專利名稱：：用于腸道病癥和/或補(bǔ)水的口服制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及作為口服制劑組分的抗微生物劑的產(chǎn)生和用途，所述口服制劑用于預(yù)防和治療由微生物生物體或經(jīng)其他來源引起的腸道病癥。所述口服制劑可用于治療和/或預(yù)防多種腸疾病和病癥、用于控制腸病原體和用于給患有腹瀉的個體補(bǔ)水。
背景技術(shù)：
：五歲以下的兒童由于腹瀉病(diarrhealdisease)引起的發(fā)病率和死亡率仍是發(fā)展中國家以及發(fā)達(dá)世界的較低社會經(jīng)濟(jì)群體的主要健康挑戰(zhàn)，直到20世紀(jì)50年代，才確定腹瀉病是五歲以下兒童發(fā)病和死亡的主要原因。世界衛(wèi)生組織(WHO)報道在2000年約150，0000名5歲以下的兒童死于腹瀉病。在20世紀(jì)70年代初的研究中，WHO/UNICEF推薦使用葡萄糖基口服補(bǔ)水溶液(oralrehydrationsolution,ORS)(鹽/鈉、糖/碳水化物和水)的單一制劑來預(yù)防或治療各種原因或各個感染年齡組的腹瀉脫水。ORS的應(yīng)用拯救了全世界數(shù)百萬兒童的生命。今天，ORS被認(rèn)為是20世紀(jì)最重要的醫(yī)學(xué)進(jìn)展之一。其已經(jīng)成為用于治療患有腹瀉和并發(fā)脫水的兒童的基石。其在治療腹瀉相關(guān)的脫水中的使用已從1984年的少于病例的15%增加至1993年的40%。最初的ORS制劑是基于霍亂患者中大便鈉的水平，并且目的是用于治療脫水，而不是腹瀉。因此，盡管補(bǔ)水狀態(tài)得以保持，但腹瀉的持續(xù)時間沒有縮短。因此，對于ORS的理想組合物及其對各種形式的腹瀉的適合性的爭論很激烈，所述各種形式的腹瀉為霍亂性和非霍性，營養(yǎng)不良性和營養(yǎng)良好性，兒童和成年人的，及兒童和嬰兒的?？茖W(xué)研究繼續(xù)研發(fā)了具有如下主要特征的ORS的新制劑，其應(yīng)當(dāng)便宜、安全、有效、長期儲存穩(wěn)定，并且其具有抗腹瀉作用(量和持續(xù)時間降低)和補(bǔ)水作用。改良第一個方面之一是碳水化物(葡萄糖)的來源和形式。在許多培養(yǎng)物中，已經(jīng)使用米(rice)和米湯(ricewater)作為腹瀉的家用藥物(homeremedy)。在80年代初，首先試驗(yàn)了用米飯(boiledrice)、米粉末(ricepower)、米粉(riceflour)或糖漿(syrup傳代葡萄糖，結(jié)果引起霍亂患者的大便排出量和腹瀉持續(xù)時間減少。許多臨床和現(xiàn)場研究緊接著比較了米基ORS(rice-basedORS)與WHO推薦的葡萄糖基ORS，在所有的研究中，米基ORS顯示出大便排出量減少、腹瀉的持續(xù)時間縮短和對靜脈內(nèi)液體不定期的干擾(unscheduledinterventions)較少。在ORS中，對使用米及其它復(fù)合碳水化物作為葡萄糖替代品的臨床試驗(yàn)的薈萃分析(meta-analysis)表明，解釋復(fù)合碳水化物優(yōu)于葡萄糖的七種可能的因素l)底物利用率增加，2)葡萄糖聚合物對葡萄糖吸收的動力學(xué)優(yōu)點(diǎn)，3)小腸對葡萄糖單體和聚合物的不同處理，4)低滲透性，5)肽和氮基酸對溶質(zhì)結(jié)合的鈉吸收的單獨(dú)作用，6)米中的抗分泌部分，以及7)內(nèi)腔營養(yǎng)對粘膜修復(fù)和再生的增強(qiáng)。在1994年，WHO/lnternationalCentre聯(lián)合的DiarrheaDiseaseResearch,Bangladesh(ICDDR1B)ConsultativeMeeting在Dhaka舉行，評論了使用米基ORS的22個臨床試驗(yàn)結(jié)果。盡管米基ORS對患有霍亂的成年人和兒童較好，但其對患有急性非霍亂性腹瀉的兒童不好。而且，該組織得出結(jié)論米基物質(zhì)的花費(fèi)增加不足以證明改變WHO推薦的制劑是正當(dāng)?shù)??；诟篂a持續(xù)時間的減少需要較短的治療和使用更少的ORS，已經(jīng)對此花費(fèi)結(jié)論進(jìn)行了努力，因而使得花費(fèi)相同等。還指出某些發(fā)展中國家沒有備用的葡萄糖供應(yīng)品。米基ORS的改善作用及其降低的滲透性引起對具有滲透性降低的新的葡萄糖基制劑的研究。使用鈉和葡萄糖濃度的幾種變化來試驗(yàn)滲透性降低的ORS。在對2,397名患者參與的15次隨機(jī)試驗(yàn)的觀察中，與標(biāo)準(zhǔn)WHO制劑相比，滲透性降低的補(bǔ)水溶液與需要不定期的靜脈內(nèi)輸注降低、大便量減少和嘔吐減少有關(guān)。在2001年，口服補(bǔ)水溶液制劑的專家研討會在紐約舉行，該研討會評論了比較WHO/UNICEF推薦的單一葡萄糖基制劑與含有更少鈉和葡萄糖的滲透性降低的制劑的數(shù)據(jù)。在該會議后，WHO/UNICEF由推薦單一制劑改變?yōu)橥扑]低滲透性的制劑。腹瀉可以由暫時性問題如感染或慢性問題如腸疾病引起。腹瀉病可以分為滲透性(由于在腸腔存在的滲透負(fù)載量的增加，或者過量攝入或吸收減少)、炎性或粘膜性(當(dāng)腸的粘膜內(nèi)壁發(fā)炎時)、分泌性(當(dāng)分泌活動出現(xiàn)增加時)和運(yùn)動性(由腸道運(yùn)動性病癥引起)。腹瀉的一些更常見的原因?yàn)?1)細(xì)菌感染。通過污染的食物或水消耗的幾種類型的細(xì)菌可以引起腹瀉。常見的細(xì)菌包括梭菌屬(a^^Www)、彎曲桿菌屬(C"w/^/o&cfer)、沙門氏菌屬(Sa/附。"e〃a)、志賀氏菌屬(5Tz/ge〃力禾口大腸桿菌(^sc/zen'c/n'"co")。(2)病毒感染，許多病毒引起腹瀉，包括輪狀病毒、諾瓦克病毒(Norwalkvirus)、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒(herpessimplexvirus)和病毒性肝炎病毒。(3)食物過敏反應(yīng)(intolerances)。某些人不能消化某些食物成分，比如乳糖，在奶中發(fā)現(xiàn)的糖。(4)寄生蟲,寄生蟲可以通過食品或水進(jìn)入身體，并定居在消化系統(tǒng)中。引起腹瀉的寄生蟲包括藍(lán)氏賈第蟲(G^W/a/amW&)、溶組織內(nèi)阿米巴A&to/少".ca)禾口隱孢子蟲(Cryptosporidium)。(5)藥物反應(yīng)，所述藥物比如抗生素、血壓藥和含有鎂的抗酸劑。(6)腸疾病，如炎癥性腸病(inflammatoryboweldisease,IBD)或乳糜瀉(celiacdisease)。(7)功能性腸病，比如腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome),其中腸不能正常工作。艱難梭菌(C/o^^wm4^cz7e)是一種格蘭氏陽性的、產(chǎn)芽胞的厭氧生物體，其是引起醫(yī)院性(g卩，醫(yī)院獲得性)腹瀉的主要原因之一。