一種秸稈腐熟劑及其制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種秸稈腐熟劑及其制作方法。該秸稈腐熟劑，包括草炭和含有菌體活性成分的微生物菌群，所述菌體活性成分為芽孢、營養(yǎng)體或孢子；其中，微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌；且微生物菌群的含量為：0.5-5億個/克草炭。因此，該秸稈腐熟劑具備除了能夠起到分解秸稈的作用之外，其還具有抑制病蟲害的生長和繁殖的效果。
【專利說明】一種秸稈腐熟劑及其制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種秸桿腐熟劑及其制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]秸桿還田是秸桿利用的一種重要方式；其一般都需要利用秸桿腐熟劑加速秸桿分解。秸桿腐熟劑中含有大量的酵母菌、霉菌和芽孢桿菌等，其大量繁殖能快速有效地將作物秸桿分解成作物生長所需要的氮、磷、鉀等大量元素和鈣、鎂、錳、鑰等中微量元素，能夠有效改良土壤團粒結(jié)構(gòu)，提高土壤通氣和保肥保水功能，并且能產(chǎn)生熱量和一定量的二氧化碳，從而改善植物的生長環(huán)境并促進秸桿循環(huán)的有效利用。
[0003]但是，秸桿直接還田為某些病蟲害的發(fā)生創(chuàng)造了適宜的環(huán)境條件，可使玉米螟安全過冬以及蠐螬、地老虎、金針蟲等地下害蟲增多；秸桿中的病原菌難以移出大田，從而增加了病原菌的數(shù)量。因此，提供一種能夠抑制田間病蟲害的生長和繁殖的秸桿腐熟劑是本領(lǐng)域亟待解決的一個技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種秸桿腐熟劑，以解決上述的問題；
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供一 種秸桿腐熟劑制作方法。
[0006]在本發(fā)明的實施例中提供了一種秸桿腐熟劑，包括草炭和含有菌體活性成分的微生物菌群，所述菌體活性成分為芽孢、營養(yǎng)體或孢子；
[0007]其中，所述微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌；所述微生物菌群的含量為:0.5-5億個/克草炭。
[0008]本發(fā)明提供的這種秸桿腐熟劑，其包括含有菌體活性成分的微生物菌群和草炭，并且微生物菌群的含量控制在0.5-5億個/克草炭之間；含有菌體活性成分的微生物菌群作為秸桿腐熟劑的重要組份，其具有很好的抗逆性，能夠在惡略的環(huán)境下存活；當(dāng)使用該秸桿腐熟劑分解秸桿時，由于哈茨木霉、枯草芽孢桿菌具有抑制有害病原菌生長繁殖效果，釀酒酵母和綠僵菌具有抑制害蟲生長繁殖效果，因此，長期存活的微生物菌群還可以很好的作為殺蟲、殺菌劑，其能夠殺死病蟲害或者抑制病蟲害的生長和繁殖；因此，該秸桿腐熟劑具備除了能夠起到分解秸桿的作用之外，其還具有抑制病蟲害的生長和繁殖的效果。
[0009]本發(fā)明還提供了一種腐熟劑的制作方法，包括以下步驟:
[0010]將哈茨木霉原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到哈茨木霉發(fā)酵液；
[0011]將枯草芽孢桿菌原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0012]將釀酒酵母原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到釀酒酵母發(fā)酵液；
[0013]將綠僵菌原菌種進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到綠僵菌發(fā)酵液；
[0014]將所述哈茨木霉發(fā)酵液、所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、所述釀酒酵母發(fā)酵液和所述綠僵菌發(fā)酵液混合，得到混合菌液；
[0015]將所述混合菌液與既定重量的草炭吸附混拌，得到含量為0.5-5億個/克草炭的混合物；
[0016]將所述混合物粉碎后制劑，得到秸桿腐熟劑。
[0017]通過上述方法可以實現(xiàn)將草炭和微生物菌群制成秸桿腐熟劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1示出了本發(fā)明實施例二提供的秸桿腐熟劑的制作流程圖。
【具體實施方式】
[0019]下面通過具體的實施例子并結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步的詳細描述。
[0020]實施例一
[0021]在本發(fā)明的實施例中提供了一種秸桿腐熟劑，包括草炭和含有菌體活性成分的微生物菌群，所述菌體活性成分為芽孢、營養(yǎng)體或孢子；
`[0022]其中，所述微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌；所述微生物菌群的含量為:0.5-5億個/克草炭。
[0023]本發(fā)明提供的這種秸桿腐熟劑，其包括含有菌體活性成分的微生物菌群和草炭，并且微生物菌群的含量控制在0.5億-5億個/克草炭之間；含有菌體活性成分的微生物菌群作為秸桿腐熟劑的重要組份，其具有很好的抗逆性，能夠在惡略的環(huán)境下存活；當(dāng)使用該秸桿腐熟劑分解秸桿時，由于哈茨木霉、枯草芽孢桿菌具有抑制有害病原菌生長繁殖效果，釀酒酵母和綠僵菌具有抑制害蟲生長繁殖效果，因此，長期存活的微生物菌群還可以很好的作為殺蟲、殺菌劑，其能夠殺死病蟲害或者抑制病蟲害的生長和繁殖；因此，該秸桿腐熟劑具備除了能夠起到分解秸桿的作用之外，其還具有抑制病蟲害的生長和繁殖的效果。
