利用肌氨酸代謝產(chǎn)物中的甲醛或過氧化物的前列腺癌診斷試紙，其制造方法及利用其的 ...的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及前列腺癌的診斷試紙(test strip)及利用其的前列腺癌診斷方法，尤 其，特征在于提供，利用甲醒(formaldehyde)或過氧化物而診斷前列腺癌的試紙及利用其 的前列腺癌診斷方法，所述甲醒或過氧化物是由前列腺癌患者的小便中所包含的肌氨酸 (sarcosine)氧化而生成的。
【背景技術(shù)】
[0002] 根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)，前列腺癌作為男性發(fā)病率較高的癌種，僅次于肺 癌、胃癌、肝癌、大腸癌、食道癌排在第六位，在美國，每年約有18萬6千人患病，其中約有2萬 9千名死亡的男性中前列腺癌是最普遍的癌癥之一，但此疾病的進(jìn)展追查較難。典型的診斷 根據(jù)血液檢查和隨后的活檢(b iopsy )，所述血液檢查找出血液中的被稱作前列腺特異抗體 (PSA:P;rostate Specific Antigen)的特定蛋白質(zhì)。
[0003] 但是現(xiàn)有的前列腺特異抗體的數(shù)值在前列腺癌中常常升高，但是運(yùn)并不能直接表 示腫瘤的存在，抗體的數(shù)值高并不意味著其惡性程度高。此外，健康的男性血液中也存在微 量的前列腺特異抗體，因此通過前列腺特異抗體檢查來診斷前列腺癌的可信度降低。
[0004] 最近美國密歇根大學(xué)醫(yī)科大學(xué)的阿魯爾"奇納伊安(Arul化山11日17日11)博±在自 然(nature)中表示，根據(jù)由前列腺癌細(xì)胞所產(chǎn)生的代謝物質(zhì)肌氨酸在小便中檢測(cè)出的量， 從而能夠判斷前列腺癌和其是否有向其他器官轉(zhuǎn)移的傾向性。
[0005] 研究員在尿液中確認(rèn)了在早期、進(jìn)行性、轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者的小便中探知前列 腺癌并區(qū)分此疾病的陽性及侵害性形態(tài)時(shí)所使用的化合物。此外發(fā)表，氨基乙酸(amino acid glyCine)的甲基(methylation)化的形態(tài)的肌氨酸的濃度在前列腺癌患者的尿液中， 尤其當(dāng)癌細(xì)胞有向其他器官擴(kuò)散的傾向更高時(shí)，肌氨酸的濃度表現(xiàn)更高，在現(xiàn)有前列腺癌 診斷時(shí)，與用作現(xiàn)有診斷指標(biāo)的前列腺特異抗體相比，肌氨酸的數(shù)值更為準(zhǔn)確。
[0006] 利用其來開發(fā)出檢測(cè)小便內(nèi)的肌氨酸的方法，從而用作前列腺癌的診斷指標(biāo)的各 種嘗試正在進(jìn)行。
[0007] 現(xiàn)有的方法主要使用高效液相色譜法（腫LC，High Performance Liquid C h r ο m a t ο g r a p h y )和對(duì)小便標(biāo)本進(jìn)行肌氨酸氧化酶處理后使用分光光度計(jì) (spectrophotometer)的方法。兩種方法雖然都能夠達(dá)到定量，但是具有?？诩夹g(shù)的特別實(shí) 驗(yàn)者需要使用高價(jià)的裝置，并且需要經(jīng)過將試料進(jìn)行多個(gè)步驟處理的復(fù)雜的過程，因此問 題在于，使用中帶來制約。
[000引現(xiàn)有的關(guān)于前列腺癌診斷工具及其方法的先行技術(shù)提出如下幾種。