最初在健康新生兒的糞便菌群中鑒定了該生物體。該生物體建群在至多50%的健康嬰兒中，但很少在正常非住院成年人中發(fā)現(xiàn)。直到20世紀(jì)70年代，在使用廣譜抗生素后，才"再發(fā)現(xiàn)"艱難梭菌是與腹瀉和結(jié)腸炎有關(guān)的媒介物。今天，認(rèn)為艱難梭菌是在發(fā)達(dá)國家的住院成年人中腹瀉的主要原因。社區(qū)獲得性(community-acqured)艱難梭菌的危險非常低，但是建群和明顯的疾病(colonizationandovertdisease)(腹瀉至假膜性結(jié)腸炎)的危險與長期的住院和使用抗生素治療直接相關(guān)。使用廣譜抗微生物的治療劑干擾了消化道的正常菌群，使得艱難梭菌建群其中。然而，以前，估計該危險對于住院超過一周使用毒素A和B的新單克隆抗體基于快速ELISA的患者為大于20%;該比率有可能加倍。當(dāng)可能和以甲硝唑或萬古霉素給藥時，對于艱難梭菌的選擇治療是廣譜抗微生物劑中止的原因。盡管大多數(shù)患者響應(yīng)特定的治療，但是存在藥物不耐受和抗性發(fā)展的問題。而且，5%至30%的患者將經(jīng)受復(fù)發(fā)和多次感染.在1998年，確定了三個與艱難梭菌有關(guān)的未解決的問題。第一個是缺少靈敏的和特定的試驗(yàn)。該問題已經(jīng)隨著對毒素A和B的更靈敏的和特定的ELISA試驗(yàn)的發(fā)展而得到解決。第二個是需要改善醫(yī)院控制隔離方法。一種建議是控制醫(yī)院中抗微生物劑的使用模式。而且，堅決堅持手工洗滌及其它標(biāo)準(zhǔn)感染控制方案是有效的。第三個是疾病的復(fù)發(fā)。用另一種抗生素治療由于使用抗生素引發(fā)的病癥的事實(shí)可導(dǎo)致持續(xù)住院的患者中疾病復(fù)發(fā)。IBD是一種發(fā)病率顯著且影響生活質(zhì)量的終生病癥。診斷的百分之二十至三十是兒童。并不完全了解IBD的病因?qū)W，但是遺傳、微生物和免疫因素起重要作用。常規(guī)的免疫調(diào)節(jié)治療劑，包括類固醇，對生長發(fā)育可具有顯著的副作用。哺乳的孩子具有較低的腹瀉及其他感染的發(fā)病率。母乳含有許多固有的抗微生物蛋白質(zhì)，其可能在減少腹瀉和促進(jìn)健康的或共生的微生物系統(tǒng)(microflora)建群于胃腸道中起作用，所述微生物系統(tǒng)起抑制現(xiàn)患有的腹瀉和未來腹瀉發(fā)作的作用。體外數(shù)據(jù)表明乳蛋白質(zhì)乳鐵蛋白(lactoferrin,LF)和溶菌酶(lysozyme,LZ)在母乳的抗微生物作用中起重要作用。已證實(shí)獨(dú)立LF和LZ的和其組合具有抗廣譜細(xì)菌、病毒、寄生蟲和真菌的抗微生物活性。LF還具有免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)，上調(diào)腸道中的抗炎細(xì)胞因子和下調(diào)其中的促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子。目前的市場上沒有安全和經(jīng)濟(jì)有效的顯示出該效果的生理活性乳蛋白質(zhì)的來源。這樣的蛋白質(zhì)的必要條件包括下述的a.蛋白質(zhì)必須是生物活性的。b.蛋白質(zhì)必須在經(jīng)濟(jì)有效的系統(tǒng)中生產(chǎn)和分離。c.大量補(bǔ)給這些生物活性乳蛋白質(zhì)是必需的。d.在基本上缺少人類病原體和/或毒素的宿主中產(chǎn)生。捐贈的人類母乳包括病原體，其與在轉(zhuǎn)基因細(xì)菌、酵母菌、真菌、動物和細(xì)胞培養(yǎng)物中產(chǎn)生的病原體相同。e.能夠在多種制劑中保持生物活性。f.當(dāng)配置時貯存穩(wěn)定。本發(fā)明滿足了這些必要條件。9仍需要使用更有效的制劑，例如復(fù)合碳水化物和抗微生物蛋白質(zhì)來預(yù)防和治療腸疾病。進(jìn)一步地，如果復(fù)合碳水化物或抗微生物蛋白質(zhì)的制劑是以類似于在先天免疫系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的濃度，這樣的治療可能具有協(xié)同的有益效果，比如在控制腸內(nèi)生物體比如艱難梭菌方面。這樣的治療可以單獨(dú)進(jìn)行或與用抗生素的標(biāo)準(zhǔn)治療協(xié)同進(jìn)行。發(fā)明概述本發(fā)明的一個方面是用于預(yù)防或治療腸道病癥、腸疾病和相關(guān)病癥的口服制劑。實(shí)例包括腹瀉(diarrhea)、霍亂(cholera)、隱孢子蟲病(cryptosporidiosis)、食源'性疾f萄(foodbomedisease)、胃腸炎(gastroenteritis)、潰瘍(ulcers)、炎癥性腸病(其包括，但不限于克隆氏病(Crohn，sdisease)和潰瘍性結(jié)腸炎(ukerativecolitis))、沙門氏菌病(saalmonellosis)、傷寒(typhoid)和AIDS。本發(fā)明的另一個方面是有助于控制腸病原體的口服制劑。實(shí)例包括梭菌屬、彎曲桿菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬和大腸桿菌。本發(fā)明的另一個方面是有助于促進(jìn)腸內(nèi)有益菌群生長的口服制劑。本發(fā)明的進(jìn)一步的方面是一種口服制劑，其含有rhLF，含量為約0.5至約5.0g/l;和rhLZ，含量為約0.1至約1.0g/1。優(yōu)選，所述口服制劑具有的約200至約310mOsm/L的滲透性。所述口服制劑優(yōu)選遞送抗微生物活性和補(bǔ)水，并給藥以在降低腸疾病或病癥的持續(xù)時間和/或嚴(yán)重性降低和提高痊愈率方面提供主要改善，因而提高康復(fù)的速度。本發(fā)明的另一個方面包括用于產(chǎn)生口服制劑的方法，該方法包括將抗微生物劑加入所述制劑中，其中所述制劑賦予至少一種下述益處改善補(bǔ)水、預(yù)防腹瀉的發(fā)作或復(fù)發(fā)、減少腹瀉持續(xù)時間和/或量、控制腸病原體如艱難梭菌和促進(jìn)有益腸內(nèi)菌群的生長。當(dāng)通過實(shí)施本發(fā)明下述試驗(yàn)或上述知識時，本發(fā)明的其它新特征和優(yōu)點(diǎn)將對本領(lǐng)域技術(shù)人員變得顯而易見。發(fā)明詳述有關(guān)植物細(xì)胞的術(shù)語"穩(wěn)定地轉(zhuǎn)化的"指該植物細(xì)胞具有整合到其基因組中的非天然(異源)核酸序列，其保持兩代或多代。"宿主細(xì)胞"指含有載體且支持異源核酸序列復(fù)制和/或轉(zhuǎn)錄和/或表達(dá)的細(xì)胞。優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明，所述宿主細(xì)胞為植物細(xì)胞，最優(yōu)選單子葉植物細(xì)胞，比如水稻(rice)或大麥(barley)?？