大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育育性恢復(fù)基因的分子標(biāo)記及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種與大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記及其應(yīng)用，該與大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記是位于大白菜CMS7311育性恢復(fù)基因兩側(cè)并與其緊密連鎖的InDel78標(biāo)記和恢復(fù)系序列SCAR42標(biāo)記，其中分子標(biāo)記InDel78和SCAR42與育性恢復(fù)基因的遺傳距離分別為0.91cM和0.92cM，將育性恢復(fù)基因限定于大白菜A09染色體一個(gè)337kb的范圍內(nèi)。這兩個(gè)分子標(biāo)記不僅可應(yīng)用于大白菜CMS7311育性恢復(fù)基因的分子標(biāo)記輔助選擇，提高選擇效率，加快育種進(jìn)程；也為進(jìn)一步的育性恢復(fù)基因的圖位克隆、揭示細(xì)胞質(zhì)雄性不育及其育性恢復(fù)的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育育性恢復(fù)基因的分子標(biāo)記及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)的植物分子標(biāo)記輔助育種領(lǐng)域，涉及與一種大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]大白菜(Brassicacampestris L.ssp.pekinensis (Lour.) Olsson)是十字花科蕓薹屬白菜種中最重要的蔬菜作物之一，原產(chǎn)中國，是我國乃至世界性大宗蔬菜。早在上世紀(jì)90年代，陜西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所就通過種間雜交及回交技術(shù)把甘藍(lán)型油菜CMS中轉(zhuǎn)育至大白菜育成CMS7311(張魯剛，郝東方，結(jié)球白菜溫度敏感細(xì)胞質(zhì)雄性不育系CMS7311育性轉(zhuǎn)化的研究，植物學(xué)報(bào)，2001，43 (11):1123-1128)，進(jìn)一步研究確認(rèn)該CMS也含有異常的開放閱讀框0RF224，并帶有部分溫敏特性；并在大白菜找到可恢復(fù)CMS育性的恢復(fù)系，確定恢復(fù)基因?yàn)閱位蜻z傳。由于傳統(tǒng)的育性表型選擇要等到開花，通過田間直接觀察完成。對(duì)于攜帶恢復(fù)基因的優(yōu)良材料，要將其轉(zhuǎn)育為不育系，必須經(jīng)過雜交，自交，同時(shí)用不育系測(cè)交判斷其基因型等過程，操作起來費(fèi)時(shí)費(fèi)力，周期長，育種進(jìn)程慢。為了加快大白菜胞質(zhì)雄性不育育種速度，采用現(xiàn)代生物技術(shù)，進(jìn)行分子標(biāo)記輔助育種十分迫切。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的在于，提供一種大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其中:
[0004](I)提供大白菜CMS7311育性恢復(fù)基因的InDel標(biāo)記和SCAR標(biāo)記各I個(gè)；
[0005](2)提供InDel標(biāo)記和SCAR標(biāo)記的PCR引物序列；
[0006](3)提供對(duì)大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育及其育性恢復(fù)基因進(jìn)行輔助選擇過程中對(duì)上述標(biāo)記進(jìn)行應(yīng)用的方法。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案:
[0008]一種與大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，所述的與大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記是與位于大白菜CMS7311育性恢復(fù)基因兩側(cè)并與其緊密連鎖的InDel78標(biāo)記和恢復(fù)系序列SCAR42標(biāo)記，其中，InDel78標(biāo)記由恢復(fù)系序列InDel78F和不育系序列InDel78S組成；
[0009]所述的恢復(fù)系序列InDel78F大小為1146bp，具體序列如下:
[0010]5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCTTCTCCTAAAAGAGTGATCTTAAGACCCAATCATCATGAGAATGTTTCTAGCTCTCTTCCTTCTCTTGGCCTTGACCACATCTTCAAGTAAGTACCTTTCTTCTCTTCTTGGTATACGGTCCAATAACAGTATTTAAGATTTTATTTCTATGTCTTTCTTTCTCTCTAGATGCAACTTACTGCCTCTGCAAAGATGGGACAGAAGACAACGCACTTCAAGCATCAATAGACTATGTTTGTGGAAAATTAGATTGCAACCCAATCCTTGACAAGGGTGCTTGTTATCAACCAAACACCATCAAAAGCCACTGTGATTGGGCTGTTAACAGCTACTTCCAGAATGTAGCTCAAGCCCCTGGAAGCTGCGACTTCTCTGGAACTGCCACTACCAGTCAAAACCCACCTSCATGTAAGTAAAAAAGTTTACATTTTGATGCGAAAAGTTGTGGTCTTGATGAGGTTCTTTTGTGCAGATTTGGTTACCGGATGTGTCTATCCTTCAAGCG
【權(quán)利要求】
1.一種與大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，所述的與大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記是與位于大白菜CMS7311育性恢復(fù)基因兩側(cè)并與其緊密連鎖的InDel78標(biāo)記和恢復(fù)系序列SCAR42標(biāo)記，其中，InDel78標(biāo)記由恢復(fù)系序列InDel78F和不育系序列InDel78S組成； 所述的恢復(fù)系序列InDel78F大小為1146bp，具體序列如下:

2.如權(quán)利要求1所述的大白菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育可育基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，其特征在于，所述的恢復(fù)系序列InDel78F、不育系序列InDel78S和恢復(fù)系序列SCAR42標(biāo)記的PCR特異性擴(kuò)增引物的序列如下:
ID78F:5-ATCATATCCTGTCTATTTCGTGCT-3 ；
ID78R:5-GTTATAACGAGGCACATAGGTTTC-3 ；
SC42F1: 5-GGACCAACTATACTTATCCTGTTACT-3 ；
P42R: 5-ACTAATGTTTCCGTAGCAATCT-3。
3.權(quán)利要
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，具體方法是: (1)用CTAB法提取待測(cè)材料基因組DNA；
(2)PCR 擴(kuò)增:a、反應(yīng)體系為25ul體系，各組分物質(zhì)的含量分別為:20ng模板DNA；`2.5ul 10 Xbuffer ；1.8mM MgCl2 ；0.25mmol/L dNTP ;lpmol/L 引物:1.5U Taq DNA 聚合酶;ddH20補(bǔ)齊至25ul,混勻，離心； b、PCR擴(kuò)增程序:預(yù)變性 94°C /5min，然后 94°C /60s,56°C /45s,72°C /lmin，35 個(gè)循環(huán)后，72 °C 延伸 5min ； c、電泳:取6ul的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與2ul的6Xloading buffer混勻，點(diǎn)入0.8%的瓊脂糖凝膠中，150V電壓下電泳25min，經(jīng)EB染色后在凝膠成像儀中觀察拍照； d、判斷: 在使用引物ID78F/ID78R擴(kuò)增出1146bp的目的條帶，則該材料帶有大白菜CMS育性恢復(fù)基因的概率為99.09% ； 在使用引物SC42F1/P42R擴(kuò)增出458bp的目的條帶，則該材料帶有大白菜CMS育性恢復(fù)基因的概率為99.08%以上； 如果兩對(duì)引物分別同時(shí)擴(kuò)增出目的條帶，則待測(cè)材料具有大白菜CMS育性恢復(fù)基因的概率為100%。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103981177SQ201410165808
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年4月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月22日
【發(fā)明者】張魯剛, 許小勇, 張玉 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)