專利名稱：非肽鈴蟾肽受體拮抗物對(duì)治療焦慮和恐慌紊亂癥的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于鈴蟾肽受體拮抗物對(duì)新適應(yīng)癥用的藥物制造中的應(yīng)用。也關(guān)于利用鈴蟾肽受體拮抗物進(jìn)行診斷、治療或預(yù)防的方法。
背景技術(shù)：
兩棲的四十肽鈴蟾肽(BB)屬于新一類的肽，在它們的C-端順序中共享結(jié)構(gòu)均勻性(Dutta A.S.(1993)inSmall PeptidesChemistry，Biology，&ClinicalStudies，第2章，pp66-82，Elsevier)。
十肽神經(jīng)介素B(NMB)、神經(jīng)介素C(NMC)和27殘基氨基酸，釋放胃泌激素的肽(GRP)是已被證明的三種哺乳類動(dòng)物的類鈴蟾肽的肽(Battey J.等人(1991)，Trends Neurosa.14524)。認(rèn)為NMB和GRP通過作用于相應(yīng)的優(yōu)選的NMB(BB1)受體和優(yōu)選GRP(BP2)受體，可傳遞各種周邊和中心傳遞的生物作用(Lebacq Verheyden A.等人(1990)Handbook of ExperimentalPharmacology95(part II)71)。國際專利申請(qǐng)WO 98/07718中描述了非肽鈴蟾肽受體拮抗物。
發(fā)明簡(jiǎn)要現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)描述于WO 98/07718中的化合物和相關(guān)的化合物可用于以下疾病的診斷、預(yù)防和治療，例如焦慮和恐慌紊亂癥、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育失調(diào)、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌紊亂、嘔吐或厭食。在國際專利申請(qǐng)WO 98/07718中所描述的在本發(fā)明中所使用的鈴蟾肽受體拮抗物，公開在本文中作為參考。
因此，本發(fā)明提供了一種利用鈴蟾肽受體拮抗物可改善治療的各種疾病的預(yù)防或治療方法，包括焦慮恐慌失調(diào)癥、社會(huì)恐怖、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育失調(diào)癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、嘔吐或厭食，炎癥疼痛、神經(jīng)病的疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性和后皰疹性疼痛，所述方法包括對(duì)需要這種治療的病人施用有效量的式I的鈴蟾肽受體拮抗物或其藥學(xué)上可接受的鹽。 其中i為0或1，k為0或1，l為0，1，2，或3，m為0或1，n為0，1或2，Ar是苯基、吡啶基或嘧啶基，各為未取代的，或可由選自烷基、鹵素、烷氧基、乙?；?、硝基、氨基、-CH2NR10R11，氰基、-CF3，-NHCONH2，和-CO2R12中的1～3個(gè)取代基取代的R1是氫或1～7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，R8是氫或和有3～7個(gè)碳原子的R1形成的環(huán)，R2是氫或1～8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈，或環(huán)狀烷基，它也可以含有1～2個(gè)氧或氮原子，R9是氫或由3～7個(gè)碳原子與R2形成的環(huán)，它可含有氧或氮原子；或者R2和R9可一起是羰基，Ar1可以是單獨(dú)選自Ar并也可包括吡啶基-N-氧化物、吲哚基、咪唑基，和吡啶基，R4、R5、R6和R7每一個(gè)都是單獨(dú)地選自氫和低級(jí)烷基，R4也可與R5形成2～3個(gè)原子的共價(jià)鍵，其可以包括氧或氮原子，R3可單獨(dú)地選自Ar，或者是氫、羥基、-NMe2，N-甲基-吡咯基、咪唑基、N-甲基-咪唑基、四唑基、N-甲基-四唑基、噻唑基、-CONR13R14、烷氧基， ，或
其中p為0，1或2，Ar2是苯基或吡啶基，R10，R11，R12，R13和R14各單獨(dú)地選自氫或者1-7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基。
本發(fā)明還關(guān)于利用式I化合物制備一種通過上述鈴蟾肽受體拮抗物而用于可改善治療的診斷、預(yù)防或治療的疾病。
本發(fā)明還關(guān)于提供治療哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，包括向哺乳動(dòng)物施用一種組合物，該組合物含有抑制腫瘤量的式I化合物，或者式I化合物和細(xì)胞毒素劑的共軛物。
本發(fā)明進(jìn)而提供一種對(duì)哺乳動(dòng)物具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的組織的體內(nèi)診斷成象的方法，該方法包括向哺乳動(dòng)物施用診斷成象量的本發(fā)明放射性標(biāo)記化合物，由于所說的化合物與有許多有這種受體細(xì)胞的組織的鈴蟾肽受體相結(jié)合，所以能進(jìn)一步檢測(cè)放射圖像。尤其是本發(fā)明關(guān)于對(duì)哺乳動(dòng)物診斷哺乳動(dòng)物腫瘤的存在方法，該方法包括向哺乳動(dòng)物施用診斷成象量的式I化合物，并可選擇地檢測(cè)具有許多有鈴蟾肽受體的細(xì)胞的組織的圖像。
本發(fā)明的再一個(gè)方面，是提供一種體外檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織中的癌細(xì)胞的方法，該方法包括將哺乳動(dòng)物的組織樣品，與體外診斷成象量的式I化合物接觸一定時(shí)間，并在足以使化合物與癌細(xì)胞結(jié)合的條件下，檢測(cè)這種結(jié)合。
附圖描述

圖1示出化合物1(以10mg/kg，試驗(yàn)前1h腹膜注射)對(duì)放置在提高的正迷宮上的大鼠行為的作用([A]是開臂的％時(shí)間；[B]進(jìn)入開臂的％數(shù)；[C]開臂結(jié)束時(shí)間；Veh載體)。
圖2示出了通過大鼠在強(qiáng)光、生疏的條件下，化合物1對(duì)社會(huì)相互作用所用時(shí)間的作用。
圖3示出了通過大鼠在敞開田野試驗(yàn)的沙地中央時(shí)化合物1對(duì)所用時(shí)間的作用(Veh載體)。
圖4示出了豚鼠幼畜中化合物1在隔離-誘導(dǎo)發(fā)聲恐懼模式中的作用。
圖5示出了豚鼠幼畜中在隔離-誘導(dǎo)發(fā)聲恐懼模式中苯甲二氮(a)或氟苯氧丙胺(b)的作用。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明中使用的化合物是上述式I的化合物。優(yōu)選化合物是式II的化合物。 其中Ar是未取代苯基，或由選自異丙基、鹵素、硝基、和氰基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基，R4、R5和R6是氫，R7是甲基或氫，R3是2-吡啶基或羥基，和Ar1是吲哚基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或咪唑基。
另一種優(yōu)選化合物是式I的化合物。
其中Ar是未取代的苯基，R1是環(huán)戊基或叔丁基，R4和R5是氫，R7是甲基，R6是氫，R3是具有2個(gè)異丙基取代基的苯基，未取代苯基，或式 Ar1是吲哚基。
