專利名稱：一個組成型表達啟動子及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及ー個水稻組成型表達啟動子KT632P的功能鑒定和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
外源DNA序列通過連接到特定的啟動子從而啟動在植物宿主中的表達，啟動子類型的選擇決定基因的表達時間和部位。目前在農(nóng)業(yè) 生物技術(shù)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的主要是ー些組成型的強啟動子，比如CaMV 35S啟動子和玉米Ubiquitin-I啟動子(Battraw and Hall,1990; Christensen et al. 1992)。植物特有的NAC轉(zhuǎn)錄因子數(shù)量眾多，廣泛分布于陸生植物中，構(gòu)成了最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一(Duval et al. , 2002;Ooka et al.，2003)。NAC家族的命名源于矮牽牛(Petunia hybrida)NAM(No Apical Meristem)和擬南芥(Arabidopsis thaliana)ATAFl、ATAF2 以及 CUC2 (cup-shaped cotyledon)基因(Souer et al. , 1996; Aida et al. , 1997)。NAC轉(zhuǎn)錄因子在多個生長發(fā)育和脅迫應(yīng)答過程中發(fā)揮著重要作用，已成為當(dāng)前植物基因功能及表達網(wǎng)絡(luò)調(diào)控研究中的熱點(Olsen et al. , 2005a; Zheng et al.，2009)。目前發(fā)現(xiàn)，擬南芥中至少包含107個NAC基因(Riechmann et al.，2000)，而水稻(Oryza sativa)中含有140個(Fang et al.，2008)。根據(jù)N端保守序列的相似程度,Ooka等(2003)將擬南芥以及水稻全部NAC蛋白分為2個大類(I和II)，各包含14和4個亞類。同一亞類基因的功能往往相似，例如ATAF亞類中的大多數(shù)NAC基因都與植物響應(yīng)環(huán)境脅迫有關(guān)(Delessert et al. , 2005; Jensen et al.，2007)。當(dāng)然，應(yīng)用不同的算法和軟件得到的NAC基因進化樹會存在差異。最近發(fā)現(xiàn)煙草(Nicotiana tabacum)中也包含152個NAC基因(Rushton et al.，2008)。Paul等將之與擬南芥、水稻、大豆(Glycine max)和番爺(Lycopersicon esculentum)等多種植物的NAC基因匯集到一起,作了更為廣泛的進化關(guān)系分析，認為NAC基因家族包含7個亞家族，其中6個亞家族為各科植物所共有，而另ー個家族為茄科所特有，命名為 TNACS (tobacco NAC genes) (Rushton et al. 2008)。TNACS 蛋白在N端保守區(qū)域與其它亞家族存在明顯的差異，目前還不知道這種結(jié)構(gòu)上的差異是否意味著功能的變化(Rushton et al.，2008)。隨著各類NAC基因序列信息的不斷豐富，更廣泛的聚類分析將可能為我們帶來新的發(fā)現(xiàn)。熊立仲等人通過生物信息學(xué)研究分析發(fā)現(xiàn)，水稻中含有138個NAC基因。通過將水稻中NAC轉(zhuǎn)錄因子家族的基因進行進化樹分析，發(fā)現(xiàn)水稻NAC基因家族分為5個亞家族。