濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法，包括：(1)球磨粉碎：取麥麩，加入物料重量4-6倍的水，并加纖維素酶20U/g、淀粉酶10U/g，采用球磨機(jī)在轉(zhuǎn)速為250-400rpm條件下對小麥麩皮進(jìn)行濕法粉碎1-3h得到超細(xì)粉體懸濁液；(2)多肽的提取。(3)雌激素的提取。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供了濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法，原料采用濕法球磨聯(lián)合酶法進(jìn)行預(yù)處理，可以打破小麥麩皮顆粒中致密的結(jié)晶結(jié)構(gòu)，促進(jìn)蛋白、淀粉、植物雌激素等有效成分的溶出，可有效提高麥麩多肽酶解中多肽的轉(zhuǎn)化率和醇提取過程中雌激素的溶出量。
【專利說明】濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品加工【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年研究發(fā)現(xiàn)，食物蛋白質(zhì)的酶解產(chǎn)物中存在一些具有較高生物活性的短肽，如抗血栓肽、降血壓肽、抗氧化肽、免疫促進(jìn)肽等，這些生物活性肽的研究為新功能性食品的開發(fā)提供了新的途徑，成為當(dāng)前食品科學(xué)領(lǐng)域引人注目的研究方向之一。蛋白質(zhì)酶解是一個(gè)復(fù)雜的過程，除酶本身的特性外，還受底物濃度、PH值、溫度等多種因素的影響，任何一個(gè)條件的改變都可能產(chǎn)生不同的產(chǎn)物，影響蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化率。目前，國內(nèi)對于生物活性肽的研究集中在分離、純化和功能性研究上，但多肽得率均較低，原料蛋白存在嚴(yán)重浪費(fèi)問題。
[0003]植物雌激素指植物含有的類似于動(dòng)物雌激素(雌二醇、孕酮等)生物活性物質(zhì)，這類物質(zhì)在高雌激素環(huán)境里表現(xiàn)抗雌激素作用，可降低乳腺癌、子宮肌瘤等與雌激素過高而引起的相關(guān)疾病，在低雌激素環(huán)境里起雌激素激動(dòng)劑的作用，可防治如骨質(zhì)疏松、更年期綜合癥等與雌激素水平下降有關(guān)的疾病。小麥麩皮中富含雌激素，具有抗癌、防癌等作用，小麥麩皮中的雌激素主要集中于小麥麩皮細(xì)胞內(nèi)，生物利用率極低。
[0004]小麥麩皮中富含植物雌激素和蛋白，且目前主要作為飼料和肥料被利用，附加值極低。本發(fā)明選用麥麩作為原料提取麥麩蛋白和植物雌激素，通過濕法球磨聯(lián)合酶解制各麥麩生物活性多肽和雌激素的混合溶液，方法條件溫和、無污染、效率高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法，其方法條件溫和、無污染、效率高。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出如下技術(shù)方案:
一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽的方法，包括以下步驟:
(1)球磨粉碎:取一定量的麥麩，以麥麩重量計(jì)，加入物料重量4-6倍的水，并加纖維素酶20U/g、淀粉酶10U/g，采用球磨機(jī)在轉(zhuǎn)速為250-400rpm條件下對小麥麩皮進(jìn)行濕法粉碎l-3h得到超細(xì)粉體懸池液；
(2)多肽的提取:將懸濁液與球磨機(jī)分離，并加水至料液比為1:9，調(diào)整pH至9.5，以麥麩重量計(jì),加入堿性蛋白酶50U/g,在55°C條件下酶解Ih,酶解液在4000rpm條件下離心20min得到多肽溶液。
[0007]優(yōu)選地，所述步驟(I)中將一定量的麥麩置于瑪瑙罐中。
[0008]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的球磨機(jī)為行星式球磨機(jī)。
[0009]優(yōu)選地,所述步驟(2)中利用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至9.5。
[0010]本發(fā)明還保護(hù)采用上述的方法提取的多肽溶液。
[0011]本發(fā)明另外提供一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩雌激素的方法，在上述步驟(I)和步驟(2)后，還包括以下步驟:
(3)雌激素的提取:取(2)過濾的濾渣，按照料液比為1:2的量加入體積分?jǐn)?shù)為30%-60%的乙醇提取液，60-800C回流lh，在4000rpm條件下離心20min得雌激素提取液，殘?jiān)凑丈鲜霾襟E重復(fù)提取一次，合并2次提取的上清液，得雌激素提取液。
[0012]本發(fā)明進(jìn)一步保護(hù)采用上述方法提取的雌激素提取液。
[0013]本發(fā)明采用以下原料:纖維素酶(2000U/g)、淀粉酶(2000U/g)、堿性蛋白酶(20，000 U/g)三種酶購買于肇東市日成酶制劑有限公司。
[0014]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明提供了濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽和麥麩雌激素的方法，原料采用濕法球磨聯(lián)合酶法進(jìn)行預(yù)處理，可以打破小麥麩皮顆粒中致密的結(jié)晶結(jié)構(gòu)，促進(jìn)蛋白、淀粉、植物雌激素等有效成分的溶出，可有效提高麥麩多肽酶解中多肽的轉(zhuǎn)化率和醇提取過程中雌激素的溶出量。
