后有機相用飽和的氯化銨溶液洗滌3次，無 水硫酸鎂干燥，減壓脫溶，殘留物經(jīng)柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇）純化得到純品。
[0187] 純品為黃綠色熒光固體，收率：80%
[0188] 4匪R(DMS0-d6, 400MHz，δ ppm) :8. 76(s，1H)，8. 68(s，1H)，8. 49(s，1H)，8. 2 5(s，lH)，8.21(d，J = 9.1Hz，1H) ,8.00 (s，lH) ,7.92 (d，J = 8.0Hz，2H) ,7.81 (d，J = 8. 1Hz, 1H),7. 47 - 7. 41 (m, 3H),7. 27 (dd, J = 9. 1, 4. 4Hz, 1H),3. 50 (s, 2H),2. 33 (s, 4H),2. 27 (s, 3H), 1. 50 (s, 6H).
[0189] HRMS (ESI) m/z :C29H30N70, calculated 492. 2512 [M+H]+, found 492. 2510 [M+H]+.
[0190] 實施例11
[0191] 體外測定蛋白激酶活性使用Kinase-Glo激酶發(fā)光法，具體方法如下。
[0192] 樣品測定制備：
[0193] (1)將樣品化合物溶解在DMS0中，然后用DMS0稀釋定量為500μΜ濃度并轉移至 定量板中溶液轉移到劑量板?；衔镆?倍濃度用DMS0連續(xù)稀釋。然后每個濃度用反應 緩沖溶液按10倍濃度稀釋獲得10X最終濃度。將濃度范圍〇. 03~50μΜ的化合物轉移 至Bcr-Abl活性測定板中，劑量為1μL/孔。
[0194] (2)用DMS0將陽性對照物STSP配置成10mM濃度的母液，用DMS0稀釋至100μΜ。 先以5倍濃度用DMS0連續(xù)稀釋。然后每個濃度用反應緩沖溶液按10倍濃度稀釋獲得10X 最終濃度。將濃度范圍0. 〇〇〇 64~10μΜ的化合物轉移至Bcr-Abl活性測定板中，劑量為 1μL/ 孔。
[0195] (3)對ΗΡΕ和ΖΡΕ孔，用反應緩沖溶液將2μLDMS0稀釋10倍獲得10 %DMS0稀 釋，然后將其轉移至活性測定板中，劑量為1μL/孔。
[0196] 化合物抑制Bcr-Abl的1(：5。測定：
[0197] (1)測定所需樣品的準備，沒有ΗΡΕ激酶的化合物，但含有ATP，底物和1 %DMSO; ΖΡΕ(0%效應）：沒有化合物但含有激酶、ATP、襯底和1%DMS0溶液；陽性化合物孔：含有激 酶、ATP、底物和不同濃度的陽性化合物。測試化合物：含有激酶、ATP、底物和不同濃度的待 測化合物。
[0198] (2)測定所需試劑的準備，4XATP:將ATP在測試緩沖溶液中稀釋4倍獲得工作 溶液；4X底物：將Poly(葡萄糖：酪氨酸）在測試緩沖溶液中稀釋4倍獲得工作溶液； 2. 5XBcr-Abl激酶：激酶用測定稀釋緩沖溶液稀釋2. 5倍獲得工作溶液。
[0199] (3)激酶反應加入10X化合物到384孔測定板，1μL/孔。對于ΗΡΕ和ZPE孔，加 入相同體積（1μL/孔）的10%DMS0溶液；加入2. 5XBcr-Abl激酶至測定板，4μL/孔。 對于ΗΡΕ和ΖΡΕ孔，加入相同體積（4μL/孔）的測定緩沖溶液；將測定板放入離心機以 1OOOrpm離心1分鐘以便混合體系；測定板在30°C下預孵化為30分鐘；混合同等體積的 4XATP和4X底物獲得2XATP-底物混合物。該混合物是Bcr-Abl激酶活性測定受體的反 應混合物；加入2XATP-底物混合物至測定板，5μL/孔；將測定板放入離心機以1OOOrpm 離心1分鐘以便混合體系；測定板在30°C下預孵化為lh;將Kinasegloplus加入到各自 孔中，10μL/孔，再在27°C下將測定板孵化20分鐘；用Envision讀取熒光強度值。Kinase gloplus試劑使用前在室溫中放置30分鐘。
[0200] (4)原始數(shù)據(jù)的分析處理用Prism 5. 0分析原始數(shù)據(jù)；化合物的抑制率的計算 Compound inHibitiory rate = ("Compound"reading-ZEP)/(HPE_ZPE)X 100%，測定結果 見表1。
[0201] 表1 :以STSP為陽性對照，對合成的10個目標化合物進行了活性測定
[0202]
【主權項】
1. N-(3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物， 其特征在于，結構式如下2. 權利要求1所述的N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯 基）苯甲酰胺衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 將2-甲基-5-硝基苯胺溶解在乙醇中，加入濃鹽酸，將上述體系置于冰浴條件下， 然后將亞硝酸鈉的水溶液加入上述體系中，得到式（II)表示的2-甲基-5-硝基苯肼鹽酸 鹽；(b) 將二水合氯化亞錫溶于37%的濃鹽酸中，置于冰浴條件下，然后將式（II)化合 物滴加到上述體系中，反應0. 