用于前列腺癌分析的組合物和方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供用于診斷前列腺癌的方法。本發(fā)明還提供新穎的抗STEAP-1抗體及其用途。
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于前列腺癌分析的組合物和方法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)
[0002] 本申請(qǐng)依據(jù)35USC119(e)要求2011年11月29日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng) No. 61/629, 886和2012年9月19日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)No. 61/703, 099的優(yōu)先權(quán)，通 過(guò)提述將其內(nèi)容完整收入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及腫瘤學(xué)和癌癥診斷領(lǐng)域，更具體地涉及用于前列腺癌篩選，分階段，治 療監(jiān)測(cè)的組合物和方法。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 前列腺癌是男性中最流行的癌癥之一。雖然大多數(shù)早期發(fā)作的前列腺癌是沒(méi)有 癥狀且生長(zhǎng)緩慢的，但是某些前列腺癌更具攻擊性，疼痛且導(dǎo)致死亡。目前，有兩大類(lèi)非 侵入性篩選測(cè)試可用于在男性中檢測(cè)前列腺癌。一種是手指直腸檢查（DRE)(其容許醫(yī) 生通過(guò)將戴有手套的手指插入直腸并感受前列腺來(lái)檢測(cè)前列腺異常），而另一種是前列 腺表面抗原測(cè)試（PSA測(cè)試）（其測(cè)量血液樣品中PSA抗原的水平）。雖然FDA已經(jīng)批準(zhǔn) 與DRE -起使用PSA測(cè)試來(lái)幫助在男性中檢測(cè)前列腺癌，但是PSA測(cè)試在篩選方面是有爭(zhēng) 議的，因?yàn)椴磺宄摐y(cè)試是否實(shí)際地挽救生命。特別地，基于PSA篩選沒(méi)有或很小降低前 列腺癌死亡率，同時(shí)導(dǎo)致引起不必要的疼痛和副作用的治療或測(cè)試的發(fā)現(xiàn)，美國(guó)預(yù)防服務(wù) 工作組最近反對(duì)推薦在健康男性中進(jìn)行PSA篩選（參見(jiàn)例如R. Chou et al, Ann. Intern. Med.，0ctober7,2011E-375 ;Djulbegovic et al，BMJ2010,341:c4543)。前列腺癌的最確定 性診斷是活檢，其中自疑似患者取出的一小塊前列腺針對(duì)腫瘤細(xì)胞的存在情況進(jìn)行顯微鏡 檢查。顯然，此類(lèi)規(guī)程相當(dāng)具有侵入性，不太期望用于早期篩選和檢測(cè)。
[0006] 正如在許多其它類(lèi)型的癌癥中，前列腺癌患者中的主要死亡原因不是原發(fā)性腫瘤 而是轉(zhuǎn)移。一些原發(fā)性腫瘤細(xì)胞自身能脫離初始組織并進(jìn)入循環(huán)。這些細(xì)胞稱(chēng)作循環(huán)腫瘤 細(xì)胞（CTC)。一旦CTC自身播種至身體中的合適部位，它們就可發(fā)展成轉(zhuǎn)移性集落，它們難 以檢測(cè)且隨著它們進(jìn)展成繼發(fā)性腫瘤能危及生命。試圖檢測(cè)CTC。然而，尚未開(kāi)發(fā)出能辨 別CTC是否源自前列腺及前列腺癌如何進(jìn)展的方法。鑒于最近的發(fā)現(xiàn)，即PSA篩選未能降 低死亡率，仍然存在開(kāi)發(fā)能在前列腺癌的診斷和預(yù)后中提供可靠結(jié)果的藥劑和方法的重大 需要。
[0007] 發(fā)明概述
[0008] -方面，本公開(kāi)文本提供用于在測(cè)試受試者中診斷前列腺癌的方法，其包括：a) 使上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中該癌細(xì)胞來(lái)自取 自測(cè)試受試者的血液樣品；并b)測(cè)定任何癌細(xì)胞是否表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物，其中存在 表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞指示測(cè)試受試者中具有前列腺癌。
[0009] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)定表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的 量，其中此類(lèi)量指示測(cè)試受試者中的前列腺癌的階段。
[0010] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)定癌細(xì)胞上前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá) 水平。 toon] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括基于癌細(xì)胞的前列腺特異性標(biāo)志物表達(dá)水 平對(duì)癌細(xì)胞分等級(jí)，并測(cè)定每個(gè)等級(jí)中的癌細(xì)胞的百分比。
[0012] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括通過(guò)將該等級(jí)中的癌細(xì)胞的百分比乘以基 于前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平指派給該等級(jí)的獨(dú)特等級(jí)數(shù)為每個(gè)等級(jí)計(jì)算等級(jí)得分， 并將所有等級(jí)得分加和以獲得Η得分，其中Η得分指示測(cè)試受試者中的前列腺癌的階段。
[0013] 在某些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞是用包含配體的捕捉組合物自血液樣品鑒定的， 該配體特異性結(jié)合上皮起源的癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該配體為特異性結(jié)合優(yōu)先在 癌細(xì)胞上表達(dá)的上皮抗原的抗體。在某些實(shí)施方案中，該上皮抗原為上皮細(xì)胞粘附分子 (EpCAM)。
[0014] 在某些實(shí)施方案中，在自血液樣品分離的細(xì)胞級(jí)分中富集鑒定的癌細(xì)胞。在某些 實(shí)施方案中，該細(xì)胞級(jí)分是在磁場(chǎng)下分離的。在某些實(shí)施方案中，該捕捉組合物中的配體是 與磁性顆粒偶聯(lián)的。
[0015] 在某些實(shí)施方案中，該特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體包含抗STEAP-1抗 體。在某些實(shí)施方案中，該抗STEAP-1抗體以彡ΙΟΟΟηΜ的KD結(jié)合STEAP-1。在某些實(shí)施方 案中，該抗STEAP-1抗體為鼠單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，該抗STEAP-1抗體為15A5， 15A5是由具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞生成的15A5。
[0016] 在某些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞是用一種或多種容許檢測(cè)上皮起源的癌細(xì)胞的試劑 鑒定的。在某些實(shí)施方案中，該試劑包含特異性結(jié)合細(xì)胞角蛋白的配體，且其中該配體任選 是與第二可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的。在某些實(shí)施方案中，該試劑進(jìn)一步包含區(qū)分細(xì)胞與非細(xì)胞 成分的染料。在某些實(shí)施方案中，該試劑進(jìn)一步包含特異性結(jié)合白細(xì)胞標(biāo)志物的配體。
[0017] 在某些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞是通過(guò)基于免疫熒光顯微術(shù)，流式細(xì)胞術(shù)，纖維光學(xué) 掃描細(xì)胞術(shù)，或激光掃描細(xì)胞術(shù)的方法檢測(cè)的。
[0018] 另一方面，本公開(kāi)文本提供在測(cè)試受試者中預(yù)測(cè)前列腺癌療法的功效的方法。
[0019] 另一方面，本公開(kāi)文本提供在測(cè)試受試者中監(jiān)測(cè)對(duì)前列腺癌療法的響應(yīng)的方法。
[0020] 另一方面，本公開(kāi)文本提供結(jié)合與抗體15A5結(jié)合的表位基本上相同的表位的抗 體，其中抗體15A5是由具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞生成的。
[0021] 另一方面，本公開(kāi)文本提供具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞系。
[0022] 另一方面，本公開(kāi)文本提供用于檢測(cè)血液樣品中表達(dá)STEAP-1的前列腺癌細(xì)胞的 存在情況的測(cè)試試劑盒，其包含特異性結(jié)合STEAP-1的抗體。在某些實(shí)施方案中，該測(cè)試試 劑盒進(jìn)一步包含一種或多種選自下組的組合物：與特異性結(jié)合上皮起源的癌細(xì)胞的第一配 體偶聯(lián)的磁性顆粒，特異性結(jié)合上皮標(biāo)志物的第二配體，特異性結(jié)合白細(xì)胞標(biāo)志物的第三 配體，和區(qū)分細(xì)胞與非細(xì)胞成分的染料。
[0023] 附圖簡(jiǎn)述
[0024] 圖1描繪基于抗STEAP-1抗體染色水平的代表性CTC打分標(biāo)準(zhǔn)。
[0025] 圖2描繪不同細(xì)胞系在CellSearch?系統(tǒng)上使用綿羊多克隆抗STEAP-1抗體，小 鼠單克隆抗STEAP-1抗體37,和家兔多克隆抗STEAP-1抗體測(cè)定的STEAP-1表達(dá)和Η得分： (a) LB50細(xì)胞上的表達(dá)；(b) PC3細(xì)胞上的表達(dá)；（c) LB50細(xì)胞的Η得分；和（d) PC3細(xì)胞的Η 得分。
[0026] 圖3描繪不同摻混（spiked-in)樣品在CellSearch?系統(tǒng)上使用綿羊多克隆抗 STEAP-1抗體測(cè)定的STEAP-1表達(dá)和Η得分：（a)表達(dá)，（b)H得分。
[0027] 圖4描繪11份患者血液樣品在CellSearclr?系統(tǒng)上用綿羊多克隆抗STEAP-1抗 體測(cè)定的Η得分。
[0028] 圖5描繪10份患者血液樣品在CellSearch?系統(tǒng)上使用綿羊多克隆抗STEAP-1 抗體測(cè)定的Η得分（a)，及與來(lái)自相同患者的腫瘤組織樣品的IHC結(jié)果的比較（b-c)。
[0029] 圖6描繪不同摻混樣品在CellSearch?系統(tǒng)上使用綿羊多克隆抗STEAP-1抗體 (a-b)和小鼠單克隆抗STEAP-1抗體15A5(c-d)測(cè)定的STEAP-1表達(dá)和Η得分。
[0030] 圖7描繪患者樣品的重復(fù)樣品中CTC枚舉的再現(xiàn)性（以CTC計(jì)數(shù)/患者顯示）（a) 及來(lái)自患者樣品的重復(fù)樣品的CTC中STEAP-1生物標(biāo)志物表達(dá)水平的再現(xiàn)性（以Η得分/ 患者顯示）（b)。
[0031] 圖8描繪來(lái)自基線(xiàn)1和2時(shí)采集的血液樣品的CTC枚舉中的強(qiáng)關(guān)聯(lián)。
[0032] 圖9描繪劑量1-7的劑量放大治療期間服藥前和服藥后患者的CTC計(jì)數(shù)的倍數(shù)變 化。
[0033] 圖10描繪劑量1-7的劑量放大治療期間服藥前和服藥后患者的CTC計(jì)數(shù)。
[0034] 圖11描繪劑量1-7的劑量放大治療期間服藥前和服藥后患者的CTC計(jì)數(shù)。
[0035] 發(fā)明詳述
[0036] I.定義
[0037] 如本文中可互換使用的，術(shù)語(yǔ)"腫瘤"或"癌癥"指特征在于贅生性或惡性細(xì)胞生 長(zhǎng)，增殖，或轉(zhuǎn)移的任何醫(yī)學(xué)狀況，而且包括實(shí)體癌癥和非實(shí)體癌癥（諸如白血?。┒?。
[0038] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"前列腺癌"或"前列腺腫瘤"指源自前列腺組織的癌癥或 腫瘤。
[0039] 在疾病（諸如癌癥或腫瘤）的語(yǔ)境中，術(shù)語(yǔ)"階段"或"期"指疾病的進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，其 指示疾病的嚴(yán)重性。
[0040] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"分階段"或"分期"指鑒定疾病進(jìn)展所處的特定階段。
[0041] 術(shù)語(yǔ)"診斷"（連同其語(yǔ)法變化形式諸如"診斷性"）指鑒定分子或病理學(xué)狀態(tài)，疾 病或狀況（諸如鑒定癌癥），或者指鑒定可能受益于特定治療方案的癌癥患者。
[0042] 術(shù)語(yǔ)"預(yù)后"（及其語(yǔ)法變化形式諸如"預(yù)后性"）指預(yù)測(cè)受益于治療（諸如癌癥 療法）的可能性。
