乳酸亞鐵等有機(jī)鐵穩(wěn)定性差。研究發(fā)現(xiàn)，以蛋白多肽為載體整合亞鐵離子制得的肽亞鐵補(bǔ)充劑可有效避免這些不足，兼具補(bǔ)鐵作用和肽的營養(yǎng)功能，能被人體有效吸收。因此，開發(fā)肽亞鐵營養(yǎng)補(bǔ)充劑具有重要的實(shí)際意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種鴿蛋清功能肽。

2、本發(fā)明還要解決的技術(shù)問題是提供上述鴿蛋清功能肽的制備方法。

3、本發(fā)明最后要解決的技術(shù)問題是提供上述鴿蛋清功能肽在在制備抗氧化制劑或促進(jìn)上皮細(xì)胞鐵吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)制劑中的應(yīng)用。

4、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

5、一種鴿蛋清功能肽，所述鴿蛋清功能肽的氨基酸序列為下所示：ala-his-leu-arg-ala-phe-trp-arg，即ahlrafwr。

6、其中，所述鴿蛋清功能肽可以通過鴿蛋清天然提取或人工合成得到。

7、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述鴿蛋清功能肽是從鴿蛋清干粉中提取得到的。

8、其中，所述鴿蛋清功能肽，經(jīng)測定，其分子量為1182.225da。

9、其中，所述鴿蛋清功能肽，其對細(xì)胞的毒性很低，具有顯著的抗氧化性，能夠有效螯合亞鐵離子，促進(jìn)亞鐵離子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收。

10、編碼所述鴿蛋清功能肽的核酸分子也在本發(fā)明所保護(hù)的范圍之內(nèi)。

11、一種本發(fā)明所述鴿蛋清功能肽的制備方法，利用硫酸銨鹽析法純化鴿蛋清蛋白，使用蛋白酶對純化后的鴿蛋清蛋白進(jìn)行酶解制備得到鴿蛋清酶解液，再將鴿蛋清酶解液經(jīng)分離純化、冷凍干燥，即得所述鴿蛋清功能肽。

12、其中，所述利用硫酸銨鹽析法純化鴿蛋清蛋白，具體是將鴿蛋清干粉溶于水中，再加入飽和硫酸銨，鹽析后離心取上清液，調(diào)節(jié)ph、靜置離心后收集沉淀，再將沉淀復(fù)溶于水，經(jīng)透析、干燥得到純化的鴿蛋清蛋白。

13、具體的，所述鴿蛋清干粉、水和飽和硫酸銨的質(zhì)量比為1：10～30：50～80；優(yōu)選的，所述鴿蛋清干粉、水和飽和硫酸銨的質(zhì)量比為1：25：65。

14、具體的，所述鹽析，其條件為：4℃過夜鹽析。

15、具體的，所述調(diào)節(jié)ph至4.0～6.0，優(yōu)選的調(diào)節(jié)ph至4.5～5.5，更優(yōu)選的調(diào)節(jié)ph至4.5。

16、其中，所述使用蛋白酶對純化后的鴿蛋清蛋白進(jìn)行酶解制備得到鴿蛋清酶解液，具體是將所述鴿蛋清蛋白溶于水制成蛋白溶液，再將蛋白溶液熱處理、調(diào)節(jié)ph后，加入蛋白酶進(jìn)行酶解即得鴿蛋清酶解液。

17、具體的，所述蛋白溶液，其濃度為50～80g/l，優(yōu)選的所述蛋白溶液濃的度為60g/l。

18、具體的，所述熱處理，其條件為：80～90℃水浴15～25min。

19、具體的，所述調(diào)節(jié)ph至5.0～6.0，優(yōu)選的，調(diào)節(jié)ph至5.5。

20、具體的，所述蛋白酶為食品級、安全性較高的木瓜蛋白酶，其添加量為所述鴿蛋清蛋白的2～4wt％。

21、具體的，所述酶解，其條件為：45～60℃、100～300r/min酶解3～5h。

22、其中，所述分離純化，先利用超濾膜超濾收集分子量在3000da以下的組分，再使用凝膠色譜繼續(xù)分離純化。

23、具體的，所述超濾膜超為3000da的濾膜；所述超濾在0.3mpa的條件下進(jìn)行；所述凝膠色譜為sephadex?g-15凝膠色譜，所用洗脫液為純水，檢測波長為280nm。

24、在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，將各洗脫峰收集后凍干，通過測定體外螯合鐵的活性，將活性較高的f2組分冷凍干燥即得本發(fā)明所述鴿蛋清功能肽ahlrafwr。

25、所述鴿蛋清功能肽或所述核酸分子在制備抗氧化制劑或促進(jìn)上皮細(xì)胞鐵吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)制劑中的應(yīng)用也在本發(fā)明所保護(hù)的范圍之內(nèi)。

