一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基及其配制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于人參組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng) 基，還涉及一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基配制方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人參是被子植物門雙子葉植物綱離瓣花亞綱五加科，多年生草本植物，生長于密 林，多分布于黑龍江、吉林、遼寧和河北北部深山中，含有10多種人參皂甙，以及人參快醇、 多種氨基酸和維生素，是名貴的中草藥材。
[0003] 但是目前人參組織培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)時間長，愈傷組織生長緩慢，不能滿足市場、 科研和物種保護(hù)的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于現(xiàn)有技術(shù)存在上述問題，本發(fā)明提供一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，該 培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸）、6-BA(6-芐氨基腺嘌 呤）、AgN0 3(硝酸銀）、瓊脂粉、白砂糖，本發(fā)明提供的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基具有誘 導(dǎo)率高、誘導(dǎo)時間短、成本低的優(yōu)點(diǎn)。
[0005] -種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2，4-D (2,4_二氯苯氧乙酸）、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、AgN03(硝酸銀）、瓊脂粉、白砂糖，硝酸銀可 以調(diào)節(jié)人參細(xì)胞內(nèi)酶的活性，加快人參愈傷組織誘導(dǎo)和生長。
[0006] 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為0.5-2mg/L、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為 0.01-0.2 mg/L、AgN03(硝酸銀）的濃度為0.01-0.04 mg/L、瓊脂粉的濃度為8-12g/L、白砂 糖的濃度為25-35g/L。
[0007] 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為0.8-1.511^/1、6-84(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度 為0 · 7-0 · 13 mg/L、AgN03(硝酸銀）的濃度為0 · 02-0 · 03 mg/L、瓊脂粉的濃度為9-1 lg/L、白 砂糖的濃度為28-32g/L。
[0008] 快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.5。
[0009] 快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的pH值為6.0,微酸性的培養(yǎng)環(huán)境有利于人參愈傷 組織的誘導(dǎo)生長。
[0010] 快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基采用的外植體是人參莖尖，還可以是根尖、葉片和 葉柄。
[0011] -種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的配制方法，其包括以下步驟： 步驟S10溶解配制培養(yǎng)基:用蒸餾水溶解MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基各成分，并添加2,4-D(2,4-二氯 苯氧乙酸）、6-BA( 6-芐氨基腺嘌呤）、AgN03 (硝酸銀）、瓊脂粉、白砂糖； 步驟S20高溫滅菌:將步驟S10配制好的培養(yǎng)基放于高壓滅菌鍋中，于120~121°C高溫滅 菌20~21分鐘，冷卻凝固。
[0012] 步驟S10還包括步驟SI 1調(diào)節(jié)pH值:使用HCL和Κ0Η滴定調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至6.0。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
[0014] 實(shí)施例一:配制快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基。
[0015]根據(jù)表1所示的MS培養(yǎng)基配方以及表2所示的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基配方， 制備本發(fā)明所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基。
[0016 ]用天平分別稱取MS培養(yǎng)基中的各成分以及2，4-D、6-BA、AgN03、瓊脂粉、白砂糖，置 于三角瓶中，加入適量純化水，攪拌溶解，定容至l〇〇〇mL，并調(diào)節(jié)pH值至5.8。將三角瓶封口， 置于高壓滅菌鍋中，于121°C滅菌21min，然后于超凈工作臺中，將快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培 養(yǎng)基分裝至組織培養(yǎng)瓶中，自然冷卻，待其凝固后將組織培養(yǎng)瓶封口，備用。
[0017] 表1 MS培養(yǎng)基的成分及其用量。
[0018] 表2快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的成分及其用量。
[0019] 實(shí)施例二:本發(fā)明所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的測試。
[0020] 根據(jù)表1所示的MS培養(yǎng)基配方以及表3所示的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基配方， 參照實(shí)施例一所述的培養(yǎng)基制備方法，分別制備各試驗組、對照組的快速誘導(dǎo)人參愈傷組 織培養(yǎng)基。
[0021 ]表3快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的成分及其用量。
