五味子木脂素單一組分的制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種五味子木脂素單一組分的制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是向親油性五味子木脂素提取物中加入表面活性劑形成均一的水溶液，才可采用大孔吸附樹脂進(jìn)行初步純化，然后采用ODS-A-HG或ODS-A的反相C18填料進(jìn)行層析純化，用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，得到純度為98%以上的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素單一組分。
【背景技術(shù)】
[0002]五味子(SbAisaflt/rachinensis (Turcz.) ifei77)，集酸、甜、苦、辣、咸五味于一身而得名。五味子的主要活性成分是木脂素，具有保肝、抗氧化、消炎、抗癌、抗艾滋病等功效。五味子木脂素成分不同，功效不同。在保肝抑制急性肝衰竭，增加肝糖原合成的五味子成分中，五味子醇乙效果明顯，五味子乙素次之，其它成分作用不大；五味子醇甲對(duì)中樞神經(jīng)有安定作用，可治療失眠癥；五味子酚、五味子乙素對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用明顯影響，五味子醇甲和五味子醇乙無(wú)明顯影響；五味子甲素是一個(gè)與所有目前已知的多重耐藥性逆轉(zhuǎn)劑完全不同的天然成分，可以逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥，然而五味子醇甲、五味子丙素和五味子乙素、五味子醇乙、五味子酚等沒(méi)有逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的活性，或者活性很弱。目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的五味子木脂素主要為五味子總素和低含量的木脂素，價(jià)格低廉。用粗提物制備藥物，不能充分發(fā)揮藥物的功效，可能會(huì)出現(xiàn)藥效拮抗或帶來(lái)一些副作用。制備純的木脂素可以用作藥物，可以用于生物活性的實(shí)驗(yàn)研宄，可以作為分析檢測(cè)的對(duì)照品，目前五味子對(duì)照品主要來(lái)源于國(guó)外進(jìn)口，而且價(jià)格相當(dāng)昂貴。
[0003]在五味子木脂素的分離純化報(bào)道中，申請(qǐng)?zhí)枮?00910242188.X (發(fā)明名稱:五味子單體成分的分離制備方法)和王磊等人(王磊，魏蕓，袁其朋.高速逆流法分離純化五味子中的五味子酚.北京化工大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2009，2: 77-80.)采用高速逆流層析法分離木脂素，但要求提取物先經(jīng)過(guò)硅膠柱層析純化后，再采用高速逆流層析操作，此法處理量少而且成本高。申請(qǐng)?zhí)枮?00910010631.0 (發(fā)明名稱:一種制備五味子醇甲和五味子醇乙的新工藝)采用硅膠柱層析法，硅膠柱一次上柱純化效果差，需要反復(fù)多次層析操作，多種有機(jī)溶劑梯度洗脫的方法，效率低、成本高。申請(qǐng)?zhí)枮?00710150140.7 (發(fā)明名稱:一種五味子的有效組分及其制備方法與用途)采用乙酸乙酯和乙醇的混合溶劑進(jìn)行提取，將得到的浸膏乙醇溶解后直接過(guò)0DS-C18柱，95%的乙醇洗脫得到的混合物再上ZorbaxSB-C18制備色譜，水和乙腈混合液梯度洗脫，兩次的C18柱層析法，處理量少，試劑乙腈成本尚。
[0004]大孔樹脂吸附法從天然植物中分離提取活性成分，具有低的操作成本，低的溶劑消耗和容易再生的優(yōu)點(diǎn)，已在環(huán)保、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。樹脂吸附的物質(zhì)都是水溶性或一定溶解度的有機(jī)物，五味子木脂素是親油性有機(jī)物，不能溶解和均勻地分散到水溶液中，容易導(dǎo)致樹脂床層的堵塞，不能有效地采用樹脂吸附的方法進(jìn)行分離純化，如申請(qǐng)?zhí)?00910216886.2 (發(fā)明名稱:一種富集純化五味子中五味子醇甲的方法)，及尹滟等人的報(bào)道(尹滟，劉嚴(yán)生，于葉玲，唐星.用大孔樹脂提取和純化五味子總木脂素.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，24 (2):113-118.)。Ma 等人(Chun-hui Ma, Ting-ting Liu, LeiYang, Yuan-gang Zu, Feng-jian Yang, Chun-jian Zhao, Lin Zhang, Zhong-hua Zhang.Preparat1n of high purity biphenyl cyclooctene lignans from Schisandra extractby 1n exchange resin catalytic transformat1n combined with macroporous resinseparat1n.Journal of Chromatography B, 2011, 879(30): 3444-3451)和Caichompoo等人(Wanida Caichompoo, Qiao-yan Zhang, Ting-ting Hou, Hua-juan Gao, Lu-pingQin， Xiu-jia Zhou.0ptimizat1n of extract1n and purificat1n of activefract1ns from Schisandra chinensis (Turcz.) and its osteoblastic proliferat1nstimulating activity.Phytotherapy Research, 2009, 23(2): 289-292.)米用加入乙醇到水溶液中以增加親油性物質(zhì)在水溶液中的溶解度，然后采用樹脂吸附初步純化的方法。為增加親油性物質(zhì)在水相中的溶解度和分散度，需要增加乙醇的濃度，乙醇是常用的解吸劑，乙醇的存在使吸附量降低，如果降低乙醇的濃度，將增加親油性物質(zhì)與溶液中雜質(zhì)的聚集和沉淀。
[0005]考慮到木脂素不溶于水，乙醇不利于樹脂吸附的兩個(gè)特性，為了更好地提高木脂素的純度和利用效果，本發(fā)明采用加入表面活性劑的方法，將木脂素類親油性生物活性成分均勻分散于不含乙醇的水溶液中，得到均一穩(wěn)定的溶液，然后進(jìn)行大孔樹脂初步分離及純化五味子總木脂素，減輕后續(xù)層析純化操作的負(fù)荷，最后采用C18反相層析介質(zhì)ODS-A-HG或ODS-A進(jìn)一步純化木脂素，乙醇水溶液梯度洗脫獲得高純度的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素單品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是采用廉價(jià)而應(yīng)用廣泛的大孔吸附樹脂法進(jìn)行初步純化，采用加入表面活性劑的方法使親油性木脂素提取物均勻分散在水溶液中，以利于樹脂的吸附操作；然后米用反相C18填料的ODS-A-HG或ODS-A層析介質(zhì)對(duì)木脂素進(jìn)行層析，乙醇水溶液梯度洗脫的方法得到五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素單品。
[0007]本發(fā)明技術(shù)方案所采用的生產(chǎn)工藝過(guò)程為:五味子果實(shí)一一烘干一一粉碎一一乙醇回流提取一一濃縮一一乙酸乙酯萃取一一濃縮一一吐溫40和水混合分散成均一水溶液一一大孔吸附樹脂初步純化一一ODS-A-HG或ODS-A層析一一梯度洗脫一一濃縮干燥木脂素單品。
[0008]具體路線是:取適量五味子果實(shí)，經(jīng)干燥后，再用粉碎機(jī)粉碎成粉末，加入60%?100%乙醇水溶液回流提取2次，每次I?2