[0024]此外，本發(fā)明實施例提供的這種秸桿腐熟劑，其微生物菌群為含有菌體活性成分(芽孢、孢子或者營養(yǎng)體)的菌群，含有菌體活性成分的微生物菌群，其被吸附劑(草炭)吸附后，當(dāng)期施加至秸桿后，微生物菌群的生長和繁殖非常迅速，因此，其分解秸桿的效率也大大提聞。
[0025]秸桿腐熟劑分解秸桿的能力很大程度上決定于微生物菌群所含菌的比例，因此，在本實施例中，為了使得秸桿腐熟劑具有更好的分解能力以及抗病蟲害的效果，優(yōu)選的，哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌的個數(shù)比為7:30:5:8。
[0026]此外，草炭作為吸附劑，其用于使微生物菌群吸附在其表面和內(nèi)部。在本實施例中，草炭的粒度為0.08-0.1毫米。
[0027]另外，在本實施例中，哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌均保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號依次為=CGMCC N0.7861、CGMCCN0.7850、CGMCCN0.7849和CGMCC N0.7848 ;其保藏命名依次為:哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌；其分類命名依次為:Trichoderma harzianum、Baciilus subtilis、Saccharomyces cerevisiae、Metarhizium anisopliae ;保藏日期均為 2013 年 7 月 03 日。[0028]為了使得本發(fā)明實施例一的秸桿腐熟劑得到更好的應(yīng)用，更加有效應(yīng)用到分解秸桿以及病蟲害防治中，本發(fā)明還在上述實施例一的基礎(chǔ)之上提供了實施例二，實施例二是實施例一的腐熟劑的具體制作方法，現(xiàn)做詳細的闡述和解釋:
[0029]實施例二
[0030]本實施例的秸桿腐熟劑的制作方法包括以下步驟，請參考圖1:
[0031]步驟101:將哈茨木霉原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到哈茨木霉發(fā)酵液；
[0032]步驟102:將枯草芽孢桿菌原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
[0033]步驟103:將釀酒酵母原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到釀酒酵母發(fā)酵液；
[0034]步驟104:將綠僵菌原菌種進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到綠僵菌發(fā)酵液； [0035]其中，步驟101-步驟104為分別將哈茨木霉原菌、枯草芽孢桿菌原菌、釀酒酵母原菌和綠僵菌原菌種通過一系列的擴培操作，得到發(fā)酵液的過程，其制備順序隨意，可以分步操作，也可以同時進行。
[0036]此外，在具體的操作過程中，4種菌均需要通過菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)以及發(fā)酵罐培養(yǎng)的過程，而為了簡化操作過程，在進行每一步操作的過程中，優(yōu)選的，可以對4種菌都進行處理，例如同時將4種菌進行活化處理，然后同時再進行搖瓶培養(yǎng)，待所有的菌搖瓶培養(yǎng)都完成之后再進入下一個環(huán)節(jié)，直到完成發(fā)酵罐培養(yǎng)的過程，進而得到4種菌的發(fā)酵液。
[0037]步驟105:將哈茨木霉發(fā)酵液、枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、釀酒酵母發(fā)酵液和綠僵菌發(fā)酵液混合，得到混合菌液；
[0038]在步驟105中，得到多種發(fā)酵液之后，需要將多種發(fā)酵液混合，得到混合菌液。
[0039]步驟106:將混合菌液與既定重量的草炭吸附混拌，得到含菌量為0.5億個/克草炭的混合物；
[0040]步驟107:將混合物粉碎后制劑，得到秸桿腐熟劑。
[0041]步驟106和步驟107分別為將混合菌液與草炭混合得到混合物、將得到的混合物粉碎制劑的過程，優(yōu)選的，在制劑的過程中，制成粉劑。
[0042]在本實施例中，步驟101-104均包含菌種活化-搖瓶培養(yǎng)-種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)的操作，具體的，為了更好的實現(xiàn)擴大培養(yǎng)的效果，提高各菌的存活率，各步驟可以優(yōu)選按照以下操作得以實現(xiàn):
[0043]步驟101可以通過以下操作得以實現(xiàn):
[0044]將哈茨木霉原菌接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28_30°C的溫度下培養(yǎng)70-74小時，得到活化后哈茨木霉菌種；其中，按照重量計，菌種活化培養(yǎng)基包括土豆20%、葡萄糖2%和瓊脂2%，且其pH值為7.0-7.5 ；