亞家族I包含54個水稻NAC基因，所有已報道的與發(fā)育相關(guān)的NAC轉(zhuǎn)錄因子都包含在亞家族I中；亞家族II也含有54個NAC基因序列，到目前為止還沒有亞家族II中的基因被報道；亞家族III含有14個NAC基因，所有已發(fā)表的脅迫相關(guān)的NAC基因都包含在這個亞家族中，如來自水稻的SNACl和0sNAC6基因，來源于擬南芥的ANAC019、ANAC055和ANAC072基因，來自西紅柿的 StNAC 基因，煙草中的 TERN (GenBank accession number: AB021178)基因也包含在這個亞家族中；亞家族IV含有14個水稻NAC基因；亞家族V含有2個水稻NAC基因，已報道的煙草中的SENU5基因也包含在這個群體中(Yujie Fang et al. , Mol GenetGenomics (2008) 280:547 - 563)。根據(jù)已報道的文獻，本發(fā)明所提供的KT632基因即為水稻基因0NAC028，其基因ID是 L0C_0s02g34970。根據(jù)進化樹分析結(jié)果，KT632 (0NAC028, L0C_0s02g34970)基因?qū)儆趤喖易錓I群體。應(yīng)用實時定量PCR技術(shù)分析水稻各NAC基因的組織特異表達特性和逆境誘導(dǎo)表達特性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)KT632基因受干旱和鹽脅迫的誘導(dǎo)，但是不受冷脅迫的誘導(dǎo)(YujieFang et al. ,Mol Genet Genomics (2008) 280:547 - 563)。目前為止，還沒有關(guān)于 KT632基因是ー個組成型表達基因的報道。本發(fā)明通過實驗分析，發(fā)現(xiàn)KT632 (0NAC028，L0C_0s02g34970)基因自翻譯起始位點ATG往上-IOOObp的啟動子片段KT632P，呈現(xiàn)出很強的組成型表達特性，在KT632P轉(zhuǎn)基因水稻中，其所驅(qū)動的報告基因GUS在轉(zhuǎn)基因水稻的根、莖、葉和花等器官中都表現(xiàn)出很強的表達水平，這些數(shù)據(jù)充分表明KT632P為ー個很強的組成型表達啟動子。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一個能在植物各組織器官中驅(qū)動組成型表達的啟動子核苷酸序列，及克隆并應(yīng)用該啟動子的方法。在一些實施方式中，包括(a)將核苷酸序列可操作地連接于包括SEQ ID No 1的啟動子，以產(chǎn)生表達盒；和(b)生成含有該表達盒的轉(zhuǎn)基因植物，由此在植物中表達所述核苷酸。在一些實施方式中，所述“生成”包括用表達盒轉(zhuǎn)化植物細胞并從所轉(zhuǎn)化的植物細胞中再生出植物。本發(fā)明所提供的組成型表達啟動子，含有序列表中SEQ ID No 1所示的核苷酸序列，還包含與SEQ ID No :1中所列核苷酸序列至少具有95%相似性的核苷酸序列，可以驅(qū)動操作性連接的核苷酸序列在植物各器官中的組成型表達。本發(fā)明啟動子為水稻0NAC028基因的啟動子序列，0NAC028基因的編碼區(qū)序列如SEQ ID No :2所示，其基因組DNA序列如SEQ ID No 3 所示。實施方案中的啟動子核苷酸序列可用于從其它生物中分離相應(yīng)序列，如其它植物(單子葉或雙子葉植物等)。根據(jù)這些相應(yīng)序列與本文所列序列間的序列同源性，使用如PCR、雜交等技術(shù)來鑒別分離這些相應(yīng)序列。因此，根據(jù)它們與本文所列的完整KT632P啟動子序列(或其片段)間的序列相似性而分離的相應(yīng)片段，也包括在實施方案中。