墒褂闷渌乃拗骷?xì)胞作為第二寄主，包括細(xì)菌、酵母菌、昆蟲、兩棲動物或哺乳動物細(xì)胞，以將DNA轉(zhuǎn)移至期望的植物宿主細(xì)胞。"植物細(xì)胞"指來源于植物的任何細(xì)胞，包括未分化的組織(例如胼胝體)以及植物種子、花粉、繁殖體、胚胎、懸浮液培養(yǎng)物、分生組織區(qū)域、葉子、根、莖干、配子體、孢子體和小孢子。術(shù)語"成熟的植物"指完全分化的植物。術(shù)語"種子產(chǎn)品"包括，但不限于種子成分(seedfractions),比如脫殼(de-hulled)的整個種子、磨粉(flour)(通過將已經(jīng)脫殼的種子研磨和碾磨成粉末)、種子提取物，優(yōu)選蛋白質(zhì)提取物(其中所述米粉的蛋白質(zhì)成分已經(jīng)與碳水化物成分分離)、麥芽(包括麥芽浸膏或麥芽糖槳)和/或來源于轉(zhuǎn)基因谷粒的純化的蛋白質(zhì)成分。術(shù)語"生物活性"指由本領(lǐng)域技術(shù)人員通常歸因于所述蛋白質(zhì)的任何生物活性。"單子葉植物種子組分"指從單子葉植物種子、通常成熟的單子葉植物種子中提取的碳水化物、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)組分。"種子成熟"指以受精開始和以谷物干燥結(jié)束的時期，在受精中，可代謝的儲備物，例如糖、低聚糖、淀粉、酚類化合物、氨基酸和蛋白質(zhì)在有或沒有靶向液胞(vacuoletargeting)下儲存至種子(谷物)中各種組織，例如胚乳、種皮、糊粉層和盾片狀上皮(scutellarepithelium),引起谷物增大、谷粒填充(grainfilling)。"成熟-特殊蛋白質(zhì)啟動子"指在種子成熟期間基本上顯示出上調(diào)活性(大于25%)的啟動子。"異源DNA"指從另一個來源引入植物細(xì)胞的或來自植物來源的DNA，所述植物來源包括相同的植物來源，但其在沒有正常地調(diào)節(jié)異源DNA表達(dá)的啟動子的調(diào)控下。"異質(zhì)蛋白"為由異源PNA編碼的蛋白質(zhì)。所述蛋白質(zhì)包括，但不限于抗微生物蛋白質(zhì)和肽、乳鐵蛋白(其可由乳鐵蛋白多肽取代的)、溶菌酶、咕啉結(jié)合蛋白(haptocorin)、乳凝集素(lactahedrin)、防衛(wèi)素(defensin)、組織蛋白酶抑制素(cathelicidins)和乳過氧化物酶(lactoperoxidase)。如本文所用的，術(shù)語"天然型的"或"野生型"，相對于給定的細(xì)胞、多肽、核酸、特性或表型，指其中通常在自然中發(fā)現(xiàn)的形式。如本文所用的，術(shù)語"純化"可以與術(shù)語"分離"交互使用，通常指將特定的組分從環(huán)境的一種或多種其它組分中的任何分離，在所述環(huán)境中產(chǎn)生或發(fā)現(xiàn)有該特定組分。例如，從產(chǎn)生重組體蛋白質(zhì)的植物細(xì)胞中純化重組體蛋白質(zhì)通常指使含有轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的植物材料經(jīng)歷分離技術(shù)，比如沉淀、離心、過濾和層析。任何這樣的純化或分離步驟的結(jié)果可仍然含有其它的組分，只要該結(jié)果具有比在這樣的純化或分離步驟之前更少的其它組分("雜質(zhì)組分")。如本文所用的，關(guān)于宿主細(xì)胞的術(shù)語"轉(zhuǎn)化的"或"轉(zhuǎn)基因的"指宿主細(xì)胞含有天然宿主細(xì)胞缺乏的、非天然的或異源的或引入的核酸序列的宿主細(xì)胞。而且，在本發(fā)明的上下文中，"穩(wěn)定地轉(zhuǎn)化的"指引入的核酸序列保持宿主的兩代或多代，優(yōu)選(但不是必要地)，這是歸因于將引入的序列整合到宿主基因組的緣故。"ORS"指常用于預(yù)防或改正脫水的溶液。ORS通常但非必須含有鹽、糖、鉀及其它有助于代替疾病或病癥的體液損失的礦物質(zhì)的混合物。"口服制劑成分"包括一種或多種蛋白質(zhì)、肽、激素、碳水化物、氨基酸、脂質(zhì)、維生素、有機(jī)鹽和無機(jī)鹽。"口服制劑活性成分"或"口服制劑組分"指加入到或補(bǔ)充到口服制劑的任何抗微生物劑、蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)、重組體和非重組體。"口服制劑補(bǔ)充劑"指一種或多種口服制劑組分與或不與加入到口服制劑的其它成分的組合。"抗微生物劑"指具有抗菌藥、抗真菌藥、抗原蟲藥和/或抗病毒藥功能的一組化學(xué)品。"重組體蛋白質(zhì)"指使用DNA重組技術(shù)產(chǎn)生的異源蛋白。"腸疾病或病癥"包括腹瀉(來自任何原因，例如任何之前列出的獨(dú)立原因)、克隆氏病、憩室病(diverticulosis)和憩室炎(diverticulitis)、胃癌(gastriccancer)、胃炎(gastritis)、潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis)、消化性潰瘍(pepticulcer)、腸潰瘍(intestinalulcer)、胃漬瘍(gastriculcer)、十二指腸潰瘍(duodenalulcer)、應(yīng)^敫性腸病(irritableboweldisease)、腸易激綜合征、便秘(constipation)、腸病原體感染、與慢性人類免疫缺陷性病毒(humanimmunodeficiencyvims,HIV)感染相關(guān)的胃腸功能失調(diào)(gastrointestinaldysfimction)、獲得性免疫缺乏綜合癥(acquiredimmunodeficiencysyndrome,AIDS)禾口/或其治療及痔瘠(hemorrhoids)。向口服溶液中加入乳鐵蛋白和溶菌酶引起腹瀉病的持續(xù)時間減少和腸粘膜的回收率增加。已經(jīng)表明乳鐵蛋白具有抗HT-29細(xì)胞的輪狀病毒感染的體外抗病毒作用，HT-29細(xì)胞為腸細(xì)胞樣細(xì)胞系。該抗病毒作用機(jī)理似乎是雙重的。乳鐵蛋白直接結(jié)合病毒顆粒，并防止其結(jié)合到靶細(xì)胞。當(dāng)在結(jié)合步驟后，將細(xì)胞暴露于乳鐵蛋白中時，乳鐵蛋白也對病毒抗原的合成和病毒產(chǎn)生具有抑制作用。該第二種機(jī)理需要由特定的細(xì)胞受體攝取乳鐵蛋白。另一種重要的觀察為牛乳鐵蛋白抗輪狀病毒的活性在脫液酸化(desialylation)后增加。注意到在水稻中產(chǎn)生的重組體人乳鐵蛋白沒有唾液酸。盡管沒有如常規(guī)檢測到，腺病毒也可能與腹瀉相關(guān)。乳鐵蛋白能通過結(jié)合糖胺聚糖受體和阻斷病毒結(jié)合細(xì)胞膜而抑制細(xì)胞的腺病毒感染。乳鐵蛋白也已顯示出有效地消弱志賀氏菌毒力(virulence)。在孟加拉的流行病學(xué)研究證實(shí)哺乳嬰兒患有志賀氏菌感染的發(fā)病率和嚴(yán)重性降低。