質(zhì)進(jìn)行分離測定，堿降解待測樣品的制備 如下： 取依折麥布適量，置量瓶中，加0.0 lmol/L乙醇制氫氧化鈉溶液IOml使溶解，密塞，于 55°C加熱15分鐘，取出，立即加0. lmol/L鹽酸溶液2ml，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)溶解，配制成每1ml含依折麥布200 μ g的供試品溶液，取30 μ 1注入高效液相 色譜儀，按照上述的色譜條件完成依折麥布堿降解雜質(zhì)的測定。
[0022] 表1梯度洗脫溶液A與有機(jī)溶劑B的體積
本發(fā)明的有益效果在于：（I)本發(fā)明的一種高效液相色譜法分離測定依折麥布及有關(guān) 物質(zhì)的方法，該方法對上述的6種有關(guān)物質(zhì)均能適用，可以同時(shí)對其中的一種或多種有關(guān) 物質(zhì)進(jìn)行分離檢測，與現(xiàn)有技術(shù)相比，提高了分離檢測的效率；（2)利用本發(fā)明的方法檢測 依折麥布堿降解雜質(zhì)，能更準(zhǔn)確、更有效地將有關(guān)物質(zhì)6和其他降解雜質(zhì)有效分離開，進(jìn)口 注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20070201)方法卻不能分離有關(guān)物質(zhì)6和其他降解雜質(zhì)。
[0023] 因此本發(fā)明的方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，從而能更精準(zhǔn)的確保依折 麥布原料及其制劑的質(zhì)量可控，并最終確定產(chǎn)品的安全有效。
[0024]
【附圖說明】 圖1為實(shí)施例1和實(shí)施例2中系統(tǒng)適用性溶液的HPLC圖（圖中12. 910出峰為依折麥 布）； 圖2為實(shí)施例1中測定依折麥布有關(guān)物質(zhì)HPLC圖（圖中12. 704出峰為依折麥布）； 圖3為實(shí)施例2中測定依折麥布片有關(guān)物質(zhì)HPLC圖（圖中12. 717出峰為依折麥布）； 圖4為對比例1中系統(tǒng)適用性溶液HPLC圖（圖中30. 443出峰為依折麥布）； 圖5為對比例1中有關(guān)物質(zhì)3和有關(guān)物質(zhì)4混合溶液HPLC圖； 圖6為實(shí)施例3中采用本發(fā)明方法測定依折麥布堿降解溶液HPLC圖（圖中13. 365出 峰為依折麥布）； 圖7為對比實(shí)施例2中采用進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)方法測定依折麥布堿降解溶液HPLC圖（圖中 27.981出峰為依折麥布）； 圖8為對比實(shí)施例2中采用本發(fā)明方法測定堿降解溶液中RRTL 52峰的收集液HPLC 圖； 圖9為對比實(shí)施例2中保留時(shí)間為17. 498min峰的[M+H]質(zhì)譜圖； 圖10為對比實(shí)施例2中保留時(shí)間為17. 498min峰的[M-Η]質(zhì)譜圖。
[0025]
【具體實(shí)施方式】 所舉實(shí)施例是為了更好地對本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行說明，但并不是本發(fā)明的內(nèi)容僅限于所 舉實(shí)施例。所以熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述
【發(fā)明內(nèi)容】
對實(shí)施方案進(jìn)行非本質(zhì)的改進(jìn)和 調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0026] 以下實(shí)施例中，本發(fā)明的方法中，采用的儀器及色譜條件如下： (1)高效液相色譜儀：Waters-2695-2487 (Waters); 檢測器：UV ; 色譜工作站：Empower。
[0027] (2)色譜柱：以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑，硅膠顆粒粒徑為5 μ m，色譜柱柱長 250mm，直徑為 4. 6mm。
[0028] (3)質(zhì)譜儀：API3000 ; 工作站：Analystl. 4. 2 ; 尚子源：ESI ;。
[0029] (4)流動(dòng)相 溶液A :0. 1%磷酸溶液、乙腈和甲醇按體積比48 :42 :10混合； 有機(jī)溶劑B :乙腈。
[0030] (5)檢測條件 流動(dòng)相：溶液A和有機(jī)溶劑B按照下表所示的體積比例進(jìn)行混合作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度 洗脫； 流動(dòng)相流速：1.0ml/min ; 柱溫箱溫度：30°C ; 洗脫后檢測器檢測波長：232nm ; 進(jìn)樣量：30 μ 1。
[0031] 實(shí)施例1依折麥布原料藥有關(guān)物質(zhì)的測定 取依折麥布、有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5、有關(guān)物質(zhì)6 對照品各適量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麥布 200 μ g，有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5和有關(guān)物質(zhì)6各2 μ g 的系統(tǒng)適用性溶液。
[0032] 取依折麥布對照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解并配制成每 Iml含0. 2 μ g的對照品溶液。
