6 + 1. 6%。
[0118]H9和ATCC4356菌株清除DPPH自由基能力的測(cè)定結(jié)果如圖9所示。結(jié)果表明， H9菌株清除DPPH自由基的能力隨著菌株濃度的升高而顯著升高（p<0. 05)。H9菌懸液和 無(wú)細(xì)胞提取液在濃度為l〇9CFU/mL時(shí)對(duì)DPPH的清除能力達(dá)到最高，分別為55. 0± 1. 7%和 47. 5 + 1. 8%。同時(shí)煮沸后的菌株仍具有一定的抗氧化性。
[0119] (2)亞油酸氧化體系中抗氧化能力的測(cè)定 陽(yáng)120] 1. 5血的0. 1M的鋼鹽憐酸緩沖液（pH7. 0)和1. 5血的50mM亞油酸（溶于99. 5 % 的乙醇）混合后加入2.OmL待測(cè)樣品（完整細(xì)胞菌懸液和無(wú)細(xì)胞提取液）。BHT化2mM溶 于甲醇）代替待測(cè)樣品作為陽(yáng)性對(duì)照?；旌弦涸?0°C下避光反應(yīng)，時(shí)隔24h用硫氯酸鐵法 測(cè)定亞油酸的氧化程度。100μL反應(yīng)液和4. 5mL75 %乙醇混合，然后加入30%的硫氯酸錠 100μL，1M的肥1 200μL、20mM的FeClz溶液（溶于3. 5 %的肥1) 100μL，總反應(yīng)液5mL，反 應(yīng)5min后顏色發(fā)生變化，說(shuō)明亞油酸被氧化，SOOOgX4°C離屯、5min得上清液，在500皿波 長(zhǎng)下測(cè)定其吸光值。W憐酸緩沖液代替待測(cè)樣品作為空白對(duì)照。 陽(yáng)121] 脂質(zhì)過(guò)氧化抑制率=(1 -As。。樣品/A5。?？瞻祝100%
[0122] H9和ATCC4356菌株抑制脂質(zhì)過(guò)氧化能力的測(cè)定結(jié)果如圖10所示。結(jié)果表明，H9 菌株抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的能力都隨著菌液濃度的升高而顯著升高（P<〇. 05)。H9菌懸液和無(wú) 細(xì)胞提取液在濃度為l〇9CFU/mL時(shí)，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的能力達(dá)到最高，分別為76. 2 + 1. 1% 和70. 0 + 0. 4%。同時(shí)煮沸后的菌株后仍具有一定的抗氧化性。
[0123] 實(shí)施例9:副干酪乳桿菌化actobacillusparacasei)H9作為發(fā)酵劑在豆奶和牛 奶混合發(fā)酵乳中發(fā)酵力和品質(zhì)指標(biāo)的研究 陽(yáng)124] 1、菌株的活化
[0125]稱取1.OgH9凍干菌粉（實(shí)驗(yàn)室-20°C保存）接種到100ml滅菌的脫脂乳培養(yǎng)基 中37°C培養(yǎng)至凝乳，再W2%的接種量接種活化下一代（37°C培養(yǎng)），重復(fù)活化3次后得到 活力穩(wěn)定的H9菌株。 陽(yáng)126] 2、豆奶的制作
[0127]選取顆粒飽滿表面光澤無(wú)霉變的大豆，用清水洗凈，然后用去離子水浸泡（選取 的大豆與去離子水的質(zhì)量體積比為1:8,室溫下浸泡lOh)，然后用0. 25%的NaHC〇3溶液浸 泡化，W純化大豆中的脂肪酶，減輕豆腥味，將浸泡好的大豆磨漿去渣（采用90°C熱水W防 止脂肪氧化酶在氧氣的存在下發(fā)生作用，但也要防止蛋白質(zhì)變性），收集大豆與水的質(zhì)量比 為1:8的豆?jié){，100°C煮沸l(wèi)Omin(可W純化脂肪酶，去除豆腥味），然后在25Mpa的壓力下均 質(zhì)兩次，然后在95°C滅菌lOmin，將其冷卻至37°C左右，水浴37°C保溫，備用。
[0128] 3、牛奶和豆奶混合發(fā)酵乳的制備
[0129] 滅菌過(guò)的全脂牛奶，進(jìn)行分裝，在分裝好的牛奶中分別添加0%、10%、20%、30%、 40 %、50 %的滅菌過(guò)的豆奶，5 %的接種量無(wú)菌接種H9菌株，置于37°C的恒溫培養(yǎng)箱中發(fā) 酵，監(jiān)測(cè)發(fā)酵產(chǎn)品抑達(dá)到4. 6時(shí)結(jié)束，取出后4°C冰箱放置24h后熟后測(cè)定產(chǎn)品的抑、滴定 酸度、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化能力、產(chǎn)品中總活菌數(shù)、黏度、持水力，并且進(jìn)行對(duì)六組產(chǎn)品進(jìn)行感官 評(píng)價(jià)作對(duì)比。
[0130] 結(jié)果表明，隨著豆乳添加量的增加酸乳的抑升高，可滴定酸度降低，說(shuō)明豆乳的 添加有效降低后熟過(guò)程中的酸化現(xiàn)象；添加量為30%時(shí)酸乳黏度最高，此時(shí)酸乳持水力最 好，且產(chǎn)品具有良好的質(zhì)地口感，并產(chǎn)生了令人愉悅的豆香味。 陽(yáng)1別]實(shí)施例10:副干酪乳桿菌化actobacillusparacasei)H9作為生物保鮮劑在魚(yú)肉 保鮮中的應(yīng)用
[0132]將鮮購(gòu)的35條活魚(yú)敲死后，去鱗、觸、內(nèi)臟，洗凈漸干。沿脊椎剖為兩半，取魚(yú)背脊 部肌肉切成8. 0X6. 0cm的魚(yú)段，每段60. 0 + 2.Og。將80片魚(yú)段均分為W下五組，C組：不 做任何處理，Η組：涂抹冊(cè)菌體，Μ組：海藻酸鋼單獨(dú)涂膜處理，歷組：涂抹冊(cè)菌體后再用 海藻酸鋼涂膜處理，HSM組：涂抹含有Η9菌體的發(fā)酵液（pH3. 70)后再用海藻酸鋼涂膜處 理。上述五組中，涂抹的H9菌體濃度為107CFU/g，處理2min。涂膜處理，先在1% (m/v)的 海藻酸鋼溶液中浸泡Imin，然后在1% (m/v)的化C12溶液中膠化2min，拱出，用滅菌水清 洗殘留化C12,漸干。所有的樣品都單獨(dú)裝入塑料保鮮袋中，密封，置于4Γ恒溫箱中膽藏， 在膽藏的0, 3, 7,11，15d時(shí)，每組中隨機(jī)取Ξ片魚(yú)段對(duì)感官品質(zhì)、TVB-N含量、pH值、TAB值、 菌落總數(shù)各指標(biāo)進(jìn)行分析。
