0570,版本070570. 1GI:6225856的多聚免疫球蛋白受體的氨基酸序列等中的相當于胞 外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列等。如果是上述示例，則第19~638位氨基酸序列相當于分泌因子。
[0210] 如果是來源于人，則可舉出在NCBI網(wǎng)站上示出的登記號P01833,版本P01833. 4GI: 150421625的多聚免疫球蛋白受體的氨基酸序列中的相當于胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列 等。如果是上述示例，則第19~645位氨基酸序列相當于分泌因子。
[0211] 為了制造包含上述分泌因子的單克隆IgA抗體，可包括如下工序：進一步將具有 編碼多聚免疫球蛋白受體的分泌因子的堿基序列的核酸引入到在上述工序1中獲得的雜 交瘤中。具體的基因引入方法可對已知方法進行適當?shù)匦薷?，不受特別限制。
[0212] 上述單克隆IgA抗體可具有來源于相同物種的氨基酸序列，或者可具有來源于不 同物種的氨基酸序列。來自相同物種的情況下，可舉出來源于人、小鼠、大鼠、倉鼠、兔、山 羊、驢、豬、牛、馬、雞、猴、黑猩猩等。
[0213] 來自不同物種的情況下，沒有特別限制，例如可舉出來自選自人、小鼠、大鼠、倉 鼠、兔、山羊、驢、豬、牛、馬、雞、猴、黑猩猩等中的兩種以上物種的單克隆IgA抗體。
[0214] 進而，具有來源具體不同物種的氨基酸序列的單克隆IgA抗體的實施方式為具有 來源于人的氨基酸序列和來源于非人的動物物種的氨基酸序列的單克隆IgA抗體，可舉出 具有整個重鏈和輕鏈的可變區(qū)都來源于非人的動物物種的氨基酸序列而其它區(qū)域來源于 人的氨基酸序列的實施方式的單克隆IgA抗體。該單克隆IgA抗體有時被特別稱為嵌合抗 體。
[0215] 本發(fā)明的單克隆IgA抗體抑制至少兩種腸內(nèi)細菌的生長。
[0216] 本說明書中使用的術(shù)語"腸內(nèi)細菌"只要它們是在活體腸內(nèi)的固有細菌，就不受特 別的限制。這種腸內(nèi)細菌可舉出在活體內(nèi)形成腸內(nèi)細菌叢，參與維持腸道免疫系統(tǒng)的體內(nèi) 平衡的細菌。
[0217] 具體的腸內(nèi)細菌沒有特別限制，例如可舉出：屬于普氏菌（Prevotella)屬的細 菌、屬于擬桿菌（Bacteroides)屬的細菌、屬于巨單胞菌（Megamonas)屬的細菌、屬于雙歧 桿菌（Bifidobacterium)屬的細菌、屬于柔嫩梭菌（Faecalibacterium)屬的細菌、屬于類 球菌（Coprococcus)屬的細菌、屬于瘤胃球菌（Ruminococcus)屬的細菌、屬于布勞迪亞 (Blautia)屬的細菌、屬于真細菌（Eubacterium)屬的細菌、屬于羅氏菌（Roseburia)屬 的細菌、屬于乳酸菌（Lactobacillus)屬的細菌、屬于梭菌（Clostridium)屬的細菌、屬 于埃希氏菌（Escherichia)屬的細菌、屬于葡萄球菌（Staphylococcus)屬的細菌、屬于 腸球菌（Enterococcus)屬的細菌、屬于假單胞菌（Pseudomonas)屬的細菌、屬于腸桿菌 (Enterorhabdus)屬的細菌等。
