專利名稱：一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置。
背景技術(shù)：
臨床上，用PCR方法檢測HBV DNA能夠最準(zhǔn)確的反映HBV病毒的復(fù)制情況，但因其成本高、操作復(fù)雜及實驗環(huán)境要求高等諸多因素限制，難以作為常規(guī)方法來檢測HBV的感染。從理論上來說，HBcAg的檢出主要差異在HBeAg和HBeAb之間。HBcAg主要出現(xiàn)在HBV感染的早期，它的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒的復(fù)制，有較強的傳染性；HBeAb的出現(xiàn)則預(yù)示著病情趨向好轉(zhuǎn)，這時體內(nèi)的HBeAg逐漸消失，病毒的復(fù)制減弱，傳染性減少；HBeAg與HBcAg為病毒復(fù)制的中間產(chǎn)物，均為C基因區(qū)編碼，它們之間的密切基因位置關(guān)系決定了它們有較高的 表達(dá)符合性，所以我們認(rèn)為一般情況下可以用HBeAg及HBcAg的檢測代替PCR HBV DNA的檢測來反映HBV的復(fù)制情況。由于血清內(nèi)游離HBcAg的量極少，常規(guī)方法不易檢出，通常采用的辦法是將乙肝病毒表面抗體和乙肝病毒核心抗體同時包被到微孔板上，乙肝病毒表面抗體與乙肝病毒氏顆粒表面抗原結(jié)合，在裂解劑的作用下乙肝病毒氏顆料殼裂解，暴露出乙肝病毒核心抗原后被微孔板上的乙肝病毒核心抗體所吸附，再使過氧化物酶與染色底物反應(yīng)，最終達(dá)到檢測乙肝病毒核心抗原的目的。這種方法在包被抗體時,通常采用針對HBsAg和HBcAg的免疫球蛋白多抗多被，多抗作為包被抗體，效價低、特異性差，其檢測結(jié)果的靈敏度低，操作流程也較長。隨著現(xiàn)代診斷醫(yī)學(xué)的發(fā)展，ELISA診斷試劑已經(jīng)從最初的合成肽抗原，發(fā)展到了基因工程抗原。合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限，只能達(dá)到數(shù)百個氨基酸，而利用基因工程制備的抗原分子量更大，也具有更強的穩(wěn)定性，因此用基因工程抗原取代合成肽抗原已成為必然的市場和技術(shù)選擇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服上述技術(shù)缺點提供一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置。本發(fā)明解決技術(shù)問題采用的技術(shù)方案為包括一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗箱，所述檢測方法包括檢驗操作步驟、檢驗試劑和檢驗結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗箱體內(nèi)設(shè)有加樣吸管、微孔板、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標(biāo)板和加熱管。所述檢驗方法為雙抗體夾心法檢測HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時包被固相載體。所述檢驗試劑為，促進(jìn)劑，工作濃度O. 4 400mg/ml的抗-HBsAg,裂解劑,工作濃度1% 9%的咿-40、0· 05% I. 5%的巰基乙醇、O. 05 I. 0M/PH7. 5的Tris組成的混合液，標(biāo)記物，工作濃度為I : 350 I : 1400的HRP-抗-HBcAg。所述檢驗操作步驟為,微孔板每孔加待檢血清100 μ 1,37°C孵育60min后,加促進(jìn)劑每孔50 μ 1，微型震蕩器振蕩lmin，37°C孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μ 1，37°C孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37°C孵育10 15min，比色。所述便攜檢驗箱內(nèi)部中空，間隔設(shè)有控溫室和震蕩室，所述控溫室內(nèi)設(shè)有加熱管、微孔板支架、微孔板和洗板機，所述震蕩室內(nèi)設(shè)有微型震蕩器、試劑瓶架、試管架和真空抽氣裝置，所述便攜檢驗箱體頂部設(shè)有震蕩器定時開關(guān)、酶標(biāo)板和加樣吸管。所述試管架上設(shè)有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設(shè)有促進(jìn)劑瓶、裂解劑瓶和顯色劑瓶，所述洗板機上設(shè)有洗板機開關(guān)。所述加熱管上設(shè)有溫控板和加熱定時開關(guān)，所述試管架上設(shè)有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設(shè)有促進(jìn)劑瓶、裂解劑瓶和標(biāo)記物瓶，所述洗板機上設(shè)有洗板機開關(guān)。 所述便攜檢驗箱背側(cè)面設(shè)有電源開關(guān)，所述電源開關(guān)與加熱管、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置分別形成電氣通路。本發(fā)明所具有的有益效果是本發(fā)明操作簡單、快速，實用性強，便攜性高，與PCR探針檢測HBV-DNA陽性結(jié)果符合率為92. 3%，與乙型肝炎兩對半檢測HBV陽性結(jié)果符合率為94. 1%，達(dá)到實際臨床檢驗要求，適合基層醫(yī)療單位使用，有效滿足HBV快速檢測的臨床需要。


