專(zhuān)利名稱(chēng)：：非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)用藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及非那西丁(phenacetin)的一種新用途，即非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：我國(guó)是世界上肝臟疾病發(fā)病率最高的國(guó)家之一，僅乙型肝炎病毒攜帶者就高達(dá)一億多人，占我國(guó)總?cè)丝诘?0%以上。每年有100萬(wàn)新生兒由于母嬰垂直傳播，可能會(huì)感染乙肝病毒。最近的流行病學(xué)研究表明，原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌是全球腫瘤發(fā)病的第五位，每年新發(fā)病人數(shù)大約56.4萬(wàn)人。而在我國(guó)，每年新發(fā)病的原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌病人就有30萬(wàn)人左右，占全球肝細(xì)胞肝癌發(fā)病率的半數(shù)以上，已成為癌癥死亡原因的第一位。大量的研究資料顯示，慢性乙型肝炎導(dǎo)致的肝硬化和肝纖維化是原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的癌前期病變。在乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人中，轉(zhuǎn)變成肝細(xì)胞肝癌的年危險(xiǎn)率為3%左右。80%以上的乙型肝炎病毒攜帶者，雖然各項(xiàng)肝臟功能都正常，臨床上也沒(méi)有肝臟功能損害的表現(xiàn)，但其患肝癌的危險(xiǎn)比非乙型肝炎病毒攜帶者高20倍以上(IchiroShimizuetal.WorldJGastroenterol2007;13(32):4295-4305)。這說(shuō)明，乙型肝炎病毒感染不是引起肝細(xì)胞肝癌的唯一因素，評(píng)價(jià)肝臟功能或肝臟功能的損害與肝癌易感性無(wú)關(guān)。乙型肝炎病毒感染后，除機(jī)體的免疫功能外，肝臟的微環(huán)境對(duì)肝癌形成與否至關(guān)重要。目前，還沒(méi)有一種用于檢測(cè)肝癌高危人群的藥物。顯然，發(fā)明一種藥物，用于診斷乙型肝炎病毒攜帶者和慢性肝病病人的肝癌易感性，將具有十分重要的社會(huì)效益和巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。非那西丁(phenacetin)是一種解熱鎮(zhèn)痛藥，是復(fù)方阿司匹林片等感冒藥的主要成分之一。本發(fā)明人己在CN200410066858.4中公開(kāi)了非那西丁用于檢測(cè)慢性肝病病人肝臟功能的損害；另外，本發(fā)明人還就上述用途申請(qǐng)了一種能早期、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)肝臟功能的檢測(cè)試劑盒，見(jiàn)CN200710041869.0。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供非那西丁的一種新用途，即在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用，所述的非那西丁為口服制劑或注射劑，所述的肝癌高危人群是被乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人，或乙型肝炎病毒攜帶者。非那西丁在人體內(nèi)的代謝非常復(fù)雜，包括氧化代謝和結(jié)合代謝等多種生物轉(zhuǎn)化作用。近年來(lái)，我們經(jīng)過(guò)大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體研究發(fā)現(xiàn)，由非那西丁制備成的口服制劑或注射劑，能夠用于檢測(cè)乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人，或乙型肝炎病毒攜帶者是否屬于肝癌高危人群。我們的研究表明，在乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人或乙型肝炎病毒攜帶者中，非那西丁氧位去乙基代謝為高活性者，如果其代謝非那西丁代謝產(chǎn)物醋氨酚的硫酸結(jié)合n相反應(yīng)也呈高活性，為肝癌高危人群。而非肝癌高危的慢性肝病病人，其非那西丁氧位去乙基代謝為低活性。上述的非那西丁氧位去乙基代謝為高活性者，即口服或注射非那西丁后，其血液中醋氨酚濃度:非那西丁濃度大于l。上述的非那西丁代謝產(chǎn)物醋氨酚的硫酸結(jié)合n相反應(yīng)也呈高活性，即口服或注射非那西丁后，其尿液中硫酸-醋氨酚累積排泄量:葡萄糖醛酸-醋氨酚累積排泄量大于2?？诜悄俏鞫∫?.5-1.25克為宜。測(cè)量血液中醋氨酚濃度:非那西丁濃度以口服非那西丁0.5-3小時(shí)后為宜。