[0218] 在這些細菌之中，可舉出以下的細菌：Prevotellamelaninogenica、 Bacteroidetesvulgatus、Megamonasfuniformis、Megamonashypermegale、 Bifidobacteriumbifidum、Faecalibacteriumprausnitzii、Coprococcuseutactus、 Ruminococcusobeum、Blautiaproductus、Blautiacoccoides、Eubacteriumrectale、 Roseburiaintestinalis、Lactobacillusmurinus、Lactobacilluscasei、Clostridium difficile、Escherichiacoli、Staphylococcusaureus、Enterococcusfaecalis、 Pseudomonasfulva、Enterorhabdusmucosicola等。
[0219] 此外，本發(fā)明的單克隆抗體具有如在下面的實施例中描述的使大腸粘膜固有層的 腺管減少或萎縮恢復的效果。大腸粘膜固有層中的腺管減少是對由腸內(nèi)疾病，特別是腸內(nèi) 細菌的異常增殖和/或腸內(nèi)細菌叢的病變引起的腸內(nèi)疾病看到的組織病理學結(jié)果。此外， 是在普通潰瘍性結(jié)腸炎的慢性病變中常見的病變。
[0220] 因此，本發(fā)明的單克隆IgA抗體預期具有抑制腸內(nèi)細菌的異常增殖和/或腸內(nèi)細 菌叢的病變的效果，并且進一步預期具有治療例如由腸內(nèi)細菌的異常增殖和/或腸內(nèi)細菌 叢的病變引起的例如腸內(nèi)疾病的效果，該腸內(nèi)疾病諸如炎癥性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩 氏病、變態(tài)反應、哮喘、肥胖癥和自身免疫性疾病。
[0221] 上述腸內(nèi)細菌的異常增殖不受特別限制，是指例如存在于腸內(nèi)的細菌數(shù)量異常增 加的狀態(tài)。
[0222] 腸內(nèi)細菌叢的病變不受特別限制，是指由于例如構(gòu)成腸內(nèi)細菌叢的腸內(nèi)細菌的種 類和各種腸內(nèi)細菌的比例發(fā)生變化而在維持與宿主共生關系的體內(nèi)平衡上產(chǎn)生異常的狀 ??τ〇
[0223] 而且，腸內(nèi)細菌的異常增殖和/或腸內(nèi)細菌叢的病變不必然限制為受到腸內(nèi)疾病 影響的狀態(tài)，還可以是具有誘導腸內(nèi)疾病的要因的狀態(tài)。
[0224] 在本說明書中使用的術(shù)語"治療"指達到期望的藥理學和/或生理學效果。該效 果包括部分或完全治愈疾病和/或由疾病引起的不利影響（例如病癥和癥狀）。此外，這些 效果還包括：抑制或延遲疾病和/或由疾病引起的不利影響（例如病癥和癥狀）的發(fā)展的 效果；減輕病癥和癥狀（即改善疾病或癥狀，或引起疾病或癥狀發(fā)展的逆轉(zhuǎn)）的效果；和防 止疾病復發(fā)的效果。
[0225] 此外，上述效果還包括如下效果：在具有疾病和/或由疾病引起的不利影響（例如 病癥和癥狀）的誘因但還沒有診斷為具有的個體中，部分或完全防止疾病的發(fā)作和/或由 疾病引起的不利影響（例如病癥和癥狀）。因此，術(shù)語"治療"還包括"緩解"、"防止復發(fā)"、 "預防"等意思。
[0226] 如上所述，本發(fā)明的單克隆IgA抗體預期通過用于治療腸內(nèi)疾病而發(fā)揮優(yōu)異的效 果。這種效果是通過將該單克隆抗體經(jīng)口或經(jīng)腸道給藥至個體而實現(xiàn)的效果。這證實了本 發(fā)明的單克隆IgA抗體可用作經(jīng)口或經(jīng)腸道的組合物、藥物組合物的有效成分。
[0227] 趁麼
[0228] 本發(fā)明的核酸編碼本發(fā)明的單克隆IgA抗體。更具體地，本發(fā)明的核酸具有編碼 由SEQIDN0:1至SEQIDN0:50中任一條所示的氨基酸序列的堿基序列。該核酸可以是 核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸。此外，該核酸的形式不受特別地限制，可以是單鏈或雙鏈。