26、一種制劑，所述制劑含有所述的鴿蛋清功能肽也在本發(fā)明所保護(hù)的范圍之內(nèi)。

27、有益效果：

28、(1)本發(fā)明以蛋白酶酶解制備得到了一種新的鴿蛋清功能肽ahlrafwr，其制備工藝簡單，過程溫和，較好地保持了鴿蛋清功能肽的活性，且成本低廉。本發(fā)明提高了鴿蛋的附加價值，拓寬了鴿蛋的商業(yè)用途。

29、(2)本發(fā)明提供了一種簡便可行的鴿蛋清功能肽的制備方法，本發(fā)明制備過程未添加任何有機(jī)溶劑，所用蛋白酶為食品級，因此對環(huán)境無污染且對人體無害。

30、(3)本發(fā)明制備得到的鴿蛋清功能肽ahlrafwr具有優(yōu)異的抗氧化活性，對dpph和abts顯示出良好的抗氧化能力，可有效減輕氧化應(yīng)激、清除自由基，預(yù)防細(xì)胞損傷和老化。同時，能夠有效螯合亞鐵離子，促進(jìn)鐵離子向腸上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收，從而有助于改善由缺鐵造成的貧血癥狀，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定。

技術(shù)特征：

1.一種鴿蛋清功能肽，其特征在于，所述鴿蛋清功能肽的氨基酸序列為ahlrafwr。

2.編碼權(quán)利要求1所述鴿蛋清功能肽的核酸分子。

3.權(quán)利要求1所述的鴿蛋清功能肽的制備方法，其特征在于，利用硫酸銨鹽析法純化鴿蛋清蛋白，使用蛋白酶對純化后的鴿蛋清蛋白進(jìn)行酶解制備得到鴿蛋清酶解液，再將鴿蛋清酶解液經(jīng)分離純化、冷凍干燥，即得所述鴿蛋清功能肽。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述利用硫酸銨鹽析法純化鴿蛋清蛋白，是將鴿蛋清干粉溶于水中，再加入飽和硫酸銨，鹽析后離心取上清液，調(diào)節(jié)ph、靜置離心后收集沉淀，再將沉淀復(fù)溶于水，經(jīng)透析、干燥得到純化的鴿蛋清蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述鴿蛋清干粉、水和飽和硫酸銨的質(zhì)量比為1：10～30：50～80；所述鹽析，其條件為：4℃過夜鹽析；所述調(diào)節(jié)ph至4.0～6.0，優(yōu)選的調(diào)節(jié)ph至4.5～5.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述使用蛋白酶對純化后的鴿蛋清蛋白進(jìn)行酶解制備得到鴿蛋清酶解液，具體是將所述鴿蛋清蛋白溶于水制成蛋白溶液，再將蛋白溶液熱處理、調(diào)節(jié)ph后，加入蛋白酶進(jìn)行酶解即得鴿蛋清酶解液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述蛋白溶液，其濃度為50～80g/l；所述熱處理，其條件為：80～90℃水浴15～25min；所述調(diào)節(jié)ph至5.0～6.0；所述蛋白酶為木瓜蛋白酶，其添加量為所述鴿蛋清蛋白的2～4wt％；所述酶解，其條件為：45～60℃、100～300r/min酶解3～5h。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述分離純化，先利用超濾膜超濾收集分子量在3000da以下的組分，再使用凝膠色譜繼續(xù)分離純化。

9.權(quán)利要求1所述鴿蛋清功能肽或權(quán)利要求2所述核酸分子在制備抗氧化制劑或促進(jìn)上皮細(xì)胞鐵吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)制劑中的應(yīng)用。

10.一種制劑，其特征在于，所述制劑含有權(quán)利要求1所述鴿蛋清功能肽。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鴿蛋清功能肽及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明利用硫酸銨鹽析法，再經(jīng)蛋白酶酶解、分離純化、冷凍干燥，制備得到了一種鴿蛋清功能肽，其氨基酸序列為AHLRAFWR。該制備工藝簡單，過程溫和，較好地保持了鴿蛋清功能肽的活性，且成本低廉，提高了鴿蛋的附加價值，拓寬了鴿蛋的商業(yè)用途。制備得到的鴿蛋清功能肽具有優(yōu)異的抗氧化活性，對DPPH和ABTS顯示出良好的抗氧化能力，可有效減輕氧化應(yīng)激、清除自由基，預(yù)防細(xì)胞損傷和老化，同時能夠促進(jìn)鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)吸收，從而改善由缺鐵造成的貧血癥狀，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定。

技術(shù)研發(fā)人員：孟俊,楊海明,馬銀潔,周慧,周俊
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京衛(wèi)斯登生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/5