[0043] 術(shù)語(yǔ)"預(yù)測(cè)"在本文中用于指患者會(huì)有利地或不利地響應(yīng)特定抗前列腺癌療法的 可能性。在一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及那些響應(yīng)的程度。在一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及患者 是否會(huì)在治療（例如使用特定治療劑的治療）后存活或改善且某個(gè)時(shí)間段沒(méi)有疾病進(jìn)展和 /或患者會(huì)在治療（例如使用特定治療劑的治療）后存活或改善且某個(gè)時(shí)間段沒(méi)有疾病進(jìn) 展的概率。
[0044] 術(shù)語(yǔ)"好處"以最廣義使用，而且指任何期望效果且具體包括本文中定義的臨床好 處。
[0045] "個(gè)體"或"受試者"為哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括但不限于馴養(yǎng)的動(dòng)物（例如牛，綿 羊，貓，犬，和馬），靈長(zhǎng)動(dòng)物（例如人和非人靈長(zhǎng)動(dòng)物，諸如猴），家兔，和嚙齒動(dòng)物（例如小 鼠和大鼠）。在某些實(shí)施方案中，個(gè)體或受試者為人。
[0046] 術(shù)語(yǔ)六次跨膜前列腺上皮抗原1 (也稱(chēng)作STEAP-1)指在前列腺組織中優(yōu)勢(shì)表達(dá) 且發(fā)現(xiàn)在多種癌細(xì)胞系中上調(diào)的細(xì)胞表面抗原（}11^61^6七31.(1999)，？1'〇(3.似1:1.4〇&(1· Sci. USA, 96 (25)，14523-8)。一種例示性人 STEAP-1 具有 2007 年 10 月 26 日提交的 US2009/0280056A1中披露的氨基酸序列SEQ ID N0:1，通過(guò)提述明確將其完整公開(kāi)內(nèi)容收入 本文。
[0047] 術(shù)語(yǔ)"抗STEAP-1抗體"和"結(jié)合STEAP-1的抗體"指能夠以足夠親和力結(jié)合 STEAP-1使得該抗體在靶向STEAP-1中作為診斷劑有用的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗 STEAP-1抗體結(jié)合無(wú)關(guān)的非STEAP-1蛋白的程度小于該抗體對(duì)STEAP-1的結(jié)合的約10%， 如例如通過(guò)放射免疫測(cè)定法（RIA)測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合STEAP-1的抗體具有 彡 1 μ M，彡 ΙΟΟηΜ，彡 10nM，彡 InM，彡 0· InM，彡 0· OlnM，或彡 0· OOlnM(例如 1(Γ8Μ 或更低， 例如1(Γ8Μ至1(Γ13Μ，例如10_9Μ至10_ 13Μ)的解離常數(shù)（Kd)。在某些實(shí)施方案中，抗STEAP-1 抗體結(jié)合在來(lái)自不同物種的STEAP-1間保守的STEAP-1表位。
[0048] "親和力"指一種分子（例如抗體）的單個(gè)結(jié)合位點(diǎn)和它的結(jié)合配偶（例如抗原） 之間全部非共價(jià)相互作用的強(qiáng)度之和。除非另有說(shuō)明，如本文中使用的，"結(jié)合親和力"指內(nèi) 在結(jié)合親和力，其反映結(jié)合對(duì)的成員（例如抗體和抗原）之間的1:1相互作用。分子X(jué)對(duì) 它的配偶Y的親和力一般可通過(guò)解離常數(shù)（Kd)來(lái)表示。親和力可通過(guò)本領(lǐng)域已知的常用 方法來(lái)測(cè)量，包括本文中描述的那些。下文描述了測(cè)量結(jié)合親和力的具體例示性和示例性 實(shí)施方案。
[0049] 術(shù)語(yǔ)"抗體"在本文中以最廣義使用，而且涵蓋各種抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于單克 隆抗體，多克隆抗體，多特異性抗體（例如雙特異性抗體），和抗體片段，只要它們展現(xiàn)期望 的抗原結(jié)合活性。
[0050] "抗體片段"指與完整抗體不同，包含完整抗體中結(jié)合（完整抗體所結(jié)合的）抗原 的部分的分子。抗體片段的例子包括但不限于Fv，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)ab' -SH，F(xiàn)(ab'）2 ;雙抗體； 線(xiàn)性抗體；單鏈抗體分子（例如scFv);和自抗體片段形成的多特異性抗體。
[0051] 與參照抗體"結(jié)合相同表位的抗體"指在競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法中將參照抗體對(duì)其抗原的結(jié) 合阻斷50%或更多的抗體，反之，參照抗體在競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法中將該抗體對(duì)其抗原的結(jié)合阻斷 50%或更多。本文中提供了一種例示性競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法。
[0052] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"抗體15A5"指由具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì) 胞系生成的小鼠單克隆抗STEAP-1抗體。雜交瘤細(xì)胞系的微生物保藏信息如下：ATCC保藏 物No. :PTA-12259 ;保藏日：2011年11月17日；和保藏材料：雜交瘤15A5. 1. 1. 1(也稱(chēng)作 7284)，其生成抗體15A5。
[0053] 抗體的"類(lèi)"指其重鏈擁有的恒定域或恒定區(qū)的類(lèi)型。有5大類(lèi)抗體：IgA，IgD， IgE, IgG，和IgM，而且這些中的數(shù)種可進(jìn)一步分成亞類(lèi)（同種型），例如IgGp IgG2, IgG3， IgGpIgAi，和IgA2。與不同類(lèi)的免疫球蛋白對(duì)應(yīng)的重鏈恒定域分別稱(chēng)作α，δ，ε，Y，和 μ 〇
[0054] 術(shù)語(yǔ)"全長(zhǎng)抗體"，"完整抗體"，和"全抗體"在本文中可互換地用于指具有與天然 抗體結(jié)構(gòu)實(shí)質(zhì)性相似的結(jié)構(gòu)或具有含有Fc區(qū)的重鏈的抗體，如本文中定義的。
[0055] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"指自實(shí)質(zhì)性同質(zhì)的抗體群體獲得的抗體，即 除可能的抗體變體（例如含有天然存在突變或單克隆抗體制備物的生產(chǎn)期間產(chǎn)生，此類(lèi)變 體一般以微小量存在）外，構(gòu)成群體的抗體個(gè)體相同和/或結(jié)合相同表位。與多克隆抗體 制備物（其通常包括針對(duì)不同決定簇（表位）的不同抗體）形成對(duì)比，單克隆抗體制備物 的每個(gè)單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。如此，修飾語(yǔ)"單克隆"指示抗體自實(shí)質(zhì)性同 質(zhì)的抗體群體獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過(guò)任何特定方法生成抗體。例如，要依照本發(fā) 明使用的單克隆抗體可以通過(guò)多種技術(shù)生成，包括但不限于雜交瘤法，重組DNA法，噬菌體 展示法，和利用包含所有或部分人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，本文中描述了 此類(lèi)方法和用于生成單克隆抗體的其它例示性方法。
[0056] "天然抗體"指具有不同結(jié)構(gòu)的天然存在免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體為 約150, 000道爾頓的異四聚體糖蛋白，由形成二硫鍵的兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈 構(gòu)成。自N至C端，每條重鏈具有一個(gè)可變區(qū)（VH)(也稱(chēng)作可變重域或重鏈可變域），接著 是三個(gè)恒定域（CH1，CH2,和CH3)。類(lèi)似地，自N至C端，每條輕鏈具有一個(gè)可變區(qū)（VL)(也 稱(chēng)作可變輕域或輕鏈可變域），接著是一個(gè)恒定輕域（CL)。抗體的輕鏈可基于其恒定域的 氨基酸序列歸于兩個(gè)型之一，稱(chēng)作卡帕（κ )和拉姆達(dá)（λ )。
[0057] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞毒劑"指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞 死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒劑包括但不限于放射性同位素（例如At 211，I131，I125, Υ9°， Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212和Lu的放射性同位素）；化療劑或化療藥物（例如 甲氨蝶呤（methotrexate)，阿霉素（adriamicin)，長(zhǎng)春花生物喊（vinca alkaloids) (長(zhǎng)春新堿（vincristine)，長(zhǎng)春堿（vinblastine)，依托泊苷（etoposide)),多柔 比星（doxorubicin)，美法侖（melphalan)，絲裂霉素 C(mitomycin C),苯丁 酸氮芥 (chlorambucil),柔紅霉素（daunorubicin)或其它嵌入劑）；生長(zhǎng)抑制劑；酶及其片段（諸 如溶核酶）；抗生素；和毒素（諸如小分子毒素或細(xì)菌，真菌，植物或動(dòng)物起源的酶活性毒 素，包括它們的片段和/或變體）。適合于本發(fā)明的細(xì)胞毒劑的非限制性例子包括2007年 10月26日提交的US2009/0280056A1中記載的那些，通過(guò)提述明確將其完整公開(kāi)內(nèi)容收入 本文。例如，在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞毒劑為單甲基auristatin E (MMAE)。
[0058] "分離的"抗體為已經(jīng)與其天然環(huán)境的一種成分分開(kāi)的抗體。在一些實(shí)施方案中， 將抗體純化至超過(guò)95%或99%純度，如通過(guò)例如電泳（例如SDS-PAGE，等電聚焦（IEF)，毛 細(xì)管電泳）或?qū)游觯ɡ珉x子交換或反相HPLC)測(cè)定的。關(guān)于用于評(píng)估抗體純度的方法的 綜述參見(jiàn)例如 Flatman et al.，J. Chromatogr. B848:79-87 (2007)。
[0059] "分離的"核酸指已經(jīng)與其天然環(huán)境的一種成分分開(kāi)的核酸分子。分離的核酸包括 正常情況下包含該核酸分子的細(xì)胞中包含的核酸分子，但是該核酸分子存在于染色體外或 與其天然染色體位置不同的染色體位置。
[0060] "分離的編碼抗STEAP-1抗體的核酸"指一種或多種編碼抗體重和輕鏈（或其片 段）的核酸分子，包括單一的載體或分開(kāi)的載體中的此類(lèi)核酸分子，及存在于宿主細(xì)胞中 一個(gè)或多個(gè)位置處的此類(lèi)核酸分子。
[0061] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"載體"指能夠擴(kuò)增與它連接的另一種核酸的核酸分子。該 術(shù)語(yǔ)包括作為自我復(fù)制核酸結(jié)構(gòu)的載體以及摻入宿主細(xì)胞（其中引入該載體）的基因組的 載體。某些載體能夠指導(dǎo)與它們可操作連接的核酸的表達(dá)。此類(lèi)載體在本文中稱(chēng)作"表達(dá) 載體"。
[0062] 術(shù)語(yǔ)"宿主細(xì)胞"，"宿主細(xì)胞系"，和"宿主細(xì)胞培養(yǎng)物"可互換使用，而且指其中引 入外源核酸的細(xì)胞，包括此類(lèi)細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括"轉(zhuǎn)化子"和"轉(zhuǎn)化細(xì)胞"，包括原 代轉(zhuǎn)化細(xì)胞和自它們衍生的后代，不管傳代次數(shù)。后代在核酸內(nèi)容方面與親本細(xì)胞可以不 是完全相同的，但可包含突變。本文中包括具有在初始轉(zhuǎn)化細(xì)胞中篩選或選擇的相同功能 或生物學(xué)活性的突變后代。
[0063] 術(shù)語(yǔ)"包裝插頁(yè)"用于指治療性產(chǎn)品的商業(yè)包裝中通常包括的說(shuō)明書(shū)，它含有關(guān) 于關(guān)注此類(lèi)治療性產(chǎn)品使用的適應(yīng)癥，用法，劑量，施用，組合療法，禁忌癥和/或警告的信 息。
[0064] II.方法
[0065] 一方面，本公開(kāi)文本提供使用來(lái)自測(cè)試受試者的血液樣品在測(cè)試受試者中進(jìn)行前 列腺癌診斷或分階段的方法。特別地，本公開(kāi)文本提供在測(cè)試受試者中進(jìn)行前列腺癌診斷 或分階段的方法，其通過(guò)測(cè)定循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC)是否表達(dá)一種或多種前列腺特異性標(biāo)志 物來(lái)進(jìn)行。
[0066] 在本文中提供的方法中，對(duì)CTC分析一種或多種前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)。在 CTC上檢測(cè)前列腺特異性標(biāo)志物為前列腺癌診斷和分階段提供進(jìn)一步信息。
[0067] 在某些實(shí)施方案中，本公開(kāi)文本提供在測(cè)試受試者中進(jìn)行前列腺癌診斷或分階段 的方法，其包括：a)使上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸， 其中該癌細(xì)胞來(lái)自取自測(cè)試受試者的血液樣品；并b)測(cè)定任何癌細(xì)胞是否表達(dá)前列腺特 異性標(biāo)志物，其中存在表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞指示測(cè)試受試者中具有前列腺 癌。