另一種優(yōu)選化合物是式I的化合物，其中Ar是2，6-二異丙基-苯基，4-硝基-苯基，和4-氰基-苯基，R4、R5和R6是氫，R7是甲基，
R2是氫或環(huán)己基，和R3是羥基，吡啶基。 ，或 本發(fā)明中使用的化合物的烷基基團(tuán)，除了專門指定的形式外，包括1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈，或環(huán)狀碳鏈。代表性的基團(tuán)是甲基、乙基、丙基、異丙基、正-丙基、正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、2-甲基己基、正-戊基、1-甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2-甲基戊基、2，2-二甲基丙基、正-己基和其他。
本發(fā)明中所用化合物的低級(jí)烷基基團(tuán)包括具有1-6個(gè)碳原子的基團(tuán)。
本發(fā)明中所用化合物的環(huán)烷基基團(tuán)是具有3-7個(gè)碳原子的基團(tuán)。它們可以用選自鹵素、硝基、烷基、和烷氧基中的1-3個(gè)基團(tuán)取代。
本發(fā)明中所用化合物的烷氧基團(tuán)，除了另有說明外，包括1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈的兩種碳鏈。代表性的基團(tuán)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異-丙氧基、仲-丁氧基、和己氧基。
術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴、碘和砹，包括他們的放射性核素。
術(shù)語“Ar”是指包括取代的或未取代的苯基。取代基包括以下的一種或多種取代基，諸如鹵素、硝基、烷基、烷氧基、和其他基，如所說明的或本技術(shù)人員所熟知的。
術(shù)語“胺”是游離氨基、烷基化胺、和?；贰?br> 更優(yōu)選的化合物是選自以下(S)N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-N-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-1-甲基-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-(1-氧-吡啶-2-基)-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，
2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-吡啶-2-基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，2-[3-(2-叔-丁基-苯基)-脲基]-N-環(huán)己基甲基-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二氯-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二甲氧-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二甲基氨基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，(S)N-環(huán)己基甲基-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，2-二甲基-1-苯基-丙基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，[S-(R*，R*)]3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-{3-[1-(4-硝基-苯基)-乙基]-脲基}-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，N-(2，2-二甲基-4-苯基-[1，3]二噁烷-5-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(1-苯基-環(huán)戊基甲基)-脲基]-丙酰胺，(S)-N-(2，6-二異丙基-苯基)-2-[3-(2，2-二甲基-1-苯基-丙基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺，(R)-N-(2，6-二異丙基-苯基)-2-[3-(2，2-二甲基-1-苯基-丙基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-N-(2，2-二甲基-4-苯基-[1，3]二噁烷-5-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-(2-環(huán)己基-乙基)-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(3-甲基-丁基)-丙酰胺，
2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(3-苯基-丙基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(2-苯基-環(huán)己基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-N-二氫化茚-1-基-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-N-(1-羥基-環(huán)己基甲基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(6，7，8，9-四氫-5H-苯并環(huán)庚-5-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-苯基-丙酰胺，N-(1-羥基-環(huán)己基甲基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺，2-[3-(4-氰基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-丙酰胺，(S)4-(3-{2-(1H-吲哚-3-基)-1-甲基-1-[(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-氨基甲?；鵠-乙基}-脲基)-苯甲酸乙基酯，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-咪唑-4-基)-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-3-(2-三氟甲基-苯基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-(2-硝基-苯基)-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧-吡啶-2-基)-環(huán)己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺，和N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-吡啶-2-基-丙酰胺。