體外試驗(yàn)表明乳鐵蛋白在細(xì)菌表面起作用，引起侵入的抗原釋放并使該細(xì)菌變得對蛋白酶更敏感。這些相同的研究證實(shí)侵入抗原的損失與乳鐵蛋白的鐵飽和或N-末端陽離子肽無關(guān)。乳鐵蛋白的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用使該"食品"物質(zhì)成為向患有腸疾病或病癥如輕度至中度IBD的孩子和/或成年人供應(yīng)營養(yǎng)的優(yōu)良候選者。使用先天免疫系統(tǒng)的蛋白質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)抗微生物劑治療，將輔助物(adjuncts)加入IBD治療和域腸病原體如艱難梭菌的控制的時機(jī)可通過使用乳鐵蛋白獲得。該蛋白質(zhì)在上皮分泌物中發(fā)現(xiàn)，并推測其有助于屏障保護(hù)功能。乳鐵蛋白是一種轉(zhuǎn)鐵蛋白家族的鐵結(jié)合糖蛋白，并且其與抗微生物性質(zhì)和以粘膜水平提高免疫性有關(guān)。乳鐵蛋白和來自乳鐵蛋白的特定胃蛋白酶產(chǎn)生的肽刺激雙歧桿菌(bifidobacterial)的生長。在大鼠結(jié)腸炎模型系統(tǒng)中證實(shí)13乳鐵蛋白具有調(diào)節(jié)腸中炎癥細(xì)胞因子應(yīng)答的能力。其也降低了了健康志愿者中吲哚美辛(indomethacin)的損害。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，乳鐵蛋白為通過在米顆粒基系統(tǒng)(ricegrainbasedsystem)中的蛋白質(zhì)表達(dá)和純化產(chǎn)生，且優(yōu)選重組體人乳鐵蛋白。如此產(chǎn)生的乳鐵蛋白已經(jīng)歷了大量測試以確定其與從母乳中純化的天然蛋白質(zhì)基本等效。在其他的實(shí)施方案中，乳鐵蛋白可以重組產(chǎn)生或從一種或多種人類、牛類、豬和山羊來源獲得的乳汁中分離。本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括使用乳鐵蛋白來治療、控制或預(yù)防腸病原體的感染。例如，在住院患者中可使用乳鐵蛋白來治療治療、控制或預(yù)防艱難梭菌感染。天然的蛋白質(zhì)，以平均母乳水平(至少lmg/ml乳鐵蛋白)或高于該水平使用，可控制或預(yù)防受試者中的病原體建群，特別是需要廣譜抗菌治療劑的住院或長期護(hù)理的患者。來自體外試驗(yàn)的初始數(shù)據(jù)證實(shí)了臨床分離物對重組體人乳鐵蛋白的敏感性。在用于治療或預(yù)防病原性優(yōu)選艱難梭菌感染的方法中，劑量方案(dosingregimen)可以是每24小時約0.5至10g，優(yōu)選約2至8g，最優(yōu)選約3g的乳鐵蛋白，持續(xù)至足夠治療或預(yù)防感染時，可伴有或不伴有抗生素治療。在相關(guān)的實(shí)施方案中，使用乳鐵蛋白，無論是單獨(dú)或與溶菌酶一起，可促進(jìn)健康腸道菌群的發(fā)育和保持。此類益生菌(probioticbasteria)的實(shí)例可包括乳酸桿菌屬(i:acto^c/〃附)、雙歧桿菌屬(B^t/o6acten'i^)、乳球菌屬(丄actococcM力、腸球菌屬(五"feracoccw力、酵母菌屬(Sacc/zaram少ces)禾口嗜酸菌屬(J"Wcp/w7附)的成員，但不限于這些。溶菌酶是1,4-(3-N-乙酰基溶菌酶。它酶促解性降解革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞膜中肽聚糖的糖苷鍵。溶菌酶單獨(dú)的起作用，其溶胞和殺死一些革蘭氏陽性微生物。通常，革蘭氏陰性細(xì)菌的外膜保護(hù)它們免受溶菌酶的作用。相反，乳鐵蛋白結(jié)合并改變革蘭氏陰性細(xì)菌的膜。在母乳及其它粘膜分泌物中發(fā)現(xiàn)的這兩種蛋白質(zhì)證實(shí)了單獨(dú)的抑菌活性，但能當(dāng)兩者都存在時，其能以協(xié)同的殺菌方式起作用。乳鐵蛋白單獨(dú)具有抑菌性質(zhì)。乳鐵蛋白的一種作用機(jī)理是通過分離鐵,剝奪(depriving)微生物的必需營養(yǎng)素。然而，乳鐵蛋白也具有N國末端區(qū)域,其有殺菌性且具有脂多糖(lip叩olysaccharide，LPS)結(jié)合活性。在對霍亂弧菌(K^o/erae)的研究中，單獨(dú)的溶菌酶為非活性的，單獨(dú)的乳鐵蛋白為抑菌性的,并且混合的蛋白質(zhì)為殺菌性的。在S.0^/Vm#7'"m和大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果。乳鐵蛋白和溶菌酶分別和組合都對大腸桿菌有效。也已經(jīng)研究了人乳和乳鐵蛋白的抗寄生活性。兩者都顯示出抗藍(lán)氏賈第蟲滋養(yǎng)體的殺死活性(cidalactivity)。在隱孢子蟲病的情況下，母乳喂養(yǎng)己成為有效的抑制(deterrent)。這可以通過細(xì)胞因子調(diào)節(jié)而具有抗微生物作用和抗炎作用兩者。乳鐵蛋白可具有保護(hù)腹瀉期間腸粘膜的陽性作用?？诜┯萌殍F蛋白的動物研究證實(shí)了其經(jīng)由調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)抗結(jié)腸炎發(fā)展的保護(hù)作用。這可通過乳鐵蛋白誘導(dǎo)抗炎細(xì)胞因子IL-4和IL-10的增加和抑制促炎細(xì)胞因子IL-6、TNF-a和IL-1卩的釋放來實(shí)現(xiàn)。這種保護(hù)性機(jī)理可產(chǎn)生更少的損害和更快地修復(fù)腸道粘膜組織，引起其正常通透性和生長。在小鼠中，乳鐵蛋白也保護(hù)腸道粘膜抗細(xì)菌脂多糖的作用。通過對作為抗炎和免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的乳鐵蛋白的研究證實(shí)，使用本發(fā)明的口服制劑中人乳鐵蛋白是有益的，無論單獨(dú)施用或與已知的治療炎癥性腸病如克隆氏病或潰瘍性結(jié)腸炎的方法協(xié)同施用。從人母乳中純化乳鐵蛋白和溶菌酶不是經(jīng)濟(jì)可行的選擇。這些蛋白質(zhì)也可從一種或多種牛、豬和/或山羊來源的乳汁中分離。人乳鐵蛋白和溶菌酶在植物，優(yōu)選單子葉植物比如水稻中的表達(dá)也是有吸引力的方法，因?yàn)槊讓儆谟糜谝雼雰旱牡谝活愅扑]食品。其具有營養(yǎng)價值和低的變應(yīng)原性。純化后，來自米的任何剩余蛋白或碳水化物無危險引入，且可以看作營養(yǎng)的試探(nutritionallysound)。因?yàn)槿巳殍F蛋白和溶菌酶是母乳喂養(yǎng)嬰兒飲食的主要部分，向飲食中加入重組體人乳鐵蛋白和溶菌酶將擴(kuò)充它們的正常攝入。口服制劑或ORS可以有利地含有0.0001%至10%重量的抗微生物蛋白質(zhì)，優(yōu)選，選自下組乳鐵蛋白、溶菌酶、防衛(wèi)素、組織蛋白酶抑制素和乳過氧化物酶。