[0068] 術(shù)語(yǔ)"上皮起源的癌細(xì)胞"指表達(dá)至少一種上皮標(biāo)志物的癌細(xì)胞。如本文中使用 的，術(shù)語(yǔ)"標(biāo)志物"指在特定類(lèi)型的細(xì)胞上優(yōu)先表達(dá)且?guī)椭鷧^(qū)分那些細(xì)胞與其它類(lèi)型的細(xì)胞 的抗原分子。例如，上皮標(biāo)志物可以是在上皮細(xì)胞上普遍表達(dá)但正常情況下在白細(xì)胞上找 不到的抗原分子。上皮起源的癌細(xì)胞還可表達(dá)腫瘤標(biāo)志物，例如在腫瘤細(xì)胞上優(yōu)先找到但 在正常細(xì)胞上不太頻繁找到的抗原分子。在某些實(shí)施方案中，上皮起源的癌細(xì)胞包括CTC。
[0069] 在某些實(shí)施方案中，上皮起源的癌細(xì)胞表達(dá)至少一種也在癌細(xì)胞中優(yōu)先找到的上 皮標(biāo)志物。檢測(cè)到此類(lèi)上皮標(biāo)志物指示上皮起源的癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，此類(lèi)上皮 標(biāo)志物為上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM)。
[0070] 上皮起源的癌細(xì)胞來(lái)自得自測(cè)試受試者的血液樣品。血液樣品可以是任何自人血 液衍生的樣品，例如血漿樣品，血清樣品，全血，或已經(jīng)用某些藥劑（諸如抗凝劑）處理過(guò)的 血液。可以直接自測(cè)試受試者獲得血液樣品，或者可以從自測(cè)試受試者收集樣品的機(jī)構(gòu)獲 得血液樣品。
[0071] 在某些實(shí)施方案中，用捕捉組合物自血液樣品鑒定癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，捕 捉組合物包含特異性結(jié)合上皮起源的癌細(xì)胞的配體。在某些實(shí)施方案中，配體為特異性結(jié) 合在癌細(xì)胞上優(yōu)先表達(dá)的上皮抗原的抗體。在某些實(shí)施方案中，上皮抗原為EpCAM。
[0072] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"鑒定"指實(shí)質(zhì)性區(qū)分上皮起源的癌細(xì)胞與血液樣品中的其 余成分。例如，可以由捕捉組合物結(jié)合或捕捉上皮起源的癌細(xì)胞，而其余成分沒(méi)有得到結(jié)合 或捕捉。
[0073] 可以將所鑒定的癌細(xì)胞與血液樣品中的其余成分分開(kāi)或不分開(kāi)。在某些實(shí)施方案 中，沒(méi)有將所鑒定的癌細(xì)胞與樣品中的其它成分分開(kāi)，或者自樣品中的其它成分富集所鑒 定的癌細(xì)胞。例如，可以將血液樣品（例如血清樣品）加載至載玻片，可以用捕捉組合物鑒 定血液樣品（例如血清樣品），而且可以在沒(méi)有任何分離或富集操作的情況下，使樣品與其 它試劑進(jìn)一步接觸。
[0074] 在某些實(shí)施方案中，在自血液樣品分離的細(xì)胞級(jí)分中富集所鑒定的癌細(xì)胞。如本 文中使用的，術(shù)語(yǔ)"富集"指細(xì)胞級(jí)分中所鑒定的癌細(xì)胞的密度比血液樣品中的要高?？墒?用任何合適技術(shù)來(lái)分離細(xì)胞級(jí)分。本領(lǐng)域常用的技術(shù)包括但不限于重力分離，磁力分離或 親和力分離，例如在癌細(xì)胞與容許分離癌細(xì)胞的捕捉組合物形成復(fù)合物之后。對(duì)于重力分 離，可以將捕捉組合物與能旋轉(zhuǎn)下來(lái)以容許富集所鑒定的癌細(xì)胞的顆?；蛑榕悸?lián)。對(duì)于磁 力分離，可以將捕捉組合物與能在合適的磁場(chǎng)中分離的磁性顆粒偶聯(lián)。對(duì)于親和力分離，可 以在裝置（諸如載玻片）上固定化捕捉組合物，并容許捕捉所鑒定的細(xì)胞。
[0075] 在某些實(shí)施方案中，在磁場(chǎng)下分離細(xì)胞級(jí)分。在某些實(shí)施方案中，捕捉組合物中的 配體是與磁性顆粒偶聯(lián)的。
[0076] 可以使用本領(lǐng)域已知的方法（參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No. 5, 597, 531， No. 5, 698, 271,和 No. 6, 365, 362),還有 Liberti et al, In Fine Particles Science and Technology, 777-90, E. Pelizzetti (ed.) (1996)中記載的規(guī)程來(lái)制備適合于本文中公開(kāi)的 方法的磁性顆粒。簡(jiǎn)言之，磁性顆粒包含用聚合物或蛋白質(zhì)（例如牛血清清蛋白和酪蛋白） 包被的磁核（例如鐵氧化物）。可以控制磁性顆粒的磁質(zhì)和尺寸使得磁性顆粒是響應(yīng)磁的 但對(duì)細(xì)胞分析技術(shù)（諸如免疫熒光檢測(cè)）是基本上不可見(jiàn)的。磁性顆粒的合適尺寸可以 是小于200nm，優(yōu)選具有合適的尺寸分布范圍，例如在90-150nm內(nèi)。顆粒的磁質(zhì)可以介于 70-90 %之間。
[0077] 在某些實(shí)施方案中，磁性顆粒是膠狀的。此類(lèi)膠狀磁性顆粒在溶液中在延長(zhǎng)的時(shí) 段里是基本上穩(wěn)定的，而且在重力下或在不應(yīng)用磁場(chǎng)的情況下不趨于聚集。在某些實(shí)施方 案中，磁性顆粒為膠狀納米顆粒。
[0078] 可以使用本領(lǐng)域已知的任何合適方法將捕捉組合物中的配體與磁性顆粒偶聯(lián)。例 如，可以使用異雙功能接頭（諸如琥珀酰亞氨基丙基-二硫代吡啶（STOP)和磺基琥珀酰亞 氨基-4-[馬來(lái)酰亞氨基甲基]環(huán)己烷-1-羧酸酯（SMCC))將捕捉組合物與磁性顆粒直接 偶聯(lián)。又例如，可以將包含生物素化抗體的捕捉組合物與綴合有鏈霉親合素的磁性顆粒偶 聯(lián)。也可以用能引起偶聯(lián)的其它偶聯(lián)對(duì)（例如親合素-生物素，蛋白A-抗體Fc，受體-配 體，和凝集素-碳水化合物）引入捕捉組合物和磁性顆粒。
[0079] 在某些實(shí)施方案中，捕捉組合物包含與磁性膠狀納米顆粒偶聯(lián)的EpCAM抗體。在 某些實(shí)施方案中，可使用CeMSearch?系統(tǒng)（Veridex，New Jersey)來(lái)分離富集了所鑒定的 細(xì)胞的細(xì)胞級(jí)分。
[0080] 使上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸。如本文 中使用的，術(shù)語(yǔ)"前列腺特異性"指示標(biāo)志物優(yōu)先見(jiàn)于前列腺組織，而且實(shí)質(zhì)性區(qū)分前 列腺組織或細(xì)胞與其它組織或細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，前列腺特異性標(biāo)志物為前列 腺細(xì)胞的表面或膜標(biāo)志物。在某些實(shí)施方案中，前列腺特異性標(biāo)志物選自下組：六次跨 膜前列腺上皮抗原（STEAP-1)(參見(jiàn)例如]^361^6七31.，（1999)?1'〇(：.似1:1.4〇3(1.3(3；[· USA，96, 14523-14528)，前列腺特異性膜抗原（PSM)(參見(jiàn)例如 Israeli, R. S. et al.，（1993) Cancer Res. 53, 227-230)，前列腺癌腫瘤抗原（PCTA-1)(參見(jiàn)例如 Su，Ζ· Z. et al.，（1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA93, 7252-7257)，和前列腺干細(xì)胞抗原（PSCA)(參見(jiàn)例如 Reiter, R. E. et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci USA95, 1735-1740)。一種例示性人 STEAP-1 具有2007年10月26日提交的US2009/0280056A1中披露的氨基酸序列SEQ ID NO: 1，通過(guò) 提述明確將其完整公開(kāi)內(nèi)容收入本文。
[0081] 在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體包含抗STEAP-1抗 體。在某些實(shí)施方案中，抗STEAP-1抗體以彡ΙΟΟΟηΜ的K D結(jié)合STEAP-1?？筍TEAP-1抗體 可以是多克隆抗體或單克隆抗體，而且可以是任何合適物種的，諸如例如綿羊抗體，家兔抗 體，或鼠抗體。
[0082] 在某些實(shí)施方案中，抗STEAP-1抗體為鼠單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，抗 STEAP-1抗體為15A5,15A5是由具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞生成的。在某 些實(shí)施方案中，抗STEAP-1抗體為結(jié)合與抗體15A5結(jié)合的表位基本上相同的表位的抗體。
[0083] 在某些實(shí)施方案中，抗STEAP-1抗體是與第一可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的?？墒褂萌魏?合適的可檢測(cè)標(biāo)記物。在某些實(shí)施方案中，可檢測(cè)標(biāo)記物為熒光標(biāo)記物，諸如例如熒光團(tuán) AF-488,花青染料的衍生物，熒光素，羅丹明，德克薩斯紅，氨基甲基香豆素（AMCA)，藻紅蛋 白，異硫氰酸熒光素（FITC)，等等。綴合抗體與可檢測(cè)標(biāo)記物的方法是本領(lǐng)域公知的，參見(jiàn) 例如 Hermanson，G. T.，Bioconjugate techniques, Academic Press, 2008。
[0084] 在某些實(shí)施方案中，抗STEAP-1抗體不是綴合的?？梢杂门c可檢測(cè)標(biāo)記物（例如 第一可檢測(cè)標(biāo)記物）綴合的二抗來(lái)檢測(cè)未綴合的抗STEAP-1抗體。此類(lèi)二抗可以是在與抗 STEAP-1抗體不同的物種中生成的，而且識(shí)別抗STEAP-1抗體恒定區(qū)的任何抗體，正如本領(lǐng) 域通常采用的。
[0085] 在某些實(shí)施方案中，用一種或多種容許檢測(cè)上皮起源的癌細(xì)胞的試劑鑒定癌細(xì) 胞。
[0086] 在某些實(shí)施方案中，試劑包含特異性結(jié)合上皮標(biāo)志物的配體。在某些實(shí)施方案中， 上皮標(biāo)志物不是EpCAM。在某些實(shí)施方案中，上皮標(biāo)志物為細(xì)胞角蛋白。細(xì)胞角蛋白是一組 通常在上皮細(xì)胞中表達(dá)的蛋白質(zhì)，而且形成上皮組織的細(xì)胞骨架中的含角蛋白絲體。
[0087] 在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合上皮標(biāo)志物的配體為抗細(xì)胞角蛋白抗體，任選與 第二可檢測(cè)標(biāo)記物綴合。可使用任何合適的可檢測(cè)標(biāo)記物，例如熒光標(biāo)記物，諸如藻紅蛋 白。
[0088] 在某些實(shí)施方案中，試劑進(jìn)一步包含區(qū)分細(xì)胞與非細(xì)胞成分的細(xì)胞特異性染料。 例如，可使用對(duì)細(xì)胞核染色的染料。在某些實(shí)施方案中，染料為4'，6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI)。
[0089] 在某些實(shí)施方案中，試劑進(jìn)一步包含特異性結(jié)合白細(xì)胞標(biāo)志物的配體?？梢赃x擇 白細(xì)胞標(biāo)志物為在白細(xì)胞上普遍表達(dá)但在非白細(xì)胞上通常不表達(dá)，例如，CD45可以是合適 的白細(xì)胞標(biāo)志物。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合白細(xì)胞標(biāo)志物的配體是與第三可檢測(cè)標(biāo) 記物綴合的。例如，配體可以是與別藻藍(lán)蛋白綴合的抗⑶45抗體?？耿?5抗體對(duì)所鑒定 的細(xì)胞的染色可幫助自上皮起源的CTC排除白細(xì)胞。
[0090] 在一項(xiàng)測(cè)試中使用超過(guò)一種可檢測(cè)標(biāo)記物（包括染料）的情況中，優(yōu)選選擇可檢 測(cè)標(biāo)記物使得能獨(dú)立檢測(cè)每種標(biāo)記物，對(duì)樣品中存在的任何其它可檢測(cè)信號(hào)沒(méi)有實(shí)質(zhì)性干 擾。例如，可檢測(cè)標(biāo)記物（包括染料）可以是在檢測(cè)條件下顯不不同顏色的不同熒光分子。
[0091] 可通過(guò)任何合適方法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，例如基于免疫熒光顯微術(shù)，流式細(xì)胞術(shù)，纖維光 學(xué)掃描細(xì)胞術(shù)，或激光掃描細(xì)胞術(shù)的那些。
[0092] 在某些實(shí)施方案中，在用細(xì)胞特異性染料和差異標(biāo)記的，針對(duì)上皮標(biāo)志物，前列腺 特異性標(biāo)志物和白細(xì)胞標(biāo)志物的抗體或配體染色之后在熒光顯微術(shù)下顯現(xiàn)癌細(xì)胞。將細(xì)胞 特異性染料，上皮標(biāo)志物和前列腺特異性標(biāo)志物呈陽(yáng)性但白細(xì)胞標(biāo)志物呈陰性的細(xì)胞歸類(lèi) 為表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的，上皮起源的癌細(xì)胞。也可以使用流式細(xì)胞術(shù)來(lái)分析此類(lèi)細(xì) 胞，參見(jiàn)例如 Cruz, I.，et al.，Am J Clin Pathol, Vol. 123:66-74(2005)。