以后，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧-吡啶-2-基)-環(huán)己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺也稱作化合物1。
本發(fā)明中所用的化合物，在上述式I中，根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)，可具有多個(gè)手性中心。尤其是本發(fā)明中使用的化合物可以以非對(duì)映體，非對(duì)映體的混合物，或者以混合的或單獨(dú)的光學(xué)對(duì)映體而存在。本發(fā)明認(rèn)為可使用所有這些形式的化合物。
本發(fā)明中使用的化合物包括式I化合物的溶劑化物、水合物、藥物可接受的鹽，和多晶型物(不同晶格描述物)。
最適宜是形成鹽，藥物可接受的鹽包括乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二氫氯化物、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰對(duì)氨苯基胂酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明鹽(hydrabamine)、氫溴化物、氫氯化物、羥基萘酸鹽、碘化物、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽(4，4′-亞甲基雙(3-羥基-2-萘酸鹽))，泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、q-氯茶堿、三乙基碘鹽、芐星、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、亞乙基二胺、葡甲胺、普魯卡因、鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、和鋅(也可參看“pharmaceutical salts”，Bergs S.M.等人(1997)J.P ham.Sci.661-19，本文中引入作參考)。
術(shù)語“病人”或“對(duì)象”是指哺乳動(dòng)物，特別是指人類。
進(jìn)行本發(fā)明的方法是通過向哺乳動(dòng)物施用有效量的式I化合物，在化學(xué)治療適應(yīng)癥中，施用式I化合物與細(xì)胞毒素劑的共軛物，或其藥物可接受的鹽以診斷、預(yù)防和治療上述的任何疾病。這種有效量一般是每公斤對(duì)象體重為約1-300mg。對(duì)于一個(gè)70kg的成年人，一般劑量為每天約1mg到5g。此外，所用放射性標(biāo)記化合物的劑量取決于放射性核素的比放射性。
本發(fā)明的再一個(gè)方面，是提供一種對(duì)上述所列適應(yīng)癥的治療或預(yù)防用的藥物組合物，所述組合物含有式I的鈴蟾肽受體拮抗物，至少與一種藥物上可接受的載體或賦形劑一起。為由本發(fā)明所用化合物制備藥物組合物，惰性的，藥物上可接受的載體可以是固體也可以是液體。固體形式的制劑包括粉末、片劑、分散性顆粒、膠囊、藥包、子宮托和包括陰道栓的栓劑。固體載體可以是能用作稀釋劑、香劑、增溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、或片劑崩解劑中的一種或多種物質(zhì)，它也可以是一種密封材料。在粉末中，載體是一種磨得很細(xì)的固體，并與很好磨碎的活性組分形成混合物。在片劑中，活性組分以適當(dāng)?shù)谋嚷逝c具有需要粘合性質(zhì)的載體進(jìn)行混合，并壓制成所要形狀和大小。
為了制備陰道栓或栓劑，首先將低熔蠟，諸如脂肪酸甘油酯和可可脂的混合物熔融，并例如通過攪拌使活性組成分散在其中。然后將熔融均勻的混合物倒入適宜大小的模具中，并使其冷卻和固化。軟膏也是優(yōu)選的藥物組合物，同樣可以由本發(fā)明所用的化合物進(jìn)行制備。
粉末和片劑優(yōu)選含有5％～約70％的活性組分，適宜的載體是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、乳糖、蔗糖、果膠、糊精、淀粉、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)蠟、可可脂，等等。
術(shù)語“制劑”是包括將活性組分與作為載體的密封材料進(jìn)行配制，提供一種膠囊，其中活性組成(具有或不具有其他載體)由載體包圍，因此載體與它結(jié)合在一起，同樣也能制備藥包。
片劑、粉劑、藥包和膠囊可以作為適于口服的固體劑形。
液體形式制劑包括溶液、懸濁液、和乳濁液。作為適于腸胃服用的液體制劑的實(shí)例，可以提出活性化合物的無菌水或水-丙二醇溶液。液體制劑也可以是在聚乙二醇水溶液中的溶液。口服的水溶液可通過將活性組分溶解在水中而制備。如果需要，可添加適宜的色劑、香劑、穩(wěn)定劑和增稠劑。通過將磨細(xì)的活性組分與粘性材料如天然合成膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和藥物配制技術(shù)中公知的其他懸浮劑一起分散在水中，可制成水懸浮液。
優(yōu)選的藥物制劑是以單位劑量形式。這種形式中，將制劑分成含有適宜量的活性組分的單位劑量。單位劑量形式可以是一種包裝制劑，包裝含有離散量的制劑，例如，包裝片劑、膠囊、和裝在小瓶或安瓿瓶中的粉末。單位劑量形式也可以是膠囊、藥包、或片劑本身，或者可以是任意適宜數(shù)量的這種包裝形式。
正如已提到的，式I化合物可以用于診斷、預(yù)防和治療各種狀況的疾病，關(guān)于這種應(yīng)用的更詳細(xì)情況提供如下。
1)焦慮、恐慌發(fā)作和社交恐怖癥焦慮癥是一種常見的癥狀，苯并二氮雜是對(duì)此癥的主要治療劑。在美國為此目的最常用的是氯二氮雜氧化物、苯甲二氮，去甲羥基安定、氯羥去甲安定、環(huán)丙安定和三唑安定。然而，治焦慮癥的苯并二氮雜也可引起鎮(zhèn)靜狀態(tài)，它們具有肌肉-松馳、鎮(zhèn)靜-催眠性和遺忘的副作用，它們也可增強(qiáng)醇的作用，對(duì)它們的作用的偏差都可能發(fā)展，在長期頻繁地使用后，一旦停止使用就會(huì)導(dǎo)致焦慮反彈，長期使用苯并二氮雜，尤其是隨著劑量的增加，都會(huì)導(dǎo)致依賴性。因此，需要降低對(duì)焦慮治療的這種依賴趨勢(shì)。
最近發(fā)現(xiàn)，建議類鈴蟾肽的肽在緊張和焦慮中會(huì)發(fā)揮作用(Plamondon H.等人(1996)Soc.Neurosci.22Abstract 181.13)將用于GRP受體和NMB受體的對(duì)mRNA抗過敏的寡核苷酸輸注老鼠腦室(i.c.v)，超過2天通過受體自體放射照相術(shù)測(cè)量，結(jié)果降低腦中鈴蟾肽結(jié)合位點(diǎn)的密度。當(dāng)與對(duì)照動(dòng)物比較時(shí)，用抗過敏的寡核苷酸處理的老鼠，在高位加迷宮的焦慮場(chǎng)(anxiogenicfields of an elevated plus maze)或在槽形隧道的卵形迷宮(trough-tunnel ovalmaze)的焦慮場(chǎng)上，明顯消耗更多的時(shí)間。這就反映出處理的焦慮作用。通過藥物學(xué)方法證明本發(fā)明的化合物有用于治療焦慮恐慌癥，以下列舉一些實(shí)例。
動(dòng)物和藥劑服用以6組圈養(yǎng)的雄性Hooded Lister大鼠(200-250g)或雄性TO小鼠(20-25g)。以成對(duì)圈養(yǎng)稱重280-380g的普通狨猴(callithrix jacchus)。所有的動(dòng)物都在12小時(shí)明/暗循環(huán)下，用食物和水隨意圈養(yǎng)。