優(yōu)選，這些蛋白質(zhì)以占所述口服制劑或ORS重量的約0.001%至1%的量提供。更優(yōu)選，如果使用乳鐵蛋白和/或溶菌酶，它們至少以在人母乳中發(fā)現(xiàn)的量存在。在其他的實(shí)施方案中，抗微生物蛋白質(zhì)可以重組產(chǎn)生或從一種或多種人、牛、豬和山羊來源獲得中的乳汁中分離。根據(jù)本發(fā)明，抗微生物劑蛋白質(zhì)和肽，如乳鐵蛋白和溶菌酶的產(chǎn)生可以使用美國專利申請?zhí)?0/077,381、10/411,395、PCT/US2004/041083和/或PCT/US2003/39107的教導(dǎo)獲得，在此將其中的每篇全部引入作為參考。如此產(chǎn)生的抗微生物劑蛋白質(zhì)和肽可在進(jìn)一步純化或不進(jìn)一步純化的情況下15使用，和加入到口服制劑中。在單子葉植物種子中產(chǎn)生抗微生物蛋白質(zhì)和肽的優(yōu)選方法包括下述步驟(a)用嵌合體基因轉(zhuǎn)化單子葉植物細(xì)胞，所述嵌合體基因包括(i)來自成熟特異的單子葉植物貯藏蛋白的基因的啟動子，(ii)第一DNA序列，可操作地連接至所述啟動子，編碼單子葉植物種子特異性信號序列，所述序列能將與其連接的多肽耙向單子葉植物種子胚乳細(xì)胞，禾口(iii)第二DNA序列，連接具有第一DNA序列的翻譯框，編碼抗微生物蛋白質(zhì)禾Q/或肽，其中第一DNA序列和第二DNA序列一起編碼融合蛋白，該融合蛋白含有N-末端信號序列的抗微生物蛋白質(zhì)和/或肽；(b)從轉(zhuǎn)化的單子葉植物細(xì)胞培養(yǎng)單子葉植物，至足夠產(chǎn)生含有抗微生物蛋白質(zhì)和/或肽的種子的時間；以及(c)從植物中收獲該種子。優(yōu)選，述抗微生物蛋白質(zhì)和/或肽構(gòu)成種子產(chǎn)品中全部可溶性蛋白質(zhì)的至少3.0%，或全部種子重量的至少0.1%。重組體人乳鐵蛋白在谷物比如米和大麥中的表達(dá)，為產(chǎn)生和分離乳鐵蛋白提供了成本有效的方法。己表明，在水稻中產(chǎn)生的人乳鐵蛋白基本上與來自母乳的人乳鐵蛋白等效。而且，研究證實(shí)聚糖模式中的差異非常不可能出現(xiàn)變應(yīng)原性危險。通過對作為抗微生物、抗炎和免疫調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的乳鐵蛋白的研究證實(shí)，人乳鐵蛋白在胃腸疾病中的使用提供了理想的應(yīng)用。它們除了在治療、預(yù)防和減少患者中腹瀉影響的應(yīng)用之外，可以施用根據(jù)本發(fā)明的營養(yǎng)供給產(chǎn)品以促進(jìn)患這種健康的腸道菌群的發(fā)展。對于患有急性水樣腹瀉的兒童，可以使用一種含有人乳鐵蛋白與另一種母乳蛋白質(zhì)、溶菌酶組合的口服補(bǔ)水溶液。人乳鐵蛋白和/或溶菌酶也在預(yù)防長期護(hù)理的老年患者的腹瀉中是有益的。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，人乳鐵蛋白和/或溶菌酶可用作營養(yǎng)供應(yīng)品并用于預(yù)防旅客和軍隊(duì)腹瀉。在其他的實(shí)施方案中，本發(fā)明的口服補(bǔ)水溶液也可使用從一種或多種人、牛、豬和山羊來源的乳汁中分離的蛋白質(zhì)來制備。本發(fā)明的制劑可以以適于產(chǎn)生預(yù)期效果的任何方式施用——使用其補(bǔ)水、治療腸疾病或病癥、預(yù)防腸疾病的發(fā)16作或復(fù)發(fā)、抑制腸道病原體比如艱難梭菌和促進(jìn)腸道中共生的微生物系統(tǒng)的生長。所述制劑可以作為溶液、用于重構(gòu)的無水形式(粉末)、液態(tài)濃縮物(可以向其中加入水)、汁狀物、酸奶酪等的形式提供，配制成營養(yǎng)棒(nutritionbar)、膠囊、片劑、糯米紙囊劑(wafer)等。將參照附圖進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。圖1顯示了在根據(jù)本發(fā)明制備的口服溶液和標(biāo)準(zhǔn)ORS之間腹瀉持續(xù)時間的差異；圖2顯示了在根據(jù)本發(fā)明制備的口服溶液和標(biāo)準(zhǔn)ORS之間腹瀉量的差升；圖3顯示了與標(biāo)準(zhǔn)ORS相比，使用根據(jù)本發(fā)明制備的口服溶液后不到達(dá)48小時就具有固體糞便的患者的百分?jǐn)?shù)；圖4顯示了與標(biāo)準(zhǔn)ORS相比，使用根據(jù)本發(fā)明制備的口服溶液后復(fù)發(fā)患者的百分?jǐn)?shù)；圖5顯示了消耗的溶液量(根據(jù)本發(fā)明制備的口服溶液與ORS相比)；圖6顯示了在有和沒有1mg/mlrhLF的介質(zhì)中大腸桿菌菌落形成比較，顯示出在用rhLF處理的培養(yǎng)基中菌落減少；圖7顯示了如通過在波長A630的光密度測定的乳鐵蛋白抑制細(xì)菌細(xì)胞生長的線形圖。所述三種處理為對照(僅僅培養(yǎng)基)、天然(含有天然人乳鐵蛋白)和重組體(含有重組人乳鐵蛋白)；圖8顯示了在有和沒有20pg/mlrhLZ的介質(zhì)中大腸桿菌菌落形成的比較，顯示出在用rhLZ處理的培養(yǎng)基中菌落減少；和圖9顯示了來自三種處理僅僅緩沖液(用白色正方形方框)、緩沖液加天然人溶菌酶(紅線)和緩沖液加重組體人溶菌酶(綠線)的大腸桿菌菌落形成單元的線形圖。實(shí)施例實(shí)施例l:重組體人乳鐵蛋白的表達(dá)A.人乳鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因水稻中表達(dá)的表達(dá)載體人乳腺乳鐵蛋白的完整核苷酸序列為優(yōu)化的密碼子，其通過OperoriTechnologies(CA,USA)合成。為了獲得最佳的表達(dá)水平，用在水稻種子蛋白的翻譯中最常使用的密碼子再合成人乳乳鐵蛋白基因(Genbank登記號碼HSU07642)。盡管密碼子改變的數(shù)量占全部序列的22.46%，但氨基酸組成與非重組體人乳鐵蛋白保持相同。含有密碼子優(yōu)化的基因的質(zhì)粒稱為Lac-ger。用Swa/ZY^/消化Lac-ger，將含有乳鐵蛋白基因的片段克隆至pAPI141，其被部分M7e/消化，且完全被Xho消化。對于在水稻種子中hLF的表達(dá)，將密碼子優(yōu)化的基因可操作地連接于水稻胚乳特異性谷蛋白(Gtl)的啟動子和NOS終止子。得到的質(zhì)粒稱為pAPI164。B.產(chǎn)生系統(tǒng)選擇水稻品種Taipei309(6^加似加"，/"/o"&")作為重組體人乳鐵蛋白(recombinanthumanlactorerrin,rhLF)的產(chǎn)生系統(tǒng)，通過用具有質(zhì)粒pAPI164和作為可選的標(biāo)記物的、含有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因的相伴標(biāo)記物質(zhì)粒(companionmarkerplasmid)的粒子轟擊胚胎發(fā)生的水稻胼胝體，最終得到轉(zhuǎn)基因水稻植物。