[0093] 或者，也可以將癌細(xì)胞沉積在玻璃載玻片的表面上，并掃描細(xì)胞特異性染料， 上皮標(biāo)志物和前列腺特異性標(biāo)志物呈陽(yáng)性但白細(xì)胞標(biāo)志物呈陰性的細(xì)胞（參見(jiàn)例如 Marrinucci, D. et al.，Human Pathology, Vol. 38, No. 3, 514-519 (2007))。類(lèi)似地，也可以 使用激光掃描技術(shù)分析沉積在玻璃載玻片上的所鑒定的細(xì)胞（參見(jiàn)例如Pachmann，K. et al. , Breast Cancer Research, Vol. 7, No. 6, R975-R979 (2005)) 〇
[0094] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)定表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞 的量，其中此類(lèi)量指示測(cè)試受試者中的前列腺癌的階段。已經(jīng)做出假設(shè)要關(guān)聯(lián)腫瘤的尺 寸和/或攻擊性與外周血中腫瘤細(xì)胞的數(shù)目。例如，有報(bào)告說(shuō)具有1mm直徑腫瘤的患者 可能具有每l〇〇ml血液約6個(gè)腫瘤細(xì)胞的外周血中腫瘤細(xì)胞頻率（參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利 No. 6, 365, 362)。假設(shè)腫瘤尺寸的增大可能與此頻率成比例，那么可以建立標(biāo)準(zhǔn)來(lái)指示測(cè)試 受試者中的癌癥的階段。在某些實(shí)施方案中，可使用來(lái)自診斷有早期階段或轉(zhuǎn)移性前列腺 癌的患者的臨床血液樣品來(lái)測(cè)定那些患者的外周血中癌細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)水平，由此為將來(lái)的檢 測(cè)和分析提供標(biāo)準(zhǔn)。
[0095] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)定癌細(xì)胞上的前列腺特異性標(biāo)志物的表 達(dá)水平。一些前列腺特異性標(biāo)志物為其表達(dá)水平因癌癥的腫瘤生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)移和/或晚期階段 而上調(diào)的抗原。此類(lèi)前列腺特異性標(biāo)志物可包括但不限于STEAP-1，PSMA，PCTA-1，和PSCA。 可通過(guò)任何合適方法來(lái)測(cè)定癌細(xì)胞上的前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平，例如通過(guò)測(cè)定與 前列腺特異性標(biāo)志物對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)的強(qiáng)度。
[0096] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括基于癌細(xì)胞的前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá) 水平對(duì)癌細(xì)胞分等級(jí)，并測(cè)定每個(gè)等級(jí)中的癌細(xì)胞的百分比。在某些實(shí)施方案中，分別對(duì) 表達(dá)高水平，中等水平和低水平的前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞分等級(jí)。可以例如使用已 建立的具有已知標(biāo)志物表達(dá)水平的細(xì)胞系來(lái)測(cè)定"高水平"，"中等水平"，和"低水平"的標(biāo) 準(zhǔn)。例如，已知LB50細(xì)胞系表達(dá)高水平的STEAP-1，已知LnCAPner細(xì)胞系表達(dá)中等水平的 STEAP-1，且已知PC3細(xì)胞系表達(dá)低水平的STEAP-1。因此，檢測(cè)為具有與LB50細(xì)胞系相當(dāng) 或比LB50細(xì)胞系要高的STEAP-1表達(dá)水平的癌細(xì)胞可以分等級(jí)為"高水平"。類(lèi)似地，"中 等水平"可指派給其STEAP-1表達(dá)水平與LnCAPner細(xì)胞系相當(dāng)或比LnCAPner細(xì)胞系要高但 比LB50細(xì)胞系要低的癌細(xì)胞。那些具有與PC3細(xì)胞系相當(dāng)或比PC3細(xì)胞系要低的STEAP-1 表達(dá)水平的可以分等級(jí)為"低水平"。
[0097] 可進(jìn)一步測(cè)定每個(gè)等級(jí)中的癌細(xì)胞的數(shù)目。在某些實(shí)施方案中，可計(jì)算每個(gè)等級(jí) 中的癌細(xì)胞的百分比。更高百分比的高水平等級(jí)中的癌細(xì)胞可指示更加晚期階段的前列腺 癌。類(lèi)似地，處于早期階段的前列腺癌可顯示更低百分比的較高水平等級(jí)中的癌細(xì)胞和/ 或更高百分比的較低水平等級(jí)中的癌細(xì)胞。
[0098] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括通過(guò)將該等級(jí)中的癌細(xì)胞的百分比乘以基 于前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平指派給該等級(jí)的獨(dú)特等級(jí)數(shù)，并將所有等級(jí)得分加和以 獲得Η得分為每個(gè)等級(jí)計(jì)算等級(jí)得分，其中Η得分指示測(cè)試受試者中的前列腺癌的階段。例 如，等級(jí)數(shù)3可指派給較高水平等級(jí)，2指派給中等水平等級(jí)，而1指派給較低水平等級(jí)，這 限定了 Η得分的范圍在0至300以?xún)?nèi)。更高的Η得分指示更多的細(xì)胞處于較高水平等級(jí)， 即更加晚期階段的前列腺癌，而更低的Η得分指示更多的細(xì)胞處于較低水平等級(jí)，即相對(duì) 較早階段的前列腺癌。
[0099] 在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)定標(biāo)志物的存在情況和/或標(biāo)志物的存 在頻率。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)免疫組織化學(xué)（"IHC"），Western印跡分析，免疫沉淀， 分子結(jié)合測(cè)定法，ELISA，ELIFA，熒光激活細(xì)胞分選（"FACS"），MassARRAY，蛋白質(zhì)組學(xué)，基 于血液的定量測(cè)定法（如例如血清ELISA)，生化酶活性測(cè)定法，原位雜交，Northern分析， 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（"PCR"）包括定量實(shí)時(shí)PCR( "qRT-PCR"）和其它擴(kuò)增型檢測(cè)方法，諸如 例如分支DNA，SISBA，TMA等等），RNA-Seq，F(xiàn)ISH，微陣列分析，基因表達(dá)概況分析，和/或 基因表達(dá)連續(xù)分析（"SAGE"），以及極其多種可通過(guò)蛋白質(zhì)，基因，和/或組織陣列分析實(shí) 施的測(cè)定法任一來(lái)測(cè)定標(biāo)志物的存在情況。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)熒光原位雜交（FISH) 來(lái)測(cè)定標(biāo)志物的存在情況。在一些實(shí)施方案中，標(biāo)志物為PTEN。在一些實(shí)施方案中，CTC是 三倍體。在一些實(shí)施方案中，CTC是具有PTEN損失的三倍體。在一些實(shí)施方案中，CTC通過(guò) CEP10FISH測(cè)定為三倍體。在一些實(shí)施方案中，CTC通過(guò)PTEN FISH測(cè)定為包含PTEN損失。 [0100] 另一方面，本公開(kāi)文本還提供在測(cè)試受試者中預(yù)測(cè)前列腺癌療法的功效的方法， 其包括：a)使上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中該癌 細(xì)胞來(lái)自取自測(cè)試受試者的血液樣品；并b)測(cè)定任何癌細(xì)胞是否表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志 物，其中存在表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞指示測(cè)試受試者中前列腺癌療法的功效。
[0101] 某些前列腺特異性標(biāo)志物還可以是前列腺癌治療的治療性靶物。因此，CTC上此 類(lèi)標(biāo)志物的表達(dá)水平及此類(lèi)水平的變化可預(yù)示靶向此類(lèi)標(biāo)志物的療法的功效。
[0102] 在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)定表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的 量，和/或測(cè)定癌細(xì)胞上前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平。例如，可以關(guān)聯(lián)來(lái)自早期臨床試 驗(yàn)中基線(xiàn)治療前樣品的癌細(xì)胞上前列腺特異性標(biāo)志物（例如STEAP-1)的表達(dá)水平與臨床 終點(diǎn)（諸如無(wú)進(jìn)展存活，PSA變化，患者報(bào)告的骨痛，總體存活，或其它）以確定某個(gè)閾值以 上的前列腺特異性標(biāo)志物表達(dá)是否指示前列腺癌療法（例如基于STEAP-1抗體-藥物綴合 物（ADC)的療法）的臨床活性。還可以關(guān)聯(lián)癌細(xì)胞中前列腺特異性標(biāo)志物（例如STEAP-1) 表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化（即治療后樣品中的下調(diào)）與臨床結(jié)局度量以確定此類(lèi)變化是否指 示治療活性。可使用此類(lèi)方法作為檢驗(yàn)該測(cè)定法作為可用于為前列腺癌療法（例如基于 STEAP-1ADC的療法）選擇患者的候選預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物中的第一步，接著是確認(rèn)性III研 究中的前瞻性驗(yàn)證。
[0103] 另一方面，本公開(kāi)文本還提供在測(cè)試受試者中監(jiān)測(cè)對(duì)前列腺癌療法的響應(yīng)的方 法，其包括：a)使第一組上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接 觸，其中第一組癌細(xì)胞來(lái)自取自測(cè)試受試者的第一血液樣品；b)測(cè)定第一組中表達(dá)前列腺 特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量和/或癌細(xì)胞中前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平；c)使第二組 上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中第二組癌細(xì)胞來(lái)自 在前列腺癌療法的測(cè)試時(shí)段之后取自測(cè)試受試者的第二血液樣品；d)測(cè)定第二組中表達(dá) 前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量和/或癌細(xì)胞中前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平；并e) 將b)中測(cè)定得到的表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量和/或前列腺特異性標(biāo)志物表 達(dá)水平與步驟d)中的比較，其中表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量變化和/或癌細(xì)胞 中前列腺特異性標(biāo)志物表達(dá)水平升高指示測(cè)試受試者中對(duì)前列腺癌療法的響應(yīng)。在某些實(shí) 施方案中，前列腺特異性標(biāo)志物為STEAP-1。
[0104] III.抗體
[0105] 另一方面，本公開(kāi)文本提供結(jié)合與抗體15A5結(jié)合的表位基本上相同的表位的抗 體，其中抗體15A5是由具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞生成的。
[0106] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體與15A5抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)STEAP-1的結(jié)合。可使 用競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法來(lái)鑒定與抗STEAP-1抗體15A5競(jìng)爭(zhēng)對(duì)STEAP-1的結(jié)合的抗體。