除了另有說明，一般都是在試驗(yàn)前40分鐘，通過腹腔注射(i.p)或皮下注射(s.c)給藥藥劑，對(duì)于大鼠和狨為1ml/kg的容積量，對(duì)于小鼠為10ml/kg的容積量。
a)小鼠的明/暗箱試驗(yàn)裝置是一個(gè)頂部敞開的箱子，長45cm，寬27cm，和高27cm，由隔板分成大(3/5)，小(2/5)區(qū)，隔板比四壁延高20cm(costall B.等人(1989)Pharmacol.Biochem.Behav.32777-785)。沿地板水平，在隔板的中心處開有7.5×7.5cm的開口。小的箱室涂成黑色，大的箱室涂成白色。白箱室用60W的鎢燈照明，用紅光照明實(shí)驗(yàn)室，將每個(gè)小鼠通過放在白區(qū)的中心而進(jìn)行試驗(yàn)，并使它習(xí)慣新環(huán)境5分鐘，測(cè)定在照明位點(diǎn)中度過的時(shí)間(Kilfoil T.等人(1989)Neuropharmacol.28901-905)。
b)鼠的高位X迷宮試驗(yàn)方法A標(biāo)準(zhǔn)的高位X迷宮(Handley S.L.等人(1984)Naunyn-Schiedeberg的Arch.Pharmacol.3271-5)，如Field等人(1991)Br.J.Pharmacol.102 Suppl304P中所述是自動(dòng)化的。將動(dòng)物放在面向開臂之一的X迷宮中心處。為了確定焦慮效應(yīng)，在5分鐘的試驗(yàn)期內(nèi)，測(cè)定在開臂的進(jìn)入和在結(jié)束的一半所度過的時(shí)間(Costall等人(1989)Br.J.Phamacol.96Suppl.312P)。
結(jié)果(圖1)在試驗(yàn)前60分鐘以10mg/kg劑量腹膜給藥化合物1的鼠群中，與只接收載體的鼠群比較，在迷宮開臂處度過時(shí)間的％顯著增加，探查開臂結(jié)束度過的時(shí)間量也明顯增加。
c)狨猴的人恐嚇試驗(yàn)在2分鐘的試驗(yàn)時(shí)間內(nèi)，記錄通過動(dòng)物因恐嚇刺激而出現(xiàn)的體態(tài)變化的總數(shù)(人站在離狨猴箱約0.5m處，并凝視進(jìn)狨猴的眼睛)。記錄體態(tài)的變化是凝視狹縫、尾部姿態(tài)，在箱內(nèi)/高位處作氣味標(biāo)識(shí)，立毛，后退，和背部成拱形狀。每個(gè)動(dòng)物在藥物處理前和處理后的試驗(yàn)日期經(jīng)受兩次恐嚇刺激。在首次(控制)恐嚇后，至少2小時(shí)，進(jìn)行皮下藥物處理。對(duì)每種化合物的預(yù)處理時(shí)間是40分鐘。用Dunnett′試驗(yàn)后的單向方差分析來分析兩次記錄間的不同。
d)大鼠的沖突試驗(yàn)在工作室內(nèi)培訓(xùn)大鼠群壓桿以獲得食物。計(jì)劃程序包括交替進(jìn)行如下操作，通過打開室光而發(fā)信號(hào)，間隔30s變化，進(jìn)行4次4分鐘未懲罰周期，和通過關(guān)閉室光而發(fā)信號(hào)以恒比5的三次3分鐘處罰(通過伴隨輸送食物對(duì)腳的沖擊)。對(duì)每只鼠調(diào)整腳的沖擊的程度，與未懲罰的應(yīng)答相比，獲得大約80～90％的應(yīng)答抑制，在培訓(xùn)的日期內(nèi)鼠群接收含鹽載體。
f)大鼠的社會(huì)相互作用試驗(yàn)方法社會(huì)相互作用活動(dòng)場(chǎng)是環(huán)形的(直徑70cm)，由白色有機(jī)玻璃制成，壁高30cm?；顒?dòng)場(chǎng)通過位于活動(dòng)場(chǎng)上方的強(qiáng)光源(350lux)直接照射。在活動(dòng)場(chǎng)的正上方還安裝一臺(tái)照相機(jī)，與相鄰室內(nèi)的視頻記錄儀連接，為以后分析進(jìn)行試驗(yàn)期間記錄。
將大鼠按體重進(jìn)行配對(duì)，以保證一對(duì)的成員重量差小于10g。在將鼠放入活動(dòng)場(chǎng)的前60分鐘，對(duì)每對(duì)中的兩個(gè)鼠進(jìn)行載體(n＝10)或各種劑量試驗(yàn)化合物(n＝10/組)的腹膜注射5分鐘。由對(duì)藥物處理不明的觀察者記錄在活躍的社會(huì)調(diào)查(鼠對(duì)用鼻子聞，追蹤和整理)中度過的時(shí)間。對(duì)于藥物處理的，以隨意的順序在1000～1400之間進(jìn)行試驗(yàn)，在每次試驗(yàn)后要擦試整個(gè)活動(dòng)場(chǎng)。利用單向ANOVA分析數(shù)據(jù)，隨后對(duì)各種差異進(jìn)行Post-hoc Duncan′s試驗(yàn)。
結(jié)果(圖2)以3.75和7.5mg/kg[F(2，27)＝7.2，p＜0.01]注射的化合物1明顯增加了大鼠的社會(huì)相互作用能力。就百分比增加而言，兩種劑量是相近的。對(duì)于運(yùn)動(dòng)活性沒有作用，這就證明對(duì)于社會(huì)相互作用的能力的作用是有選擇的。
g)大鼠敞開場(chǎng)地的試驗(yàn)方法敞開活動(dòng)場(chǎng)是環(huán)形的(直徑70cm)，由白色有機(jī)玻璃制成，壁高30cm。通過位于活動(dòng)場(chǎng)的正上方的強(qiáng)光源(350lux)照射活動(dòng)場(chǎng)。與相鄰室的視頻記錄儀連接的照相機(jī)也安裝在活動(dòng)場(chǎng)的正上方，為后來分析進(jìn)行試驗(yàn)期間記錄。底板用線分成內(nèi)環(huán)和外環(huán)。劑量給藥后60分鐘，將每個(gè)鼠放置在活動(dòng)場(chǎng)中心5分鐘，并留下以進(jìn)行探查。由對(duì)藥物處理不明觀察者記錄在活動(dòng)場(chǎng)周邊附近度過的時(shí)間，和在活動(dòng)場(chǎng)內(nèi)區(qū)度過的時(shí)間，當(dāng)動(dòng)物的4個(gè)爪都在區(qū)域時(shí)，才認(rèn)為在內(nèi)活動(dòng)場(chǎng)內(nèi)，同樣，當(dāng)4個(gè)爪都在外環(huán)中時(shí)，才認(rèn)為在周邊處。在內(nèi)區(qū)域度過的時(shí)間，是以在內(nèi)外區(qū)域內(nèi)總時(shí)間的百分比表示，并通過單向ANOVA分析，隨后對(duì)各種差異進(jìn)行Post-hoc Duncan′s試驗(yàn)。
結(jié)果(圖3)與對(duì)照動(dòng)物比較，以3.75mg/kg進(jìn)行腹膜注射化合物1的鼠，在活動(dòng)場(chǎng)的內(nèi)區(qū)域中度過時(shí)間的百分比明顯增加，這反應(yīng)處理焦慮的作用。
h)隔離豚鼠幼畜導(dǎo)致焦慮的發(fā)音模式動(dòng)物的精神病模式通常用大鼠或小鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物。然而，就這一點(diǎn)講，豚鼠是最適合的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因?yàn)樗鼈兙哂信c人類相類似的中心5HT1D受體，通過暫時(shí)隔離母體引起豚鼠發(fā)聲是對(duì)影響行為的試驗(yàn)?zāi)Ｊ?。還知道，在這種豚鼠的焦慮模式中能夠抑制隔離叫聲的化合物是臨床效應(yīng)的征兆。
