專(zhuān)利名稱(chēng)：生產(chǎn)赤蘚糖醇的Moniliella菌株的制作方法
赤蘚糖醇是一種糖醇，其可發(fā)現(xiàn)于地衣，大麻葉及蘑菇中，基還可在發(fā)酵食品如葡萄酒，大豆醬油或米酒中調(diào)味(Sasaki，T.(1989)赤蘚糖醇的生產(chǎn)技術(shù)，Nippon Nogeikagaku Kaishi 631130-1132)。赤蘚糖醇是一種四碳多醇，其具有多種性質(zhì)如甜味(大約為蔗糖的70-80％)，對(duì)牙齒無(wú)害，非常低的熱量值(0.3kcal/g，蔗糖的十分之一)，無(wú)致癌性且不象其它多醇，很少引起胃腸道不適(Harald和Bruxelles(1993)Starch/Starke 45400-405)。
傳統(tǒng)的赤蘚糖醇工業(yè)生產(chǎn)是通過(guò)將催化劑如氫與鎳加入原料糖中，在高溫高壓環(huán)境下生產(chǎn)。另一種方法是通過(guò)化學(xué)還原原料如中酒石酸鹽(Kent，P.W.和Wood，K.R.(1964)J.Chem.Soc.2493-2497)或赤蘚糖(Otey，F(xiàn).H.和Sloan，J.W.(1961)Ind.Eng.Chem.53267)以獲得赤蘚糖醇。另外，赤蘚糖醇可通過(guò)許多微生物生產(chǎn)，這些微生物包括高嗜高滲酵母例如畢赤氏酵母(Pichia)，假絲酵母(Candida)，球擬酵母(Torulopsis)，三角酵母(Trigonopsis)，Moniliella，短柄霉(Aureobasidium)，及絲孢酵母(Trichosporon)菌種(Onishi，H.(1967)Hakko Kyokaish 25495-506；Hajny等(1964)Appl.Microbiol.12240-246；Hattor，K.和Suziki，T.(1974)Agric.Biol.Chem.381203-1208；Ishizuka，H.等(1989)J.Ferment.Bioeng.68310-314)。
本發(fā)明涉及分離的Moniliella菌種的菌株，其具有增強(qiáng)的將葡萄糖轉(zhuǎn)化為赤蘚糖醇的能力，這種菌株在最佳條件下能以至少大約35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％或更高的轉(zhuǎn)化率從葡萄糖中生產(chǎn)赤蘚糖醇。
本發(fā)明的菌株包括天然來(lái)源的Moniliella分離株；及Moniliella菌株的突變體例如美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中登記號(hào)為PTA-1227，PTA-1228，PTA-1229，PTA-1230及PTA-1232的Moniliella菌株。一特殊的突變體菌株是分離株N61188-12，保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，登記號(hào)PTA-2862。
本文所用術(shù)語(yǔ)“突變體”是指一種菌株，其遺傳組成與參照菌株或親代菌株至少有一個(gè)核苷酸不同，例如取代，插入或缺失。本發(fā)明的突變體可通過(guò)許多方法產(chǎn)生，一種方法是選擇相對(duì)于親代菌株有增高的赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率的菌株，此菌株可通過(guò)隨機(jī)誘變親代菌株而獲得，例如通過(guò)化學(xué)誘變劑，轉(zhuǎn)座子或輻照。另外，本發(fā)明的突變體菌株可包括重組核酸序列，例如，突變體可以是一種含有一額外的核酸序列的菌株，所述序列例如為轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導(dǎo)或以其他方式插入親代菌株細(xì)胞中的序列。此額外的核酸序列可編碼一般性表達(dá)或條件表達(dá)的多肽?；蛘撸祟~外的核酸序列可編碼能改變細(xì)胞生理學(xué)的核酸序列，例如反義，核酶，或其它核酸序列。另一種情況中，插入的核酸插在內(nèi)源性基因中并改變(例如增強(qiáng)或破壞)其功能。例如，插入的核酸可以是失活內(nèi)源性基因的剔除構(gòu)建體；或是提高內(nèi)源性基因轉(zhuǎn)錄的人工增強(qiáng)子或啟動(dòng)子。這類(lèi)突變可破壞親代菌株輸出、同化或消耗赤蘚糖醇或甘露糖醇的能力。
本發(fā)明還涉及一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，該方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明的Moniliella菌株，例如一種增強(qiáng)的突變體；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇，例如從上清或細(xì)胞沉淀中純化。