[0107] 在一種例示性競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法中，在包含結(jié)合STEAP-1的第一經(jīng)標(biāo)記抗體（例如15A5) 和第二未標(biāo)記抗體（要測(cè)試它與第一抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)STEAP-1的結(jié)合的能力）的溶液中溫育固 定化的STEAP-1。第二抗體可存在于雜交瘤上清液中。作為對(duì)照，在包含第一經(jīng)標(biāo)記抗體但 不包含第二未標(biāo)記抗體的溶液中溫育固定化的STEAP-1。在允許第一抗體結(jié)合STEAP-1的 條件下溫育后，去除過(guò)量的未結(jié)合抗體，并測(cè)量與固定化STEAP-1締合的標(biāo)記物的量。如果 測(cè)試樣品中與固定化STEAP-1締合的標(biāo)記物的量相對(duì)于對(duì)照樣品實(shí)質(zhì)性減少，那么這指示 第二抗體與第一抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì)STEAP-1的結(jié)合。參見(jiàn)Harlow and Lane (1988) Antibodies:A Laboratory Manual ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY) 〇
[0108] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體具有彡1000nM，彡100nM，彡10nM，彡InM， 彡0· InM，彡0· OlnM，或彡0· OOlnM(例如10_8M或更低，例如10_8M至10_13M，例如10_ 9M至 1〇-13Μ)的對(duì)STEAP-1的解離常數(shù)（Kd)。
[0109] 在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)如下述測(cè)定法所述用Fab型式的感興趣抗體及其抗 原實(shí)施的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測(cè)定法（RIA)來(lái)測(cè)量Kd。通過(guò)在存在未標(biāo)記抗原的滴 定系列的情況中用最小濃度的（ 1251)標(biāo)記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被板捕 捉結(jié)合的抗原來(lái)測(cè)量Fab對(duì)抗原的溶液結(jié)合親和力（參見(jiàn)例如0^11的 &1.，1皿〇1· Biol. 293:865-881 (1999))。為了建立測(cè)定法的條件，將·ΜΙΟ^ΟΤΙΤΕΙΙ? 多孔板（Thermo Scientific)用 50mM 碳酸鈉（ρΗ9· 6)中的 5 μ g/ml 捕捉用抗 Fab 抗體（Cappel Labs)包被 過(guò)夜，隨后用PBS中的2% (w/v)牛血清清蛋白于室溫（大約23°C )封閉2-5小時(shí)。在非吸 附板（Nunc#269620)中，將100pM或26pM[125I]_抗原與連續(xù)稀釋的感興趣Fab混合（例如 與 Presta et al.，Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)中抗 VEGF 抗體，F(xiàn)ab-12 的評(píng)估一致）。 然后將感興趣的Fab溫育過(guò)夜；然而，溫育可持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)段（例如約65小時(shí)）以確保達(dá)到 平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板，于室溫溫育（例如1小時(shí)）。然后去除溶液，并用PBS 中的〇· 1 %聚山梨酯20 ( T\VEEN-20? )洗板8次。板干燥后，添加150 μ 1/孔閃爍液 (MICR0SCINT-20? Packard)，并在 T0PC0UNT? 伽馬計(jì)數(shù)器（Packard)上對(duì)板計(jì)數(shù) 10 分鐘。 選擇每種Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法。
[0110] 依照另一個(gè)實(shí)施方案，使用表面等離振子共振測(cè)定法使用BIACOR&?-2000或 BIACOR_E?-3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)于 25°C用固定化抗原 CM5 芯片以? 10個(gè)響應(yīng)單位（RU)測(cè)量Kd。簡(jiǎn)言之，依照供應(yīng)商的說(shuō)明書(shū)用鹽酸N-乙基-Ν'-(3-二 甲基氨基丙基）_碳二亞胺（EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生 物傳感器芯片（CM5，BIAcore，Inc.)。將抗原用10mM乙酸鈉 pH4. 8稀釋至5yg/ml (? 0.2 μ M)，之后以5 μ Ι/min的流速注射以實(shí)現(xiàn)大約10個(gè)響應(yīng)單位（RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注 射抗原之后，注射1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。對(duì)于動(dòng)力學(xué)測(cè)量，于25°C以大約25 μ 1/ min的流速注射在含0.05%聚山梨酯20(TWEEN-20?)表面活性劑的PBS(PBST)中兩倍 連續(xù)稀釋的Fab (0. 78nM至500nM)。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一朗格繆爾（Langmuir)結(jié)合模型 (BIACORE? Evaluation Software version3. 2)通過(guò)同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖來(lái)計(jì) 算結(jié)合速率（km)和解離速率（k#)。以比率k^/lv計(jì)算平衡解離常數(shù)（Kd)。參見(jiàn)例如 Chen et al.，J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)。如果通過(guò)上述表面等離振子共振測(cè)定法， 結(jié)合速率超過(guò)ιο^Γ1^，那么可使用熒光淬滅技術(shù)來(lái)測(cè)定結(jié)合速率，即根據(jù)分光計(jì)，諸如配 備了斷流裝置的分光光度計(jì)（Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCO?分光光度計(jì) (ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量，在濃度漸增的抗原存在下，測(cè)量PBS, pH7. 2 中20nM抗抗原抗體（Fab形式）于25?的突光發(fā)射強(qiáng)度（激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通）的升高或降低。
[0111] 也可在Octet Red儀器（ForteBio, Menlo Park, CA，USA)上實(shí)施動(dòng)力學(xué)結(jié)合測(cè)量。 例如，在Octet緩沖液（0. 2 %十二烷基麥芽糖苷或DDM，一PBS)中實(shí)施所有清洗，稀釋和測(cè) 量，以lOOOrpm搖動(dòng)板。將鏈霉親合素生物傳感器在Octet緩沖液中平衡10分鐘，然后加 載生物素化STEAP-1 (來(lái)自1 % DDM中的病毒裂解物，在Octet緩沖液中1:8稀釋?zhuān)?分鐘， 并清洗10分鐘。對(duì)于結(jié)合階段，將配體包被的鏈霉親合素尖頭在抗STEAP-1抗體片段中浸 泡10分鐘（8次連續(xù)2倍稀釋?zhuān)加?00或50nM)?？稍趦H裝有Octet緩沖液的孔中對(duì)抗 體-STEAP-1復(fù)合物的解離測(cè)量600秒。用Octet評(píng)估軟件v6. 3使用1:1結(jié)合模型及全局 擬合來(lái)測(cè)定KD，Ka和Kd。
[0112] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體包括但不限于鼠抗體，綿羊抗體和家兔抗 體。在某些實(shí)施方案中，抗體為鼠單克隆抗體。
[0113] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體包含抗體15A5的至少一個(gè)⑶R區(qū)。可 使用本領(lǐng)域已知的方法來(lái)測(cè)定抗體的⑶R區(qū)。例示性⑶R (⑶R-L1，⑶R-L2，⑶R-L3， CDR-H1，CDR-H2,和 CDR-H3)存在于氨基酸殘基 24-34 (L1)，50-56 (L2)，89-97 (L3)， 31-35B(HI)，50-65(H2)，和 95-102(H3) (Kabat et al.，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991))。重鏈可變區(qū)中的CDR1除外，CDR-般包含形成高變環(huán) 的氨基酸殘基。CDR還包含"特異性決定殘基"或"SDR"，它們是接觸抗原的殘基。SDR 包含在⑶R中稱(chēng)作短縮-⑶R或a-⑶R的區(qū)域內(nèi)。例示性a-⑶R (a-⑶R-L1，a-⑶R-L2， a-CDR-L3, a-CDR-Hl，a-CDR-H2,和 a-CDR-H3)存在于氨基酸殘基 31-34(L1)，50-55(L2)， 89-96 (L3)，31-35B (HI)，50-58 (H2)，和 95-102 (H3) ( SMAlmagroandFransson，F(xiàn)ront. Biosci. 13:1619-1633(2008))。除非另有說(shuō)明，CDR殘基和可變域中的其它殘基（例如FR 殘基）在本文中是依照Kabat et al·，supra編號(hào)的。
[0114] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體包含抗體15A5的至少一個(gè)重鏈可變區(qū)，或 抗體15A5的至少一個(gè)輕鏈可變區(qū)。
[0115] 術(shù)語(yǔ)"可變區(qū)"或"可變域"指抗體重或輕鏈中涉及抗體結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)域。天然 抗體的重鏈和輕鏈可變域（分別為VH和VL) -般具有相似的結(jié)構(gòu)，每個(gè)結(jié)構(gòu)域包含四個(gè) 保守框架區(qū)（FR)和三個(gè)高變區(qū)（HVR)(參見(jiàn)例如Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed.，W. H.FreemanandCo.，page91(2007))。單個(gè)VH或VL域可能足以賦予抗原結(jié)合特異性。此 夕卜，可分別使用來(lái)自結(jié)合抗原的抗體的VH或VL域篩選互補(bǔ)VL或VH域的文庫(kù)來(lái)分離結(jié)合 特定抗原的抗體。參見(jiàn)例如 Portolano et al.，J. Immunol. 150:880-887 (1993) ;Clarkson et al. , Nature352:624-628(1991)〇
[0116] 本公開(kāi)文本還涵蓋本文中提供的抗體的抗體片段。在某些實(shí)施方案中，本文中 提供的抗體為抗體片段。抗體片段包括但不限于Fab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)ab' -SH，F(xiàn)(ab'）2, Fv，和 scFv片段，及下文描述的其它片段。關(guān)于某些抗體片段的綜述參見(jiàn)Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)。關(guān)于 scFv 片段的綜述參見(jiàn)例如 Pluckthiin, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. , (Springer-Verlag, New ￥〇濁)，口口.269-315(1994);還可參見(jiàn)恥93/16185;美國(guó)專(zhuān)利吣.5,571，894 和 No. 5, 587, 458。關(guān)于包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基且具有延長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期的Fab和F (ab '）2 片段的討論參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No. 5, 869, 046。
[0117] 雙抗體指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段，其可以是二價(jià)的或雙特異性的。參 見(jiàn)例如 EP404, 097 ;W01993/01161 ;Hudson et al·，Nat. Med. 9:129-134(2003) ;Hollinger et al·，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:6444-6448 (1993)。三抗體和四抗體也記載于 Hudson et al·，Nat. Med. 9:129-134 (2003)。
[0118] 單域抗體指包含抗體的整個(gè)或部分重鏈可變域或整個(gè)或部分輕鏈可變域的抗體 片段。在某些實(shí)施方案中，單域抗體為人單域抗體（Domantis, Inc.，Waltham，MA ;參見(jiàn)例如 美國(guó)專(zhuān)利 No. 6, 248, 516B1)。
[0119] 可以通過(guò)各種技術(shù)生成抗體片段，包括但不限于對(duì)完整抗體的蛋白水解消化以及 由重組宿主細(xì)胞（例如大腸桿菌或噬菌體）生成，如本文中描述的。
[0120] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體為抗體15A5或其抗原結(jié)合片段。