實施方案的啟動子區(qū)域可從任何植物中分離，包括(但不限干)水稻、蕓苔屬、玉米、小麥、高粱、兩節(jié)薺屬、白芥、蓖麻子、芝麻、棉籽、亞麻子、大豆、擬南芥屬、菜豆屬、花生、苜猜、燕麥、油菜籽、大麥、燕麥、黒麥(Rye)、粟、蜀黍、小黒麥、單粒小麥、斯佩爾特小麥(Spelt)、雙粒小麥、亞麻、格蘭馬草(Gramma grass)、摩擦禾、假蜀黍、羊茅、多年生麥草、甘鹿、紅莓苔子、番木瓜、香蕉、紅花、油棕、香瓜、蘋果、黃瓜、石斛、劍蘭、菊花、百合科、棉花、桉、向日葵、蕓苔、甜菜、咖_、薯蕷、觀賞植物和松類等。本文中“啟動子” ー詞指DNA調(diào)控序列，其中通常含有ー個TATA盒，該序列能夠指導(dǎo)RNA聚合酶II在合適的轉(zhuǎn)錄起始位點上起始特定編碼序列的轉(zhuǎn)錄。啟動子也可另外含有其他識別序列，它們通常位于TATA盒的上游或5’端，被稱作上游啟動子元件，這些元件能夠影響轉(zhuǎn)錄速率。應(yīng)認識到當(dāng)鑒別了本文所公開的啟動子區(qū)域的核苷酸序列后，分離并鑒定位于本文所鑒別的特定啟動子區(qū)域上游的其它調(diào)控元件就屬于現(xiàn)有技術(shù)范圍了。因此，、本文公開的啟動子區(qū)域可另外包含上游調(diào)控元件，如負責(zé)組織特異性和時間特異性表達的元件、調(diào)控組成型表達的元件和增強子等。本文中的“組成型表達”是指目的基因在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續(xù)表達或變化很小這類基因的表達方式。本發(fā)明所提供的KT632P啟動子就是ー個在植物的各個發(fā)育階段的根、莖、葉和花等組織器官中都有較強表達的組成型啟動子。啟動子的活性和強度可以根據(jù)其驅(qū)動的報告基因的mRNA或蛋白質(zhì)的表達量來測定。報告基因(importer gene)是ー種編碼可被檢測的蛋白質(zhì)或酶的基因，也就是說，是ー個其表達產(chǎn)物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調(diào)節(jié)序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調(diào)控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產(chǎn)物來確定目的基因的表達調(diào)控特性。常用的報告基因有β-葡萄糖苷酸酶基因GUS，和綠色熒光蛋白基因GFP。本發(fā)明通過⑶S報告基因來檢測啟動子的活性和表達特性。根據(jù)⑶S基因檢測所用的底物不同，有三種檢測方法組織化學(xué)法、分光光度法和熒光法(靈敏度為分光光度檢測法最高)，其中最為常用的是組織化學(xué)法。組織化學(xué)法檢測以5-溴-4-氯-3-吲哚-β -葡萄糖苷酸(X-Gluc)作為反應(yīng)底物。將被檢材料用含有底物的緩沖液浸泡，若組織細胞轉(zhuǎn)入了 GUS基因，并表達出了 GUS酶蛋白，在適宜的條件下，該酶就可將X-Gluc水解生成藍色產(chǎn)物，這是由其初始產(chǎn)物經(jīng)氧化ニ聚作用形成的靛藍染料，它使各組織細胞中有⑶S表達活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色，用肉眼或在顯微鏡下可看到，且在一定程度下根據(jù)染色深淺可反映出GUS活性的強弱。因此利用該方法可觀察到外源基因在特定器官、組織，甚至單個細胞內(nèi)的表達情況。本發(fā)明的實施案例中也包括DNA載體，該載體含有操作性連接于異源核苷酸序列上的啟動子，該啟動子含有本發(fā)明公開的序列，并可在植物細胞中驅(qū)動上述異源核苷酸序列進行表達。本發(fā)明的實施方案還提供了表達載體，以及在基因組中穩(wěn)定包含上述DNA載體的植物或植物細胞。