[0015]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面通過實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明，但不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0017]實(shí)施例1
(1)球磨粉碎:取500克的麥麩至于瑪瑙罐中，加入水2000mL，并加入纖維素酶5g、淀粉酶2.5g，采用行星式球磨機(jī)(XQM-20L，南京科析試驗(yàn)儀器研究所)在轉(zhuǎn)速為400rpm條件下對小麥麩皮進(jìn)行濕法粉碎3h得到超細(xì)粉體懸濁液；
(2)多肽的提取:將懸濁液與球罐分離，利用2500ml水沖洗球罐，合并2次懸濁液，利用氫氧化鈉溶液調(diào)整PH至9.5，加入堿性蛋白酶1.25g，在55°C條件下酶解lh，酶解液在4000rpm條件下離心20min得到多肽溶液。采用雙縮脲法檢測溶液中多肽的含量，計(jì)算麥麩多肽的轉(zhuǎn)化率為87%，采用試劑盒法檢測溶液中孕酮含量為0.63ng/mL、雌二醇含量為
0.19pg/mL。麥麩多肽分離純化的步驟是:粗制多肽溶液超濾分離，截留分子量為IOKDa以下的多肽，經(jīng)真空冷凍干燥得即得將麥麩多肽。多肽溶液經(jīng)過凝膠層析、離子交換層析和RT-HPLC后收集的活性組分進(jìn)行醋酸纖維素薄膜電泳，電泳為一條單一條帶，說明收集的活性多肽純度較高，質(zhì)譜測定其分子量為6523.2Da。
[0018](3)雌激素的提取:取(2)過濾的濾渣，加入體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇提取液IOOOmL, 80°C回流lh，在4000rpm條件下離心20min得雌激素提取液，殘?jiān)凑丈鲜霾襟E重復(fù)提取一次，合并2次提取的上清液，得雌激素提取液，采用試劑盒法檢測溶液中孕酮含量為3.2ng/mL、雌二醇含量為2.5pg/mL。將步驟(2)中超濾脫除溶液與提取的雌激素上清液合并后，利用大孔樹脂吸附柱分離，采用水混溶性溶劑進(jìn)行梯度洗脫，得到含有結(jié)合態(tài)雌激素的濃縮液；將提取的結(jié)合態(tài)雌激素濃縮液，經(jīng)反相C18柱富集純化，進(jìn)行上樣、水混溶性溶劑梯度洗脫、收集組分濃縮，得到純化的雌激素混合物。
[0019]檢測方法:游離氨基酸采用甲醛滴定法；蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法。多肽采用雙縮脲法檢測。
[0020]多肽轉(zhuǎn)化率計(jì)算公式:轉(zhuǎn)化率=(Τ2-Τ1)/(Ρ1_Ρ2)。[0021]式中:T2為酶解后多肽含量；T1為酶解前多肽含量；P1為酶解前總蛋白含量；P2為酶解前酸溶性蛋白含量。
[0022]盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解:在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下可以對這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。
【權(quán)利要求】
1.一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩多肽的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)球磨粉碎:取一定量的麥麩，以麥麩重量計(jì)，加入物料重量4-6倍的水，并加纖維素酶20U/g、淀粉酶10U/g，采用球磨機(jī)在轉(zhuǎn)速為250-400rpm條件下對小麥麩皮進(jìn)行濕法粉碎l-3h得到超細(xì)粉體懸池液； (2)多肽的提取:將懸濁液與球磨機(jī)分離，并加水至料液比為1:9，調(diào)整pH至9.5，以麥麩重量計(jì),加入堿性蛋白酶50U/g,在55°C條件下酶解Ih,酶解液在4000rpm條件下離心20min得到多肽溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中將一定量的麥麩置于瑪瑙罐中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的球磨機(jī)為行星式球磨機(jī)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中利用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH至 9.5。
5.權(quán)利要求1一 4所述的方法提取的多肽溶液。
6.一種濕法球磨聯(lián)合酶法提取麥麩雌激素的方法，其特征在于，在權(quán)利要求1 一 4任一項(xiàng)所述步驟(I)和步驟(2 )后，還包括以下步驟: (3)雌激素的提取:取(2)過濾的濾渣，按照料液比為1:2的量加入體積分?jǐn)?shù)為30%-60%的乙醇提取液，60-800C回流lh，在4000rpm條件下離心20min得雌激素提取液，殘?jiān)凑丈鲜霾襟E重復(fù)提取一次，合并2次提取的上清液，得雌激素提取液。
7.權(quán)利要求6所述的方法提取的雌激素提取液。
【文檔編號(hào)】A23L1/305GK103461643SQ201310401181
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】吳琴燕, 莊義慶, 楊敬輝 申請人:江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所