專利名稱：艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達miRNA群的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及艾滋病病毒靶細胞⑶4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達miRNA 群。具體的講是在人microRNA組范圍內(nèi)篩選艾滋病相關(guān)miRNA，利用細胞模型和基因芯 片技術(shù)相結(jié)合的方法建立的艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達 miRNA群，屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
microRNA(miRNA)是新近發(fā)現(xiàn)的一類約有18-24個核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分 子單鏈RNA，通過不完全互補的方式與編碼蛋白mRNA的3’端非編碼區(qū)結(jié)合，引起靶mRNA 的降解、活性降低或翻譯受抑，從而在轉(zhuǎn)錄后水平對基因表達進行調(diào)控。miRNA在細胞的 個體發(fā)育、增殖、凋亡、分化和應(yīng)激中扮演著重要的角色，與腫瘤、心臟病、糖尿病和艾滋病 等多種疾病都有著密切聯(lián)系，某些miRNA的產(chǎn)生過程與HIV-1 (human immunodeficiency virus-type 1，人類免疫缺陷病毒)的生活周期相關(guān)聯(lián)。因此推測在艾滋病的發(fā)生過程中， 存在特征性的miRNA表達譜。HIV-1天然的靶細胞⑶4+T細胞的活化和增殖是HIV-1得以大量繁殖和廣泛播散 的先決條件，1996年Levine等人意外發(fā)現(xiàn)，經(jīng)同時包被在磁珠上的⑶3、⑶28抗體(“⑶3/ CD28 beads")刺激后，活化、增殖的CD4+T細胞，反而獲得了既能抵抗感染又能清除病毒 的能力——來自HIV-1感染者的CD4+T細胞活化后，能逐漸清除已感染的病毒，來自健康成 人的CD4+T細胞活化后，能抵抗HIV-1而不被感染。我們以此特殊效應(yīng)為基礎(chǔ)，同時以高度 易感并促進病毒增殖的PHA/IL-2活化細胞為反證，構(gòu)建細胞模型并篩選出艾滋病相關(guān)的 miRNA表達圖譜，用以直接篩選安全有效的抗艾滋細胞藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表 達miRNA群。本發(fā)明采用高通量的人microRNA芯片，通過比較未刺激、⑶3/⑶28磁珠刺激及 PHA/IL-2刺激三種狀態(tài)的⑶4+T細胞miRNA表達差異，篩選得到一組艾滋病病毒靶細胞 ⑶4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達miRNA群，共包含12個miRNA，其部分或全部組合 作為排除抗艾滋細胞藥物的標志；該群miRNA在CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1狀態(tài)時低表 達，miRNA群中的12個miRNA的名稱及序列見表1 ；表1易感和支持HIV-1的特異表達miRNA群(共12個miRNA)
權(quán)利要求
一組艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV 1的特異表達miRNA群，其特征在于該特異表達miRNA群包含的miRNA名稱分別為hsa let 7b、hsa let 7c、hsa let 7g、hsa let 7i、hsa mir 140 3p、hsa mir 150、hsa mir 181a、hsa mir 22、hsa mir 26a、hsa mir 26b、hsa mir 342 3p、hsa mir 342 5p，其部分或全部組合作為排除抗艾滋細胞藥物的標志；該群miRNA在CD4+T細胞抵抗和清除HIV 1狀態(tài)時低表達。
2.權(quán)利要求1所述的艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達 miRNA群，其特征在于5個miRNA由SEQ ID NO :1_5所示的核苷酸序列組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達miRNA群，屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明通過采用高通量的人miRNA芯片，比較未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三種狀態(tài)的CD4+T細胞miRNA表達差異，篩選得到艾滋病病毒靶細胞CD4+T細胞易感和支持HIV-1的特異表達miRNA群，該特異表達miRNA群共包含12個miRNA，由SEQ ID NO1-12所示的核苷酸序列組成。本特異表達miRNA群中的各miRNA所調(diào)控的靶基因均參與了造成不同生物學(xué)效應(yīng)的顯著功能(Gene Ontology，GO)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(pathway)，同時在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)(Signal-Net)和基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(GeneRelNet)中處于關(guān)鍵結(jié)點或重要地位，且有望基于其中單個、多個或全部miRNA建立芯片、分子雜交和RT-PCR的方法檢測樣本中這些miRNA的表達水平，根據(jù)這些miRNA的表達水平診斷艾滋病及篩選抗艾滋細胞藥物。
文檔編號C12Q1/68GK101974531SQ20101029326
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月27日
發(fā)明者張華堂, 徐雯雯, 郭彥, 陳玲, 韓妙君 申請人:中國科學(xué)院昆明動物研究所