5~2小時后，加 NaOH溶液中和，得到式（III)表示的2-甲 基-5-硝基苯肼；(c) 將式（III)化合物與2-溴丙二醛在乙醇中反應，得到式（IV)表示的 4-溴-1-(2-甲基-5-硝基苯基）吡唑；(d) 將式（IV)化合物溶解到乙醇中，加入氯化銨的水溶液和鐵粉，得到式（V)表示的 3-(4-溴-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；(e) 將式（V)化合物和Boc酸酐在四氫呋喃中反應，得到式（VI)表示的 N-Boc-3-(4-溴-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；(f) 將式（VI)化合物溶于二氧六環(huán)中，加入聯(lián)硼酸頻哪醇酯、醋酸鉀和二（三苯基膦） 二氯化鈀，反應得到式（VII)表示的N-Boc-3-(4-(2-(4, 4, 5, 5-四甲基-1,3, 2-二氧硼戊 環(huán)基））-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；(g) 將咪唑并[l，2-b]噠嗪、NBS和催化量的AIBN在氯仿中反應，得到式（VIII)表示 的3-溴咪唑并[1，2-b]噠嗪；(h) 將式（VII)化合物和式（VIII)化合物溶解到二氧六環(huán)和水的混合溶液中，加入四 (三苯基磷）鈀和碳酸鈉，反應得到式（IX)表示的N-Boc-3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]噠嗪 基）-卜吡唑基）-4-甲基苯胺；(i) 將式（IX)和三氟乙酸在二氯甲烷中反應，得到式⑴表示的3-(4-(3-咪唑并 [1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；(j) 將式（X)化合物、4-氯甲基苯甲酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反應，得到式（XI)表 示的4-氯甲基-N-(3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰 胺；(k) 將式（XI)化合物，親核試劑和碘化鉀在DMF中反應，得到式（I)表示的 N-(3-(4-(3-(咪唑并[1，2-b]噠嗪基））-1-吡唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物，或（1)將式（X)化合物、取代苯甲酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反應，得到式（I)表示的 N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物；R1 表示-OCH 3、-F、-CF3、-CH2CH3或-H， R2表示-CF 3、-F、-Cl 或-H。3.根據(jù)權利要求2的方法，其特征在于，步驟（a)反應溫度0~5°C，反應時間0. 5~ 1小時；步驟（b)式（II)化合物與二水合氯化亞錫的物質(zhì)的量比為I : (1. 5~2)，反應溫 度0~10°C，反應時間1~2小時；步驟（c)式（III)化合物與2-溴丙二醛的物質(zhì)的量比 為I : (I. 1~1. 5)，反應溫度55~65°C，反應時間2~4小時；步驟（d)反應溫度80~ 90°C，反應時間2~3小時；步驟（e)式（V)化合物與Boc酸酐的物質(zhì)的量比為I : (I. 1~ I. 4)，反應溫度66~70°C，反應時間2~3小時；步驟（f)式（VI)化合物：聯(lián)硼酸頻哪醇 酯：醋酸鉀：二（三苯基膦）二氯化鈀的物質(zhì)的量比為I : (I. 1~1. 5) : 3 : (0. 1~ 0. 2)，反應溫度100~IKTC，反應時間15~18小時；步驟（g)咪唑并[1，2-b]噠嗪：NBS = AIBN物質(zhì)的量比為1 : (1.5~2) : (0.1~0.2)，反應溫度65°C，反應時間2~3小 時；步驟（h)式（VII)化合物：式（VIII)化合物：碳酸鈉：四（三苯基磷）鈀的物質(zhì)的量 比為1 : 2 : 3 : (0.1~0.2)，反應溫度110~120°C，反應時間7~10小時；步驟⑴ 常溫反應5~6小時；步驟（j)式⑴化合物：4-氯甲基苯甲酰氯：三乙胺的物質(zhì)的量比 為1 : (2~3) : (0. 2~0. 5)，反應時間2~3小時；步驟（k)式（XI)化合物：親核試 劑：碘化鉀的物質(zhì)的量比為1 : (2~3) : (0. 1~0. 2)，反應溫度80~90°C，反應時間 2~3小時；步驟⑴式⑴化合物：取代苯甲酰氯：三乙胺的物質(zhì)的量比為1 : (2~3) :(0. 2~0. 5)，反應時間2~3小時。4. 根據(jù)權利要求2的方法，其特征在于，步驟（k)親核試劑為：或5. 根據(jù)權利要求2的方法，其特征在于，步驟⑴取代苯甲酰氯結構式為：6. 權利要求1所述的N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]噠嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯 基）苯甲酰胺衍生物在制備Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制劑中的應用。
【專利摘要】苯甲酰胺衍生物及制備和應用，屬于藥物化學領域。本發(fā)明涉及式表示的N-(3-(4-(3-咪唑并[1,2-b]噠嗪基)-1-吡唑基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺衍生物及制備和應用。R1表示-OCH3、-F、-CF3、-CH2CH3、-H、R2表示-CF3、-F、-Cl或-H。制備是制備2-甲基-5-硝基苯肼，然后經(jīng)反應得到4-溴-1-(2-甲基-5-硝基苯基)吡唑，再經(jīng)還原，Boc酸酐保護，聯(lián)硼酸頻哪醇酯反應，再進行偶聯(lián)生成N-Boc-3-(4-(3-咪唑并[1,2-b]噠嗪基)-1-吡唑基)-4-甲基苯胺，最后脫Boc并氨解。本發(fā)明化合物對Bcr-Abl激酶具有抑制作用。
【IPC分類】A61P35/02, C07D487/04
【公開號】CN105418615
【申請?zhí)枴緾N201510906290
【發(fā)明人】胡利明, 呂永娟, 吳加周, 郭爽, 卜明
【申請人】北京工業(yè)大學
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月9日