[0229] 編碼上述氨基酸序列的堿基序列不限于相對于一個氨基酸序列由一種堿基序列 構(gòu)成的核酸，根據(jù)核酸的使用目的，可以通過適當?shù)剡x擇編碼該氨基酸的各種密碼子來確 定堿基序列。作為使用目的，例如可舉出使用該堿基序列表達本發(fā)明的單克隆IgA抗體，對 其制造等。具體地，可考慮與制造時使用的宿主細胞種類對應的密碼子頻率選擇各種密碼 子。
[0230] 可通過使用已知程序"在硅片上"容易地確定這樣的堿基序列。此外，本發(fā)明的核 酸可具有對SEQIDNO: 1至SEQIDN0:50實施如在"單克隆IgA抗體"部分詳細描述的突 變的氨基酸序列進行編碼的堿基序列。
[0231] 這種具體的堿基序列沒有特別限制，例如可舉出SEQIDN0:51至SEQIDN0:60 所示的堿基序列。下面的表2能夠說明這些堿基序列和在"單克隆IgA抗體"中詳述的SEQ IDNO: 1至SEQIDNO:50的氨基酸序列之間的對應關系。
[0232] 表 2
[0233]
[0234] 單克降IgA抗體的制誥方法
[0235] 本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法是上述"單克隆IgA"的制造方法，其特征在 于，該方法包括下面的工序1和工序2。
[0236]工序 1
[0237] 工序1是將從腸道粘膜固有層收集的B細胞與其它類型的細胞混合并融合，制備 雜交瘤的工序。
[0238]工序 2
[0239] 工序2是培養(yǎng)在工序1中制備的雜交瘤，確定產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA 抗體的細胞，從該細胞回收IgA抗體的工序。
[0240] 為了獲得如后述的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)根據(jù)需要進行了適當組合的結(jié) 構(gòu)，本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法可在工序2之后進一步包括例如使用IgA特異性 蛋白酶等進彳丁處理的工序、引入能形成^硫鍵等化學鍵的官能團的工序以及隨后經(jīng)由如述 官能團形成化學鍵的工序。
[0241] 下面詳細描述本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法中的工序1和工序2。
[0242]工序 1
[0243] 本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法中的工序1為將從腸道粘膜固有層收集的B 細胞與其它類型的細胞混合并融合，制備雜交瘤的工序。
[0244] 在工序1中使用的B細胞位于腸道粘膜固有層中。此外，只要它們具有產(chǎn)生IgA 抗體的功能，則B細胞不一定限于包含編碼IgA抗體的DNA或mRNA，并且通過mRNA的翻譯 產(chǎn)生IgA抗體的B細胞。上述B細胞還包括如下細胞：在該細胞中，與IgA抗體不同的子類 的IgG抗體、IgM抗體等的免疫球蛋白進行類型轉(zhuǎn)換而成為IgA抗體，在該細胞內(nèi)產(chǎn)生IgA 抗體。
[0245] 腸道粘膜固有層不受特別限制，例如為存在于食道、胃、小腸（包括十二指腸、空 腸、回腸等）和大腸（包括盲腸、結(jié)腸、直腸等）中的構(gòu)成粘膜的層之一，可為位于上皮細胞 層和粘膜肌層之間的層。其中，優(yōu)選存在于小腸中，且包含淋巴組織、毛細血管、淋巴管等的 腸道粘膜固有層。
