脂柱進(jìn)行解吸，并收集蛋白；
(6)納濾濃縮
將步驟(5)得到的精制濾液采用納濾膜進(jìn)行濃縮，得到大分子液和小分子液，其中，一部分小分子液送入步驟(2) —次膜過濾工序，剩余小分子液送入步驟(3) 二次膜過濾工序；
(7)氰化鈉轉(zhuǎn)化
向步驟(6)得到的大分子液中加入適量氰化鈉得到含氰精制濾液；
(8)三級吸附柱除雜結(jié)晶
將步驟(7)得到的含氰精制濾液進(jìn)行三級吸附樹脂柱除雜結(jié)晶，最終得到純品氰鈷胺(VBI2);
(9)將步驟(2)—次膜過濾工序收集到的一次膜濃縮液和步驟(3) 二次膜過濾工序收集到的二次膜濃縮液混合后進(jìn)行分離，分離出的清液送入步驟(I)水解工序，分離出的濃渣無助濾劑菌絲體與步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白和步驟(5)蛋白吸附工序得到的蛋白一起收集，用于深加工；
(10)將步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白進(jìn)行焚燒處理；
本實(shí)施例，得到的無助濾劑蛋白占蛋白總量的93%，氰化鈉用量比傳統(tǒng)工藝降低92%，VB12的總收率提高2.3%，總收率達(dá)83.5%。
[0013]實(shí)施例3
(1)水解
以葡萄糖、玉米漿、糖蜜、甜菜堿為原料發(fā)酵得到VB12發(fā)酵液，向發(fā)酵液中加入I倍發(fā)酵液質(zhì)量的水，加熱至95°C進(jìn)行水解，釋放出細(xì)胞內(nèi)的VB12，得到水解液；
(2)一次膜過濾
將步驟(I)得到的水解液采用過濾精度為10nm的金屬膜系統(tǒng)進(jìn)行過濾去除蛋白、菌絲體等雜質(zhì)，過濾壓力為0.36?0.41Mpa，溫度為60°C，當(dāng)透過液濾出速度明顯下降時(shí)，向膜系統(tǒng)中加入一定量的水繼續(xù)過濾，當(dāng)水解液中VB12含量低于5 μ g/L時(shí)，停止加水，過濾結(jié)束，收集一次膜透過液，收集一次膜濃縮液；
(3)二次膜過濾
將步驟(2)得到一次膜透過液采用截留分子量為30000的超濾膜系統(tǒng)進(jìn)行過濾除雜，過濾壓力為0.7?0.8Mpa，溫度為45°C，當(dāng)透過液濾出速度明顯下降時(shí)，向膜系統(tǒng)中加入一定量的水繼續(xù)過濾，當(dāng)水解液中VB12含量低于5 μ g/L時(shí)，停止加水，過濾結(jié)束，收集二次膜透過液，收集二次膜濃縮液；
(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白
將步驟(3)得到的二次膜透過液采用立式預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓離心機(jī)脫蛋白，濾布過濾精度為800目，預(yù)涂劑為娃藻土和珍珠巖，娃藻土:珍珠巖質(zhì)量比為1:50，當(dāng)?shù)鞍追e累至一定厚度被刮刀刮下，收集刮下的無助濾劑蛋白，當(dāng)脫蛋白結(jié)束時(shí)，調(diào)節(jié)刮刀間距，刮下少量的有助濾劑蛋白并收集，收集轉(zhuǎn)鼓濾液；
(5)蛋白吸附
將步驟(4)得到的轉(zhuǎn)鼓濾液采用蛋白吸附樹脂柱吸附其中的蛋白雜質(zhì)，得到精制濾液；采用酸液或堿液或次氯酸鈉對蛋白吸附樹脂柱進(jìn)行解吸，并收集蛋白；
(6)納濾濃縮
將步驟(5)得到的精制濾液采用納濾膜進(jìn)行濃縮，得到大分子液和小分子液，其中，一部分小分子液送入步驟(2) —次膜過濾工序，剩余小分子液送入步驟(3) 二次膜過濾工序；
(7)氰化鈉轉(zhuǎn)化
向步驟(6)得到的大分子液中加入適量氰化鈉得到含氰精制濾液；
(8)三級吸附柱除雜結(jié)晶
將步驟(7)得到的含氰精制濾液進(jìn)行三級吸附樹脂柱除雜結(jié)晶，最終得到純品氰鈷胺(VBI2);
(9)將步驟(2)—次膜過濾工序收集到的一次膜濃縮液和步驟(3) 二次膜過濾工序收集到的二次膜濃縮液混合后進(jìn)行分離，分離出的清液送入步驟(I)水解工序，分離出的濃渣無助濾劑菌絲體與步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白和步驟(5)蛋白吸附工序得到的蛋白一起收集，用于深加工；
(10)將步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白進(jìn)行焚燒處理。