非那西丁氧位去乙基酶也稱(chēng)之為細(xì)胞色素P450氧化酶1A2，其在肝臟呈組成型表達(dá)。口服或注射非那西丁后，在細(xì)胞色素P450氧化酶1A2作用下，非那西丁絕大部分被轉(zhuǎn)化成醋氨酚，然后在II相反應(yīng)酶催化下，與葡萄糖醛酸、硫酸或谷胱甘肽結(jié)合，排出體外。非那西丁副作用少，不良反應(yīng)小，能夠成為臨床理想的診斷藥物。本發(fā)明在實(shí)施過(guò)程+，先后驗(yàn)證了美沙西丁、蛋氨酸、咖啡因和醋氨酚等藥物，均得到令人滿(mǎn)意的結(jié)果。從有效性、實(shí)用性和不良反應(yīng)等綜合因素分析，以非那西丁為最佳。非那西丁能夠制備成口服制劑，包括散劑、沖劑、片劑和膠囊劑等，也能制備成注射劑。由于非那西丁水溶性差，在制備注射劑時(shí)，可添加助溶劑，增加其水溶性。具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的實(shí)施并不僅限于此。實(shí)施例l:非那西丁膠囊劑的制備按《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版膠囊劑的有關(guān)規(guī)定，將非那西丁(藥用原料由佳木斯鹿靈制藥有限公司提供)制備成男性用膠囊劑(0.25克/粒)和女性用膠囊劑(0.2125克/粒)兩種規(guī)格，每板4粒，鋁箔包裝。實(shí)施例2:非那西丁注射劑的制備按《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版注射劑的有關(guān)規(guī)定，將非那西丁(藥用原料由佳木斯鹿靈制藥有限公司提供)制備成0.15%的注射劑，其溶劑為乙醇注射用水=15:85(v/v)，分裝在2毫升的藥用玻璃瓶中。密封后，高壓消毒。實(shí)施例3:非那西丁作為診斷藥物用于檢測(cè)肝癌高危人群的研究目的研究非那西丁作為診斷藥物，是否能夠用于檢測(cè)肝癌高危人群。儀器20A型高效液相色譜儀(日本島津公司制造，包括LC-20AD泵、DGU-20A在線脫氣儀、SIL-HTC自動(dòng)進(jìn)樣器，ODSd8色譜柱4.6X250mm，流動(dòng)相乙腈-0.1%甲酸(30:70)，等度洗脫，流速lmL/min，進(jìn)樣體積為20"L)。平行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的受試對(duì)象24例慢性乙型肝炎病人，Child-Pugh分級(jí)為A級(jí)。年齡26-59歲，其中男性18例，女性6例。18例原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌病人，均有慢性乙型肝炎病史，Child-Pugh分級(jí)為A級(jí)。年齡38-62歲，其中男性13例，女性5例。正常對(duì)照組12人，男女參半，年齡21-48歲。所有受試者均知情同意，并經(jīng)倫理委員會(huì)討論、同意。操作步驟所有受試者于晚飯后開(kāi)始禁食，次日晨男性口服非那西丁膠囊4粒(1.0克)，女性口服非那西丁膠囊4粒(0.85克)。給藥后二小時(shí)，抽取靜脈血l毫升，置于抗凝管內(nèi)，-20\:保存。采用高效液相色譜法(優(yōu)選CN200710041869.0所公開(kāi)了色譜-分光光度檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法)，測(cè)定血液中非那西丁及其代謝產(chǎn)物游離型醋氨酚和結(jié)合型醋氨酚含量。給藥后，同時(shí)收集24小時(shí)的尿液，精確測(cè)定其體積后取樣，-20°(^保存。采用高效液相色譜法，測(cè)定尿液中醋氨酚、葡萄糖醛酸-醋氨酚和硫酸-醋氨酚的含量。前瞻性實(shí)驗(yàn)的受試對(duì)象95例受試者，男性，年齡35-65歲。均為乙型肝炎病毒表面抗原陽(yáng)性、乙型肝炎病毒e抗原陽(yáng)性和乙型肝炎病毒核心抗體陽(yáng)性。血清甲胎球蛋白檢查陰性，肝臟B超檢査無(wú)占位性病變。根據(jù)非那西丁試驗(yàn)結(jié)果，19人為非那西丁氧位去乙基代謝高活性，同時(shí)非那西丁代謝產(chǎn)物醋氨酚的硫酸結(jié)合反應(yīng)也呈高活性，將其作為A組。其余76人作為B組。臨床常規(guī)隨訪，每3-6個(gè)月檢査血清甲胎球蛋白和肝臟B超一次。必要時(shí)，做肝臟CT或核磁共振檢査。實(shí)驗(yàn)結(jié)果非那西丁作為診斷藥物，用于檢測(cè)肝癌高危人群和慢性肝病病人肝臟功能損害的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表l一3。表1.血液中非那西丁及其代謝產(chǎn)物游離型醋氨酚和結(jié)合型醋氨酚含量(Pg/ml，均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與正常人比，**P<0.01;與肝癌病人比##尸<0.01表2.24小時(shí)尿液中葡萄糖醛酸-醋氨酚與硫酸-醋氨酚的含量比值<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與正常人比，**P<0.01;與慢性肝病病人比##戶(hù)<0.01表3.