本發(fā)明的一或多個(gè)實(shí)施方案在附圖
及下文中加以詳細(xì)闡述，本發(fā)明的其它特點(diǎn)，目的及優(yōu)點(diǎn)從以下闡述，附圖及權(quán)利要求中將顯而易見(jiàn)。
真菌Moniliella能發(fā)酵簡(jiǎn)單糖產(chǎn)生赤蘚糖醇，赤蘚糖醇是許多烹飪法使用的非常好的調(diào)味品。使用篩選和誘變鑒別能高效生產(chǎn)赤蘚糖醇的改良的Moniliella菌株，這種菌株可理想地用于大規(guī)模生產(chǎn)赤蘚糖醇，這一點(diǎn)通過(guò)本發(fā)明所舉例說(shuō)明的方法獲得。增強(qiáng)的赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株的分離如申請(qǐng)日2000年6月2日的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)09/585,926所述可從天然來(lái)源中獲得Moniliella分離株。例如，Monilella分離株可得自高糖含量的天然來(lái)源，包括蜂蜜，蜜餞及花粉?；谄鋵⑵咸烟寝D(zhuǎn)化為赤蘚糖醇的能力及其各種形態(tài)學(xué)和生理學(xué)特性鑒別各菌株，文中所用的術(shù)語(yǔ)“葡萄糖至赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率”是指產(chǎn)生的赤蘚糖醇量除以消耗的葡萄糖的量，所得比值以百分?jǐn)?shù)表示，真菌菌株的葡萄糖至赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率可通過(guò)以下方法計(jì)算，此菌株首先在50ml燒瓶中的含有30％葡萄糖和1％酵母提取物(初始細(xì)胞密度1×105個(gè)細(xì)胞/ml)的10ml肉湯中在搖床中以150rpm，在30℃培養(yǎng)6天，然后確定培養(yǎng)基中赤蘚糖醇濃度及葡萄糖濃度。1g葡萄轉(zhuǎn)化為0.3g赤蘚糖醇則轉(zhuǎn)化率為30％。在4％麥芽提取物，0.5％酵母提取物瓊脂上，在20℃培養(yǎng)10天確定形態(tài)學(xué)特征。參見(jiàn)由Kurtzman等編輯的《酵母分類(lèi)學(xué)研究》，第4版，第785頁(yè)，Elsevier，阿姆斯特丹(1998)。
Moniliella菌株突變體可通過(guò)Ishizuka等(1989)J.Ferment.Bioeng.68310-314所述誘變法，或所述方法的改進(jìn)方法(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No.5,036,011)獲得。如下闡述了一種用N-甲基-N-亞硝基胍(NTG)誘變Moniliella細(xì)胞的變化方法，將Moniliella細(xì)胞接種在具有30％葡萄糖和1％酵母提取物的肉湯中，并在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)過(guò)夜。此培養(yǎng)物以1∶100稀釋在含有30％葡萄糖的10ml肉湯中，并在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)1天。此培養(yǎng)肉湯以3000rpm離心15分鐘，以形成細(xì)胞沉淀并棄去上清。此細(xì)胞沉淀用10ml無(wú)菌0.1M pH7.0磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌，離心(3000rpm，15分鐘)懸浮液并再棄去上清。細(xì)胞重懸浮于具有150μg/ml NTG的PBS中10分鐘。
在用NTG處理后，Moniliella細(xì)胞在葡萄糖溶液中培養(yǎng)3小時(shí)，然后適當(dāng)稀釋培養(yǎng)物并涂布于含有65％葡萄糖的培養(yǎng)基上，在30℃培養(yǎng)6天。隨機(jī)選擇菌落，接種于含30％葡萄糖的肉湯中，并在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)過(guò)夜。將過(guò)夜培養(yǎng)物的1∶100稀釋液用于接種30％葡萄糖溶液(10ml)，在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)4天，此培養(yǎng)物的培養(yǎng)基然后以12000rpm離心10分鐘，適當(dāng)稀釋上清，并用DNS法(見(jiàn)下文)測(cè)定剩余葡萄糖量。具有較高葡萄糖消耗量(即低葡萄糖剩余量)的培養(yǎng)物被進(jìn)一步分析以確定赤蘚糖醇產(chǎn)量，下文所述HPLC法可用于確定赤蘚糖醇產(chǎn)量。