[0009] 2010年6月2 日柏林夏洛蒂醫(yī)科大學(xué)（Qiarite Universitatsmedizin Berlin)在 日本申請(qǐng)的日本公開專利(2012-529021)中所記載的發(fā)明是診斷前列腺癌或其因子的活體 外(ex vivo)的方法，并且所述方法包括如下步驟:測(cè)定疑似患有前列腺癌或疑似攜帶其因 子(dispoSition)的被實(shí)驗(yàn)體的試驗(yàn)樣品（samp 1 e)的至少一個(gè)代謝物質(zhì)；W及將所述至少 一個(gè)代謝物質(zhì)通過其診斷前列腺癌或其因子。所述先行專利包括:代謝物質(zhì)的收集、包括代 謝物質(zhì)特性值的數(shù)據(jù)收集、W及包括所述數(shù)據(jù)收集的膽存媒介。此外，所述先行專利也提供 一種系統(tǒng)，所述系統(tǒng)與數(shù)據(jù)膽存媒介W能夠運(yùn)轉(zhuǎn)的形態(tài)連接，并且對(duì)樣品的代謝物質(zhì)的特 性值進(jìn)行比較。此外，包括:包括至少一個(gè)代謝物質(zhì)的診斷工具；W及用于制造診斷前列腺 癌的診斷工具的代謝物質(zhì)的使用。
[0010] 所述先行發(fā)明設(shè)及對(duì)前列腺癌相關(guān)的代謝物質(zhì)進(jìn)行分類的方法，并且為了診斷前 列腺癌，記載有測(cè)定肌氨酸含量的觀點(diǎn)。
[0011] 所述先行發(fā)明為了測(cè)定小便的肌氨酸含量，而利用已經(jīng)公知的方法，換句話說，為 了測(cè)定小便的肌氨酸的直接含量，而利用液相色譜化C，1 iquid C虹omatography)質(zhì)量分析 法及/或氣相色譜(GC，gas C虹omatogra地y)質(zhì)量分析法。
[0012] 與此相反，本發(fā)明的差別在于，提供利用作為肌氨酸代謝產(chǎn)物的甲醒的前列腺癌 診斷試紙及利用其的前列腺癌診斷方法。
[0013] 此外，1989年8月9日勃林格曼哈因蓋尹貝合在韓國申請(qǐng)并登記的"通過酶促氧化 (enz;ymatic oxidation)的標(biāo)本的比色測(cè)定方法及試濟(jì)Γ (登記號(hào)：1992-0001449)的相關(guān)發(fā) 明設(shè)及通過標(biāo)本的酶促氧化的標(biāo)本的比色測(cè)定方法，所述測(cè)定方法是，作為在電子受體的 存在下通過標(biāo)本的酶促氧化的標(biāo)本的比色測(cè)定及對(duì)標(biāo)本的量的測(cè)定值，通過顏色形成而測(cè) 定還原的電子受體的方法，其特征在于，在具有作為直接電子受體的+ 1和-1之間的氧化態(tài) 的氮的化合物的群組中選擇的物質(zhì)的存在下，通過適當(dāng)?shù)难趸€原酶標(biāo)本得到氧化。
[0014] 所述先行發(fā)明因?yàn)槔闷咸烟茄趸€原酶，所W不同于利用肌氨酸氧化酶的本發(fā) 明，為了測(cè)定標(biāo)本量，記載有比色測(cè)定方法，但是于本發(fā)明的根本區(qū)別在于，不使用肌氨酸 代謝物質(zhì)。
[001引此外，2006年9月舊貝斯W色列戴克尼斯醫(yī)療中屯、在韓國申請(qǐng)的吁痛前癥(pre? eclampsia) 或子痛的診斷及治療方法 "（[0016]所述先行發(fā)明記載有為了診斷子痛前癥或子痛而檢測(cè)試料中的VEGF或PIGF濃度 的構(gòu)成，相反地，本發(fā)明為了檢測(cè)用于前列腺癌診斷的肌氨酸含量而利用肌氨酸氧化酶，從 而在運(yùn)一點(diǎn)上構(gòu)成不同，并且為了疾病的診斷而利用比色試紙法的角度雖然有一部分相 似，但不同點(diǎn)是，本發(fā)明利用對(duì)通過肌氨酸氧化而生成的甲醒進(jìn)行檢測(cè)的比色試紙法。 [0017] 此外，2008年8月15日密他伯頓公司（Metaboton，Inc)申請(qǐng)的"前列腺癌的代謝性 能分析(profiling)法"（日本公開專利2010-537170)的相關(guān)發(fā)明，設(shè)及癌癥指標(biāo)(marker)， 尤其，提供異常存在于前列腺癌中的代謝產(chǎn)物，并且提供W對(duì)癌特異的代謝產(chǎn)物為標(biāo)的的 診斷、研究及治療用途。