方法以5分鐘隔離時(shí)間定量測(cè)定豚鼠幼畜(2-14天齡)的悲痛叫聲，在這之后使他們與他們的母親和小伙伴重新相聚。試驗(yàn)箱由白色內(nèi)壁、白色照明的聲音減弱盒構(gòu)成。借助于微型擴(kuò)音器和DAT記錄器，在DAT磁帶上記錄發(fā)出的聲音。在連續(xù)3天進(jìn)行3次預(yù)試驗(yàn)后，首先利用最少發(fā)射500次聲響的標(biāo)準(zhǔn)選擇幼畜。作為正控制，包括苯甲二氮雜和攝取5-羥色胺的抑制劑氟苯氧丙胺。每只幼畜接受試驗(yàn)化合物(化合物1，1-30mg/kg，腹膜內(nèi)(i.p.)注射，在50％環(huán)糊精中、苯甲二氮0.1-1mg/kg，皮下注射(s.c.)在羥甲基纖維素(CMC)中，或者氟苯氧丙胺1-10mg/kg，皮下注射，在水載體中)，并在與母體隔離前，返回家籠30分鐘。作為正控制，每天平行試驗(yàn)苯甲二氮(1mg/kg)。對(duì)每組，通過一對(duì)t試驗(yàn)而進(jìn)行，計(jì)算分析處理前和處理后所發(fā)出叫聲數(shù)的差異。使用Kruskall-Wallis試驗(yàn)分析叫聲數(shù)減少的百分比，隨后在載體和不同劑量之間進(jìn)行Mann-Whitney試驗(yàn)。
結(jié)果在所有的研究劑量下，化合物1顯著地減少了隔離引發(fā)的叫聲。在試驗(yàn)前30分鐘，只注射化合物1，隨著劑量(1-30mg/kg，i.p.)增加叫聲減少的百分比，以10mg/kg的MED(圖4以平均減少±SEM的百分比表示結(jié)果。對(duì)載體組*P＜0.05，Kruskull-Wallis試驗(yàn)，隨后Mann-Whitney試驗(yàn))。這種效果優(yōu)于苯甲二氮所觀察到的效果(MED＝1mg/kg；圖5)。因?yàn)殒?zhèn)靜作用，所以研究中不包括這種化合物的較高劑量。氟苯氧丙胺以10mg/kg的最低有效劑量(MED)也能明顯降低叫聲數(shù)(圖5)。很明顯抗焦慮和抗抑郁藥物都能減少由豚鼠發(fā)出的隔離叫聲。鈴蟾肽拮抗物化合物1如這些化合物一樣有效，表明這類化合物作為新型的抗焦慮/抗抑郁藥劑存在一定潛力。
2)肺動(dòng)脈高血壓Hurel S.J.等人(Lancet(1996)3481243)指出GRP受體拮抗物注入到遭受肺動(dòng)脈高血壓痛苦的病人中，隨后就能減小肺收縮壓力。本發(fā)明的化合物通過標(biāo)準(zhǔn)藥物方法證實(shí)可用于治療肺動(dòng)脈高血壓癥。
3)肺修補(bǔ)和肺發(fā)育的紊亂癥幾種研究都強(qiáng)調(diào)GRP和GRP受體在肺損傷后的肺修補(bǔ)和在肺發(fā)育中的作用(Spurzem J.R.等人(1997)Am J.Respir.Cell.Mol.Biol.16209-211，WangD.等人(1996)Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.14409-416；Spindel E.R.，同上14407-408)。肺損傷包括因吸煙誘發(fā)而導(dǎo)致增加肺的類鈴蟾肽的肽量。由Cutz E.等人的發(fā)現(xiàn)(Pediatrics(1996)98668-72)，提出母體吸煙可能使嬰兒肺神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的增殖而使嬰兒突然死亡的綜合癥(SIDS)(正如根據(jù)氣管上皮對(duì)鈴蟾肽免疫反應(yīng)的百分比所測(cè)定的)，并提出這些細(xì)胞的機(jī)能障礙可對(duì)SIDS的病理生理學(xué)作出貢獻(xiàn)。通過標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法證明本發(fā)明的化合物可用于治療肺修補(bǔ)和肺發(fā)育的紊亂癥。
4)治療癌癥本發(fā)明還關(guān)于治療癌癥的方法，它包括向病人或?qū)ο螅貏e是哺乳動(dòng)物，尤其是人類，施用有效量的式I化合物，最好是與細(xì)胞毒素劑共軛的式I化合物。該方法特別適用于其腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的癌癥，包括某些前列腺癌或胰腺癌。
當(dāng)使用直接標(biāo)記的式I化合物于治療目的時(shí)，最好使用鹵素取代的Ar作為放射性核素。用于治療的鹵素放射性核素最好是β-輻射或α-輻射的放射性核素。對(duì)于治療癌癥的最佳的Ar鹵素取代基包括131I、211At、76Br和77Br，131I尤其好。
Ar由放射性核素鹵素取代的式I化合物，通過相應(yīng)非放射性化合物的親電子芳香取代而易于制備，其中Ar由鹵素或活性基團(tuán)取代。這種鹵素優(yōu)選是Br或I，最好的活性基團(tuán)包括三丁基錫、三甲基甲硅烷、叔-丁基二甲基甲硅烷，等。
式I化合物與細(xì)胞毒素劑的共軛物，特別優(yōu)選是當(dāng)式I化合物中R3是羥基或氨基。在這種情況下，本發(fā)明的化合物可方便地通過二官能部分，如谷氨酸等，與細(xì)胞毒素劑連接，形成共軛物。適宜的細(xì)胞毒素劑，包括如阿霉素(doxorubicin)、抗癌化學(xué)治療的化合物，如Merck Index，第12版，1996，P，MISC-10中描述的。
本發(fā)明還提出使用式I化合物與放射性核素的共軛物，用于放射性治療法的優(yōu)選放射性核素發(fā)射α或β粒子，包括188Re，131I，221At，212pb，212Bi，76Br，77Br等等(例如，The Merck Index，第12版，1996，page MISC-93)。使用通常方法可制備所說的共軛物。例如，可利用二官能的螯合劑，如三琥珀(trisucein)(Safavy A.等人(1993)Bioconj.Chem.4194-8)，根據(jù)SafavyA.等人在Cancer(1997)80(Suppl)2354-9中采用的方法，使放射性核素，如188Re，與式I化合物連接。共軛物可采用其在進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)時(shí)破裂而釋放出細(xì)胞毒素劑的化合物形式，化合物在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化，以產(chǎn)生上式的母體化合物，例如，通過在進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)時(shí)進(jìn)行水解，這種化合物最為理想。
本發(fā)明治療哺乳動(dòng)物腫瘤的方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施加抑制腫瘤量的本發(fā)明的至少一種化合物的組合物。這種抑制腫瘤的量是對(duì)象化合物中至少一種的量，該量足以使化合物定位于腫瘤處，以減小腫瘤的生長或大小。該劑量為0.1～500mmol/kg體重。優(yōu)選劑量為5～50mmol/kg體重。
根據(jù)放射性核素的型式可變化放射性計(jì)量。然而，考慮到放射性量時(shí)，可使用從1毫居(mCi)到約800mCi。優(yōu)選可使用10～600mCi。然而，當(dāng)考慮劑量時(shí)，放射性化合物的比放射性應(yīng)考慮到。這種比放射性最好是很高的，例如對(duì)123I-標(biāo)記的化合物，比放射性至少為約1000～約50000Ci/mM。對(duì)123I-標(biāo)記的化合物的比放射性，優(yōu)選為約10000～約22000Ci/mM。
a)前列腺癌鈴蟾肽在人類的前列腺癌細(xì)胞中，通過GRP受體專門誘發(fā)起細(xì)胞內(nèi)的鈣流動(dòng)(Aprikian A.G.et al.(1996)J.Mol.Endocrinol16297～306)。這就提出了神經(jīng)肽的鈴蟾肽族在前列腺癌的生物學(xué)中起到調(diào)節(jié)作用。使用抗體提高抗鈴蟾肽抑制前列腺癌細(xì)胞系的生長(Hoosein N.M.(1993)Cancer Bull.45436-411)。通過標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明的化合物可用于前列腺癌的診斷和治療。