表明有高赤蘚糖醇產(chǎn)量的培養(yǎng)物進(jìn)行進(jìn)一步檢定，例如，獲得用于培養(yǎng)的各個(gè)菌落，如上述再培養(yǎng)，并再分析。選擇的菌落根據(jù)這些方法的額外誘變循環(huán)可加以改良。測(cè)定剩余葡萄糖收集4天培養(yǎng)物肉湯，并以12000rpm離心10分鐘。適當(dāng)稀釋上清，1ml每份稀釋液加入0.5ml DNS(二硝基水楊酸)試劑中。制備DNS試劑(例如a.1％3，5-二硝基水楊酸(DNS)；b.0.2％苯酚；c.0.05％NaHSO3或0.025％Na2S2O3；d.1％NaOH；e.0.5％酒石酸鉀鈉四水合物)，并根據(jù)Miller，G.L.(1958)分析化學(xué)(Anal.Chem.)31426-428所述使用。此混合物充分混合后在100℃保溫5分鐘。在室溫下冷卻后，加入9ml水并確定在540nm的吸光度(OD540nm)。在540nm的吸光度用于與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相比確定葡萄糖濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是通過(guò)測(cè)定各種濃度純葡萄糖而得到的。測(cè)定赤蘚糖醇濃度上清中赤蘚糖醇量可通過(guò)HPLC及TLC確定，以例如確定菌株生產(chǎn)赤蘚糖醇能力。HPLC分析使用Hewlett Packard H4033A分析儀，在Ion-300層析柱上，用0.1N硫酸作為流動(dòng)相，流速0.4ml/min，溫度設(shè)定為75℃。TLC分析用的是Neissner等所述方法(Neissner等，1980，Herstellung，aanalysc und DC-trennung von fettsaureerythritpartialestern.FETTE SEIFEN ANSTRICHMITTEL.8210-16)，在用4％硼酸漂洗Kieselgel 60F254(Merck)之后，在使用之前將此凝膠在培養(yǎng)器內(nèi)在105℃加熱20分鐘。展開(kāi)溶劑是甲基乙基甲酮∶丙酮∶水(100∶10∶10(體積比))，顯色劑是濃縮硫酸中的KMnO4。
通過(guò)HPLC或TLC純化自上清的赤蘚糖醇可通過(guò)提取進(jìn)一步純化，然后減壓干燥。根據(jù)Shindou等(Shindou等，1989，J.Agric.FoodChem.271474-1476)的方法，將進(jìn)一步純化的產(chǎn)物及赤蘚糖醇標(biāo)準(zhǔn)乙?；３嗵\糖醇標(biāo)準(zhǔn)可商購(gòu)，例如購(gòu)于Merck，德國(guó)。所得樣本可通過(guò)GC-MS分析以確定再純化產(chǎn)物是否等同于標(biāo)準(zhǔn)樣本。大規(guī)模生產(chǎn)赤蘚糖醇通過(guò)以下所提供的具體實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)鑒別優(yōu)選的pH，溫度和生長(zhǎng)和發(fā)酵所需的碳源，可以?xún)?yōu)化突變Moniliella菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量。相似的分析可用于優(yōu)化通氣，攪拌速度，培養(yǎng)體積及培養(yǎng)時(shí)間。
為大規(guī)模生產(chǎn)赤蘚糖醇，將保存在甘油中的0.2ml Moniliella細(xì)胞加入500ml燒瓶中的50ml肉湯中，并在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)大約24小時(shí)。用2ml的此培養(yǎng)物接種第二個(gè)500ml燒瓶中的50ml肉湯。第二個(gè)培養(yǎng)物在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)48小時(shí)。用第二個(gè)培養(yǎng)肉湯接種5L發(fā)酵罐(NBS.Edison，New Jersey，美國(guó))中的2L肉湯。培養(yǎng)條件如下通氣1VVM；攪拌速度500rpm；溫度30℃；培養(yǎng)時(shí)間5-7天。為此，肉湯可由30％，35％，40％，45％，或50％葡萄糖與1％酵母提取物一起組成。另外，KM72和KM72F(Shin Etsu，Shin-Etsu Chemical Co.，Ltd.6-1，Ohtemachi 2-chome，Chiyoda-ku，東京，日本)可用作消沫劑。純化赤蘚糖醇離心發(fā)酵罐中的培養(yǎng)基以分離培養(yǎng)物上清與沉淀細(xì)胞。通過(guò)活性碳(例如，可得自地方供應(yīng)商的粉末碳)將上清脫色。