[0246] 從腸道粘膜固有層收集B細胞的方法不受特別限制，例如可舉出如下方法，收集 腸，沖洗之后切開獲得的腸以露出粘膜層，然后在含適當濃度的Η)ΤΑ的鹽水中搖動以釋放 和去除上皮細胞。隨后，通過使用適當濃度的消化酶（諸如膠原酶）進行處理，收集B細胞。 除了上述方法之外，還可使用任意已知的方法來收集B細胞。也可以使用市場上購買的來 源于腸道粘膜固有層的B細胞。
[0247] 腸道粘膜固有層的來源（即B細胞的來源）不受特別限制，例如可舉出小鼠、大 鼠、倉鼠、兔、山羊、綿羊、驢、豬、牛、馬、雞、猴、黑猩猩、人等。
[0248] 上述之外的細胞種類（在本說明書中有時稱為"其它細胞"）為前述B細胞以外種 類的細胞，只要是通過與B細胞接觸，融合并形成雜交瘤，且該雜交瘤不失去上述的B細胞 發(fā)揮的產(chǎn)生IgA抗體的功能即可。
[0249] 上述其它細胞優(yōu)選與前述B細胞融合形成雜交瘤且該雜交瘤具有永生化功能的 細胞，具體可舉出癌細胞，尤其是來源于骨髓的骨髓瘤細胞等。其它細胞優(yōu)選是骨髓瘤細 胞。
[0250] 其它細胞的來源不受特別限制，例如可舉出小鼠、大鼠、倉鼠、兔、山羊、綿羊、驢、 豬、牛、馬、雞、猴、黑猩猩、人等。
[0251] 融合是指B細胞和其它細胞不能分離地成為一體。在此，不能分離地成為一體排 除了在融合后細胞增殖時發(fā)生的細胞分裂現(xiàn)象。這樣，作為本說明書中的雜交瘤的一例可 舉出融合的細胞。
[0252] 混合和融合的條件不受特別限制，在融合細胞的方法中通常使用的條件都可以適 當使用。例如，可以適當改變用于培養(yǎng)B細胞或其它細胞的條件。作為上述方法可舉出：在 適當?shù)呐囵B(yǎng)基中混合B細胞和除了B細胞之外的其它細胞，以在例如聚乙二醇的存在下彼 此接觸的方法；在上述混合之后，進一步包括施加電刺激的方法；和在使用仙臺病毒等病 毒的方法之后，在5%的二氧化碳、37°C的條件下孵育得到的產(chǎn)物的方法。
[0253] 融合的時間也不受特別限制，完成融合本身所需的時間可進行適當?shù)卦O定。確認 融合完成的方法可通過適當修改融合細胞時經(jīng)常使用的已知方法來進行。上述方法可舉出 例如在顯微鏡下觀察融合發(fā)展程度的方法。還可以適當選擇和使用已知的試劑盒，以在其 使用條件下進行細胞融合。
[0254]工序 2
[0255] 本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法的工序2包括：培養(yǎng)在工序1中制備的雜交 瘤，確定產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的細胞，從該細胞回收前述抗體。
[0256] 在本發(fā)明的工序2之前，在工序1中獲得的雜交瘤可進行例如亞克隆工序，諸如有 限稀釋法等，其中亞克隆工序通常用于制造單克隆抗體。
[0257] 如下面的實施例中所述，可例如利用ELISA、EIA、RIA、FLISA、FIA等，使用可識別 該IgA抗體的抗IgA抗體（需要時可用放射性同位素、熒光或著色劑標記），利用FACS等， 來確定產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤。
[0258] 用于確定"產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤"的具體方法沒有 特別限制，可舉出例如使用上述抗IgA抗體的以下兩種類型的方法等。這兩種類型的方法 也可適當?shù)亟M合使用。
[0259] 第一種確定方法可舉出包括如下工序的方法：
[0260] (A)在上述工序1中獲得的雜交瘤中，確定產(chǎn)生與一種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的 雜交瘤的工序；和