b)胰腺癌正常的和腫瘤的胰腺細(xì)胞含有特殊的GRP受體，它在惡性胰腺組織表達(dá)更多(Hajri A.et al.(1996)Dancreas1225～35)。類鈴蟾肽的肽可刺激人類胰腺癌細(xì)胞的增殖(Wang Q.J.等人Int.J.Caneer(1996)68528-34)。因此，可以使用鈴蟾肽受體拮抗物治療胰腺癌。而且，可以使用放射性標(biāo)記的鈴蟾肽受體拮抗物治療胰腺癌。通過標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明的化合物可用于治療胰腺癌。
5)肝的卟啉癥肝卟啉癥的主要臨床表現(xiàn)是神經(jīng)性癥狀，包括腹部疼痛、神經(jīng)病和精神干擾。認(rèn)為在疾病急性期間，系統(tǒng)循環(huán)中，通過一些腸胃的和神經(jīng)傳遞質(zhì)的聚肽，包括GRP的增加，引起神經(jīng)性癥狀(Medenica R.等人(1997)Cell mol.Biol.439-27)。因此，用鈴蟾肽受體拮抗物治療可降低這些結(jié)合到鈴蟾肽受體的聚肽的作用，并減輕急性卟啉癥的癥狀。通過標(biāo)準(zhǔn)的藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明的化合物可用于肝卟啉癥的治療。
6)內(nèi)臟疼痛通過以如下藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明中使用的化合物適用于內(nèi)臟疼痛。
刺激大鼠的結(jié)腸在麻醉下，對(duì)大鼠進(jìn)行氣管造口術(shù)，對(duì)頸動(dòng)脈作套管插入術(shù)，以監(jiān)測(cè)血壓。內(nèi)結(jié)腸注射0.6％乙酸后45分鐘，進(jìn)行結(jié)腸膨脹(75mmHg，30s)。通過測(cè)量這些結(jié)腸膨脹后的血壓降低證明結(jié)腸疼痛。然后皮下注射試驗(yàn)化合物，30分鐘后，再進(jìn)行6次結(jié)腸膨脹。通過在預(yù)處理周期間和事后處理期間血壓降低的比較，計(jì)算抗傷害性的百分比。使用這種方法，化合物1，以10mg/kg產(chǎn)生57％的抗傷害性。
7)腸胃的分泌干擾已經(jīng)證明GRP在檢測(cè)腸胃分泌功能的干擾是一個(gè)很有價(jià)值的工具，包括那些與十二指腸潰瘍有關(guān)的疾病和幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)感染(McColl K.E.等人(1995)Aliment.Pharmacol.Ther.9341-7)。結(jié)果是放射性標(biāo)記的鈴蟾肽受體拮抗物可用于診斷這些病癥。其他的腸胃功能，像膽囊收縮、胰腺分泌，和胃-食道的活動(dòng)性可由GRP調(diào)節(jié)控制，并且，放射性標(biāo)記的鈴蟾肽受體拮抗物可用于診斷這些病癥。通過標(biāo)準(zhǔn)的藥物學(xué)方法證明本發(fā)明的化合物可用于腸胃分泌干擾的治療。
8)嘔吐鈴蟾肽在青蛙皮膚內(nèi)以高濃度存在。作為保護(hù)反應(yīng)的一部分，當(dāng)捕食者吞下時(shí)，兩棲動(dòng)物會(huì)分泌催促物質(zhì)，在哺乳動(dòng)物中，鈴蟾肽是廣泛地分布在GI道內(nèi)，在那里它可引起胃活動(dòng)性和分泌的變化。本發(fā)明的鈴蟾肽受體拮抗物可降低惡心嘔吐，并因此，在治療嘔吐是有效的，尤其是對(duì)服用抗癌劑的病人更有效?？梢允褂靡韵碌乃幬飳W(xué)方法證明本發(fā)明化合物在治療嘔吐的功效。
順鉑(cisplatin)誘發(fā)白鼬嘔吐的拮抗作用作為與對(duì)照動(dòng)物比較，利用以下方法，通過體內(nèi)順鉑(cisplatin)誘發(fā)白鼬嘔吐，證明本發(fā)明中所用化合物的止吐特性。使用靜脈注射順鉑(30mg/kg)。在注射順鉑前30分鐘，再在注射催吐劑后45分鐘，一般通過非腸胃道注射研究的化合物。隨著給藥催吐物質(zhì)，在5小時(shí)期間，連續(xù)觀察各個(gè)籠中的白鼬。在觀察期間記錄每只動(dòng)物惡心嘔吐的發(fā)作次數(shù)，對(duì)每個(gè)處理組的結(jié)果以平均±S.E.M表示。利用單向差異分析(ANOVA)評(píng)估，用本發(fā)明化合物處理和用載體(PEG200，0.5ml/kg)處理之間存在的差異顯著，隨后進(jìn)行Student的t-試驗(yàn)。
9)厭食癥鈴蟾肽引起小鼠攝取葡萄糖的降低。在缺乏GRP受體的小鼠中，鈴蟾肽不再顯示這種作用(Hampton L.等人Proc.Natl.Acad.Soi.USA.953188-92，1998)。本發(fā)明使用的鈴蟾肽受體拮抗物可增加進(jìn)食行為，因此，在治療厭食癥中有效，諸如癌癥病人的厭食癥。當(dāng)與對(duì)比動(dòng)物比較，通過測(cè)量小鼠的食物攝取和體重增加，證明體內(nèi)施用本發(fā)明所用化合物的開胃作用。
10)疼痛通過以下藥物學(xué)方法證明本發(fā)明化合物在治療疼痛中的應(yīng)用。
a)鹿角菜膠誘發(fā)大鼠的痛覺過敏和異常性疼痛將鹿角菜膠(20mg/ml的100μl)給藥到后爪的足底面中，測(cè)量對(duì)外部熱和機(jī)械刺激的痛覺過敏和異常性疼痛。
b)外科疼痛的卵巢子宮切除術(shù)后的模式在手術(shù)期間通過鼻錐保持用異熒烷(為誘導(dǎo)作用用5％，為保持麻醉用2％)和1∶4O2/NO2的混合物以麻醉雌大鼠。在手術(shù)期間將動(dòng)物放在恒溫毯上。在finea alba中，通過中線腹部切口(2cm長)進(jìn)行卵巢子宮切除術(shù)。用5.0絲線使用單夾具技術(shù)將卵巢韌帶和子宮頸進(jìn)行縫合。在腹壁上作4個(gè)簡(jiǎn)單的中斷縫合(5.0絲)。用4個(gè)傷口夾封閉皮膚，用局部抗菌素處理傷口。
為內(nèi)臟傷害的癥狀，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行手術(shù)后的試驗(yàn)，手術(shù)后，立刻將動(dòng)物放在單獨(dú)的有機(jī)玻璃籠內(nèi)，并以30分鐘一批記錄腹部姿勢(shì)。記錄的姿勢(shì)是弓背的位置，與后肢向內(nèi)移動(dòng)有關(guān)的腹部肌肉的收縮，身體的拉伸，和較低腹部對(duì)地板的擠壓。對(duì)于有關(guān)在后爪的病覺過敏和異常性疼痛的癥狀，動(dòng)物也可試驗(yàn)。
c)糖尿病引發(fā)的神經(jīng)性疼痛模式如早期所述的，使用單一的腹膜注射鏈脲霉素(50mg/kg)誘發(fā)大鼠(250-300g)產(chǎn)生糖尿病(Courteix等人，1993，Pain5381-88)。對(duì)照動(dòng)物接受類似的等滲鹽水注射。
d)神經(jīng)性疼痛的緩慢壓縮傷害模式由Bennett和Xie，在Pain3387-107(1988)中早期描述，誘發(fā)緩慢壓縮傷害(CCI)。簡(jiǎn)單說，用戊巴比妥鈉60mg/kg腹膜注射麻醉大鼠。通過bicepsfemoris，使用鈍器解剖法使左側(cè)坐骨神經(jīng)暴露在大腿股中間水平，并接近坐骨的三叉一側(cè)，寬松地扎結(jié)4個(gè)結(jié)扎(4.0編織的絲線)，以相距1mm間隙松松地環(huán)繞它而結(jié)扎，然后將肌肉以層狀封閉?？砂磶追N方法測(cè)量疼痛閾值。