附圖I為本發(fā)明配套便攜裝置的俯視示意圖。附圖2為本發(fā)明配套便攜裝置的縱切面示意圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做以下詳細(xì)說明。如圖所示，本發(fā)明包括一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗箱，所述檢測方法包括檢驗操作步驟、檢驗試劑和檢驗結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗箱體I內(nèi)設(shè)有加樣吸管21、微孔板6、洗板機7、微型震蕩器10、真空抽氣裝置19、酶標(biāo)板18和加熱管4 ；所述檢驗方法為雙抗體夾心法檢測HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時包被固相載體。所述檢驗試劑為，促進(jìn)劑，工作濃度O. 4 400mg/ml的抗-HBsAg，裂解劑，工作濃度1% 9%的咿-40、0· 05% I. 5%的巰基乙醇、O. 05 I. 0M/PH7. 5的Tris組成的混合液，標(biāo)記物，工作濃度為I : 350 I : 1400的HRP-抗-HBcAg。所述檢驗操作步驟為,微孔板6每孔加待檢血清100 μ 1,37°C孵育60min后,加促進(jìn)劑每孔50μ 1，微型震蕩器振蕩lmin，37°C孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μ 1，37°C孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37°C孵育10 15min,比色。所述便攜檢驗箱體I內(nèi)部中空，間隔設(shè)有控溫室2和震蕩室3，所述控溫室2內(nèi)設(shè)有加熱管4、微孔板支架5、微孔板6和洗板機7,所述震蕩室3內(nèi)設(shè)有微型震蕩器10、試劑瓶架14、試管架12和真空抽氣裝置19，所述便攜檢驗箱體頂部設(shè)有震蕩器定時開關(guān)11、酶標(biāo)板18和加樣吸管21。所述加熱管4上設(shè)有溫控板8和加熱定時開關(guān)9，所述試管架12上設(shè)有待檢血清試管13，所述試劑瓶架14上設(shè)有促進(jìn)劑瓶15、裂解劑瓶16和標(biāo)記物瓶17，所述洗板機7上設(shè)有洗板機開關(guān)22。所述便攜檢驗箱背側(cè)面設(shè)有電源開關(guān)20，所述電源開關(guān)20與加熱管4、洗板機7、微型震蕩器10、真空抽氣裝置19分別形成電氣通路。實施例按常規(guī)方法在聚苯乙烯微孔板上同時包被單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg，入洗板機洗滌3次，拍干；每孔加待檢血清100μ 1，進(jìn)控溫室，在37°C環(huán)境下孵育60min ;每孔加促進(jìn)劑50μ 1，進(jìn)微型震蕩器振蕩lmin，進(jìn)控溫室，在37°C環(huán)境下孵育20min，洗板4次，拍干；每孔加裂解劑100 μ 1，進(jìn)控溫室，37°C環(huán)境下孵育20min，洗板4次。每孔加酶標(biāo)記物HRP-抗-HBcAglOO μ 1，進(jìn)溫控室，在37°C環(huán)境下孵育60min，進(jìn)洗板·機，洗板4次，拍干；每孔加100 μ I底物顯色液，進(jìn)微型震蕩器振蕩lmin，在室溫環(huán)境下放置5 20分鐘；每孔加2mol/L H2S0450 μ I終止反應(yīng)；比色，判定結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于包括一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗箱，所述檢測方法包括檢驗操作步驟、檢驗試劑和檢驗結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗箱體內(nèi)設(shè)有加樣吸管、微孔板、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標(biāo)板和加熱管。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述檢驗方法為雙抗體夾心法檢測HBV病毒核心抗原法，用單基因表面抗體MC-抗-HBsAg和單基因核心抗體HBcAg同時包被固相載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述檢驗試劑為，促進(jìn)劑，工作濃度O. 4 400mg/ml的抗-HBsAg，裂解劑，工作濃度1% 9%的咿-40、0· 05% I. 5%的巰基乙醇、O. 05 I. 0M/PH7. 5的Tris組成的混合液，標(biāo)記物，工作濃度為I : 350 I : 1400的HRP-抗-HBcAg。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述檢驗操作步驟為，微孔板每孔加待檢血清IOOy 1，37°C孵育60min后，加促進(jìn)劑每孔50μ 1，微型震蕩器振蕩lmin，37°C孵育40min，洗板4次后拍干，再加裂解劑每孔100μ 1，37°C孵育20min，洗板4次，加顯色劑后，37°C孵育10 15min，比色。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述便攜檢驗箱內(nèi)部中空，間隔設(shè)有控溫室和震蕩室，所述控溫室內(nèi)設(shè)有加熱管、微孔板支架、微孔板和洗板機，所述震蕩室內(nèi)設(shè)有微型震蕩器、試劑瓶架、試管架和真空抽氣裝置，所述便攜檢驗箱體頂部設(shè)有震蕩器定時開關(guān)、酶標(biāo)板和加樣吸管。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述加熱管上設(shè)有溫控板和加熱定時開關(guān)，所述試管架上設(shè)有待檢血清試管，所述試劑瓶架上設(shè)有促進(jìn)劑瓶、裂解劑瓶和標(biāo)記物瓶，所述洗板機上設(shè)有洗板機開關(guān)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，其特征在于所述便攜檢驗箱背側(cè)面設(shè)有電源開關(guān)，所述電源開關(guān)與加熱裝置、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置分別形成電氣通路。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法及配套便攜裝置，本發(fā)明包括一種直接檢測乙肝病毒核心抗原的方法、配套使用的便攜檢驗箱，所述檢測方法包括檢驗操作步驟、檢驗試劑和檢驗結(jié)果判斷方法，所述便攜檢驗箱體內(nèi)設(shè)有加樣吸管、微孔板、洗板機、微型震蕩器、真空抽氣裝置、酶標(biāo)板和加熱管。本發(fā)明操作簡單、快速，實用性強，便攜性高，與PCR探針檢測HBV-DNA陽性結(jié)果符合率為92.3％，與乙型肝炎兩對半檢測HBV陽性結(jié)果符合率為94.1％，達(dá)到實際臨床檢驗要求，適合基層醫(yī)療單位使用，有效滿足HBV快速檢測的臨床需要。
文檔編號G01N33/543GK102914652SQ20121039815
公開日2013年2月6日 申請日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者徐連江, 李升玲, 李翠霞 申請人:徐連江