將脫色的上清通過(guò)連續(xù)經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，DIAION，WA30(Mitsubishi)及陰離子交換樹(shù)脂，AMBERLITE IR 120NA(Rohm and HaasCompany)脫鹽并脫蛋白。所得溶液用以下裝置濃縮EYELA RotaryVacuum Evaporator N-N系列；EYELA Waterbath SB-450；及EYELA，Aspirator A-3(Tokyo Rikakikai Co.LTD)，濃縮的溶液在室溫結(jié)晶。晶體任選地用含水乙醇及水(例如在4℃)沖洗或在其中重結(jié)晶以除去痕量雜質(zhì)。檢定赤蘚糖醇純化為證實(shí)純化產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)，將純化產(chǎn)物的NMR譜與標(biāo)準(zhǔn)赤蘚糖醇的NMR譜相對(duì)比，標(biāo)準(zhǔn)赤蘚糖醇例如可購(gòu)自MerckCo.(NJ.USA)，或其它商品供應(yīng)商。樣本溶于100％D2O中并置于NMR光譜儀(Bruker AM-500，德國(guó))中。以下條件用于1H NMR譜400.135MHz；脈沖長(zhǎng)度4.0μs；取數(shù)時(shí)間1.245秒；脈沖延遲1秒；化學(xué)位移D2O作為0ppm。以下條件用于13C NMR譜L100.536MHz；脈沖長(zhǎng)度5.0μs；取數(shù)時(shí)間0.623秒；脈沖延遲2秒；化學(xué)位移10mM DSS作為0ppm。
本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)以下特異實(shí)施例可獲得本發(fā)明的真菌突變體，并用其最大程度地生產(chǎn)赤蘚糖醇，以下實(shí)施例只是舉例說(shuō)明本發(fā)明而非限制本發(fā)明范圍。本文所引證的所有文獻(xiàn)均并入?yún)⒖肌?br> 實(shí)施例分離Moniliella突變體生產(chǎn)赤蘚糖醇的真菌Moniliella PTA-1230用NTG通過(guò)上述方法誘變。重復(fù)進(jìn)行誘變步驟，即前一輪分離的改良赤蘚糖醇生產(chǎn)菌用作下一輪的親代菌株。在6輪誘變后分離出N61188-12突變菌株(ATCC保藏號(hào)PTA-2862)。
N61188-12突變菌株和親代PTA-1230均在含有35％葡萄糖和1％酵母提取物的肉湯中，在搖床上以150rpm，在25℃，30℃，34℃和37℃培養(yǎng)6天。在每個(gè)溫度，對(duì)N61188-12突變菌株而言葡萄糖至赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率分別為43.9％，61.4％，17.8％，和2.2％，對(duì)親代PTA-1230而言轉(zhuǎn)化率分別為18.9％，30,5％，17.9％和7.7％。在25℃和30℃，N61188-12菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量是PTA-1230的至少2倍。觀測(cè)到的N61188-12菌株61.4％的產(chǎn)量是意想不到的，因?yàn)槠涿黠@地接近完全葡萄糖至赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率的理論上限68％。
為檢定之目的，純赤蘚糖醇用上述方法得自N61188-12菌株的發(fā)酵罐培養(yǎng)物。得自N61188-12的純赤蘚糖醇通過(guò)上述核磁共振分析，其波譜與標(biāo)準(zhǔn)赤蘚糖醇的波譜一致表明回收、純化及結(jié)晶的產(chǎn)物是所需赤蘚糖醇。優(yōu)化生產(chǎn)赤蘚糖醇的條件在變化pH，溫度(見(jiàn)上述)及碳源的條件下，平行確定親代PTA-1230與N61188-12菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量。
pH親代PTA-1230和N61188-12菌株在含有35％葡萄糖和1％酵母提取物的各種pH值肉湯中，在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)6天。在pH為3.0，4.0，5.0，6.0及7.0時(shí)，PTA-1230的赤蘚糖醇的產(chǎn)量分別為31.2％，39.3％，38.4％，34.4％和34.2％，而N61188-12菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量分別為56.6％，59.4％，58.5％，60.3％和57.3％。