[0022] 從生長健康的人參母株上采集正常生長的莖尖作為外植體，將采集回來的莖尖用 自來水沖洗干凈，置于超凈工作臺中，用濃度為75%酒精浸泡30秒，取出，用無菌水沖洗4次， 再使用濃度為0.1%的升汞液浸泡8分鐘，浸泡期間不斷輕輕搖晃，再用無菌水沖洗4次，將與 升萊液接觸的傷口部分切除，并將剩下部分切成5_米見方的外植體塊。
[0023] 將外植體塊接種到上述制備好的各試驗組、對照組的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng) 基中，每塊外植體相互間隔1.2厘米，接種完畢后將人參外植體塊置于黑暗環(huán)境中培養(yǎng)2天， 培養(yǎng)溫度為25°C。
[0024] 暗培養(yǎng)結(jié)束后將人參外植體塊置于人工氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件如下:光照 時間為12/12小時(光照/黑暗），光照強(qiáng)度為20001UX，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)25天后統(tǒng)計誘 導(dǎo)率和平均誘導(dǎo)時間，統(tǒng)計結(jié)果如表4所示。
[0025] 表4快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基測試結(jié)果。
[0026]由表4的試驗結(jié)果可知，采用本發(fā)明所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，能夠顯 著提高人參誘導(dǎo)率，縮短誘導(dǎo)時間。試驗組5為采用本發(fā)明所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織 培養(yǎng)基平均誘導(dǎo)時間為15.21天，其中最快12天可誘導(dǎo)出人參愈傷組織，另外從對照組3可 以看出硝酸銀單獨(dú)添加時并不能誘導(dǎo)人參愈傷組織。從試驗結(jié)果還可以看出，2,4-D和6-BA 的用量太多會抑制人參愈傷組織誘導(dǎo)。
【主權(quán)項】
1. 一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其特征在于，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添 加2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸）、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）、AgN0 3(硝酸銀）、瓊脂粉、白砂糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其特征在于，2，4-D( 2，4-二氯苯氧乙酸）的濃度為0.5-211^/1、6-84(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為0.01-0.2 11^/1^、 八8如3(硝酸銀）的濃度為0.01-0.04 11^/1、瓊脂粉的濃度為8-128/1、白砂糖的濃度為25-35g/L〇3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其特征在于，2，4-D( 2，4-二氯苯氧乙酸）的濃度為0.8-1.5mg/L、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤）的濃度為0.07-0.13 mg/L、 八8如3(硝酸銀）的濃度為0.02-0.03 11^/1、瓊脂粉的濃度為9-118/1、白砂糖的濃度為28-32g/L〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3其中之一所述的一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其特征在 于，所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.5。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至3其中之一所述的一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其特征在 于，所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的pH值為6.0。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至3其中之一所述的一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，其特征在 于，所述的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基采用的外植體是人參莖尖，還可以是根尖、葉片和 葉柄。7. -種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于，其包括以下步驟： 步驟S10溶解配制培養(yǎng)基：用蒸餾水溶解MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基各成分，并添加2，4-D(2，4-二氯 苯氧乙酸）、6-BA( 6-芐氨基腺嘌呤）、AgN03 (硝酸銀）、瓊脂粉、白砂糖； 步驟S20高溫滅菌:將步驟S10配制好的培養(yǎng)基放于高壓滅菌鍋中，于120~121°C高溫滅 菌20~21分鐘，冷卻凝固。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于， 所述的步驟S10還包括步驟SI 1調(diào)節(jié)pH值:使用HCL和KOH滴定調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至6.0。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基，屬于人參組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，該培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）、AgNO3（硝酸銀）、瓊脂粉、白砂糖，本發(fā)明提供的快速誘導(dǎo)人參愈傷組織培養(yǎng)基具有誘導(dǎo)率高、誘導(dǎo)時間短、成本低的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105532466
【申請?zhí)枴緾N201610011349
【發(fā)明人】何志鏗
【申請人】佛山市金藍(lán)領(lǐng)教育科技有限公司
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月9日