通過該步驟獲得充分發(fā)育的、能繁殖的水稻植物。C.重組體人乳鐵蛋白在米顆粒中的高水平蛋白質(zhì)表達(dá)重組體人乳鐵蛋白的表達(dá)在種子成熟特異性啟動子Gtl的調(diào)控下。重組體人乳鐵蛋白的高水平表示是顯而易見的。在Laemli凝膠上試驗(yàn)來自成熟水稻種子提取物的全部可溶性蛋白質(zhì)，用考馬斯藍(lán)染色以顯影所述蛋白質(zhì)。如用染色凝膠所顯示的，在所有的轉(zhuǎn)基因系中獲得80kD重組體乳鐵蛋白蛋白質(zhì)。重組體人乳鐵蛋白的表達(dá)水平相當(dāng)于種子重量的0.5%。監(jiān)測10代重組體重組體人乳鐵蛋白的穩(wěn)定表達(dá)。表達(dá)水平維持在糙米(brownrice)的約5g/kg。實(shí)施例2:重組體人乳鐵蛋白的純化為了制備補(bǔ)充了重組體人乳鐵蛋白的口服補(bǔ)水溶液，從米粉中純化重組體人乳鐵蛋白。選擇表達(dá)高水平rhLF的轉(zhuǎn)基因水稻系(164-12)。將這個系，現(xiàn)在稱為LF164，每年種植兩代，交替在夏季田間種植和在冬季溫室種植。對于蛋白質(zhì)純化，通過使用脫殼機(jī)(RiceMill，PS-160，Rimac，F(xiàn)L)對表達(dá)rhLF的稻米(paddyrice)脫殼，然后使用錘磨機(jī)(ha畫ermill,8WA,Schutte-Buffalo，18NY)碾磨成面粉(平均粒子大小100目)。通過在50L槽(tank)中將2kg的米粉和20L的提取緩沖液(0.02M磷酸鈉，pH6.5和0.3M氯化鈉)混合1小時，從轉(zhuǎn)基因米粉中進(jìn)行蛋白質(zhì)的提取。在混合期結(jié)束時，使該懸浮液沉降過夜，或以3750rpm離心。在兩種情況下，分別利用M-05和M-70纖維素/珠光體-基過濾器(ErtelAlsop，NY)，通過板框式過濾器(plateandframefilter,ErtelAlsop,8S，NY)過濾上清液。將含有rhLF及其它米粉可溶性蛋白質(zhì)的濾液裝載在離子交換柱上進(jìn)一歩純化。使用以SP隱Sepharose速流(fastflow)(AmershamPharmaciaBiotech,NJ)填充的INDEX200/500加工柱(AmershampharmaciaBiotech,NJ)。使用具有150-200cm/h的線性流速的柱。按制造商的說明進(jìn)行填充柱性能的填充、凈化和試驗(yàn)。將濾液裝載在線速度為175cm/h的柱上，并用含有0.3MNaCl的0.02M磷酸鈉緩沖液(pH6.5)洗滌，直至A28Q回到基線。使用20mM含有0.8MNaCl的磷酸鈉緩沖液(pH6.5)洗脫重組體hLF。洗滌和洗脫分別以200cm/h和150cm/h進(jìn)行。使用具有l(wèi)ft250kDa的聚醚砜(PallBiopharmaceutical,MA)膜的Centramate模(PallBiopharmaceutical,MA)進(jìn)行洗脫的hLF的濃縮和脫鹽(浸潤)。過濾在錯流速率為約1.5L/分鐘平均Tmn膜壓力為10psig下進(jìn)行。濃縮洗脫的rhLF并脫鹽至0.25L終體積，然后凍干。通常，從一千克轉(zhuǎn)基因米粉中回收約3克純化的重組體人乳鐵蛋白。從米粉純化的重組體人乳鐵蛋白為約50%被鐵飽和(部分乳鐵蛋白)。然后，將50%飽和的重組體人乳鐵蛋白用鐵進(jìn)行處理使飽和>90%，得到乳鐵蛋白，并將飽和<10%的鐵用酸處理以除去結(jié)合鐵，得到apo-乳鐵蛋白。實(shí)施例3:重組體人溶菌酶的生產(chǎn)和純化在來源于Oryzasativa,Japonica，Taipei309的水稻品種LZ159中生產(chǎn)重組體人溶菌酶。使用標(biāo)準(zhǔn)的食品工業(yè)過程對該米去殼，并研磨至平均100目的米粉。使用具有0.3MNaCIpH4.5的0.02乙酸鹽緩沖液從碾磨的米粉中提取重組體人溶菌酶。提取1.0至2.0小時后，通過離心從液相中分離固體米粉。過濾含有可溶性蛋白質(zhì)的液相并濃縮。此時，產(chǎn)物為蛋白質(zhì)濃縮物，其為>10%溶菌酶蛋白質(zhì)。使用離子交換層析進(jìn)一步純化該濃縮物。將該濃縮物裝在SPSepharoseBigBeadMedia的柱上，洗滌該柱，并用0.8M的氯化鈉洗脫結(jié)合的溶菌酶。在冷凍干燥前，超濾分離物以除去過量的鹽并濃縮。如通過HPLC分析測定，分離形式的溶菌酶為>80%純?nèi)芫傅鞍踪|(zhì)。實(shí)施例4:含有重組體蛋白質(zhì)的ORS與標(biāo)準(zhǔn)ORS的比較表1<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>在患有急性水樣腹瀉的兒童的預(yù)期雙盲研究中，將含有重組體人乳鐵蛋白(rhLF)和重組體人溶菌酶(recombinanthumanlysozyme,rhLZ)及其它組分(如表1所示)的ORS與標(biāo)準(zhǔn)ORS進(jìn)行了比較，所述重組體人乳鐵蛋白(rhLF)和重組體人溶菌酶(rhLZ)的濃度與人母乳(lmg/ml的乳鐵蛋白和0.2mg/ml的急性溶菌酶)中的類似的。將ORS的小藥囊溶于1升己煮沸并冷卻的水中。每日制備新鮮的ORS。給予患有水樣急性腹瀉的一百四十個孩子根據(jù)本發(fā)明的ORS或根據(jù)WHO規(guī)定制備的標(biāo)準(zhǔn)ORS14天。參與后，治療繼續(xù)直至腹瀉停止兩天或14天。研究表明含有乳鐵蛋白和溶菌酶的ORS優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)ORS，如通過測得腹瀉持續(xù)時間和量減少所測量的(圖1至圖5)。實(shí)施例5:重組體人乳鐵蛋白的抗微生物作用用大腸桿菌作為底物，測定重組體人乳鐵蛋白的抗微生物活性。從培養(yǎng)平板制備大腸桿菌K12的培養(yǎng)細(xì)胞。將1mL中約105CFU的大腸桿菌與1mg的rhLF混合;對照不含乳鐵蛋白。將混合物在37r培養(yǎng)120分鐘，以250rpm振搖。然后，將5^il的混合物涂布平板(plated)。如可圖6中所看到的，在加入rhLF的培養(yǎng)物中菌落形成單位顯著地減少。為了比較rhLF和天然hLF對大腸桿菌生長的作用，用三組進(jìn)行另外的試驗(yàn)陰性對照組(僅僅生長培養(yǎng)基)、陽性對照組(含有天然hLF的生長培養(yǎng)基)和治療組(含有rhLF的生長培養(yǎng)基)。如圖7所示，在生長培養(yǎng)基中大腸桿菌顯著地增加，而在含有天然和重組體人乳鐵蛋白的治療組中大腸桿菌生長慢得多，表明在生長培養(yǎng)基中重組體人乳鐵蛋白與天然乳鐵蛋白在控制大腸桿菌生長方面具有相同的作用。實(shí)施例6:重組體人溶菌酶的抗微生物作用用大腸桿菌作為底物，測定重組體人溶菌酶的抗菌活性。從培養(yǎng)平板制備大腸桿菌K12的培養(yǎng)細(xì)胞。將1mL中約105CFU的大腸桿菌與20嗎的rhLZ混合；對照不含溶菌酶。