[0261] (B)在工序A中確定的雜交瘤中，確認由其產(chǎn)生的IgA抗體是否與不同于上述腸內(nèi) 細菌的其它腸內(nèi)細菌結(jié)合，確定產(chǎn)生與兩種腸內(nèi)細菌都結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤的工序。
[0262] 在這種情況中，例如當使用ELISA方法時，工序A可以以下的方式進行：對在工序 1中獲得的雜交瘤的培養(yǎng)上清液進行取樣，并且使取樣物在第一種腸內(nèi)細菌被固定的例如 多孔板的一個孔中與該第一種腸內(nèi)細菌接觸，通過確認前述取樣物中存在與腸內(nèi)細菌結(jié)合 的IgA抗體，從而確定雜交瘤是產(chǎn)生Ig抗體的雜交瘤。
[0263] 或者，工序B可以以下方式進行：使用在工序A中已確定產(chǎn)生IgA抗體的雜交瘤的 培養(yǎng)上清液的取樣物，或者根據(jù)需要再次對在工序A中確定的雜交瘤的培養(yǎng)上清液進行取 樣，然后將該取樣物與在不同于第一種腸內(nèi)細菌的其它（第二種）腸內(nèi)細菌被固定的例如 多孔板的一個孔中與該腸內(nèi)細菌接觸，通過確認取樣物中存在與該腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗 體，從而確定雜交瘤是產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的Ig抗體的雜交瘤。
[0264] 當然，可包括在工序B中使用與上述第一種腸內(nèi)細菌和第二種腸內(nèi)細菌不同的第 三種以上的腸內(nèi)細菌作為上述的其它腸內(nèi)細菌繼續(xù)重復工序。
[0265] 當使用諸如EIA、RIA、FLISA、FIA等方法時，與上述ELISA-樣，第一種和第二種 (和需要時的第三種）腸內(nèi)細菌可被分別固定在孔或與其類似的實驗裝置中。
[0266] 當選擇FACS法時，可施用以下方法：將上述取樣物與多種腸內(nèi)細菌混合；然后，得 到的混合物進一步與抗IgA抗體接觸，適當?shù)貦z測出各種腸內(nèi)細菌、與其結(jié)合的Ig抗體以 及抗IgA抗體形成的復合物，確定產(chǎn)生與腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤。
[0267] 第二種方法可舉出包括如下工序的方法：分別使用檢測IgA抗體與每一種不同的 腸內(nèi)細菌結(jié)合的系統(tǒng)，在上述工序1獲得的雜交瘤中，確定產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合 的IgA抗體的雜交瘤。
[0268] 關于上述內(nèi)容，當例如使用利用ELISA法的方法時，可舉出下面的方法：在上述第 一種方法的工序A中，兩種（需要時三種以上）不同的腸內(nèi)細菌被固定在例如多孔板的兩 個不同孔（基于腸內(nèi)細菌的種類數(shù)量為三個以上）中，在工序1中獲得的雜交瘤的培養(yǎng)上 清液的取樣物與在各孔中的上述兩種（或三種以上）不同的腸內(nèi)細菌接觸，通過確認在上 述取樣物中存在與上述兩種（或三種以上）腸內(nèi)細菌都結(jié)合的IgA，來同時確定產(chǎn)生與至少 兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA的雜交瘤。
[0269] 當使用諸如EIA、RIA、FLISA、FIA等方法時，與使用ELISA法的情況一樣，第一種 和第二種（需要時的第三種以上）腸內(nèi)細菌可分別固定在孔或與其類似的實驗裝置中。