[0133] 結(jié)果表明，先涂抹冊(cè)菌株后用海藻酸鋼涂膜處理的魚(yú)肉比單一涂膜組魚(yú)肉的前 期保鮮效果要好。其在感官、菌落總數(shù)、TBA等指標(biāo)上顯著優(yōu)于對(duì)照組。先涂抹含有H9菌 體的發(fā)酵液（pH3.70)再用海藻酸鋼涂膜處理魚(yú)肉的保鮮效果最好。其各鮮度指標(biāo)除TBA 值外皆要顯著優(yōu)于對(duì)照組和Μ組，其保鮮期可長(zhǎng)達(dá)7山比對(duì)照組延長(zhǎng)4山且其TVB-N值一直 屬于一級(jí)鮮度范圍。運(yùn)是因?yàn)棣?菌株及其發(fā)酵所產(chǎn)生的乳酸具有抑菌作用，而且Ca2+與海 藻酸鋼可W形成薄膜起到隔絕作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種副干酪乳桿菌，其特征在于，所述副干酪乳桿菌菌株為H9,分類命名為 Lactobacillusparacasei，在中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心的保藏號(hào)為CGMCC No.4780〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副干酪乳桿菌，其特征在于，所述副干酪乳桿菌的16SrDNA 基因序列如SEQIDNo. 1所示。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副干酪乳桿菌，其特征在于，生物學(xué)特性為：菌株在MRS瓊脂 培養(yǎng)基上37°C培養(yǎng)48h，菌株生長(zhǎng)良好，菌落為乳白色圓形，菌落直徑為0. 5~1. 0mm，菌落 邊緣整齊、有凸起；該菌株革蘭氏染色呈陽(yáng)性，顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)多為短桿狀，且傾向于成 鏈，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述副干酪乳桿菌，其特征在于，所述的副干酪乳桿菌 能夠產(chǎn)生胞外黏多糖。5. 權(quán)利要求4所述的副干酪乳桿菌及其自產(chǎn)的胞外黏多糖在抗氧化方面的應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的副干酪乳桿菌及其自產(chǎn)的胞外黏 多糖在易氧化食品、保健品、發(fā)酵飲料、寵物食品中提高其抗氧化作用的應(yīng)用。7. 權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述副干酪乳桿菌在作為益生菌方面的應(yīng)用。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述副干酪乳桿菌單獨(dú)或與其他益生菌 株復(fù)合在制備益生菌膠囊、益生菌菌片、益生菌沖劑、益生菌發(fā)酵制品方面的應(yīng)用。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的其他益生菌為保加利亞乳桿菌、嗜 熱乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的一種及一種以上。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述益生菌發(fā)酵制品為益生菌酸奶及其 飲料、益生菌豆奶及其飲料。11. 權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述副干酪乳桿菌在抑菌作用方面的應(yīng)用。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于，所述副干酪乳桿菌在制備生物保鮮劑、 天然食品防腐劑和飼料添加劑中的應(yīng)用。13. 權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的副干酪乳桿菌的綜合應(yīng)用，其特征在于，將所述的副 干酪乳桿菌的抑菌、抗氧化活性和作為益生菌中的兩種或兩種以上在食品、藥物組合物、保 健品、發(fā)酵劑、發(fā)酵飲料、動(dòng)物飼料、寵物食品中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了屬于微生物新資源及微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域的一種副干酪乳桿菌及其應(yīng)用。所述的副干酪乳桿菌菌株為H9，分類命名為L(zhǎng)actobacillus？paracasei，在中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心的保藏號(hào)為CGMCC？NO.4780。所述的副干酪乳桿菌從開(kāi)菲爾粒分離篩選得到，是一株新的副干酪乳桿菌，該副干酪乳桿菌對(duì)胃腸有較好的耐受性和粘附性，能夠產(chǎn)胞外黏多糖，并且具有抑菌、降膽固醇、降血壓和抗氧化活性等生物活性。本發(fā)明的副干酪乳桿菌H9，其功能性和發(fā)酵性能良好，可以應(yīng)用到發(fā)酵劑、生物保鮮劑、功能食品添加劑以及益生菌制劑等諸多領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景。CGMCC NO.478020110426
【IPC分類】A23L2/02, C12N1/20, A23L33/00, C12R1/225, A23C9/123, A23K10/18, A23C11/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105368738
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510697710
【發(fā)明人】李博, 周彤, 劉叢叢, 孟祥升, 霍艷嬌
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2015年10月23日