將該混合物在37"C培養(yǎng)120分鐘，以250rpm振搖。然后，將5jxl的混合物涂布平板。如圖8中所看到的，在加入rhLZ的培養(yǎng)物中菌落形成單位顯著地減少。為了比較rhLZ和天然hLZ的抗菌作用，用三組重復(fù)相同的試驗(yàn)陰性對照組(僅僅緩沖液)、陽性對照組(含有天然hLZ的緩沖液)和治療組(含有rhLZ的緩沖液)(圖9)。在陰性對照組中，菌落形成單位沒有減少，而在陽性對照組中，大腸桿菌顯著地減少。在60分鐘的培養(yǎng)時間時，菌落形成單位減少為100，并在120分鐘接近零。具有rhLZ的治療組與陽性對照組具有相同的作用，表明rhLZ和hLZ都具有殺菌活性。實(shí)施例7:乳鐵蛋白對艱難梭菌的體外抑制為了測定乳鐵蛋白抗艱難梭狀芽胞桿菌的活性，進(jìn)行本實(shí)施例。該研究包括在50個不同系的艱難梭菌上進(jìn)行乳鐵蛋白的體外敏感性試驗(yàn)。50個系中的46個受4mg/ml乳鐵蛋白的抑制。證實(shí)以16mg/ml抗一種分離物沒有活性，且三種分離物不生長，并且認(rèn)為是不確定的。實(shí)施例8:乳鐵蛋白對艱難梭菌的體內(nèi)抑制進(jìn)行本實(shí)施例是為了測定來源于米的人乳鐵蛋白在腸道進(jìn)食的長期護(hù)理患者中處理腸道內(nèi)艱難梭菌抗生素后建群(post-antibioticcolonization)和產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)中的用途。在經(jīng)由腸道進(jìn)食系統(tǒng)接受營養(yǎng)物的特定患者群體中，試驗(yàn)重組體人乳鐵蛋白。已經(jīng)報道該人群對艱難梭菌具有較高的易感性。當(dāng)指示廣譜抗生素治療時，開始治療，并持續(xù)8周。通過毒素A/B的陽性快速ELISA的存在，監(jiān)測患者的艱難梭菌。所有的患者都通過胃造口術(shù)或空腸造口術(shù)管腸道進(jìn)食。患者將接受腸道進(jìn)食液形式的50mMNaCl中的來自米的重組體人乳鐵蛋白(在8周研究期間的每24小時施用600ml0.3%的生理鹽水中的5mg/ml乳鐵蛋白)或者接受600mL作為對照的0.3%生理鹽水。預(yù)期接受乳鐵蛋白處理的患者群體將比對照群體的艱難梭菌的量低。實(shí)施例9:乳鐵蛋白治療克隆氏病的用途進(jìn)行該研究是為了評價用作患有活性克隆氏病的兒科患者的營養(yǎng)供應(yīng)品的重組體人乳鐵蛋白對兒科克隆氏病活性指數(shù)(PediatricCrohn'sDiseaseActivityIndex,PCDAI)和醫(yī)師整體評估的作用。PCDAI為多項(xiàng)目測定，其包括線性生長以及強(qiáng)調(diào)主觀報告癥狀較少但強(qiáng)調(diào)腸炎的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)更多。該指數(shù)已被批準(zhǔn)用于兒童和青少年，其已顯示可區(qū)別疾病活性水平的變化。將在初始、4周、8周和12周時評價PCDAI。來源于米的重組體人乳鐵蛋白是粉末形式。治療劑和安慰劑都以用于在汁或水中重構(gòu)的1克的獨(dú)立包裝提供。建議的重構(gòu)為250mL，但這可根據(jù)受試者的喜好改變，只要一次消耗了全部的1克劑量。最少的重構(gòu)體積為150mL。劑量給藥為每天兩次。預(yù)期該研究表明，與相比，除標(biāo)準(zhǔn)治療劑外，還向患有輕度至中度克隆氏病(新發(fā)病或最近發(fā)病)的兒童施用重組體人乳鐵蛋白，將比單獨(dú)的標(biāo)準(zhǔn)治療劑產(chǎn)生更快的疾病穩(wěn)定和疾病改善，如同通過PCDAI和醫(yī)師整體評估所評價的。22當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到僅以實(shí)施例的方式給出了上述描述，可以在本發(fā)明的范圍內(nèi)進(jìn)行詳細(xì)的修改。在本申請中，引用了各種專利和出版物。在此，將這些專利和出版物的公開內(nèi)容以其全部引入本申請作為參考，以便更充分地描述本發(fā)明所屬令頁域的技術(shù)現(xiàn)狀。本發(fā)明能夠在形式和功能方面進(jìn)行相當(dāng)大的改進(jìn)、改變和等效替換，如具有本發(fā)明公開內(nèi)容益處的相關(guān)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員所想到的。雖然本發(fā)明已經(jīng)對被目前認(rèn)為是優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但本發(fā)明并不限于此。相反，本發(fā)明意欲涵蓋包括在上述提供的詳細(xì)說明的精神和范圍內(nèi)的各種改進(jìn)和等效方案。例如，盡管重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)代表本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明也可使用重組產(chǎn)生的或從乳汁分離的蛋白質(zhì)進(jìn)行，其中所述乳汁來源于一種或多種人、牛、豬和山羊來源。權(quán)利要求1、預(yù)防或治療患者腸道病癥發(fā)作或復(fù)發(fā)的方法，所述患者已暴露于引起腸道病癥的媒介物中，該方法包括向所述患者施用含有乳蛋白質(zhì)的口服制劑的步驟。2、權(quán)利要求1的方法，其中所述腸道病癥選自下組霍亂、腹瀉、隱孢子蟲病、食源性疾病、胃腸炎、潰瘍、炎癥性腸病、沙門氏菌病、傷寒和AIDS。3、權(quán)利要求1的方法，其中所述乳蛋白質(zhì)為從乳汁中分離出或重組產(chǎn)生。4、權(quán)利要求3的方法，其中所述乳蛋白質(zhì)為從一種或多種人類、牛、豬和山羊來源的乳汁中所分離。5、權(quán)利要求3的方法，其中所述乳蛋白質(zhì)為在植物細(xì)胞中重組產(chǎn)生。6、權(quán)利要求4的方法，其中所述乳蛋白質(zhì)為選自下組的重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)乳鐵蛋白、溶菌酶及其組合。7、權(quán)利要求1的方法，其中所述口服制劑進(jìn)一步包含一種或多種獨(dú)立地選自下組的附加蛋白質(zhì)防衛(wèi)素、組織蛋白酶抑制素、乳鐵蛋白和乳過氧化物酶。8、權(quán)利要求l的方法，其中所述口服制劑為溶液的形式。9、權(quán)利要求l的方法，其中所述口服制劑為營養(yǎng)棒的形式。10、權(quán)利要求1的方法，其中所述口服制劑為適于在水中重構(gòu)的粉末形式。11、權(quán)利要求l的方法，其中所述口服制劑為丸劑、片劑或膠囊的形式。12、權(quán)利要求l的方法，其中所述引起腸道病癥的媒介物選自下組細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲。13、權(quán)利要求12的方法，其中所述細(xì)菌選自下組梭菌屬、彎曲桿菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬和埃希氏菌屬。14、權(quán)利要求12的方法，其中所述病毒選自下組輪狀病毒、諾瓦克病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷性病毒和病毒性肝炎病毒。15、權(quán)利要求12的方法，其中所述寄生蟲選自下組藍(lán)氏賈第蟲、溶組織內(nèi)阿米巴和隱孢子蟲。16、預(yù)防和治療患者腹瀉發(fā)作和復(fù)發(fā)的方法，所述患者己暴露于引起腹瀉的媒介物中，該方法包括向所述患者施用含有從單子葉植物種子獲得的重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)的口服制劑的步驟。17、權(quán)利要求16的方法，其中所述重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)選自下組乳鐵蛋白、溶菌酶及其組合。18、權(quán)利要求16的方法，其中所述口服制劑進(jìn)一步包含一種或多種獨(dú)立地選自下組的附加蛋白質(zhì)防衛(wèi)素、組織蛋白酶抑制素和乳過氧化物酶。19、權(quán)利要求16的方法，其中所述口服制劑為溶液的形式。20、權(quán)利要求16的方法，其中所述口服制劑為營養(yǎng)棒的形式。21、權(quán)利要求16的方法，其中所述口服制劑為適于在水中重構(gòu)的粉末形式。22、權(quán)利要求16的方法，其中所述引起腹瀉的媒介物為選自下組的腸病原體細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲。23、權(quán)利要求22的方法，其中所述細(xì)菌選自梭菌屬、彎曲桿菌屬、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬和埃希氏菌屬。24、權(quán)利要求22的方法，其中所述病毒選自下組輪狀病毒、諾瓦克病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒和病毒性肝炎病毒。25、權(quán)利要求22的方法，其中所述寄生蟲選自下組藍(lán)氏賈第蟲、溶組織內(nèi)阿米巴和隱孢子蟲。26、預(yù)防和治療炎癥性腸病的方法，其包括向患有所述疾病的患者施用含有從單子葉植物種子獲得的重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)的口服制劑。27、權(quán)利要求26的方法，其中所述炎癥性腸病選自下組克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎。28、權(quán)利要求26的方法，其中所述重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)選自下組乳鐵蛋白、溶菌酶及其組合。29、權(quán)利要求28的方法，其中所述口服制劑進(jìn)一步包含一種或多種獨(dú)立地選自下組的附加蛋白質(zhì)防衛(wèi)素、組織蛋白酶抑制素和乳過氧化物酶。30、權(quán)利要求26的方法，其中所述口服制劑為溶液的形式。31、權(quán)利要求26的方法，其中所述口服制劑為營養(yǎng)棒的形式。32、權(quán)利要求26的方法，其中所述口服制劑為適于在水中重構(gòu)的粉末形式。33、促進(jìn)患者的消化道中腸內(nèi)益生菌群生長的方法，其包括向所述患者施用含有從單子葉植物種子獲得的重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)的口服制劑。34、權(quán)利要求33的方法，其中所述重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)選自下組乳鐵蛋白、溶菌酶及其組合。35、權(quán)利要求34的方法，其中所述口服制劑進(jìn)一步包含一種或多種獨(dú)立地選自下組的附加蛋白質(zhì)防衛(wèi)素、組織蛋白酶抑制素和乳過氧化物酶。36、權(quán)利要求33的方法，其中所述口服制劑為溶液的形式。37、權(quán)利要求33的方法，其中所述口服制劑為營養(yǎng)棒的形式。38、權(quán)利要求33的方法，其中所述口服制劑為適于在水中重構(gòu)的粉末形式。39、口服補(bǔ)水溶液，其包括-重組體人乳鐵蛋白，含量為約0.5至約5.0g/L;和重組體人溶菌酶，含量為約0.1至約1.0g/L，其中所述口服補(bǔ)水溶液具有約200至約310mOsm/L的滲透性。40、權(quán)利要求39的口服補(bǔ)水溶液，其中所述重組體人乳鐵蛋白和重組體人溶菌酶為從單子葉植物種子中獲得的。41、粉末形式的口服補(bǔ)水制劑，其包含重組體人乳鐵蛋白和重組體人溶菌酶，其中，當(dāng)與水重構(gòu)以提供口服補(bǔ)水溶液時，該口服補(bǔ)水溶液提供重組體人乳鐵蛋白，含量為約0.5至約5.0g/L;和重組體人溶菌酶，含量為約O.l至約l.Og/L，其中所述口服補(bǔ)水溶液具有約200至約310mOsm/L的滲透性。42、權(quán)利要求41的口服補(bǔ)水制劑，其中所述重組體人乳鐵蛋白和重組體人溶菌酶為從單子葉植物種子中獲得的。43、液態(tài)濃縮物形式的口服補(bǔ)水制劑，其包含重組體人乳鐵蛋白和重組體人溶菌酶，其中，當(dāng)與水重構(gòu)以提供口服補(bǔ)水溶液時，該口服補(bǔ)水溶液提供重組體人乳鐵蛋白，含量為約0.5至約5.0g/L;和重組體人溶菌酶，含量為約0.1至約1.0g/L，其中所述口服補(bǔ)水溶液具有約200至約310mOsm/L的滲透性。44、權(quán)利要求43的口服補(bǔ)水制劑，其中所述重組體人乳鐵蛋白和重組體人溶菌酶為從單子葉植物種子中獲得的。45、治療腹瀉的方法，其包括向腹瀉患者施用權(quán)利要求39、41或43的口服補(bǔ)水溶液。全文摘要本發(fā)明涉及包括一種或多種重組產(chǎn)生的人乳蛋白質(zhì)的口服制劑。本發(fā)明的制劑可用于預(yù)防已暴露于或?qū)⒈┞队谝环N或多種已知引起腸道病癥的媒介物中的患者腹瀉的發(fā)作，和預(yù)防從該病中恢復(fù)的患者腹瀉的復(fù)發(fā)。所述制劑也可用于治療炎性腸疾病，包括克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎。所述制劑也可按照用于促進(jìn)人類患者中健康腸內(nèi)菌群發(fā)育的方法有益地施用于人類患者。文檔編號A01H5/00GK101494970SQ200680040598公開日2009年7月29日申請日期2006年9月28日優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日發(fā)明者弗蘭克·E·哈杰,迪莉婭·貝瑟爾,寧黃申請人:文特里亞生物科學(xué)公司