“操作性連接”指使異源核苷酸序列處于啟動子作用下的連接方式，也指將兩個核苷酸序列連接起來從而使每個DNA片段的編碼序列都保持在適當(dāng)?shù)拈喿x框內(nèi)?！爱愒春塑账嵝蛄小敝柑烊粻顟B(tài)下沒有與本文所述啟動子序列ΚΤ632Ρ操作性連接的序列，對于植物宿主來說可以是同源的，或是異源的。本文所公開的ΚΤ632Ρ植物組成型表達啟動子及其變異體和片段可用于植物基因工程，例如制備轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)基因植物，以產(chǎn)生目的表型。“轉(zhuǎn)化植物”或“轉(zhuǎn)基因植物”指在基因組內(nèi)含有異源核苷酸序列的植物。通常轉(zhuǎn)化植物或轉(zhuǎn)基因植物基因組穩(wěn)定含有這些異源核苷酸序列，可將該異源核苷酸序列穩(wěn)定地遺傳給下一代。這些異源核苷酸序列可単獨或與重組DNA載體一起存在于基因組中。這里所述的“轉(zhuǎn)基因事件”包括任何細胞、細胞系、愈傷組織、組織、植物體部分或完整植物體，只要它們的基因型被外源核酸的存在而改變，包括通過轉(zhuǎn)基因操作而改變的起始宿主，以及通過這些起始宿主進行有性或無性繁殖所得的后代。這里所用的“轉(zhuǎn)基因事件”并不包括通過傳統(tǒng)植物種植方法或天然事件(例如隨機雜交、非重組病毒感染、非重組細菌轉(zhuǎn)化、非重組轉(zhuǎn)座或自發(fā)突變)改變了基因組(染色體或染色體外)的植物。
“轉(zhuǎn)基因事件”通過以下步驟獲得，使用外源DNA載體(含有核酸表達盒，其中含有本發(fā)明所提供的啟動子序列)轉(zhuǎn)化植物細胞，用基因組插入了外源DNA構(gòu)建體的植物細胞再培養(yǎng)獲得大量植物體，根據(jù)插入的外源基因進行篩選獲得所需的陽性轉(zhuǎn)基因系。轉(zhuǎn)基因事件的典型表型特征是目的基因的表達。在遺傳水平上，“目的基因”是植物基因組組成的一部分?！稗D(zhuǎn)基因事件”也指轉(zhuǎn)基因植物體與其它植物體進行雜交所得的含有外源DNA的后代。本文的“植物”包括整株植物、植物組織器官(如葉、根、莖等)、種子、植物細胞，以及它們的后代。實施方案中轉(zhuǎn)基因植物的部分植株應(yīng)理解為包括轉(zhuǎn)基因植物或其后代的植物細胞、原生質(zhì)體、組織、愈傷組織、胚，及從轉(zhuǎn)基因植物或其后代長出的花、莖、果實、胚珠、葉或根等。這里所用的“植物細胞”包括但不限于種子懸浮培養(yǎng)物、胚芽、分生組織區(qū)域、愈傷組織、葉、根、芽、配子、花粉、孢子體和小孢子。可用于本文所公開方法的植物種類包括所有可進行轉(zhuǎn)化的高等植物，包括單子葉植物和雙子葉植物。本文所公開的啟動子序列可在宿主植物中調(diào)控任何異源核苷酸序列的表達。因此，所述的異源核苷酸序列可以是操作性連接于本文所公開的啟動子之上的功能基因(編 碼目的蛋白)。實施方案中的功能基因包括參與信號傳導(dǎo)調(diào)控的基因如轉(zhuǎn)錄因子、激酶等，持家基因如熱休克蛋白基因。更具體地說，轉(zhuǎn)基因的種類包括如，所編碼蛋白賦予植物耐受非生物逆境的抗性基因，所述非生物逆境包括干旱、溫度、鹽和毒素(殺蟲劑和除草剤)等。或是所編碼蛋白賦予植物耐受生物逆境的抗性基因，如真菌、病毒、細菌、昆蟲和線蟲的侵害，以及由這些脅迫引起的疾病。表型的編碼包括改變植物中某個基因的表達，從而改變植物對病原體或昆蟲等的防御機制，或是提高植物對除草劑的抗性，根據(jù)環(huán)境改變植物的生長發(fā)育過程等。這些改變可通過在植物體內(nèi)表達外源基因或提高內(nèi)源特定基因的表達來獲得?；蛘呤峭ㄟ^降低植物體內(nèi)一個或多個內(nèi)源基因的表達產(chǎn)物，如酶、轉(zhuǎn)運蛋白、輔因子等，通過影響植物的代謝機制來獲得相應(yīng)的表型。