木脂素類化合物(7s,8r)-二氫脫氫二松柏醇在制備抗補體藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種從藥用植物山芝麻中分離得到的木脂素類化合物 (7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇在制備抗補體藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 研究顯示，補體系統(tǒng)的過度激活會引發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性呼 吸窘迫綜合征等多種重大疾病，然而目前對此類疾病尚缺乏較為理想的治療藥物，因此臨 床上急需高效、低毒、專一的新型補體抑制劑。從天然產(chǎn)物中研究開發(fā)補體抑制劑是近年來 一個受到越來越多關(guān)注的重要研究領(lǐng)域，其具有成本低、毒性小等特點。國內(nèi)外學(xué)者已從包 括海洋生物在內(nèi)的多種天然產(chǎn)物中分離得到多種具有補體系統(tǒng)抑制作用的單體化合物，為 抗補體藥物的研究與開發(fā)提供了廣闊的前景。
[0003] 山芝麻為梧桐科植物山芝麻（Helicteres angustifolia L.)的干燥根或全株，味 苦、性寒，歸肺、大腸經(jīng)，可解表清熱、解毒消腫，用于治療感冒發(fā)熱、痄腮、乳娥、麻疹、咳嗽、 泄瀉痢疾、癰腫?，F(xiàn)代藥理研究表明山芝麻具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗腫瘤等活性。研究 發(fā)現(xiàn)，木脂素類化合物還具有多種生物活性，如抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等，
[0004] 迄今為止，尚未見有關(guān)木脂素類化合物（7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇抗補體活性 的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供木脂素類化合物（7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇在制備抗補體 藥物中的用途。
[0006] 本發(fā)明所述的木脂素類化合物具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)：
[0007]
[0008] 本發(fā)明所述的化合物從山芝麻中分離得到，通過下述方法制備：
[0009] 取山芝麻干燥根25kg，粉碎，用95 %乙醇回流提取3次（50LX 3)，每次2h，合 并提取液并濃縮得浸膏〇.95kg，加水（4L)混懸，分別以等體積石油醚、乙酸乙酯和正 丁醇萃取5次，合并萃取液并濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物200g。將乙酸乙酯萃取部 位經(jīng)硅膠（200-300目）柱色譜分離，依次以二氯甲烷-甲醇（50:1-0:1)梯度洗脫， 得到11個流份（Fr.l-ΙΙ)，其中流份Fr.3(32g)再經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇， 30: 1，20: 1，10: 1，5: 1，3: 1，I: I)、MPLC (甲醇-水，20:80-80:20 梯度洗脫）和 s印hadex LH-20柱色譜等手段純化，分離得到化合物（7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇[(7S，8R) -dihydro dehydrodiconiferyl alcohol]〇
[0010] 本發(fā)明從山芝麻屬植物山芝麻（H. angustifolia)干燥根的乙醇提取物乙酸乙酯 萃取部位中分離得到1個木脂素類化合物，并應(yīng)用現(xiàn)代藥理研究方法，對分離得到的單體 化合物進行抗補體活性評價，實驗證實其對補體系統(tǒng)經(jīng)典途徑和旁路途徑補體激活均有較 強的抑制作用。
[0011] 本發(fā)明所述的化合物可用作制備抗補體藥物。
【附圖說明】
[0012] 圖1是山芝麻根中化合物（7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇的提取分離流程圖。
【具體實施方式】
[0013] 實施例1制備（7S，8R)_二氫脫氫二松柏醇
[0014] 取山芝麻干燥根25kg，粉碎，用95 %乙醇回流提取3次（50LX 3)，每次2h，合 并提取液并濃縮得浸膏〇.95kg，加水（4L)混懸，分別以等體積石油醚、乙酸乙酯和正 丁醇萃取5次，合并萃取液并濃縮至干，得乙酸乙酯萃取物200g。將乙酸乙酯萃取部 位經(jīng)硅膠（200-300目）柱色譜分離，依次以二氯甲烷-甲醇（50:1-0:1)梯度洗脫， 得到11個流份（Fr.l-ΙΙ)，其中流份Fr.3(32g)再經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇， 30: 1，20: 1，10: 1，5: 1，3: 1，I: I)、MPLC (甲醇-水，20:80-80:20 梯度洗脫）和 s印hadex LH-20柱色譜等手段純化，分離得到化合物（7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇[(7S，8R) -dihydro dehydrodiconiferyl alcohol]〇
[0015] 所得化合物為黃色油狀物，分子式C2qH24O6，三氯化鐵反應(yīng)呈陽性，提示有酚羥 基。 |>廣-7. 8 (cl. 34, MeOH) ;IR(KBr) : unax (cm 3 :3456, 3225, 2920, 1615, 1522, 1458， 1268, Π 22, 1〇38 ；UV: (MeOH) Anax nm(log ε ) ： 206. 6 (3. 26), 238. 4 (2. 12), 282. 3 (I. 44)； ESI-MS m/z: 383 [M+Na]+。1H-NMR (600MHz, CD3OD) δ H: 6· 97 (1H, d, J = I. 8Hz)，6· 84 (1H, dd, J =1.8,7. 8Hz) ,6.79 (lH，d, J = 7·8Ηζ) ,6.74 (2H，s) ,5.51 (lH，d, J = 6·6Ηζ) ,3.86 (3Η ,s), 3. 82(3Η, s), 3. 59(2Η, t, J = 6. 5Ηζ), 2. 64(2Η, m), L 84(2Η, tt, J = 13. 2, 6. 5Ηζ) 〇 13C-匪R(150MHz, CD3OD) δ c: 134. 8(01)，110. 5(02)，149. 0(03)，147. 4(04)，116. 1 (C-5), 119. 7(C-6), 89. 0(C-7), 55. 4(C-8), 64. 9(C-9), 136. 9(C-1'），114. 0(C-2'），14 5. 2 (C-3,），147. 5 (C-4,），129. 9 (C-5,），117. 9 (C-6,），35. 8 (C-7,），32. 9 (C-8,），62. 2 ( C-9'），56. 7, 56. 3。