[0045]具體的，上述將哈茨木霉原菌活化的操作可以為用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌苔，在倒有菌種活化培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進行劃線，然后置28-30°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h，肉眼觀察，菌苔豐滿，涂片、染色檢查無雜菌，孢子整齊時，可得到活化后哈茨木霉菌種。
[0046]將活化后哈茨木霉菌種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為26_30°C，轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下培養(yǎng)12_16h，得到哈茨木霉一級種子液，其中，第一液體培養(yǎng)基含有重量份數(shù)為5%的麥麩；
[0047]在培養(yǎng)的過程中，優(yōu)選將活化后的哈茨木霉菌種于28°C，轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分鐘的全溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-16小時，鏡檢觀察哈茨木霉菌絲較多呈團簇狀，即可得到哈茨木霉一級種子液。
[0048]將哈茨木霉一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵罐中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)16-20小時，得到哈茨木霉二級種子液；其中，按照重量計，第二液體培養(yǎng)基包括玉米粉5%、硫酸銨0.05%、泡敵0.02%、注射青霉素鉀0.0005%、注射硫酸鏈霉素0.0003%,且其pH值為4.0-4.5 ；
[0049]其中，在上述種子發(fā)酵罐的操作中，優(yōu)選將哈茨木霉一級種子液于溫度為28°C、轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分鐘的條件下培養(yǎng)16-20小時，鏡檢觀察菌絲較多呈團簇狀，即可得到哈茨木霉二級種子液，以進行后續(xù)的發(fā)酵罐培養(yǎng)。
[0050]將哈茨木霉二級種子液接種至裝有第二液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為150-170轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)84-90小時，得到哈茨木霉發(fā)酵液。
[0051]其中，在上述操作中，優(yōu)選 的，攪拌速度(即轉(zhuǎn)速)為160轉(zhuǎn)/分鐘，罐壓為0.05兆帕；通氣量:發(fā)酵前期1:0.5 (ν/ν.π?η)，后期逐漸調(diào)至1:1 (V/V.min)，檢測含雜菌率(0.3%，含菌量> 5億個孢子/ml，即可放罐，得到哈茨木霉發(fā)酵液。
[0052]具體的，在本實施例中，步驟102可以通過以下操作得以完成:
[0053]將枯草芽孢桿菌原菌接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28_30°C的溫度下培養(yǎng)22-26小時，得到活化后枯草芽孢桿菌菌種；其中，按照重量計，菌種活化培養(yǎng)基包括牛肉膏0.3%、蛋白胨 0.5%、NaCl0.5%、瓊脂 2%,且其 pH 值為 7.0-7.5 ；
[0054]具體的，上述操作可以為用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌苔，在倒有菌種活化培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進行劃線，然后置28-30°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時，肉眼觀察，菌苔豐滿，涂片、染色檢查無雜菌，孢子整齊時，可得到活化后枯草芽孢桿菌菌種。
[0055]將活化后枯草芽孢桿菌菌種接種至第一液體培養(yǎng)基的搖瓶中，在溫度為30_34°C、轉(zhuǎn)速為170-190轉(zhuǎn)/分鐘的條件下培養(yǎng)8-10h，得到枯草芽孢桿菌一級種子液，其中，第一液體培養(yǎng)基包括牛肉膏0.3%、氯化鈉0.5%、蛋白胨0.7%，且其pH值為7.0 ;優(yōu)選的，具體的操作可以為:從活化后的枯草芽孢桿菌的平板上刮取少許菌苔放入搖瓶中，于32°C、轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分鐘的全溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8-10小時，鏡檢觀察枯草芽孢桿菌生長狀態(tài)達到對數(shù)期，得到枯草芽孢桿菌一級種子液，即可上種子罐進行培養(yǎng)。
[0056]將枯草芽孢桿菌一級種子液接種到裝有第二液體培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐中，在溫度為30-34°C、轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8_10小時，得到枯草芽孢桿菌二級種子液；其中，第二液體培養(yǎng)基包括:豆柏粉2%、魚粉0.5%、玉米粉1.8%、淀粉0.4%、硫酸鎂0.06%、磷酸氫二鉀0.5%、泡敵0.025%,且其pH值為7.0-7.5 ;在培養(yǎng)的過程中，同樣，需要進行檢測，待枯草芽孢桿菌生長至對數(shù)期時，即可得到枯草芽孢桿菌二級種子液，并用于后續(xù)的發(fā)酵培養(yǎng)。[0057]將枯草芽孢桿菌二級種子液接種至含有第三液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)28-32小時，得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