由上可見，可將任何目的基因操作性連接到實施方案中的啟動子序列上，并在植物體中進行表達。其中根據(jù)RNA干擾技術(shù)(RNA interference, RNAi ),操作性連接于本文所公開的KT632P啟動子上的異源核苷酸序列，可以是某些靶基因的反義序列?！胺戳x核苷酸序列”指一段與靶基因核苷酸序列互補的雙鏈DNA分子。當(dāng)導(dǎo)入到植物細胞中后，反義DNA序列的轉(zhuǎn)錄能阻止靶基因DNA序列的正常表達。反義核苷酸序列編碼的RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可與靶基因轉(zhuǎn)錄生成的內(nèi)源mRNA互補，并可與其雜交，由此，靶基因編碼的天然蛋白的合成就受到限制，從而獲得相應(yīng)的表型。下面通過具體實施方式
，結(jié)合附圖對本發(fā)明做進ー步詳細描述，但不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。


圖I是表達載體pHPG的T-DNA區(qū)圖譜。LB和RB分別為T-DNA的左邊界和右邊界；hpt表不潮霉素抗性基因；Pnos表不nos基因的啟動子；Tnos表不nos基因的終止子；GUS表示gus蛋白基因；T35s表示35s基因的終止子；BamHI和EcoRI分別表示限制性內(nèi)切酶BamHI和EcoRI的酶切位點；啟動子即為本發(fā)明所分離鑒定的組成型表達啟動子。圖2是KT632P轉(zhuǎn)基因水稻的組織器官⑶S染色。愈傷、葉片、莖、根、穎殼和花等分別表示水稻各組織器官的染色結(jié)果。圖3是KT632P轉(zhuǎn)基因水稻干旱處理后的⑶S染色分析。其中A為正常生長的葉片染色為干旱處理后的葉片染色；C為干旱處理后的莖染色；D為正常生長的根染色；E為干旱處理后的根染色。圖4為KT632P轉(zhuǎn)基因水稻鹽處理后的⑶S染色分析。其中A為正常生長的葉片染色；B為鹽處理后的葉片染色；0為正常生長的莖染色；D為鹽處理后的莖染色；E為正常生長的根染色；F為鹽處理后的根 染色。
具體實施例方式下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法，所用引物均由上海英駿生物技術(shù)公司合成,測序由北京華大基因完成，PCR試劑盒、載體構(gòu)建過程中的核酸內(nèi)切酶購自寶生物工程有限公司，pEASY-ΤΙ連接試劑盒購自北京全式金生物技術(shù)公司，T4 DNA連接酶購自PiOmega公司，方法均參照試劑盒提供的方法進行。實驗中所用的載體pHPG由本實驗改造所得，基本骨架來自于CAMBIA公司的pCAMBIA1303。I.啟動子KT632P的分離和鑒定 設(shè)計克隆啟動子KT632P所需引物
引物 I :5’_ ggatccATACAACAGGAGGACAACATCTGG _3’
引物 2 :5’- gaattcGCTACAACTACAAGTGCAACTTACAA _3’
引物I中序列g(shù)gatcc為BamHI的酶切位點，引物2中序列g(shù)aattc為EcoRI的酶切位點。利用啟動子的正反向引物(其中帶下劃線部分的序列為啟動子序列，如Seq IDNO: I所示)，以植物基因組DNA提取試劑盒(天根生化科技(北京)有限公司)提取的水稻(中花11)基因組DNA作為模板，進行擴增，反應(yīng)條件是95°C預(yù)變性5分鐘；94°C變性30秒；55°C退火30秒；72°C延伸I分鐘；30個循環(huán)；72°C延伸10分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測回收，產(chǎn)物連入pEASY-ΤΙ，篩選陽性克隆并進行測序驗證，結(jié)果表明所擴增序列為預(yù)期的KT632P啟動子序列。2.構(gòu)建表達載體