1)熱痛覺過敏在給藥前和后的不同的時(shí)間點(diǎn)，對(duì)大鼠使用Vgo Basile足底試驗(yàn)，接著以Hargreaves等人(1998)Pain3277-78的改進(jìn)方法評(píng)估熱痛覺過敏。使動(dòng)物習(xí)慣于在高位玻璃臺(tái)上由3個(gè)單獨(dú)的有機(jī)玻璃盒構(gòu)成的裝置。在臺(tái)子下面設(shè)置可移動(dòng)的熱輻射源，并集中在所要求的爪上。記錄爪子收回的等待時(shí)間。有一個(gè)從22.5s到防止組織損傷的自動(dòng)切斷點(diǎn)。
2)靜態(tài)異常性疼痛使用Semmes-Weinstein Von Frey毛發(fā)測(cè)量機(jī)械過敏性。將動(dòng)物放進(jìn)底部為線網(wǎng)的籠中，使接近它們的爪子的底部，在開始實(shí)驗(yàn)前使它們熟習(xí)該環(huán)境。通過使動(dòng)物的右后爪的趾面，按照力的增長順序(0.7，1.2，1.5，2，3.6，5.5，8.5，11.8，15.1和29g)，與Von Frey毛發(fā)接觸達(dá)6s。一旦確立縮回應(yīng)答，下一個(gè)降下的Von Frey毛發(fā)開始，對(duì)爪子再次試驗(yàn)，直到?jīng)]有應(yīng)答發(fā)生為止。以最高29g的力提起爪子，以及誘發(fā)應(yīng)答，由此，表示切斷點(diǎn)。記錄誘發(fā)應(yīng)答所需要的最低力(以g計(jì))作為爪子縮回的閾值(PWT)。
11)診斷癥狀本發(fā)明提供一種用于具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的哺乳動(dòng)物組織的體內(nèi)診斷成象的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥一種診斷成象量的本發(fā)明化合物，并檢測(cè)具有許多有鈴蟾肽受體細(xì)胞的組織的成象。尤其是本發(fā)明提供用于檢測(cè)某些類型的癌癥，例如前列腺癌和胰腺癌的方法。
本發(fā)明所用的化合物結(jié)合到細(xì)胞表面鈴蟾肽受體上并對(duì)上述癌細(xì)胞和對(duì)具有鈴蟾肽受體的細(xì)胞，呈現(xiàn)強(qiáng)烈的細(xì)胞特異性和親合性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明是指用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，包括向哺乳動(dòng)物施用診斷成象量的上述式I化合物，并觀測(cè)在哺乳動(dòng)物組織中的化合物的滯留量。本發(fā)明還提供一種用于診斷癌癥的方法，使用標(biāo)記的，優(yōu)選使用適于成象的放射性核素標(biāo)記的式I鈴蟾肽受體拮抗物。由Michelot J.M.等人(1991)在J.Nucl.Med.321573-80中描述了適于成象的放射性核素實(shí)例。用于診斷成象的優(yōu)選放射性核素不發(fā)射像α、β一類的粒子。當(dāng)用于診斷成象時(shí)，可使用Ar的鹵素取代基作為放射性核素。而且，所述鹵素放射性核素基團(tuán)，優(yōu)選用于診斷成象的基團(tuán)，主要是放射γ的放射性核素，它可使用放射性成象方法，例如通過閃爍掃描成象術(shù)，而進(jìn)行檢測(cè)。這種放射γ的放射性核素發(fā)出的射線，足以通過組織穿透要檢測(cè)的。用于診斷成象的Ar基團(tuán)的優(yōu)選的鹵素取代基，包括123I，124I，125I，131I，18F，76Br和77Br。用于診斷成象的更好的基團(tuán)包括123I，125I和18F，123I特別優(yōu)選用于診斷成象。
本發(fā)明的化合物一般在一些癌細(xì)胞類型上，結(jié)合到特異的細(xì)胞受體上，這種癌細(xì)胞包括胰腺癌、前列腺癌和有關(guān)的細(xì)胞。本化合物結(jié)合的細(xì)胞受體實(shí)例是細(xì)胞表面的鈴蟾肽受體。在受體結(jié)合的檢測(cè)中，已證明本發(fā)明中所用化合物的結(jié)合特性，正如WO 98/07718中所描述的。
根據(jù)本發(fā)明，體內(nèi)檢測(cè)哺乳動(dòng)物腫瘤或含有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的方法，包括向哺乳動(dòng)物施加一種含有診斷成象量的至少一種本發(fā)明化合物的組合物。這種診斷成象量是至少一種目的化合物的劑量，它可使化合物足以定位于腫瘤或組織，以能檢測(cè)腫瘤或組織。這種劑量為每升化合物1μg～1g，它給藥劑量為1ng～10μg/kg體重。對(duì)于診斷成象，本發(fā)明化合物的優(yōu)選劑量為約10ng～約2μg/kg。而且，對(duì)于診斷成象，應(yīng)當(dāng)考慮施用的放射性劑量，優(yōu)選施用約0.1mCi～約20mCi的放射性化合物。
正如本文中所描述的，使用放射性探測(cè)器，例如γ-放射性探測(cè)器可檢測(cè)以一種或多種本發(fā)明化合物標(biāo)記的腫瘤或組織。一種這樣的方法是使用閃爍照相法。也可以利用X線體層照相術(shù)，例如單光子發(fā)射計(jì)算的X線體層照相術(shù)(SPECT)或正電子發(fā)射X線體層照相術(shù)(PET)，以改進(jìn)顯像。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于哺乳動(dòng)物組織樣品的癌細(xì)胞的體外檢測(cè)方法，包括將哺乳動(dòng)物的組織樣品與體外診斷成像量的式I或式II中任一種化合物接觸一段時(shí)間，在足以使化合物結(jié)合到癌細(xì)胞上的細(xì)胞表面鈴蟾肽受體，并檢測(cè)這種結(jié)合。通過技術(shù)人員已知的方法收集樣品，例如收集組織的活體解剖或體液。例如樣品可用切片刀進(jìn)行切片，以易于用顯微鏡檢查并觀測(cè)結(jié)合的化合物。樣品也可用適宜的固定劑固定住，在培育之前或之后，用一種本發(fā)明的化合物以改進(jìn)樣品組織的組織質(zhì)量。足以使化合物結(jié)合到癌細(xì)胞上細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的條件包括標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)條件，即，樣品可體外培養(yǎng)并在生理介質(zhì)中用一種本發(fā)明的化合物培育。這種條件對(duì)技術(shù)人員是公知的。另一種方法是樣品可固定，然后在等滲或生理緩沖液中，用本發(fā)明的化合物進(jìn)行培育。至少一種用于體外檢測(cè)癌細(xì)胞量的，本發(fā)明化合物的量為1ng/l～1000μg/l。優(yōu)選量為1μg/l～100μg/l。
當(dāng)本發(fā)明的化合物用于體外診斷癌癥時(shí)，可使用Ar的取代基作為放射性核素。對(duì)于體外診斷癌癥的優(yōu)選的取代基放射性核素，包括125I，18F，-14COOH，-14CH3，3H等。對(duì)于結(jié)合一種本發(fā)明化合物的細(xì)胞的檢測(cè)，可在所選擇化合物的存在下培育樣品，然后洗滌，并用標(biāo)準(zhǔn)的閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。另一種方法是將樣品浸漬在照相乳劑中，幾天后，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)，如曝光的銀粒子。
權(quán)利要求
