一種小麥秸稈腐熟劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物菌劑領(lǐng)域，具體是一種小麥秸桿腐熟劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)大國，雖然每年糧食大豐收，但同時產(chǎn)生的小麥秸桿數(shù)以億噸計， 這些巨量的秸桿造成嚴(yán)重的社會問題和環(huán)境問題，焚燒秸桿不但會導(dǎo)致大氣污染，還會影 響人們的出行安全，亂堆亂放秸桿則會占據(jù)大量土地，各個大小秸桿堆也會帶來火災(zāi)隱患， 因此每年夏收時，怎樣處理這些巨量的秸桿，成為一大難題。
[0003] 秸桿回收利用是解決這一難題的中藥手段，其中"秸桿還田"不但可以帶來經(jīng)濟(jì)效 益，還具有重要的社會和環(huán)境意義，秸桿中含有豐富的N、P、K和其它有機(jī)營養(yǎng)成分，利用微 生物對秸桿進(jìn)行降解、腐熟，使其成為有機(jī)肥回用于農(nóng)田，從而，及解決的環(huán)境污染問題，又 帶來了巨大經(jīng)濟(jì)效益。秸桿腐熟劑在此過程中扮演著十分重要的角色，直接決定秸桿的腐 熟效果及秸桿有機(jī)肥的應(yīng)用效果。而現(xiàn)有的秸桿腐熟劑存在著分解能力差、發(fā)酵周期長、腐 熟不徹底等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種小麥秸桿腐熟劑，該 小麥秸桿腐熟劑能快速、徹底地對農(nóng)作物秸桿特別是小麥秸桿進(jìn)行腐熟，而且，腐熟后的小 麥秸桿有機(jī)肥肥效高。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種小麥秸桿腐熟劑，包括枯草芽孢桿菌、綠 色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假絲酵母，所述的枯草芽孢桿菌、綠色木霉、黑曲霉、白腐真菌 和假絲酵母的質(zhì)量比為2:1:2:2:1，其中，枯草芽孢桿菌彡0. 6億cfu/g、綠色木霉彡0. 5億 cfu/g、黑曲霉彡0. 4億cfu/g、白腐真菌彡0. 6億cfu/g、假絲酵母彡0. 2億cfu/g，所述的 小麥猜桿腐熟劑為液體。
[0006] 其中，枯草芽孢桿菌主要以孢子懸浮液形式存在，黑曲霉主要以孢子懸浮液形式 存在，綠色木霉主要以菌絲和孢子懸浮液形式存在，白腐真菌主要以菌絲球和孢子形式存 在，假絲酵母主要以懸浮液形式存在。
[0007] 本發(fā)明的小麥秸桿腐熟劑能快速、徹底地對農(nóng)作物秸桿進(jìn)行腐熟，而且，腐熟后的 小麥秸桿有機(jī)肥肥效高，能有效提高農(nóng)作物產(chǎn)量與質(zhì)量。
[0008] 本發(fā)明還提供了小麥秸桿腐熟劑的制備方法，包括以下步驟：
[0009] 1)、制備培養(yǎng)基：
[0010] A、制備LB液體培養(yǎng)基：取胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g和NaCl10g溶解于1L 的容量瓶中，用1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值到7. 0~7. 5,用水定容至1L，然后高壓滅菌；
[0011] B、制備LB固體培養(yǎng)基：在步驟A制備的LB液體培養(yǎng)基內(nèi)加入瓊脂，瓊脂的加入量 為 15g/L;
[0012] C、制備PDA液體培養(yǎng)基：取馬鈴薯200g、葡萄糖20g溶解于1L的容量瓶中，用水 定容至1L，然后高壓滅菌；
[0013] D、制備PDA固體培養(yǎng)基：在步驟C制備的PDA液體培養(yǎng)基內(nèi)加入瓊脂，瓊脂的加入 量為15g/L;
[0014] E、制備PDA液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：取馬鈴薯200g、葡萄糖5g、羧甲基纖維素鈉15g溶解 于1L容量瓶中，用1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值到7.0,定容至1L，高壓滅菌；
[0015] F、制備PDA固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：在步驟E制備的PDA液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)加入瓊脂，瓊 脂的加入量為15g/L。
[0016] 2)、制備囷劑：
[0017]A、制備枯草芽孢桿菌菌液：