將測序驗證已經(jīng)插入KT632P啟動子序列的質(zhì)粒用BamHI和EcoRI雙酶切，連入同樣用BamHI和EcoRI雙酶切的載體pHPG，挑取菌落PCR結(jié)果為陽性的菌落進行測序，測序驗證正確后，提取相應(yīng)陽性克隆質(zhì)粒，命名為PHPG-KT632P。所構(gòu)建的表達載體的T-DNA區(qū)的圖譜如圖I所示，其中LB和RB分別為T-DNA的左邊界和右邊界；hpt表不潮霉素抗性基因；Pnos表不nos基因的啟動子；Tnos表不nos基因的終止子{US表示gus蛋白基因；T35S表示35S基因的終止子；BamHI和EcoRI分別表示限制性內(nèi)切酶BamHI和EcoRI的酶切位點；啟動子即為本發(fā)明通過PCR克隆出的組成型表達啟動子。3.農(nóng)桿菌共轉(zhuǎn)化
利用熱激法將質(zhì)粒PHPG-KT632P轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌AGLO菌株，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對水稻進行
共轉(zhuǎn)化。4.功能鑒定從轉(zhuǎn)基因植株中分離各組織器官，進行⑶S活性檢測，將各組織器官置于含有⑶S染色緩沖液的EP管中，放于37°C溫箱溫育過夜，然后室溫條件下在無水こ醇中脫色保存。4. I轉(zhuǎn)基因水稻苗的組織器官染色
將轉(zhuǎn)化KT632P啟動子得到的具有潮霉素抗性的水稻愈傷組織，進行GUS染色實驗，結(jié)果如圖2愈傷所示，抗性愈傷呈現(xiàn)出很強的藍色，說明本發(fā)明啟動子啟動了 GUS基因在愈傷中的強烈表達。將水稻KT632P轉(zhuǎn)基因水稻苗的組織器官，如葉片、莖、根、穎殼和花分別進行⑶S染色，結(jié)果如圖2所示，GUS基因在植株的各種組織器官中都有很強的表達，顯現(xiàn)出很強的藍色，說明本發(fā)明啟動子啟動了其所驅(qū)動的報告基因GUS在轉(zhuǎn)基因水稻的各種組織器官中 的表達。4. 2 KT632P轉(zhuǎn)基因水稻苗的干旱處理染色
為了檢測干旱逆境對本發(fā)明啟動子KT632P的啟動活性的影響，我們將其轉(zhuǎn)基因水稻苗用20%的PEG6000處理了 90分鐘，此時植株葉片呈現(xiàn)干旱脅迫后的輕度卷曲狀態(tài)，剪取其各組織器官如根、莖、葉等分別進行染色，并以正常生長的植株為對照，檢測其干旱處理后的表達活性的變化。結(jié)果如圖3所示，其干旱處理后的葉片、根和莖與對照相比，表達變化很微弱，均表現(xiàn)出很強的表達活性，說明其啟動子活性不受干旱脅迫的影響。4. 3 KT632P轉(zhuǎn)基因水稻苗的鹽處理染色
為了檢測高鹽逆境對本發(fā)明啟動子KT632P的啟動活性的影響，我們將其轉(zhuǎn)基因水稻苗用200mM的NaCl處理了 90分鐘，再剪取其各組織器官如根、莖、葉等分別進行染色，并以正常生長的植株為對照，檢測鹽處理后的表達活性的變化。結(jié)果如圖3所示，其鹽處理后的葉片、根和莖與對照相比，表達基本沒有變化，均表現(xiàn)出很強的表達活性，說明其啟動子活性不受鹽脅迫的影響。
權(quán)利要求
1.一種轉(zhuǎn)化的植物細胞，其特征是含有一種啟動子核酸分子，所述啟動子核酸分子具有SEQ ID NO 1所示的序列，或是具有選自SEQ ID NO 1的至少40個連續(xù)核苷酸的序列，或是其互補鏈的核酸序列。
2.權(quán)利要求I所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所含的啟動子核酸分子可與異源核苷酸序列操作性相連。