[0270] 當選擇FACS法時，將取樣物分別與各種腸內(nèi)細菌混合后，進一步與抗IgA抗體接 觸，適當?shù)貦z測出多種腸內(nèi)細菌、與該多種腸內(nèi)細菌結(jié)合的Ig抗體以及抗IgA抗體形成的 復合物，來確定產(chǎn)生與腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤。
[0271] 此外，在根據(jù)上述方法確定產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤之 后，可包括如下工序，通過使用例如在上制造單克隆抗體的方法中使用的有限稀釋，來進一 步克隆產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合的IgA抗體的雜交瘤。
[0272] 當進行此克隆時，可使用兩種特定的腸內(nèi)細菌，重復進行確定雜交瘤的上述工序， 該兩種特定的腸內(nèi)細菌與確定雜交瘤產(chǎn)生與至少兩種腸內(nèi)細菌結(jié)合中所使用的腸內(nèi)細菌 相同。
[0273] 在工序2中的回收方法在細節(jié)上不受到特別限制，例如可舉出：回收產(chǎn)生IgA抗體 的細胞的培養(yǎng)基上清液的方法；和回收細胞裂解液的方法?？蛇m當?shù)厥褂弥T如超聲和弗氏 壓碎器（Frenchpress)的已知機械手段，和/或使用去污劑、細胞壁消化酶和細胞膜消化 酶的已知化學處理方法的組合，通過細胞裂解獲得細胞裂解液，之后，回收在固體-液體分 離工序之后獲得的液相部分，從而可制造本發(fā)明的單克隆IgA抗體。
[0274] 此外，在從雜交瘤中回收IgA之前，雜交瘤可在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)特定的時間 段，然后可進行如上所述的回收它的上清液的方法或者從細胞裂解液回收IgA的方法。除 此以外，回收可通過如下過程進行：將雜交瘤給予能被移植該雜交瘤來源的免疫缺陷型小 鼠等個體動物腹膜內(nèi)，并且從該個體動物的腹水中回收IgA。
[0275] 以上述方式收集的單克隆IgA抗體可合適地進行已知的純化工序。純化手段在 細節(jié)上不受到特別地限制，可適當?shù)亟M合使用已知的蛋白純化手段，諸如通過使用例如丙 酮和硫酸銨的沉淀進行的純化；和通過例如親和、陰離子交換、陽離子交換、尺寸排阻（size exclusion)或反相柱色譜進行的純化。
[0276] 本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法還包括如下方式的制造方法。例如，可舉出 如下方法：將在上文"核酸"部分中詳細描述的核酸引入到能產(chǎn)生單克隆IgA抗體的細胞 中，培養(yǎng)該細胞，并且從細胞提取物或培養(yǎng)上清液中回收單克隆IgA抗體，需要時進行純 化。
[0277] 能產(chǎn)生單克隆IgA抗體的細胞不受到特別地限制，只要它是能產(chǎn)生來自哺乳動物 的多種蛋白質(zhì)的細胞，該多種蛋白常常在折疊成高級結(jié)構(gòu)時行使功能。細胞可適當?shù)剡x自 已知細胞，包括：哺乳動物來源的細胞，諸如C0S細胞、HEK細胞、HELA細胞和CH0細胞等； 和昆蟲來源的細胞，諸如Sf9等。
[0278] 引入核酸的詳細方法，培養(yǎng)其中引入核酸的細胞的條件、回收方法和純化方法不 受到特別的限制，并且取決于例如所使用的細胞類型的不同而不同，通過已知方法可適當 地進行修改并且進行組合，可制造本發(fā)明的單克隆IgA抗體。
[0279] 關于上述核酸，當本發(fā)明的單克隆IgA抗體是嵌合抗體時，制成具有編碼重鏈可 變區(qū)的堿基序列的核酸和具有編碼不同物種的重鏈恒定區(qū)的堿基序列的核酸，以及具有編 碼輕鏈可變區(qū)的堿基序列的核酸和具有編碼不同物種的輕鏈恒定區(qū)的堿基序列的核酸。接 著，產(chǎn)生的具有編碼重鏈可變區(qū)的堿基序列的核酸與具有編碼重鏈恒定區(qū)的堿基序列的核 酸結(jié)合，而具有編碼輕鏈可變區(qū)的堿基序列的核酸與具有編碼輕鏈恒定區(qū)的堿基序列的核 酸結(jié)合。然后，可將得到的核酸引入到如上所述能產(chǎn)生單克隆IgA抗體的細胞中。