葡萄糖濃度制備含有20％，30％，35％，40％和50％葡萄糖與1％酵母提取物的培養(yǎng)肉湯。PTA-1230和N61188-12菌株均在上述肉湯中在搖床上以150rpm在30℃培養(yǎng)6天。在每個(gè)葡萄糖濃度，PTA-1230菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量分別為40.6％，37.1％，34.5％，29.4％和19.2％，而N61188-12菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量分別為56.3％；57.5％，62.8％，55.6％和35.8％(表1)。PTA-1230菌株的最大產(chǎn)量是用20％葡萄糖溶液獲得，隨著葡萄糖濃度提高，產(chǎn)量降低。N61188-12菌株的最大產(chǎn)量是用含35％葡萄糖的肉湯獲得，得自其它葡萄糖濃度如20％，30％和40％的葡萄糖溶液的產(chǎn)量彼此相近，而得自50％葡萄糖溶液的產(chǎn)量降低至35.8％。在高葡萄糖濃度例如40％和50％，N61188-12菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量是PTA-1230產(chǎn)量的近2倍。這些結(jié)果表明N61188-12菌株與野生型PTA-1230菌株相比，赤蘚糖醇的生產(chǎn)能力意想不到地改良了。
碳源制備含有作為碳源的35％葡萄糖，麥芽糖糊精、麥芽糖、蔗糖、果糖或乳糖，及作為氮源的1％酵母提取物的培養(yǎng)肉湯。PTA-1230和N61188-12菌株均在以上肉湯中在30℃在搖床上以150rpm培養(yǎng)6天。在含有葡萄糖，麥芽糖糊精，麥芽糖，蔗糖，果糖或乳糖的肉湯中培養(yǎng)，PTA-1230菌株分別產(chǎn)生120.8，44.5，0，154.0，111.0及0g/L赤蘚糖醇，而N61188-12菌株分別產(chǎn)生222.0，15.1，22.8，239.4，211.4及0g/L赤蘚糖醇。這些結(jié)果表明對(duì)這二個(gè)真菌菌株而言，蔗糖具有最佳的轉(zhuǎn)化率，接下來(lái)是葡萄糖，然后是果糖。值得注意的是，PTA-1230菌株不能利用麥芽糖和乳糖生產(chǎn)赤蘚糖醇，而N61188-12菌株能利用麥芽糖，但不能利用乳糖生產(chǎn)赤蘚糖醇。對(duì)PTA-1230菌株而言，用蔗糖作碳源比用葡萄糖作碳源獲得的赤蘚糖醇產(chǎn)量高27.5％，而對(duì)N61188-12菌株而言，相同條件下赤蘚糖醇產(chǎn)量只高9％。
副產(chǎn)物積累監(jiān)測(cè)在前述碳源中代謝副產(chǎn)物-甘油，戊五醇及乙醇的濃度。例如，當(dāng)葡萄糖用作碳源時(shí)，PTA-1230菌株培養(yǎng)肉湯中甘油和戊五醇的濃度分別是36.4和17.2g/L，而N61188-12菌株培養(yǎng)肉湯中沒(méi)有甘油，且戊五醇的含量?jī)H為3.8g/L。其它碳源的結(jié)果見(jiàn)表1。
在用葡萄糖作碳源發(fā)酵PTA-1230菌株期間，沒(méi)有乙醇產(chǎn)生。但在其它碳源中，PTA-1230及N61188-12菌株在接種后開(kāi)始5天均有乙醇產(chǎn)生，然而在第6天乙醇耗盡。唯一的例外是當(dāng)果糖用于N61188-12培養(yǎng)時(shí)，在第6天仍有一些殘余乙醇(0.7g/L)?？偠灾@些結(jié)果表明使用蔗糖培養(yǎng)N61188-12菌株產(chǎn)生的赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率高而不累積副產(chǎn)物。
表1PTA-1230和N61188-12菌株的赤蘚糖醇產(chǎn)量及副產(chǎn)物產(chǎn)量
每種碳源以35％存在；氮源為1％酵母提取物；并以150rpm培養(yǎng)6天。
突變菌株N61188-12的總性質(zhì)親代PTA-1230菌株和突變體N61188-12菌株在各種條件下生長(zhǎng)并對(duì)比。其細(xì)胞形態(tài)基本相同，然而在平板上，突變菌株只生長(zhǎng)為PTA-1230菌株大小的1/4。此兩種菌株具有不同的生理學(xué)性質(zhì)，這些不同反映在其發(fā)酵及同化不同糖的能力中。突變體N61188-12菌株能發(fā)酵半乳糖(表2)，而PTA-1230菌株不能。另外，與PTA-1230菌株相反N61188-12菌株不能同化赤蘚糖醇和甘露糖醇(表3)。
表2.各種碳源的發(fā)酵
表3 PTA-1230和N61188-12菌株在不同碳源的同化分析
W*是指弱生長(zhǎng)和對(duì)碳源的meager同化。