[0121] 在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是與可檢測(cè)標(biāo)記物進(jìn)一步綴合的。合適的 標(biāo)記物包括但不限于直接檢測(cè)的標(biāo)記物或模塊（諸如熒光，發(fā)色，電子致密，化學(xué)發(fā)光，和 放射性標(biāo)記物），以及（例如經(jīng)由酶促反應(yīng)或分子相互作用）間接檢測(cè)的模塊（諸如酶或 配體）。例示性的標(biāo)記物包括但不限于放射性同位素 32P，14c，1251，3H，和1311，熒光團(tuán)諸如稀 土螯合物或熒光素及其衍生物，羅丹明及其衍生物，丹酰，傘形酮，螢光素酶例如螢火蟲(chóng)螢 光素酶和細(xì)菌螢光素酶（美國(guó)專(zhuān)利No. 4, 737, 456)，螢光素，2, 3-二氫酞嗪二酮，辣根過(guò)氧 化物酶（HRP)，堿性磷酸酶，β -半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖類(lèi)氧化酶例如葡萄糖 氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，雜環(huán)氧化酶諸如尿酸酶和黃嘌呤氧化酶 (其與采用過(guò)氧化氫氧化染料前體的酶諸如HRP偶聯(lián)），乳過(guò)氧化物酶，或微過(guò)氧化物酶，生 物素/未合素，自旋標(biāo)記物，噬菌體標(biāo)記物，穩(wěn)定的自由基，等等。
[0122] IV.核酸和宿主細(xì)胞
[0123] 可以使用重組方法和組合物生成抗體，例如如美國(guó)專(zhuān)利No. 4, 816, 567中記載的。 在一個(gè)實(shí)施方案中，提供分離的編碼本文中描述的抗STEAP-1抗體的核酸。此類(lèi)核酸可編 碼包含/構(gòu)成抗體VL的氨基酸序列和/或包含/構(gòu)成VH的氨基酸序列（例如抗體的輕 和/或重鏈）。在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種或多種包含此類(lèi)核酸的載體（例如表達(dá)載 體）。在又一個(gè)實(shí)施方案中，提供包含此類(lèi)核酸的宿主細(xì)胞。在一個(gè)此類(lèi)實(shí)施方案中，宿主 細(xì)胞包含（例如轉(zhuǎn)化有）：（1)包含編碼包含/構(gòu)成抗體VL的氨基酸序列和包含/構(gòu)成抗 體VH的氨基酸序列的核酸的載體，或（2)包含編碼包含/構(gòu)成抗體VL的氨基酸序列的核 酸的第一載體和包含編碼包含/構(gòu)成抗體VH的氨基酸序列的核酸的第二載體。在一個(gè)實(shí) 施方案中，宿主細(xì)胞是真核的，例如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO)細(xì)胞或淋巴樣細(xì)胞（例如YO，NSO， Sp20細(xì)胞）。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供生成抗STEAP-1抗體的方法，其中該方法包括在適合 于表達(dá)抗體的條件下培養(yǎng)上文提供的包含編碼抗體的核酸的宿主細(xì)胞，并任選自宿主細(xì)胞 (或宿主細(xì)胞培養(yǎng)液）回收抗體。
[0124] 為了重組生成抗STEAP-1抗體，分離編碼抗體的核酸（例如上文描述的），并插入 一種或多種載體，供宿主細(xì)胞中的進(jìn)一步克隆和/或表達(dá)使用?？墒褂贸Ｒ?guī)規(guī)程（例如通 過(guò)使用能夠特異性結(jié)合編碼抗體重和輕鏈的基因的寡核苷酸探針）容易對(duì)此類(lèi)核酸進(jìn)行 分離和測(cè)序。
[0125] 對(duì)于克隆或表達(dá)抗體編碼載體合適的宿主細(xì)胞包括本文中描述的原核或真核 細(xì)胞。例如，可以在細(xì)菌中生成抗體，特別是在不需要糖基化和Fc效應(yīng)器功能時(shí)。關(guān) 于在細(xì)菌中表達(dá)抗體片段和多肽，參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No. 5, 648, 237，No. 5, 789, 199， 和 No. 5, 840, 523(還可參見(jiàn) Charlton，Methods in Molecular Biology, ν〇1·248(Β· K. C. Lo, ed.，Humana Press, Totowa, NJ, 2003)，ρρ· 245-254,其記載在大腸桿菌中表達(dá)抗體 片段）。在表達(dá)之后，可以在可溶性級(jí)分中自細(xì)菌細(xì)胞糊分離抗體，并且可以進(jìn)一步純化。
[0126] 在原核生物以外，真核微生物（諸如絲狀真菌或酵母）對(duì)于抗體編碼載體也是合 適的克隆或表達(dá)宿主，包括糖基化途徑已經(jīng)"人源化"，導(dǎo)致抗體生成具有部分或完全人糖 基化樣式的真菌和酵母菌株。參見(jiàn) Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) ;Li et al.，Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)。
[0127] 對(duì)于表達(dá)糖基化抗體合適的宿主細(xì)胞還衍生自多細(xì)胞生物體（無(wú)脊椎動(dòng)物和脊 椎動(dòng)物）。無(wú)脊椎動(dòng)物細(xì)胞的例子包括植物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。已經(jīng)鑒定了眾多可以與昆蟲(chóng)細(xì)胞 聯(lián)合使用的桿狀病毒株，特別是用于轉(zhuǎn)染草地夜蛾（Spodopterafrugiperda)細(xì)胞。
[0128] 還可利用植物細(xì)胞培養(yǎng)物作為宿主。參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利No. 5, 959, 177， No. 6, 040, 498, No. 6, 420, 548, No. 7, 125, 978,和 No. 6, 417, 429(記載用于在轉(zhuǎn)基因植物中 生產(chǎn)抗體的PLANTIB0DIES?技術(shù)）。
[0129] 也可使用脊椎動(dòng)物細(xì)胞作為宿主。例如，適應(yīng)懸浮生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系可能是 有用的。有用的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的其它例子有經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的猴腎CV1系（C0S-7); 人胚腎系（293 或 293 細(xì)胞，如記載于例如 Graham et al.，J. Gen Virol. 36:59(1977));幼 倉(cāng)鼠腎細(xì)胞（BHK);小鼠塞托利（Sertoli)細(xì)胞（TM4細(xì)胞，如記載于例如Mather, Biol. R印rod 23:243-251 (1980));猴腎細(xì)胞（CV1);非洲綠猴腎細(xì)胞（VER0-76);人宮頸癌細(xì)胞 (HELA);犬腎細(xì)胞（MDCK;牛鼠 （buffalo rat)肝細(xì)胞（BRL3A));人肺細(xì)胞（W138);人肝細(xì) 胞〇fep G2);小鼠乳腺腫瘤（MMT060562) ;TRI細(xì)胞，如記載于例如Mather et al·，Annals N. Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982) ;MRC5細(xì)胞；和FS4細(xì)胞。其它有用的哺乳動(dòng)物宿主 細(xì)胞系包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CH0)細(xì)胞，包括DHFR-CH0細(xì)胞（Urlaub et al.，Proc. Natl. Acad. Sci.USA77:4216 (1980));和骨髓瘤細(xì)胞系，諸如YO，NSO和Sp2/0。關(guān)于適合于抗 體生產(chǎn)的某些哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系的綜述參見(jiàn)例如Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed.，Humana Press, Totowa，NJ)，pp. 255-268 (2003)。
[0130] 本文中還提供雜交瘤細(xì)胞系，其具有微生物保藏號(hào)PTA-12259。該雜交瘤細(xì)胞系生 成抗體15A5。
[0131] V.抗體的用途
[0132] 本文中提供的抗體可用于制造前列腺癌的診斷試劑?？贵w可以與適合于診斷目的 的可檢測(cè)標(biāo)記物進(jìn)一步綴合，而且可以以合適形式呈現(xiàn)，諸如凍干粉或合適溶液形式。
[0133] VI.測(cè)試試劑盒
[0134] 本公開(kāi)文本的另一方面，提供測(cè)試試劑盒，其包含可用于前列腺癌診斷或預(yù)后的 組合物。
[0135] 本公開(kāi)文本進(jìn)一步提供用于在血液樣品中檢測(cè)表達(dá)STEAP-1的前列腺癌細(xì)胞的 存在情況的測(cè)試試劑盒，其包含特異性結(jié)合STEAP-1的抗體。
[0136] 在某些實(shí)施方案中，抗體是與第一可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的。可使用任何合適的可檢 測(cè)標(biāo)記物，諸如突光標(biāo)記物。
[0137] 在某些實(shí)施方案中，抗體為本文中提供的抗STEAP-1抗體。在某些實(shí)施方案中，抗 體為抗體15A5。
[0138] 在某些實(shí)施方案中，測(cè)試試劑盒進(jìn)一步包含一種或多種選自下組的組合物：與特 異性結(jié)合上皮起源的癌細(xì)胞的第一配體偶聯(lián)的磁性顆粒，特異性結(jié)合上皮標(biāo)志物的第二配 體，特異性結(jié)合白細(xì)胞標(biāo)志物的第三配體，和區(qū)分細(xì)胞與非細(xì)胞成分的染料。
[0139] 在某些實(shí)施方案中，第二配體是與第二可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的，和/或第三配體是 與第三可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)測(cè)試試劑盒包含超過(guò)一種可檢測(cè)標(biāo)記 物（包括染料）時(shí)，優(yōu)選選擇可檢測(cè)標(biāo)記物（包括染料）使得能獨(dú)立檢測(cè)每種標(biāo)記物，對(duì)樣 品中存在的任何其它可檢測(cè)信號(hào)沒(méi)有實(shí)質(zhì)性干擾。
[0140] 在某些實(shí)施方案中，第一配體，第二配體和/或第三配體包括抗體。在某些實(shí)施方 案中，第一配體包括抗EpCAM抗體。在某些實(shí)施方案中，第二配體包括抗角蛋白抗體。在某 些實(shí)施方案中，第三配體包括抗⑶45抗體。
[0141] 測(cè)試試劑盒可進(jìn)一步包含容器和容器上或與容器相關(guān)的標(biāo)簽或包裝插頁(yè)。合適的 容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，等。容器可以是自各種材料制成的，諸如玻璃 或塑料。容器裝有自身或與另一種組合物組合時(shí)有效診斷狀況的組合物。組合物中的至少 一種試劑是本發(fā)明的抗體。標(biāo)簽或包裝插頁(yè)指示組合物可用于選定狀況的體外診斷。 實(shí)施例
[0142] 下面是本發(fā)明的方法和組合物的實(shí)施例。要理解，鑒于上文提供的一般描述，可實(shí) 施各種其它實(shí)施方案。
[0143] 實(shí)施例1 :檢測(cè)不同細(xì)胞系上的STEAP-1
[0144] 使用免疫組織化學(xué)（IHC)測(cè)定法使用3種抗STEAP-1抗體檢測(cè)3種前列腺癌細(xì)胞 系上的STEAP-1表達(dá)。使用293LB50作為高STEAP-1表達(dá)細(xì)胞系；使用LnCAPner作為中等 STEAP-1表達(dá)細(xì)胞系；且使用PC3作為低至陰性STEAP-1表達(dá)細(xì)胞系。測(cè)試的抗STEAP-1抗 體為：抗體-37,它是一種小鼠單克隆抗STEAP-1抗體；一種綿羊多克隆抗STEAP-1抗體；和 sc-25514,它是一種家兔多克隆抗STEAP-1抗體。將3種抗體與熒光團(tuán)AF-488綴合。
[0145] 分別將抗體與3種細(xì)胞系一起溫育。在針對(duì)AF-488信號(hào)的熒光顯微術(shù)下顯現(xiàn)抗 體-抗原結(jié)合。結(jié)果顯示所有3種抗體給出預(yù)期的相對(duì)于3種細(xì)胞系的表達(dá)水平的信號(hào)強(qiáng) 度，即抗體顯示293LB50細(xì)胞上的最強(qiáng)染色，LnCAPner細(xì)胞上的中等染色，和PC3細(xì)胞上的 低至陰性染色。
[0146] 實(shí)施例2 :在CellSearch?系統(tǒng)上使用抗STEAP-1抗體檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞中的 STEAP-1 表達(dá)
[0147] 在CellSearch?系統(tǒng)上對(duì)3種抗體（小鼠抗體-37,綿羊多克隆抗體，和家兔 sc-25514)分別測(cè)試它們檢測(cè)LB50細(xì)胞和PC3細(xì)胞上的STEAP-1表達(dá)的能力。