3.權(quán)利要求2所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所含的異源核苷酸序列指天然狀態(tài)下沒有與所述啟動子序列操作性連接的序列，對于植物宿主來說可以是同源或是異源的。
4.權(quán)利要求2或3所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所含的異源核苷酸序列編碼的基因產(chǎn)物可賦予植物對除草劑、鹽、低溫、干旱、病原體或昆蟲的抗性，或是調(diào)控植物的生長發(fā)育。
5.權(quán)利要求2或3所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所含的異源核苷酸序列為靶基因的部分同源序列，以RNA干擾技術(shù)的方式抑制植物內(nèi)源或外源基因的表達。
6.權(quán)利要求I所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所述轉(zhuǎn)化的植物細胞來自單子葉植物。
7.權(quán)利要求6所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所述單子葉植物細胞來自禾本科植物，優(yōu)選為水稻。
8.權(quán)利要求I所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所述轉(zhuǎn)基因植物細胞來自雙子葉植物。
9.權(quán)利要求8所述轉(zhuǎn)化的植物細胞，其中所述雙子葉植物細胞來自十字花科，優(yōu)選為擬南芥。
10.一種在植物中表達核苷酸序列的方法，所述方法包括向植物體導(dǎo)入DNA構(gòu)建體，所述DNA構(gòu)建體含有啟動子及操作性連接于所述啟動子的目的異源核苷酸序列，其中所述啟動子含有的核苷酸序列選自 a)SEQ ID NO 1所示的啟動子核苷酸序列； b)與SEQID NO :1所示序列至少有95%序列相似性的啟動子核苷酸序列,其中所述啟動子核苷酸序列可以在植物中驅(qū)動異源核苷酸呈組成型表達； c)SEQID NO :1中所示的至少40個連續(xù)核苷酸序列，且表現(xiàn)出組成型表達特性。
11.一種核酸分子，其中所述核酸分子選自 a)SEQ ID NO :1所示的啟動子核苷酸序列； b)與SEQID NO :1所示序列至少有95%序列相似性的啟動子核苷酸序列,其中所述啟動子核苷酸序列可以在植物中驅(qū)動異源核苷酸呈組成型表達； c)SEQ ID NO 1中所示的至少40個連續(xù)核苷酸序列，且表現(xiàn)出組成型表達特性。
12.—種載體，它含有權(quán)利要求11所述的核酸分子。
13.—種細胞，它含有權(quán)利要求12所述的載體。
14.權(quán)利要求13所述細胞，其中所述細胞包括細菌細胞，哺乳動物細胞，昆蟲細胞，植物細胞，或真菌細胞。
15.權(quán)利要求14所述細胞，其中所述細菌細胞來自根癌土壤桿菌或大腸桿菌。
16.權(quán)利要求13的細胞，其中所述植物細胞為水稻細胞。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一個水稻組成型表達啟動子KT632P的功能鑒定和應(yīng)用。本發(fā)明所公開的KT632基因為一個水稻NAC類轉(zhuǎn)錄因子家族基因，其啟動子在植物的根、莖、葉和花等組織器官中都有很強的表達，在各種非生物逆境處理條件下也具有很強的表達活性，在植物轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N1/15GK102676458SQ20121015293
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者吳潔芳, 周君莉, 李早霞 申請人:北京未名凱拓作物設(shè)計中心有限公司