[0018] 將實驗室保存的枯草芽孢桿菌接種于LB固體培養(yǎng)基上，在恒溫箱內(nèi)38°C培養(yǎng) 24h，再把培養(yǎng)好的菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中，保持溫度在38°C，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm搖瓶 培養(yǎng)12h，得到枯草芽孢桿菌菌種液；然后將培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌菌種液接種于發(fā)酵罐 中的LB液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行擴(kuò)大再培養(yǎng)，得到枯草芽孢桿菌菌液，低溫保存?zhèn)溆茫?br>[0019]B、制備黑曲霉菌液：
[0020] 將黑曲霉在無菌條件下接種于PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中30°C培養(yǎng)48h， 待上面長出黑色菌絲后，轉(zhuǎn)接于PDA液體培養(yǎng)基中，30°C，150rpm搖瓶培養(yǎng)72h，得到黑曲霉 菌種液；然后將黑曲霉菌種液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大再培養(yǎng)，得到黑曲霉菌液，進(jìn)行低溫 保存?zhèn)溆茫?br>[0021] C、制備綠色木霉菌液：
[0022] 將綠色木霉在無菌條件下接種于PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中32°C培養(yǎng) 48h，挑上層面白色菌絲轉(zhuǎn)接于PDA液體培養(yǎng)基中，32°C，180rpm搖瓶培養(yǎng)72h，待液體顏色 變深，產(chǎn)生孢子，得到綠色木霉種液，再將綠色木霉種液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn) 行擴(kuò)大再培養(yǎng)，得到綠色木霉菌液，進(jìn)行低溫保存；
[0023] D、制備白腐真菌菌液：
[0024] 將白腐真菌在無菌條件下接種于PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中37°C培養(yǎng) 48h，待長出菌絲后，轉(zhuǎn)接于PDA液體培養(yǎng)基中，37°C，180rpm搖瓶培養(yǎng)72h，長出菌絲球，得 到白腐真菌種液，然后將白腐真菌種液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大再培養(yǎng)，得到白腐真菌菌 液，進(jìn)行低溫保存；
[0025]E、制備假絲酵母菌液：
[0026] 將假絲酵母在無菌條件下接種于PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中33°C培養(yǎng) 48h，待上面長出菌落后，轉(zhuǎn)接于PDA液體培養(yǎng)基中，33°C，200rpm搖瓶培養(yǎng)72h，然后將種子 液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大再培養(yǎng)，得到假絲酵母菌液，進(jìn)行低溫保存；
[0027] 3)、菌劑混合：
[0028] 將步驟2)制得的枯草芽孢桿菌菌液、黑曲霉菌液、綠色木霉菌液、白腐真菌菌液 和假絲酵母菌液按質(zhì)量比為2 :1:2:2:1進(jìn)行混合，混合后得到的菌液為小麥秸桿腐熟劑， 經(jīng)測定，有效活菌數(shù)彡4億cfu/g。
[0029]本發(fā)明的小麥秸桿腐熟劑的制備方法，操作簡單，菌種容易培養(yǎng)，各菌種之間優(yōu)劣 互補(bǔ)，不產(chǎn)生拮抗反應(yīng)，和傳統(tǒng)腐熟劑相比，腐熟效率顯著提升；該小麥秸桿腐熟劑解決了 傳統(tǒng)腐熟劑腐熟效率低，腐熟不徹底的技術(shù)難題，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，具有一定的社會效益和經(jīng) 濟(jì)效益。
【附圖說明】
[0030] 圖1是噴灑不同腐熟劑的秸桿堆的溫度變化曲線圖。
[0031] 圖2是噴灑不同腐熟劑的秸桿堆的秸桿失重率變化曲線圖。
[0032] 圖3是噴灑不同腐熟劑的秸桿堆的纖維素降解率變化曲線圖。
[0033] 圖4是噴灑不同腐熟劑的秸桿堆的半纖維素降解率變化曲線圖。
[0034]圖5是噴灑不同腐熟劑的秸桿堆的木質(zhì)素降解率變化曲線圖。
【具體實施方式】
[0035] 下面通過【具體實施方式】對發(fā)明作進(jìn)一步說明。此處所描述的【具體實施方式】僅以解 釋發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0036] 實施例一