[0018]所述先行發(fā)明為了診斷前列腺癌而記載有測(cè)定肌氨酸含量運(yùn)一點(diǎn)上雖部分類似， 但是為了測(cè)定肌氨酸含量而利用肌氨酸氧化酶的內(nèi)容并沒有記載，此點(diǎn)與本發(fā)明不同，并 且為了測(cè)定小便的肌氨酸含量而利用GC-MS(氣相色譜/質(zhì)量分析法，gas C虹omatogra地y/ Mass Spectrometer)及UHPLC-MS(超高效液相色譜-質(zhì)譜法），與此相反，本發(fā)明為了檢測(cè)甲 醒而使用比色試紙法，所述甲醒通過肌氨酸氧化而生成。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0019] 由此，本發(fā)明為了解決如上所述的現(xiàn)有諸多問題而提出，本發(fā)明的目的在于提供 一種試紙及其方法，就所述試紙而言，在對(duì)小便中的肌氨酸進(jìn)行定性、定量時(shí)，如現(xiàn)有的尿 液檢查試紙一樣，將檢查試紙與標(biāo)本小便進(jìn)行反應(yīng)，從而能夠通過肉眼對(duì)顏色變化進(jìn)行確 認(rèn)，由此即使沒有?？诘娜肆案邇r(jià)的裝置也能進(jìn)行前列腺癌診斷。
[0020] 為了達(dá)成所述目的，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)思想的利用作為肌氨酸代謝產(chǎn)物的甲醒的 前列腺癌診斷試紙、其制造方法及利用其的前列腺癌診斷方法提供一種前列腺癌診斷試 紙，其包括:生成肌氨酸代謝產(chǎn)物的肌氨酸氧化酶(Sarcosine Oxidase) 及與肌氨酸被 氧化而生成的甲醒進(jìn)行反應(yīng)而執(zhí)行色原體功能的4-氨基-3-阱基-5-琉基-1,2，4-Ξ挫 (AHMT：4-Amin〇-3-hydrazin〇-5-mercapt〇-l,2,4-triazole)〇
[0021 ]此外，提供一種前列腺癌診斷試紙，其包括:生成肌氨酸代謝產(chǎn)物的肌氨酸氧化酶 (Sarcosine Oxidase); W及與肌氨酸被氧化而生成的甲醒進(jìn)行反應(yīng)而執(zhí)行色原體功能的 N-甲基苯并嚷挫嘟酬-2-腺(MBTH:N-methy 化enzothiazolinone-2-hy化azone)。
[0022] 此外，提供一種前列腺癌診斷試紙制造方法，就前列腺癌診斷試紙制造方法而言， 生成肌氨酸代謝產(chǎn)物的肌氨酸氧化酶、保持強(qiáng)堿性的緩沖液、與肌氨酸被氧化而生成的甲 醒進(jìn)行反應(yīng)從而執(zhí)行色原體功能的AHMT溶解物中浸潰纖維素試紙后，進(jìn)行干燥而制造。
[0023] 此外，提供一種前列腺癌診斷試紙的制造方法，就前列腺癌診斷試紙的制造方法 而言，生成肌氨酸代謝產(chǎn)物的肌氨酸氧化酶、保持強(qiáng)堿性的緩沖液、與肌氨酸被氧化而生成 的甲醒進(jìn)行反應(yīng)從而執(zhí)行色原體功能的MBTH溶解物中浸潰纖維素試紙后，進(jìn)行干燥而制 造。
[0024] 此外，優(yōu)選地，進(jìn)一步包括使得添加試劑能夠得到固定的水溶性聚合物固定體。