[0148] 如下實(shí)施摻混（spike-in)測(cè)定法。在T75燒瓶中培養(yǎng)LB50細(xì)胞和PC3細(xì)胞。當(dāng) 細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)，用10ml PBS清洗細(xì)胞，然后用3ml胰蛋白酶處理。將7ml培養(yǎng)基添 加至脫離的細(xì)胞，并將全部懸浮液轉(zhuǎn)移入Falcon管，接著以13000rpm離心5分鐘。取出上 清液，并在l〇ml PBS中重懸浮團(tuán)粒。將0. 5ml每份細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移入Vicell管，并使用使 用Beckman Coulter計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。在10ml培養(yǎng)基中將細(xì)胞懸浮液稀釋至5000個(gè)細(xì)胞/ml 溶液。將合適量的細(xì)胞摻混入l〇ml血液，其中7. 5ml血液將用于CellSearch方法。為了 摻混入100個(gè)細(xì)胞，將26. 6ul細(xì)胞懸浮液添加至10ml血液。將摻混有細(xì)胞的血液旋轉(zhuǎn)20 分鐘。
[0149] 為了確保有大約100個(gè)細(xì)胞摻混入血液，重復(fù)將5ul每份細(xì)胞懸浮液添加到聚 L-賴(lài)氨酸格柵的載玻片（電子顯微術(shù)科學(xué)）上達(dá)5次。5ul細(xì)胞懸浮液大約等于25個(gè)細(xì) 胞。對(duì)每張載玻片上的細(xì)胞計(jì)數(shù)，并使用細(xì)胞數(shù)通過(guò)計(jì)數(shù)CellSearch上捕捉的"CTC"（即 摻混細(xì)胞）的數(shù)目/載玻片上計(jì)數(shù)的實(shí)際細(xì)胞數(shù)來(lái)計(jì)算細(xì)胞回收率。
[0150] 在徹底混合摻混有細(xì)胞的血液之后，在CellSearch上分別用3種抗STEAP-1抗體 遵循CellSearch CTC方案運(yùn)行血液樣品。簡(jiǎn)言之，將每份測(cè)試樣品與綴合有磁性膠狀納米 顆粒的抗EpCAM抗體混合，然后置于磁場(chǎng)以容許分離富集樣品中EpCAM陽(yáng)性上皮細(xì)胞的細(xì) 胞級(jí)分。然后將細(xì)胞級(jí)分與綴合有藻紅蛋白的抗細(xì)胞角蛋白抗體，綴合有別藻藍(lán)蛋白的抗 ⑶45抗體，DAPI，和3種綴合有AF-488的抗STEAP-1抗體之一混合，用于第4濾器。將綴合 的抗STEAP-1抗體在PBS中稀釋至1:50。在CellSearch上運(yùn)行樣品，并在CellTracks分 析儀上對(duì)CTC打分。細(xì)胞角蛋白和DAPI染色呈陽(yáng)性但CD45呈陰性的細(xì)胞確定為CTC。選 擇在CellSearch自動(dòng)制備系統(tǒng)上顯示STEAP-1染色的CTC，并對(duì)指示STEAP-1表達(dá)水平的 抗STEAP-1抗體熒光強(qiáng)度進(jìn)一步定量。
[0151] 基于染色強(qiáng)度（即STEAP-1的表達(dá)水平）對(duì)具有STEAP-1表達(dá)的CTC打分。對(duì)具 有高STEAP-1表達(dá)（展現(xiàn)為強(qiáng)染色強(qiáng)度和最小限度至無(wú)背景）的CTC給予得分3,對(duì)具有一 些背景的中等染色強(qiáng)度給予得分2,而對(duì)具有相對(duì)較高背景的低染色強(qiáng)度給予得分1。圖1 顯不了 一個(gè)代表例。
[0152] 如圖2 (a)中顯示的，所有3種測(cè)試抗體均檢測(cè)出摻混入血液的STEAP-1高表達(dá)者 LB50細(xì)胞，盡管動(dòng)態(tài)范圍不同。如圖2(b)中顯示的，綿羊多克隆抗體和家兔sc-25514還檢 測(cè)出摻混入血液的STEAP-1低表達(dá)者PC3細(xì)胞。
[0153] 自（lx弱陽(yáng)性染色細(xì)胞的百分比）+ (2x中等陽(yáng)性染色細(xì)胞的百分比）+ (3x強(qiáng)陽(yáng)性 染色細(xì)胞的百分比）的和，對(duì)具有STEAP-1表達(dá)的CTC計(jì)算Η得分，最大得分為300 (McCal 1 et al. (2008) British Journal of Cancer98 (6) : 1094-1101) 〇
[0154] 如圖2(c)_(d)中顯示的，綿羊多克隆抗體展現(xiàn)最好的動(dòng)態(tài)范圍，因此選擇綿羊多 克隆抗體用于臨床樣品的進(jìn)一步測(cè)試。
[0155] 實(shí)施例3 :在CellSearch?系統(tǒng)上使用綿羊多克隆抗體分析摻混樣品中的 STEAP-1表達(dá)細(xì)胞
[0156] 使用抗STEAP-1綿羊多克隆抗體測(cè)定摻混入血液樣品的細(xì)胞上的STEAP-1表達(dá)。 以與實(shí)施例2中的描述相似的規(guī)程實(shí)施摻混測(cè)定法。分別將3種細(xì)胞系（293LB50, LnCAPner 和PC3)摻混入血液樣品，并徹底混合。將綿羊多克隆抗體在PBS中稀釋至1:50,并添加至 CellSearch上的第4濾器中的血液樣品。在CellSearch上運(yùn)行樣品，并在CellTracks分 析儀上對(duì)CTC打分。細(xì)胞角蛋白和DAPI染色呈陽(yáng)性但CD45呈陰性的細(xì)胞確定為CTC。選 擇在CellSearch自動(dòng)制備系統(tǒng)上顯示STEAP-1染色的CTC，并對(duì)指示STEAP-1表達(dá)水平的 抗STEAP-1抗體熒光強(qiáng)度進(jìn)一步定量。還依照與實(shí)施例2中的描述相同的方法計(jì)算Η得分。
[0157] 如3(a)_(b)中顯示的，綿羊多克隆抗體在測(cè)試的所有3種細(xì)胞系上檢測(cè)出 STEAP-1表達(dá)，而且具有較好的動(dòng)態(tài)范圍。如通過(guò)綿羊多克隆抗體檢測(cè)的，摻混有293LB50 細(xì)胞的樣品中超過(guò)60 %的CTC具有高強(qiáng)度水平，而且Η得分測(cè)定為200以上；摻混有 LnCAPner細(xì)胞的樣品具有約100的Η得分；而摻混有PC3細(xì)胞的樣品具有100以下的Η得 分。
[0158] 實(shí)施例4 :在CellSearch?系統(tǒng)上使用抗STEAP-1抗體檢測(cè)前列腺癌患者的CTC 中的STEAP-1表達(dá)
[0159] 來(lái)自11名前列腺癌患者的血液樣品是自一家診所獲得的。在CellSearch?系 統(tǒng)上使用抗STEAP-1綿羊多克隆抗體分析血液樣品。將綿羊多克隆抗體在PBS中稀釋至 1:50,并添加至CellSearch上的第4濾器中的血液樣品。在CellSearch上運(yùn)行樣品，并在 CellTracks分析儀上對(duì)CTC打分。細(xì)胞角蛋白和DAPI染色呈陽(yáng)性但⑶45呈陰性的細(xì)胞確 定為CTC。選擇在CellSearch自動(dòng)制備系統(tǒng)上顯示STEAP-1染色的CTC，并對(duì)指示STEAP-1 表達(dá)水平的抗STEAP-1抗體熒光強(qiáng)度進(jìn)一步定量。對(duì)于每份樣品對(duì)CTC數(shù)計(jì)數(shù)，并還如實(shí) 施例2所述計(jì)算Η得分。結(jié)果顯示于圖4。
[0160] 實(shí)施例5 :關(guān)聯(lián)CTC測(cè)定法與免疫組織化學(xué)（IHC)測(cè)定法
[0161] 在一項(xiàng)I期臨床試驗(yàn)中自10名前列腺癌患者收集了血液樣品和腫瘤組織樣品。
[0162] 在CellSearch'?,系統(tǒng)上使用抗STEAP-1綿羊多克隆抗體分析血液樣品。對(duì)于每份 樣品對(duì)CTC數(shù)計(jì)數(shù)，并還如實(shí)施例2所述計(jì)算Η得分。結(jié)果顯示于圖5 (a)。
[0163] 使用常規(guī)IHC方法測(cè)試腫瘤組織樣品，并以總體得分（1+，2+和3+)顯示組織中 STEAP-1的表達(dá)水平。數(shù)字越大指示STEAP-1表達(dá)水平越高。
[0164] 圖5(b)-(c)中顯示并比較CellSearch?結(jié)果和IHC結(jié)果。CellSearch?結(jié)果顯 示較好的與IHC結(jié)果的關(guān)聯(lián)，指示使用綿羊多克隆抗體的CellSearch?方法有效檢測(cè)血液 樣品中的STEAP-1表達(dá)CTC。
[0165] 實(shí)施例6 :比較綿羊多克隆抗體與小鼠單克隆抗體15A5
[0166] 在CellSearch?系統(tǒng)上使用摻混測(cè)定法測(cè)試小鼠單克隆抗體15A5,并與綿羊多 克隆抗體比較。如實(shí)施例2所述，分別將293LB50細(xì)胞（高表達(dá)者），LnCAPner細(xì)胞（中等 表達(dá)者），和PC3細(xì)胞（低表達(dá)者）摻混入血液樣品。在CellSearch?系統(tǒng)上分別使用綿 羊多克隆抗體和小鼠單克隆抗體15A5分析血液樣品。還計(jì)算Η得分。規(guī)程和方法與實(shí)施 例2中的描述相似。
[0167] 如圖6(a)_(d)中顯示的，兩種抗體對(duì)每份樣品在強(qiáng)度水平方面和在Η得分方面顯 示相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。小鼠單克隆抗體15Α5在該測(cè)定法中也顯示較好的動(dòng)態(tài)范圍。
[0168] 使用單克隆抗體15Α5相對(duì)于多克隆抗體有優(yōu)勢(shì)。例如，與多克隆抗體相比，單克 隆抗體會(huì)顯示較小的批間變異，較小的背景，和更大的實(shí)驗(yàn)間再現(xiàn)性。
[0169] 實(shí)施例7 :在CellSearch?系統(tǒng)上使用小鼠單克隆抗體15Α5分析患者樣品中的 STEAP-1表達(dá)細(xì)胞
[0170] 自前列腺癌患者收集血液樣品，并在CellSearch?系統(tǒng)上使用抗STEAP-1單克 隆抗體15A5進(jìn)行分析。將抗體15A5在PBS中稀釋至例如1:50,并添加至血液樣品。在 CellSearch上運(yùn)行樣品，并在CellTracks分析儀上對(duì)CTC打分。細(xì)胞角蛋白和DAPI染色 呈陽(yáng)性但⑶45呈陰性的細(xì)胞確定為CTC。選擇在CellSearch自動(dòng)制備系統(tǒng)上顯示STEAP-1 染色的CTC，并對(duì)代表STEAP-1表達(dá)水平的抗STEAP-1抗體熒光強(qiáng)度進(jìn)一步定量。對(duì)于每份 樣品對(duì)CTC數(shù)計(jì)數(shù)，并還如實(shí)施例2所述計(jì)算Η得分。
[0171] 此外，關(guān)聯(lián)在臨床試驗(yàn)中自"基線(xiàn)"（即治療前）患者收集的血液樣品中的CTC上 的STEAP-1表達(dá)水平與臨床終點(diǎn)（諸如無(wú)進(jìn)展存活，PSA變化，患者報(bào)告的骨痛，總體存活， 或其它）以確定某個(gè)閾值以上的前列腺特異性標(biāo)志物表達(dá)是否指示前列腺癌療法（例如基 于抗STEAP-1抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC)的療法）的臨床活性。關(guān)聯(lián)癌細(xì)胞中前列腺特異性 標(biāo)志物（例如STEAP-1)表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化（即治療后樣品中的下調(diào)）與臨床結(jié)局度量 以確定此類(lèi)變化是否指示治療活性?？墒褂么祟?lèi)方法作為檢驗(yàn)該測(cè)定法作為可用于為前列 腺癌療法（例如基于抗STEAP-1ADC的療法）選擇患者的候選預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物中的第一 步，接著是確認(rèn)性III期研究中的前瞻性驗(yàn)證。
[0172] 實(shí)施例8 :枚舉患者樣品中的CTC
[0173] 在啟動(dòng)療法之前自前列腺癌患者采集血液樣品的兩份重復(fù)樣品（基線(xiàn)樣品）。如 上所述，在CellSearch?系統(tǒng)上分析樣品，并在CellTracks分析儀上對(duì)CTC枚舉打分。簡(jiǎn) 言之，細(xì)胞角蛋白和DAPI染色呈陽(yáng)性但⑶45呈陰性的細(xì)胞打分為CTC。為每對(duì)重復(fù)樣品計(jì) 算均值CTC計(jì)數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)偏差，并在柱狀圖中繪制誤差（+-標(biāo)準(zhǔn)偏差）。如圖7A中顯示的，這 些患者中的均值CTC枚舉有較大的動(dòng)態(tài)范圍，樣品的重復(fù)樣品之間有緊密的計(jì)數(shù)（小誤差 棒），證明使用這種系統(tǒng)時(shí)CTC枚舉的高再現(xiàn)性。
[0174] 在啟動(dòng)療法之前自前列腺癌患者采集血液樣品的兩份重復(fù)樣品（基線(xiàn)樣品）。在 CellSearch?系統(tǒng)上在A488通道中以20ug/ml使用抗STEAP-1單克隆抗體15A5分析樣 品。如實(shí)施例2所述在CellTracks分析儀上對(duì)CTC枚舉和STEAP-1表達(dá)打分。簡(jiǎn)言之，選 擇在CellSearch自動(dòng)制備系統(tǒng)上顯示STEAP-1染色的CTC，并使用加權(quán)強(qiáng)度打分系統(tǒng)（H 得分，見(jiàn)實(shí)施例2)對(duì)抗STEAP-1抗體熒光強(qiáng)度進(jìn)一步定量。為每對(duì)重復(fù)樣品計(jì)算均值Η得 分和標(biāo)準(zhǔn)偏差，并繪制誤差（+-標(biāo)準(zhǔn)偏差）。如圖7Β中顯不的，患者群體中的STEAP-1表 達(dá)水平有較大的動(dòng)態(tài)范圍，而且進(jìn)一步指不樣品的重復(fù)樣品之間緊密的Η得分，證明使用 CellSearch系統(tǒng)時(shí)靶物表達(dá)水平定量的高再現(xiàn)性。