[0058]優(yōu)選的，將枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)的操作可具體設(shè)置為以下參數(shù):將枯草芽孢桿菌二級種子液在攪拌速度220轉(zhuǎn)/分鐘、罐壓0.05兆帕；通氣量:發(fā)酵前期1:0.5 (V/V.min)，后期逐漸調(diào)至1:1.5 (V/V - min),培養(yǎng)周期為28-32小時，在芽孢形成率達到90%以上，雜菌率< 0.3%，含菌量> 100億個芽孢/ml，即可放罐，進而得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
[0059]具體的，在本實施例中，步驟103可以通過以下操作得以完成:
[0060]將釀酒酵母原菌接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28_30°C的溫度下培養(yǎng)70-74小時，得到活化后釀酒酵母菌種；其中，按照重量計，菌種活化培養(yǎng)基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%、瓊脂2%，且其pH值為7.0-7.5 ；
[0061]具體的，上述將釀酒酵母活化的操作可以為用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌苔，在倒有菌種活化培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進行劃線，然后置28-30°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)72小時，肉眼觀察 ，菌苔豐滿，涂片、染色檢查無雜菌，孢子整齊時，可得到活化后釀酒酵母菌種。
[0062]將活化后釀酒酵母菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為26_30°C、轉(zhuǎn)速為170-190轉(zhuǎn)/分鐘的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)8-10小時，得到釀酒酵母一級種子液，其中，按照重量計，第一液體培養(yǎng)基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，且其pH值7.0 ;優(yōu)選的，可通過將活化后的釀酒酵母于28°C，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘的全溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8-10小時，鏡檢觀察酵母菌呈芽殖狀態(tài)，即可得到一級種子液，可進行種子罐培養(yǎng)。
[0063]將釀酒酵母一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵罐中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8_10小時，得到釀酒酵母二級種子液；其中，按照重量計，第二液體培養(yǎng)基包括:葡萄糖5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、硫酸鎂
0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、泡敵0.05% ;優(yōu)選的，釀酒酵母一級種子液在溫度為28°C、轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分鐘的攪拌條件下，培養(yǎng)8-10小時，鏡檢觀察釀酒酵母呈芽殖狀態(tài)，即可得到釀酒酵母二級種子液，待轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐進行發(fā)酵培養(yǎng)。
[0064]將釀酒酵母二級種子液接種至裝有第二液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)16-20小時，得到釀酒酵母發(fā)酵液。
[0065]優(yōu)選的，在得到釀酒酵母發(fā)酵液的操作過程中的具體工藝參數(shù)為:攪拌速度220轉(zhuǎn)/分鐘、罐壓0.05兆帕；通氣量:1:0.5(ν/ν.π?η)。發(fā)酵培養(yǎng)周期為16-20小時，在90%菌體不再芽殖，雜菌率< 0.3%，含菌量> 10億個菌體/ml即可放罐，得到釀酒酵母發(fā)酵液。
[0066]具體的，在本實施例中，步驟104可以通過以下操作得以完成:
[0067]將綠僵菌原菌種接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28_30°C的溫度下培養(yǎng)70-74小時，得到活化后綠僵菌菌種；其中，按照重量計，菌種活化培養(yǎng)基包括土豆20%、葡萄糖2%、瓊脂2%，且其 pH 值為 7.0-7.5 ；
[0068]具體的，上述將綠僵菌原菌種活化的操作可以為:用接種針在無菌條件下從原菌種斜面上挑取少許菌苔，在倒有菌種活化培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)進行劃線，然后置28-30°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h，肉眼觀察，菌苔豐滿，涂片、染色檢查無雜菌，孢子整齊時，可得到活化后綠僵菌菌種。