[0280] 本發(fā)明的單克隆IgA抗體為重鏈和/或輕鏈的⑶R1至⑶R3具有小鼠來源的氨基 酸序列且除了CDR之外的其它區(qū)域具有人源的氨基酸序列（這種抗體有時被稱為"人源化 抗體"）的抗體的情況下，可以與上述嵌合抗體的情況一樣，產(chǎn)生具有編碼重鏈和/或輕鏈 的CDR1至CDR3的堿基序列的核酸和具有編碼除它們之外的其它區(qū)域的堿基序列的核酸， 以構(gòu)成重鏈和輕鏈的方式再結(jié)合核酸，將得到的核酸引入到如上所述能產(chǎn)生單克隆IgA抗 體的細胞中。為了保持抗體的結(jié)合能力，可能需要將一些堿基替換成其它堿基。
[0281] 作為本發(fā)明的單克隆IgA抗體包含J鏈時的制造方法，可通過將具有編碼單克隆 IgA抗體的堿基序列的核酸和具有編碼J鏈的堿基序列的核酸引入到如上所述能產(chǎn)生單克 隆IgA抗體的細胞中，產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆IgA抗體。
[0282] 如在上文"單克隆IgA抗體"部分中描述的，基于在NCBI網(wǎng)站上示出的J鏈氨基 酸序列，可通過使用已知的方法適當?shù)卮_定編碼J鏈的堿基序列?；诖_定的堿基序列，可 使用已知的方法產(chǎn)生核酸。
[0283] 當本發(fā)明的單克隆IgA抗體包含分泌因子時，可通過將具有編碼單克隆IgA抗 體的堿基序列的核酸和具有編碼J鏈的堿基序列的核酸，以及具有編碼分泌因子的堿基 序列的核酸，引入到如上所述能產(chǎn)生單克隆IgA抗體的細胞中，產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆IgA 抗體。這樣的方法公開在例如LiCetal.，ShengWuGongChengXueBao.2011Feb; 27(2) :219-25中?？苫谄涔_內(nèi)容或通過對公開內(nèi)容進行適當修改，產(chǎn)生本發(fā)明的包含 分泌因子的單克隆IgA抗體。
[0284] 如在上文"單克隆IgA抗體"部分中描述的，基于例如在NCBI網(wǎng)站上示出的多聚 免疫球蛋白受體的氨基酸序列，通過使用已知方法，可適當?shù)卮_定包含編碼分泌因子的堿 基序列的核酸。基于確定的堿基序列，可使用已知的方法制造該核酸。
[0285] 雜奪瘤
[0286] 本發(fā)明的雜交瘤產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆IgA抗體。
[0287] 雜交瘤具體地是在上文"單克隆IgA抗體的制造方法"部分中所述的工序1中獲 得的雜交瘤。即，通過混合并融合本發(fā)明的單克隆IgA抗體的制造方法的工序1中所述的 B細胞與其它類型（即除了B細胞之外的種類）的細胞獲得的細胞。
[0288] 雜交瘤可來源于相同物種或來源于不同的物種。在上文"單克隆IgA抗體的制造 方法"部分中，來源于相同物種的雜交瘤可通過將B細胞的來源設置成與除了B細胞之外的 其它細胞的來源相同來獲得，而來源于不同物種的雜交瘤可通過將B細胞的來源設置成與 除了B細胞之外的其它細胞的來源不同來獲得。
[0289] 為了獲得來源于相同物種的雜交瘤，B細胞的來源和除了 B細胞之外的其它細胞 的來源適當?shù)剡x自，例如在上文"產(chǎn)生單克隆IgA抗體的方法"部分中描述的工序1中提到 的來源，以便它們的來源彼此重疊。來源于相同物種的雜交瘤的來源例如可舉