[0175] 在啟動(dòng)療法之前相隔約2-4周在2個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)自前列腺癌患者采集血液樣品 (基線(xiàn)1和基線(xiàn)2)。如上所述，在CellSearch?系統(tǒng)上分析血液樣品，并在CellTracks分 析儀上對(duì)CTC枚舉打分。為了評(píng)估CTC枚舉的生物學(xué)變異性，在每名患者的2份基線(xiàn)樣品 之間比較CTC計(jì)數(shù)。
[0176] 在圖8中，每個(gè)點(diǎn)代表1名患者，基線(xiàn)1時(shí)計(jì)數(shù)的CTC在X軸上，而基線(xiàn)2時(shí)計(jì)數(shù) 的CTC在Y軸上。圖包括來(lái)自14名患者的數(shù)據(jù)，而且顯示不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)采集的CTC枚舉之 間的強(qiáng)關(guān)聯(lián)，提示啟動(dòng)治療之前CTC枚舉的低生物學(xué)變異性。使用這些數(shù)據(jù)計(jì)算CTC計(jì)數(shù) 的正常變異性，作為治療前CTC計(jì)數(shù)分布的95%置信區(qū)間來(lái)計(jì)算。
[0177] 使用置信區(qū)間確定在治療期間觀(guān)察到的CTC變化的顯著性。使用超出計(jì)算置信 區(qū)間的CTC計(jì)數(shù)減少評(píng)估劑量效應(yīng)和藥物活性證據(jù)。在抗STEAP-1ADC療法服藥前和抗 STEAP-1ADC療法服藥后的2個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)自前列腺癌患者采集血液樣品。如上所述，在 CellSearch?系統(tǒng)上分析樣品，并在CellTracks分析儀上對(duì)CTC枚舉和STEAP-1表達(dá)打 分。如圖9-11中顯示的，同樣基于服藥后和服藥前CTC的倍數(shù)變化在最高劑量觀(guān)察到顯著 的CTC計(jì)數(shù)減少，即有利的CTC預(yù)后轉(zhuǎn)變。而且，在治療后具有顯著CTC減少的患者中觀(guān)察 到更高的STEAP-1靶物表達(dá)（數(shù)據(jù)未顯示）。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于在測(cè)試受試者中診斷前列腺癌的方法，其包括： a) 使上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中該癌細(xì)胞 來(lái)自取自測(cè)試受試者的血液樣品；并 b) 測(cè)定任何癌細(xì)胞是否表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物， 其中存在表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞指示測(cè)試受試者中具有前列腺癌。
2. 權(quán)利要求1的方法，其進(jìn)一步包括測(cè)定表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量，其 中此類(lèi)量指示測(cè)試受試者中的前列腺癌的階段。
3. 權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括測(cè)定癌細(xì)胞上前列腺特異性標(biāo)志物的表 達(dá)水平。
4. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括基于癌細(xì)胞的前列腺特異性標(biāo)志物表達(dá) 水平對(duì)癌細(xì)胞分等級(jí)，并測(cè)定每個(gè)等級(jí)中的癌細(xì)胞的百分比。
5. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括通過(guò)將所述等級(jí)中的癌細(xì)胞的百分比乘 以代表所述等級(jí)中前列腺特異性標(biāo)志物表達(dá)水平的獨(dú)特等級(jí)數(shù)為每個(gè)等級(jí)計(jì)算等級(jí)得分， 并將所有等級(jí)得分加和以獲得Η得分，其中Η得分指示測(cè)試受試者中的前列腺癌的階段。
6. 權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的方法，其中該癌細(xì)胞是用包含配體的捕捉組合物自血液樣品 鑒定的，該配體特異性結(jié)合上皮起源的癌細(xì)胞。
7. 權(quán)利要求6的方法，其中該配體為特異性結(jié)合優(yōu)先在癌細(xì)胞上表達(dá)的上皮抗原的抗 體。
8. 權(quán)利要求7的方法，其中該上皮抗原為上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM)。
9. 權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)的方法，其中在自血液樣品分離的細(xì)胞級(jí)分中富集鑒定的癌細(xì) 胞。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中該細(xì)胞級(jí)分是在磁場(chǎng)下分離的。
11. 權(quán)利要求10的方法，其中該捕捉組合物中的配體是與磁性顆粒（例如膠狀磁性顆 粒，例如膠狀磁性納米顆粒）偶聯(lián)的。
12. 權(quán)利要求11的方法，其中該配體包含EpCAM抗體。
13. 權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的方法，其中該前列腺特異性標(biāo)志物選自下組：六次跨膜前 列腺上皮抗原（STEAP)，前列腺特異性膜抗原（PSMA)，前列腺癌腫瘤抗原（PCTA-1)，和前列 腺干細(xì)胞抗原（PSCA)。
14. 權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的方法，其中該特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體包含 抗STEAP-1抗體。
15. 權(quán)利要求14的方法，其中該抗STEAP-1抗體以彡ΙΟΟΟηΜ的KD結(jié)合STEAP-1。
16. 權(quán)利要求14-15任一項(xiàng)的方法，其中該抗STEAP-1抗體為多克隆抗體或單克隆抗 體。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中該抗STEAP-1抗體為鼠單克隆抗體。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中該抗STEAP-1抗體為15A5,15A5是由具有微生物保藏號(hào) PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞生成的。
19. 權(quán)利要求14-18任一項(xiàng)的方法，其中該抗STEAP-1抗體是與第一可檢測(cè)標(biāo)記物綴合 的。
20. 權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)的方法，其中該癌細(xì)胞是用一種或多種容許檢測(cè)上皮起源的 癌細(xì)胞的試劑鑒足的。
21. 權(quán)利要求20的方法，其中該試劑包含特異性結(jié)合細(xì)胞角蛋白的配體，且其中該配 體任選是與第二可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的。
22. 權(quán)利要求20-21任一項(xiàng)的方法，其中該試劑進(jìn)一步包含區(qū)分細(xì)胞與非細(xì)胞成分的 染料。
23. 權(quán)利要求22的方法，其中該染料為4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI)。
24. 權(quán)利要求20-23任一項(xiàng)的方法，其中該試劑進(jìn)一步包含特異性結(jié)合白細(xì)胞標(biāo)志物 的配體，且其中該配體任選是與第三可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的。
25. 權(quán)利要求24的方法，其中該針對(duì)白細(xì)胞標(biāo)志物的配體為CD45抗體。
26. 權(quán)利要求1-25任一項(xiàng)的方法，其中該測(cè)定是通過(guò)基于免疫熒光顯微術(shù)，流式細(xì)胞 術(shù)，纖維光學(xué)掃描細(xì)胞術(shù)，或激光掃描細(xì)胞術(shù)的方法進(jìn)行的。
27. -種在測(cè)試受試者中預(yù)測(cè)前列腺癌療法的功效的方法，其包括： a) 使上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中該癌細(xì)胞 來(lái)自取自測(cè)試受試者的血液樣品；并 b) 測(cè)定任何癌細(xì)胞是否表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物， 其中存在表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞指示測(cè)試受試者中前列腺癌療法的功效。
28. -種在測(cè)試受試者中監(jiān)測(cè)對(duì)前列腺癌療法的響應(yīng)的方法，其包括： a) 使第一組上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中該 第一組癌細(xì)胞來(lái)自取自測(cè)試受試者的第一血液樣品； b) 測(cè)定第一組中表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量和/或癌細(xì)胞中前列腺特異 性標(biāo)志物的表達(dá)水平； c) 使第二組上皮起源的癌細(xì)胞與特異性結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志物的抗體接觸，其中該 第二組癌細(xì)胞來(lái)自在前列腺癌療法的測(cè)試時(shí)段之后取自測(cè)試受試者的第二血液樣品； d) 測(cè)定第二組中表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量和/或癌細(xì)胞中前列腺特異 性標(biāo)志物的表達(dá)水平；并 e) 將b)中測(cè)定得到的表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量和/或前列腺特異性標(biāo) 志物的表達(dá)水平與d)中的比較，其中表達(dá)前列腺特異性標(biāo)志物的癌細(xì)胞的量減少和/或癌 細(xì)胞中前列腺特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平降低指示測(cè)試受試者中對(duì)前列腺癌療法的響應(yīng)。
29. 權(quán)利要求27-28任一項(xiàng)的方法，其中該前列腺癌療法包含結(jié)合前列腺特異性標(biāo)志 物的抗體或抗體-藥物綴合物（ADC)。
30. 權(quán)利要求29的方法，其中該前列腺特異性標(biāo)志物為STEAP-1。
31. 權(quán)利要求27-30任一項(xiàng)的方法，其中該ADC包含共價(jià)附著至細(xì)胞毒劑的抗STEAP-1 抗體。
32. 權(quán)利要求31的方法，其中該細(xì)胞毒劑選自：毒素，化療劑，藥物模塊，單甲基 auristatin E(MMAE)，抗生素，放射性同位素，和溶核酶。
33. -種抗體，其結(jié)合與抗體15A5結(jié)合的表位基本上相同的表位，其中抗體15A5是由 具有微生物保藏號(hào)PTA-12259的雜交瘤細(xì)胞生成的。
34. 權(quán)利要求33的抗體，其包含抗體15A5的至少一個(gè)⑶R區(qū)。
35. 權(quán)利要求34的抗體，其包含抗體15A5的六個(gè)⑶R區(qū)。
36. 權(quán)利要求33-35任一項(xiàng)的抗體，其包含抗體15A5的重鏈可變區(qū)。
37. 權(quán)利要求33-36任一項(xiàng)的抗體，其包含抗體15A5的輕鏈可變區(qū)。
38. 權(quán)利要求33-37任一項(xiàng)的抗體，其為抗體15A5或其抗原結(jié)合片段。
39. 權(quán)利要求33-38任一項(xiàng)的抗體，其進(jìn)一步與可檢測(cè)標(biāo)記物綴合。
40. -種分離的多核苷酸，其編碼權(quán)利要求33-39任一項(xiàng)的抗體。
41. 一種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求40的多核苷酸。
42. -種雜交瘤細(xì)胞系，其具有微生物保藏號(hào)PTA-12259。
43. 權(quán)利要求33-39任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合片段在制備用于前列腺癌的診斷劑中 的用途。
44. 一種用于檢測(cè)血液樣品中表達(dá)STEAP-1的前列腺癌細(xì)胞的存在情況的測(cè)試試劑 盒，其包含特異性結(jié)合STEAP-1的抗體。
45. 權(quán)利要求44的測(cè)試試劑盒，其中該抗體是與可檢測(cè)標(biāo)記物綴合的。
46. 權(quán)利要求44或45的測(cè)試試劑盒，其中該抗體為權(quán)利要求33-39任一項(xiàng)的抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/574GK104067127SQ201280067510
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2012年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月29日
【發(fā)明者】S.阿特瓦爾, J-a.杭戈, M.萊克納, E.普恩諾茲, B.魯賓菲爾德, R.維杰 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司