細(xì)胞密度在各種條件如溫度，pH，碳源及葡萄糖濃度下，N61188-12菌株培養(yǎng)肉湯的濁度(A660)小于PTA-1230菌株的培養(yǎng)肉湯的濁度。除用麥芽糖及乳糖作碳源外，整體上N61188-12菌株培養(yǎng)肉湯的濁度是PTA-1230菌株的31％-77％。在大多數(shù)情況中，N61188-12菌株的濁度是PTA-1230菌株濁度的50％以下。因此，這意味著N61188-12菌株降低了用于細(xì)胞生長(zhǎng)的碳源比例，而代以將碳源高比例地轉(zhuǎn)化為赤蘚糖醇。其它實(shí)施方案已闡述了本發(fā)明的許多實(shí)施方案，然而應(yīng)知道在不偏離本發(fā)明精神及范圍之內(nèi)可以做各種修改。由此，其它實(shí)施方案在以下權(quán)利要求范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種分離的Moniliella菌株，其中此菌株以至少大約45％的轉(zhuǎn)化率將葡萄糖轉(zhuǎn)化為赤蘚糖醇。
2.權(quán)利要求1的分離的菌株，其中此菌株以至少大約50％的轉(zhuǎn)化率將葡萄糖轉(zhuǎn)化為赤蘚糖醇。
3.權(quán)利要求2的分離的菌株，其中此菌株以至少大約60％的轉(zhuǎn)化率將葡萄糖轉(zhuǎn)化為赤蘚糖醇。
4.權(quán)利要求1的分離的菌株，其中此菌株是Moniliella菌株P(guān)TA-1227的突變體。
5.權(quán)利要求1的分離的菌株，其中此菌株是Moniliella菌株P(guān)TA-1228的突變體。
6.權(quán)利要求1的分離的菌株，其中此菌株是Moniliella菌株P(guān)TA-1229的突變體。
7.權(quán)利要求1的分離的菌株，其中此菌株是Moniliella菌株P(guān)TA-1230的突變體。
8.權(quán)利要求1的分離的菌株，其中此菌株是Moniliella菌株P(guān)TA-1232的突變體。
9.權(quán)利要求7的分離的菌株，其中此菌株是N61188-12，保藏在美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，登記號(hào)為PTA-2862。
10.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求1的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
11.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求2的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
12.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求3的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
13.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求4的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
14.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求5的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
15.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求6的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
16.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求7的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
17.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求8的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
18.一種生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求9的Moniliella菌株；并從培養(yǎng)物中純化赤蘚糖醇。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了以至少大約45%的轉(zhuǎn)化率將葡萄糖轉(zhuǎn)化為赤蘚糖醇的Moniliella菌種的分離株,以及從這種菌株生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法。
文檔編號(hào)C12P7/18GK1369549SQ0110376
公開(kāi)日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2001年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月12日
發(fā)明者朱文深, 林錫杰, 溫秋燕, 黃章誠(chéng) 申請(qǐng)人:食品工業(yè)發(fā)展研究所