[0014]本實(shí)施例，得到的無助濾劑蛋白占蛋白總量的91.5%，氰化鈉用量比傳統(tǒng)工藝降低90.5%，VB12的總收率提高2.7%，總收率達(dá)83.7%。
[0015] 實(shí)施例4
(1)水解
以葡萄糖、玉米漿、糖蜜、甜菜堿為原料發(fā)酵得到VB12發(fā)酵液，向發(fā)酵液中加入I倍發(fā)酵液質(zhì)量的水，加熱至97°C進(jìn)行水解，釋放出細(xì)胞內(nèi)的VB12，得到水解液；
(2)一次膜過濾
將步驟(I)得到的水解液采用過濾精度為200nm的陶瓷膜系統(tǒng)進(jìn)行過濾去除蛋白、菌絲體等雜質(zhì)，過濾壓力為0.36?0.41Mpa，溫度為65°C，當(dāng)透過液濾出速度明顯下降時(shí)，向膜系統(tǒng)中加入一定量的水繼續(xù)過濾，當(dāng)水解液中VB12含量低于5 μ g/L時(shí)，停止加水，過濾結(jié)束，收集一次膜透過液，收集一次膜濃縮液；
(3)二次膜過濾
將步驟(2)得到一次膜透過液采用截留分子量為60000的超濾膜系統(tǒng)進(jìn)行過濾除雜，過濾壓力為0.7?0.8Mpa，溫度為45°C，當(dāng)透過液濾出速度明顯下降時(shí)，向膜系統(tǒng)中加入一定量的水繼續(xù)過濾，當(dāng)水解液中VB12含量低于5 μ g/L時(shí)，停止加水，過濾結(jié)束，收集二次膜透過液，收集二次膜濃縮液；
(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白
將步驟(3)得到的二次膜透過液采用立式預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓離心機(jī)脫蛋白，濾布過濾精度為600目，預(yù)涂劑為娃藻土和珍珠巖，娃藻土:珍珠巖質(zhì)量比為1:35，當(dāng)?shù)鞍追e累至一定厚度被刮刀刮下，收集刮下的無助濾劑蛋白，當(dāng)脫蛋白結(jié)束時(shí)，調(diào)節(jié)刮刀間距，刮下少量的有助濾劑蛋白并收集，收集轉(zhuǎn)鼓濾液；
(5)蛋白吸附
將步驟(4)得到的轉(zhuǎn)鼓濾液采用蛋白吸附樹脂柱吸附其中的蛋白雜質(zhì)，得到精制濾液；采用酸液或堿液或次氯酸鈉對蛋白吸附樹脂柱進(jìn)行解吸，并收集蛋白；
(6)納濾濃縮
將步驟(5)得到的精制濾液采用納濾膜進(jìn)行濃縮，得到大分子液和小分子液，其中，一部分小分子液送入步驟(2) —次膜過濾工序，剩余小分子液送入步驟(3) 二次膜過濾工序；
(7)氰化鈉轉(zhuǎn)化
向步驟(6)得到的大分子液中加入適量氰化鈉得到含氰精制濾液；
(8)三級吸附柱除雜結(jié)晶
將步驟(7)得到的含氰精制濾液進(jìn)行三級吸附樹脂柱除雜結(jié)晶，最終得到純品氰鈷胺(VBI2);
(9)將步驟(2)—次膜過濾工序收集到的一次膜濃縮液和步驟(3) 二次膜過濾工序收集到的二次膜濃縮液混合后進(jìn)行分離，分離出的清液送入步驟(I)水解工序，分離出的濃渣無助濾劑菌絲體與步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白和步驟(5)蛋白吸附工序得到的蛋白一起收集，用于深加工；
(10)將步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白進(jìn)行焚燒處理；
本實(shí)施例，得到的無助濾劑蛋白占蛋白總量的91%，氰化鈉用量比傳統(tǒng)工藝降低93%，VB12的總收率提高3%，總收率達(dá)84%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種維生素B12的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)水解 向VB12發(fā)酵液中加入與發(fā)酵液相同質(zhì)量的水，加熱至90?100°C進(jìn)行水解，釋放出細(xì)胞內(nèi)的VB12，得到水解液； (2)一次膜過濾 將步驟(I)得到的水解液采用金屬膜或陶瓷膜系統(tǒng)進(jìn)行過濾，濾除蛋白、菌絲體等，當(dāng)透過液濾出速度明顯下降時(shí)，向膜系統(tǒng)中加入一定量的水繼續(xù)過濾，當(dāng)水解液中VB12含量低于5 μ g/L時(shí)，停止加水，過濾結(jié)束，收集一次膜透過液和一次膜濃縮液； (3)二次膜過濾 