肝癌高危人群臨床隨訪結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*Fisher精確概率法P-0.045平行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的研究結(jié)果表明，口服非那西丁后，肝癌病人血液中結(jié)合型醋氨酚含量高于正常人一倍以上，游離型醋氨酚含量明顯下降。24小時(shí)尿液中葡萄糖醛酸-醋氨酚與硫酸-醋氨酚的含量比值，只有正常人的14.7%。慢性肝病病人血液中非那西丁濃度明顯升高，結(jié)合型醋氨酚和游離型醋氨酚含量明顯減少。其葡萄糖醛酸-醋氨酚/硫酸-醋氨酚的比值也明顯低于正常對(duì)照，但平均葡萄糖醛酸-醋氨酚的含量是硫酸-醋氨酚的1.57倍。前瞻性實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果表明，B組76例受試者在兩年期間無(wú)一人發(fā)生肝癌，而A組的19人屮，有二人發(fā)生肝細(xì)胞肝癌，F(xiàn)isher精確概率法計(jì)算，其P值=0.045。結(jié)論非那西丁制劑作為診斷藥物，能夠用于檢測(cè)乙型肝炎病毒感染者是否屬于肝癌高危人群。實(shí)施例4:非那西丁注射劑作為診斷藥物的應(yīng)用研究目的研究非那西丁注射劑是否能夠如口服制劑一樣用于測(cè)定血液中非那西丁及其代謝產(chǎn)物游離型醋氨酚和結(jié)合型醋氨酚含量。方法20只昆明種小鼠，雌性，體重22.7士2.5克。隨機(jī)分成兩組，一組作為正常對(duì)照，另一組常規(guī)制備肝損害模型(PharmacolToxi2006;98:1742)。造模后，尾靜脈注射0.15%的非那西丁注射液20mg/kg。30分鐘后，于眼球后靜脈取血，置于抗凝管內(nèi)，-20'C保存。采用高效液相色譜法，測(cè)定血液中非那西丁及其代謝產(chǎn)物游離型醋氨酚和結(jié)合型醋氨酚含量。結(jié)果非那西丁作為診斷藥物，用于檢測(cè)小鼠肝臟功能損害的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。表4.小鼠血液非那西丁、游離型醋氨酚和結(jié)合型醋氨酚含量(Pg/ml,均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差)非那西丁游離型醋氨酚結(jié)合型醋氨酚正常對(duì)照組4.61±1.388.90±2.544.12±1.85肝損害模型組9.26±3.27**6.36士2.765151.88±1.16"與正常對(duì)照比，*P<0.05，**P<0.01結(jié)論與正常對(duì)照組比，肝損害模型組小鼠血液中非那西丁濃度明顯高于正常對(duì)照組，而非那西丁代謝產(chǎn)物總量明顯低于正常對(duì)照組，尤其是結(jié)合型醋氨酚含量明顯減少。說(shuō)明非那西丁注射劑能夠和口服制劑一樣用于測(cè)定血液中非那西丁及其代謝產(chǎn)物游離型醋氨酚和結(jié)合型醋氨酚含量。權(quán)利要求1、非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用，所述的非那西丁為口服制劑或注射劑，所述的肝癌高危人群是被乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人或乙型肝炎病毒攜帶者。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用，所述的非那西丁是散劑、沖劑、片劑或膠囊劑。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)用藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及非那西丁(phenacetin)的一種新用途，即非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用。目前，還沒(méi)有一種用于檢測(cè)肝癌高危人群的藥物。本發(fā)明提供了非那西丁在制備檢測(cè)肝癌高危人群藥物中的應(yīng)用，所述的非那西丁為口服制劑或注射劑，所述的肝癌高危人群是被乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人，或乙型肝炎病毒攜帶者。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，在乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝病病人或乙型肝炎病毒攜帶者中，非那西丁氧位去乙基代謝為高活性者，如果其代謝非那西丁代謝產(chǎn)物醋氨酚的硫酸結(jié)合II相反應(yīng)也呈高活性，為肝癌高危人群。而非肝癌高危的慢性肝病病人，其非那西丁氧位去乙基代謝為低活性。文檔編號(hào)G01N30/00GK101226175SQ200810033530公開(kāi)日2008年7月23日申請(qǐng)日期2008年2月4日優(yōu)先權(quán)日2008年2月4日發(fā)明者李曉冬,平賀申請(qǐng)人:李曉冬;賀平