[0069]將活化后綠僵菌菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為26_30°C、轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)12-16小時，得到綠僵菌一級種子液，其中，按照重量計，第一液體培養(yǎng)基包括細麥麩5% ；
[0070]在培養(yǎng)的過程中，優(yōu)選將活化后的綠僵菌菌種于28°C、轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分鐘的全溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12_16h，鏡檢觀察綠僵菌較多的菌絲呈團簇狀，即可得到綠僵菌一級種子液。
[0071]將綠僵菌一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵罐中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)16-20小時，得到綠僵菌二級種子液；其中，按照重量計，第二液體培養(yǎng)基包括玉米粉5%、硫酸銨0.05%、泡敵0.02%、注射青霉素鉀0.0005%、注射硫酸鏈霉素0.0003%,且其pH值為4.0-4.5 ；
[0072]其中，在上述將綠僵菌進行種子罐發(fā)酵培養(yǎng)的操作中，優(yōu)選將綠僵菌一級種子液于溫度為28°C、轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分鐘的條件下培養(yǎng)16-20h，鏡檢觀察菌絲較多呈團簇狀，即可得到綠僵菌二級種子液，以進行后續(xù)的發(fā)酵罐培養(yǎng)。
[0073]將綠僵菌二級種子液接種至裝有第二液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為150-170轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)84-90小時，得到綠僵菌發(fā)酵液；
[0074]其中，在得到綠僵菌發(fā)酵液操作中，優(yōu)選的，攪拌速度(即轉(zhuǎn)速)為160轉(zhuǎn)/分鐘、罐壓為0.05兆帕；通氣量:發(fā)酵前期1:0.5 (ν/ν.π?η)，后期逐漸調(diào)至1:1 (V/V*min)，檢測含雜菌率< 0.3%，含量> 5億個孢子/ml，即`可放罐，得到綠僵菌發(fā)酵液。
[0075]此外，在上述所有的操作中，所使用的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)液(液體培養(yǎng)基)均優(yōu)選在
0.1lMPa壓力下滅菌30分鐘，以防止雜菌生長。而且，種子發(fā)酵罐以及發(fā)酵罐在使用之前也需要滅菌。
[0076]在得到混合菌液之后，再將混合菌液和草炭混合的過程中，優(yōu)選的，機械攪拌3-6分鐘，使芽孢、孢子或者營養(yǎng)體全部被吸附，混合均勻之后，得到混合物。
[0077]在直接的過程中，優(yōu)選的，將得到的混合物優(yōu)選利用皮帶機傳送到鏈條粉碎機粉碎，使其幾乎達到100%能夠通過0.09毫米的孔徑篩，即可得到粉劑成品。
[0078]另外，本實施例的這種秸桿腐熟劑可以包括:枯草芽孢桿菌0.3億個芽孢/克、哈茨木霉0.07億個孢子/克、綠僵菌0.08億個孢子/克和釀酒酵母菌0.05億個菌體/克混合制備含菌量為0.5億/克的具有腐熟稻桿以及防治病蟲害的防病蟲稻桿腐熟劑。
[0079]通過實驗證明，收割后將作物秸桿均勻平鋪在田面上，秸桿粉碎后還田效果更好。每畝地均勻撒施按照上述比例制成的腐熟劑2公斤，并根據(jù)當(dāng)?shù)厥┓柿?xí)慣補施適量N、P、K。采用機械或人工拍打壓桿，使秸桿沉降到地表，與泥土相粘，防止秸桿泡水后浮起。保持土壤含水量50%_60%，堆腐大約15天，秸桿即可腐解。
[0080]該秸桿腐熟菌劑在田間的應(yīng)用試驗研究表明，秸桿還田加施防病蟲秸桿腐熟劑，能加快多種作物秸桿的腐熟分解，秸桿可提早5-10天腐熟。秸桿腐解后提高了土壤的基本肥力，改善了土壤的理化性質(zhì)，進而有效的促進作物生長、增加作物產(chǎn)量、改善作物品質(zhì)、提高作物抗逆性等。它具有廣泛的適應(yīng)性，在多種作物秸桿上均表現(xiàn)較為穩(wěn)定的效果。
[0081 ] 防病蟲秸桿腐熟劑應(yīng)用于玉米秸桿還田種植小麥、水稻秸桿還田種植水稻、玉米秸桿還田種植玉米等田間試驗，作用效果顯著可以有效控制秸桿還田后引發(fā)的病蟲害。對作物紋枯病防治效果達到42.3%-53.9%，對地下害蟲的防治效果達到39.4%-40.7% ;同時，具有促長增產(chǎn)的效果，可使作物畝增產(chǎn)5%-10%，作物品質(zhì)明顯得到改善，作物的抗倒伏、抗旱性、抗寒性都明顯提高；此外，該秸桿腐熟劑與其它農(nóng)業(yè)措施兼容性好，可與殺蟲劑、除草劑、化肥、微量元素、生長調(diào)節(jié)類物質(zhì)等混合使用；不受環(huán)境因子影響，適應(yīng)性廣，在各地作物秸桿上均可推廣使用。