[0037] 小麥秸桿腐熟劑，包括枯草芽孢桿菌、綠色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假絲酵母，其 中，枯草芽孢桿菌多〇. 6億cfu/g、綠色木霉多0.5億cfu/g、黑曲霉多0.4億cfu/g、白腐真 菌多0.6億cfu/g、假絲酵母多0.2億cfu/g，所述的小麥猜桿腐熟劑為液體。
[0038] 實施例二
[0039] 上述小麥秸桿腐熟劑的制備方法包括以下具體步驟：
[0040] 1)、制備培養(yǎng)基：
[0041] A、制備LB液體培養(yǎng)基：取胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g和NaCl10g溶解于1L 的容量瓶中，用1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值到7.0~7. 5,用水定容至1L，然后121°C高壓滅菌 20min；
[0042]B、制備LB固體培養(yǎng)基：在步驟A制備的LB液體培養(yǎng)基內(nèi)加入瓊脂，瓊脂的加入量 為15g/L;
[0043] C、制備PDA液體培養(yǎng)基：取馬鈴薯200g、葡萄糖20g溶解于1L的容量瓶中，用水 定容至1L，然后121°C高壓滅菌20min;
[0044] D、制備PDA固體培養(yǎng)基：在步驟C制備的PDA液體培養(yǎng)基內(nèi)加入瓊脂，瓊脂的加入 量為15g/L;
[0045]E、制備PDA液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：取馬鈴薯200g、葡萄糖5g、羧甲基纖維素鈉15g溶解 于1L容量瓶中，用1M的NaOH調(diào)節(jié)pH值到7. 0,定容至1L，121°C高壓滅菌20min;
[0046] F、制備PDA固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基：在步驟E制備的PDA液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)加入瓊脂，瓊 脂的加入量為15g/L。
[0047] 2)、制備菌劑：
[0048] A、制備枯草芽孢桿菌菌液：
[0049] 將枯草芽孢桿菌接種于LB固體培養(yǎng)基上，在恒溫箱內(nèi)38 °C培養(yǎng)24h，再把培養(yǎng)好 的菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中，保持溫度在38°C，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm搖瓶培養(yǎng)12h，得到 枯草芽孢桿菌菌種液；然后將培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌菌種液接種于發(fā)酵罐中的LB液體培 養(yǎng)基中，進(jìn)行擴(kuò)大再培養(yǎng)，發(fā)酵罐體積為50L，培養(yǎng)基為40L，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，通氣比為 0. 8vvm，發(fā)酵20h后得到枯草芽孢桿菌菌液，低溫保存?zhèn)溆茫?br>[0050] B、制備黑曲霉菌液：
[0051] 將黑曲霉在無菌條件下接種于PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中30°C培養(yǎng)48h， 待上面長出黑色菌絲后，轉(zhuǎn)接于PDA液體培養(yǎng)基中，30°C，150rpm搖瓶培養(yǎng)72h，得到黑曲霉 菌種液；然后將黑曲霉菌種液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大再培養(yǎng)，發(fā)酵罐體積為50L，培養(yǎng)基 為20L，攪拌轉(zhuǎn)速為150rpm，通氣比為lvvm，發(fā)酵72h后得到黑曲霉菌液，進(jìn)行低溫保存?zhèn)?用；
[0052] C、制備綠色木霉菌液：
[0053] 將綠色木霉在無菌條件下接種于PDA固體斜面培養(yǎng)基上，在恒溫箱中32°C培養(yǎng) 48h，挑上層面白色菌絲轉(zhuǎn)接于PDA液體培養(yǎng)基中，32°C，180rpm搖瓶培養(yǎng)72h，待液體顏色 變深，產(chǎn)生孢子，得到綠色木霉種液，再將綠色木霉種液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基中， 發(fā)酵罐體積為50L，培養(yǎng)基為40L，攪拌轉(zhuǎn)速為180rpm，通氣比為lvvm，發(fā)酵72h后得到綠色 木霉菌液，進(jìn)行低溫保存；
[0054] D、制備白腐真菌菌液：
[0055] 將白腐真菌在無菌