[0016] 實施例2體外抗補體經(jīng)典途徑激活試驗
[0017] 取補體（豚鼠血清）0. 04ml，加入巴比妥緩沖液（BBS)配制成1:10的溶液，用BBS 對倍稀釋成 1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640和 1:1280 的溶液。取 1:1000溶血素、2% 羊紅細胞（SRBC)各0.1 ml及各濃度補體0. 2ml溶于0. 2ml BBS中，混勻，37°C水浴30min 后放入低溫高速離心機，在4000rpm、4°C條件下離心5min。分別取每管上清0. 2ml于96孔 板，在405nm測定其吸光度。實驗同時設(shè)置全溶血組（0.1 ml 2% SRBC、0.1 ml溶血素溶于 0.4ml三蒸水）。以三蒸水溶血管的吸光度作為全溶血標準，計算溶血率。以補體稀釋度為 X軸，溶血百分率為Y軸作圖。選擇達到相似高溶血率的最低補體濃度作為確保體系能正常 溶血所需的臨界補體濃度。取臨界濃度的補體與供試品混勻，按上述方法于405nm下測定 吸光度。實驗同時設(shè)置供試品對照組、補體組和全溶血組。將供試品吸光度值扣除相應(yīng)供 試品對照組吸光度值后計算溶血率。以供試品濃度作為X軸，溶血抑制率作為Y軸作圖，計 算50%抑制溶血所需供試品的濃度（CH 5q)。
[0018] 實施例3體外抗補體旁路途徑激活試驗
[0019] 取補體（人血清）0· 2ml，加入AP稀釋液（巴比妥緩沖液，pH = 7. 4,含5mMMg2+，8mM EGTA)配制成1:5的溶液，并對倍稀釋成1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320和1:640的溶 液。取各濃度補體〇. 15ml、AP稀釋液0. 15ml及0. 5%兔紅細胞（RE)O. 20ml，混勻，37°C水 浴30min后置于低溫高速離心機，在4000rpm、4°C條件下離心5min。分別取每管上清0. 2ml 于96孔板，在405nm測定吸光度。實驗同時設(shè)置全溶血組（0. 20ml 0. 5% RE溶于0. 3ml三 蒸水）。以三蒸水溶血管的吸光度作為全溶血標準，計算溶血率。以補體稀釋度為X軸，溶 血百分率為Y軸作圖。選擇達到相似高溶血率的最低補體濃度作為確保體系能正常溶血所 需的臨界補體濃度。取確定的臨界濃度的補體與供試品混勻，按上述方法于405nm下測定 其吸光度。實驗同時設(shè)置供試品對照組、補體組和全溶血組。將供試品吸光度值扣除相應(yīng) 供試品對照組吸光度值后計算溶血率。以供試品濃度作為X軸，溶血抑制率作為Y軸作圖， 計算50%抑制溶血所需供試品的濃度（AP50)。
[0020] 上述木脂素類化合物經(jīng)過體外抗補體活性試驗測定，結(jié)果表明其對補體系統(tǒng)的經(jīng) 典途徑和旁路途徑補體激活均有較強的抑制作用，50%溶血所需最小供試品濃度如表1所 示。所述化合物可用于制備補體抑制劑。
[0021] 表1. (7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇對經(jīng)典途徑和旁路途徑的補體抑制作用
[0023] 本發(fā)明中實驗采用的試劑均為本領(lǐng)域公知技術(shù)，可市購。
【主權(quán)項】
1. 如下式的木脂素類化合物（7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇在制備抗補體藥物中的用 途，2. 按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的木脂素類化合物（7S，8R)_二氫脫氫 二松柏醇通過下述方法制備： 取山芝麻干燥根，粉碎，用95%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液并濃縮得浸膏， 加水混懸，分別以等體積石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取5次，合并萃取液并濃縮至干，得 乙酸乙酯萃取物；將乙酸乙酯萃取部位經(jīng)硅膠200-300目柱色譜分離，依次以二氯甲烷-甲 醇50:1-0:1梯度洗脫，得到11個流份為Fr. 1-11，其中流份Fr. 3再經(jīng)硅膠柱色譜，其中： 二氯甲烷-甲醇，30:1,20:1, 10:1,5:1,3:1，1:1、MPLC，其中：甲醇-水，20:80-80:20 梯度 洗脫和sephadex LH-20柱色譜純化，分離得到化合物（7S，8R)_二氫脫氫二松柏醇。3. 按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的化合物抑制補體系統(tǒng)經(jīng)典途徑和旁 路途徑的補體激活。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種木脂素類化合物(7S,8R)-二氫脫氫二松柏醇在制備抗補體藥物中的用途。本發(fā)明從山芝麻屬植物山芝麻(Helicteres？angustifolia？L.)的干燥根中分離得到1個木脂素類化合物(7S,8R)-二氫脫氫二松柏醇，并采用現(xiàn)代藥理研究方法證實其對補體系統(tǒng)經(jīng)典途徑和旁路途徑的補體激活均有較強的抑制作用，其CH50值為0.0032mg/ml，AP50值為0.0077mg/ml,可作為活性成分用于制備抗補體藥物。
【IPC分類】C07D307/80, A61K31/343, A61P37/02
【公開號】CN105520926
【申請?zhí)枴緾N201410505707
【發(fā)明人】陳道峰, 殷翔, 盧燕
【申請人】復(fù)旦大學(xué)
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2014年9月28日