將步驟(2)得到的一次膜透過液采用截留分子量為10000?80000的超濾膜系統(tǒng)進(jìn)行過濾除雜，當(dāng)透過液濾出速度明顯下降時(shí)，向膜系統(tǒng)中加入一定量的水繼續(xù)過濾，當(dāng)水解液中VB12含量低于5 μ g/L時(shí)，停止加水，過濾結(jié)束，收集二次膜透過液和二次膜濃縮液； (4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白 將步驟(3)得到的二次膜透過液采用立式預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓離心機(jī)脫除蛋白，預(yù)涂劑為硅藻土和珍珠巖，當(dāng)?shù)鞍追e累至一定厚度被刮刀刮下，收集刮下的無助濾劑蛋白，當(dāng)脫蛋白結(jié)束時(shí)，調(diào)節(jié)刮刀間距，刮下少量的有助濾劑蛋白并收集，同時(shí)收集轉(zhuǎn)鼓濾液； (5)蛋白吸附 將步驟(4)得到的轉(zhuǎn)鼓濾液采用蛋白吸附樹脂柱吸附其中的蛋白雜質(zhì)，得到精制濾液，采用酸液或堿液或次氯酸鈉對蛋白吸附樹脂柱進(jìn)行解吸，并收集蛋白； (6)納濾濃縮 將步驟(5)得到的精制濾液采用納濾膜進(jìn)行濃縮，得到大分子液和小分子液，其中，一部分小分子液送入步驟(2) —次膜過濾工序，剩余小分子液送入步驟(3) 二次膜過濾工序) (7)氰化鈉轉(zhuǎn)化 向步驟(6)得到的大分子液中加入適量氰化鈉得到含氰精制濾液； (8)三級吸附柱除雜結(jié)晶 將步驟(7)得到的含氰精制濾液進(jìn)行三級吸附樹脂柱除雜結(jié)晶，最終得到純品氰鈷胺(VBI2); (9)將步驟(2)—次膜過濾工序收集到的一次膜濃縮液和步驟(3) 二次膜過濾工序收集到的二次膜濃縮液匯總分離分離出的清液送入步驟(I)水解工序，濃渣無助濾劑菌絲體與步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白和步驟(5)蛋白吸附工序得到的蛋白一起收集，用于深加工； (10)將步驟(4)預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序得到的無助濾劑蛋白進(jìn)行焚燒處理。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于在一次膜過濾工序，膜的過濾精度為30?2OOnm,過濾壓力為0.35?0.45Mpa,溫度為:30?70°C。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于在二次膜過濾工序，過濾壓力為0.5?0.9Mpa，溫度為:30 ?70 °C。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于在預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓脫蛋白工序，立式預(yù)涂轉(zhuǎn)鼓離心機(jī)的濾布過濾精度為400?1000目，預(yù)涂劑硅藻土和珍珠巖質(zhì)量比為1:(1?100)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種維生素B12的制備方法。將VB12發(fā)酵液直接加熱水解，釋放出細(xì)胞內(nèi)的VB12，然后進(jìn)行二級膜過濾、轉(zhuǎn)鼓離心脫蛋白、蛋白吸附等除雜過程，再進(jìn)行納濾濃縮脫水、氰化鈉轉(zhuǎn)化得到氰鈷胺鹽,經(jīng)三級樹脂吸附柱除雜、結(jié)晶分離后得到純品氰鈷胺即VB12。本發(fā)明可得到占蛋白總量80%以上的無助濾劑蛋白，蛋白和菌絲體可用于深加工生產(chǎn)高附加值產(chǎn)品。本發(fā)明的方法，氰化鈉用量較傳統(tǒng)工藝降低90%以上，降低生產(chǎn)成本，由于大分子液中蛋白等雜質(zhì)去除率高，無有毒含氰菌絲產(chǎn)生，省去了陽離子交換樹脂柱吸附工序，減少一次性投資，生產(chǎn)時(shí)間縮短，提高了產(chǎn)能，VB12總收率達(dá)83%。
【IPC分類】C07H1/00, C07H23/00
【公開號(hào)】CN105017360
【申請?zhí)枴緾N201510432980
【發(fā)明人】劉 東, 呂志, 張玉新, 邢建波, 張辰杰, 閆利軍
【申請人】河北美邦工程科技股份有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2015年7月22日