[0033] 取依折麥布原料藥適量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解，配制成 每1ml含依折麥布200 μ g的供試品溶液。
[0034] 分別取系統(tǒng)適用性溶液、對照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀，按上述色譜 條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1和圖2。按帶校正因子的對照品外標(biāo)法計(jì)算供試品 中各已知雜質(zhì)的含量，按對照品外標(biāo)法計(jì)算供試品中其他單個(gè)雜質(zhì)的含量，總雜質(zhì)為各已 知雜質(zhì)與其他單個(gè)雜質(zhì)之和。
[0035] 計(jì)算公式如下： 100 (C/ff) (FAt/As)； 式中：C為對照品洛液中依折麥布濃度，μ g/ml ; W為供試品溶液濃度，μ g/ml ; At為供試品溶液中各雜質(zhì)峰的峰面積； As為對照品洛液中依折麥布峰面積； F為各雜質(zhì)的校正因子。
[0036] 實(shí)施例2依折麥布制劑(依折麥布片）中有關(guān)物質(zhì)的測定 取依折麥布、有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5、有關(guān)物質(zhì)6 對照品各適量，用〇. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折麥布 200 μ g，有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5和有關(guān)物質(zhì)6各2 μ g 的系統(tǒng)適用性溶液。
[0037] 取依折麥布對照品，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)溶解并配制成每 Iml含0. 4 μ g的對照品溶液。
[0038] 取依折麥布片研細(xì)，取適量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10)超聲處理 30分鐘（隨時(shí)振搖)，配制成每1ml含依折麥布200 μ g的供試品溶液，分別取系統(tǒng)適用性溶 液、對照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，結(jié) 果見圖1和圖3。按帶校正因子的對照品外標(biāo)法計(jì)算供試品中各已知雜質(zhì)的含量，按對照品 外標(biāo)法計(jì)算供試品中其他單個(gè)雜質(zhì)的含量，總雜質(zhì)為各已知雜質(zhì)與其他單個(gè)雜質(zhì)之和。
[0039] 計(jì)算公式如下： 100 (C/ff) (FAt/As)； 式中：C為對照品洛液中依折麥布濃度，μ g/ml ; W為供試品溶液濃度，μ g/ml ; At為供試品溶液中各雜質(zhì)峰的峰面積； As為對照品洛液中依折麥布峰面積； F為各雜質(zhì)的校正因子。
[0040] 對比實(shí)施例1進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20070201)測定依折麥布有關(guān)物質(zhì) 進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20070201)測定依折麥布有關(guān)物質(zhì)的色譜條件為： 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠（Hypersil BDS C18)，柱長150mm，直徑4. 6mm，十八烷 基硅烷鍵合硅膠顆粒粒徑為5 μ m。
[0041] 流動(dòng)相：0. 05mol/L磷酸二氫鉀溶液、乙腈、四氫呋喃按照體積比65 :25 :10的比 例混合為流動(dòng)相。
[0042] 檢測波長：232nm ; 進(jìn)樣量：30μ 1 ; 檢測時(shí)間：主峰的2倍保留時(shí)間。
[0043] 取依折麥布、有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5、有關(guān)物 質(zhì)6對照品各適量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（48:42:10 )溶解，配制成每1ml含依折 麥布200 μ g，有關(guān)物質(zhì)1、有關(guān)物質(zhì)2、有關(guān)物質(zhì)3、有關(guān)物質(zhì)4、有關(guān)物質(zhì)5和有關(guān)物質(zhì)6各 2μ g的系統(tǒng)適用性溶液，取該溶液注入液相色譜儀，按進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（JX20070201)的色譜 條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖4。
[0044] 圖4和實(shí)施例1中圖1相比，檢出已知雜質(zhì)峰的個(gè)數(shù)為4個(gè)，有兩個(gè)已知雜質(zhì)有關(guān) 物質(zhì)3和有關(guān)物質(zhì)4未檢出。
[0045] 另外再取有關(guān)物質(zhì)3和有關(guān)物質(zhì)4對照品各適量，用0. 1%磷酸溶液-乙腈-甲醇 (48:42:10)溶解，配制成每1ml含有關(guān)物質(zhì)3和有關(guān)物質(zhì)4各20 μ g的