[0082] 以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種秸桿腐熟劑，其特征在于，包括草炭和含有菌體活性成分的微生物菌群，所述菌體活性成分為芽孢、營養(yǎng)體或孢子； 其中，所述微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌；且所述微生物菌群的含量為:0.5-5億個/克草炭。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的秸桿腐熟劑，其特征在于，所述哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌的個數(shù)比為7:30:5:8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的秸桿腐熟劑，其特征在于，所述草炭的粒度為:0.08-0.1毫米。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的秸桿腐熟劑，其特征在于，所述哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌均保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號依次為 CGMCC N0.7861、CGMCC N0.7850、CGMCC N0.7849 和 CGMCCN0.7848 ;其保藏命名依次為:哈茨木霉、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和綠僵菌。
5.一種根據(jù)權(quán)利要 求1所述的秸桿腐熟劑的制作方法，其特征在于，包括以下步驟: 將哈茨木霉原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到哈茨木霉發(fā)酵液； 將枯草芽孢桿菌原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液； 將釀酒酵母原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到釀酒酵母發(fā)酵液； 將綠僵菌原菌種進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到綠僵菌發(fā)酵液； 將所述哈茨木霉發(fā)酵液、所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、所述釀酒酵母發(fā)酵液和所述綠僵菌發(fā)酵液混合，得到混合菌液； 將所述混合菌液與既定重量的草炭吸附混拌，得到含菌量為0.5-5億個/克草炭的混合物； 將所述混合物粉碎后制劑，得到秸桿腐熟劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的秸桿腐熟劑的制作方法，其特征在于，在所述將哈茨木霉原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到哈茨木霉發(fā)酵液的步驟中，具體包括: 將哈茨木霉原菌接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28-30°C的溫度下培養(yǎng)70-74小時，得到活化后哈茨木霉菌種；其中，按照重量計，所述菌種活化培養(yǎng)基包括土豆20%、葡萄糖2%和瓊脂2%，且其pH值為7.0-7.5 ； 將所述活化后哈茨木霉菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為26-30°C，轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)12-16h，得到哈茨木霉一級種子液，其中，所述第一液體培養(yǎng)基含有重量份數(shù)為5%的麥麩； 將所述哈茨木霉一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基種子發(fā)酵罐中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)16-20小時，得到哈茨木霉二級種子液；其中，按照重量計，所述第二液體培養(yǎng)基包括玉米粉5%、硫酸銨0.05%、泡敵0.02%、注射青霉素鉀0.0005%、注射硫酸鏈霉素0.0003%,且其pH值為4.0-4.5 ；將所述哈茨木霉二級種子液接種至裝有所述第二液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為150-170轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)84-90小時，得到所述哈茨木霉發(fā)酵液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的秸桿腐熟劑的制作方法，其特征在于，在所述將枯草芽孢桿菌原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的步驟中，具體包括: 將枯草芽孢桿菌原菌接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28-30°C的溫度下培養(yǎng)22-26小時，得到活化后枯草芽孢桿菌菌種；其中，按照重量計，所述菌種活化培養(yǎng)基包括牛肉膏0.3%、蛋白胨0.5%、NaCl0.5%、瓊脂2%，且其pH值為7.0-7.5 ； 將所述活化后枯草芽孢桿菌菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為30-34°C、轉(zhuǎn)速為170-190轉(zhuǎn)/分鐘的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)8-10h，得到枯草芽孢桿菌一級種子液，其中，所述第一液體培養(yǎng)基包括牛肉膏0.3%、氯化鈉0.5%、蛋白胨0.7%，且其pH值為7.0 ; 將所述枯草芽孢桿菌一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐中，在溫度為30-34°C、轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8_10小時，得到枯草芽孢桿菌二級種子液；其中，所述第二液體培養(yǎng)基包括:豆柏粉2%、魚粉0.5%、玉米粉1.8%、淀粉0.4%、硫酸鎂0.06%、磷酸氫二鉀0.5%、泡敵0.025%,且其pH值為7.0-7.5 ； 將所述枯草芽孢桿菌二級種子液接種至含有第三液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)28-32小時，得到所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的秸桿腐熟劑的制作方法，其特征在于，在所述將釀酒酵母原菌進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到釀酒酵母發(fā)酵液的步驟中，具體包括: 將釀酒酵母原菌接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28-30°C的溫度下培養(yǎng)70-74小時，得到活化后釀酒酵母菌種；其中，按照重量計，所述菌種活化培養(yǎng)基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%、瓊脂2%，且其pH值為7.0-7.5 ； 將所述活化后釀酒酵母菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為170-190轉(zhuǎn)/分鐘的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)8-10h，得到釀酒酵母一級種子液；其中，按照重量計，所述第一液體培養(yǎng)基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，且其pH值7.0 ; 將所述釀酒酵母一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)8-10小時，得到釀酒酵母二級種子液；其中，按照重量計，所述第二液體培養(yǎng)基包括:葡萄糖5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、硫酸鎂0.1%、磷酸二氫鉀0.1%、泡敵0.05% ； 將所述釀酒酵母二級種子液接種至裝有所述第二液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為210-230轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)16-20小時，得到所述釀酒酵母發(fā)酵液。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的秸桿腐熟劑的制作方法，其特征在于，在所述將綠僵菌原菌種進行菌種活化、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)和發(fā)酵罐培養(yǎng)，得到綠僵菌發(fā)酵液的步驟中，具體包括: 將綠僵菌原菌種接種至菌種活化培養(yǎng)基中，在28-30°C的溫度下培養(yǎng)70-74小時，得到活化后綠僵菌菌種；其中，按照重量計，所述菌種活化培養(yǎng)基包括土豆20%、葡萄糖2%、瓊脂2%，且其 pH 值為 7.0-7.5 ； 將所述活化后綠僵菌菌種接種至第一液體培養(yǎng)基中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)12-16小時，得到綠僵菌一級種子液，其中，按照重量計，所述第一液體培養(yǎng)基包括細麥麩5% ； 將所述綠僵菌一級種子液接種在裝有第二液體培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐中，在溫度為26-30°C、轉(zhuǎn)速為110-130轉(zhuǎn)/分鐘的條件下發(fā)酵培養(yǎng)16-20小時，得到綠僵菌二級種子液；其中，按照重量計，所述第二液體培養(yǎng)基包括玉米粉5%、硫酸銨0.05%、泡敵0.02%、注射青霉素鉀0.0005%、注射硫酸鏈霉素0.0003%,且其pH值為4.0-4.5 ； 將所述綠僵菌二級種子液接種至裝有所述第二液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，在轉(zhuǎn)速為150-170轉(zhuǎn)/分鐘、壓力為0.04-0.06兆帕的條件下發(fā)酵培養(yǎng)84-90小時，得到所述綠僵菌發(fā)酵液。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的秸桿腐熟劑的制作方法，其特征在于，在所述將所述混合物粉碎后制劑，得到秸桿腐熟劑的步驟中， 所述制劑包括制成粉劑。
【文檔編號】C12R1/885GK103740693SQ201310642456
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月3日
【發(fā)明者】張麗霞, 王樹雪, 李芳
申請人:中農(nóng)綠康（北京）生物技術(shù)有限公司