1.式I化合物或其藥物可接受的鹽在處理、預(yù)防或診斷焦慮和恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌癥疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中任何一種所用藥物的制造應(yīng)用， 其中j為0或1，k為0或1，l為0，1，2，或3，m為0或1，n為0，1或2，Ar是苯基、吡啶基或嘧啶基，每種可以是未取代的，或者被選自烷基、鹵素、烷氧基、乙?；?、硝基、氨基、-CH2NR10R11、氰基、-CF3，-NHCONH2，和-CO2R12中的1～3個(gè)取代基取代。R1是氫或1-7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，R8是氫或和由3-7個(gè)碳原子的R1形成的環(huán)，R2是氫或以1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈、或環(huán)狀烷基、它也可含有1-2個(gè)氧或氮原子，R9是氫或3-7個(gè)碳原子與R2形成的環(huán)，它可含有氧或氮原子；或者R2和R9可一起成為羰基，Ar1可以是單獨(dú)選自Ar中，并也可包括吡啶基-N-氧化物、吲哚基、咪唑基，和吡啶基，R4、R5、R6和R7每一個(gè)都是單獨(dú)地選自氫和低級(jí)烷基，R4也可與R5形成2-3個(gè)原子的共價(jià)鍵，它可包括氧或氮原子。R3可單獨(dú)地選自Ar，或者是氫、羥基、-N-Me2，N-甲基-吡咯基、咪唑基、N-甲基-咪唑基、四唑基、N-甲基-四唑基、噻唑基、-CONR13R14、烷氧基， ，或 其中p為0，1或2，Ar2是苯基或吡啶基，R10、R11、R12、R13和R14每一個(gè)都是單獨(dú)地選自氫或者有1-7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，特征是，化合物是式II的化合物， 其中Ar是未取代苯基、或由選自異丙基、鹵素、硝基和氰基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基，R4，R5和R6是氫，R7是甲基或氫，R3是2-吡啶基或羥基，和Ar1是吲哚基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物和咪唑基。
3.(S)3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧-吡啶-2-基)-環(huán)己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺或其藥物上可接受的鹽，在治療預(yù)防或診斷焦慮和恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌癥疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中任何一種所用的藥物的制造應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的應(yīng)用，特征是，藥物是用于治療或預(yù)防因十二指腸潰瘍或幽門螺桿菌感染引起的胃腸分泌失調(diào)癥的藥物。
5.權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，在哺乳動(dòng)物腫瘤的哺乳動(dòng)物中診斷成象用藥物的制造中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的基團(tuán)Ar是由γ輻射的放射性核素的鹵素所取代的苯基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的基團(tuán)Ar是由123I，124I，125I，131I，18F，76Br或77Br取代的苯基。
8.權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，在用于治療前列腺癌或胰腺癌用的藥物的制造中的應(yīng)用。
9.細(xì)胞毒素和權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物的共軛物在治療哺乳動(dòng)物腫癌用藥物的制造中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求9的應(yīng)用，特征是，共軛物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)破裂，并釋放細(xì)胞毒素劑。
11.權(quán)利要求8，9或10的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由β輻射或α輻射的放射性核素鹵素所取代的苯基。
12.權(quán)利要求8，9或10的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由131I，211At，76Br或77Br取代的苯基。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，特征是，共軛物包括通過螯合劑使放射性核素與式I化合物連接。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，特征是，放射性核素是188Re。
15.根據(jù)權(quán)利要求5-14中任一項(xiàng)的應(yīng)用，特征是，藥物是針對(duì)含有具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的癌細(xì)胞的哺乳動(dòng)物腫瘤。
16.一種用于體外檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織樣品中癌細(xì)胞的方法，它包括使所述哺乳動(dòng)物組織樣品與體外診斷量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3化合物進(jìn)行接觸。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由β輻射或α輻射的放射性核素鹵素所取代的苯基。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由131I，211At，76Br或77Br取代的苯基。
19.根據(jù)權(quán)利要求16，17或18的方法，特征是，試驗(yàn)是用于含有具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的癌細(xì)胞的組織樣品。
20.一種用于治療焦慮或恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖癥、肺動(dòng)脈高壓癥、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中中任何一種疾病的方法，包括向經(jīng)受上述疾病并需要治療的病人，給藥以有效量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或它們?cè)谒幬锷峡山邮艿柠}。
22.一種用于預(yù)防焦慮或恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖癥、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中的任一種疾病的方法，包括向經(jīng)受上述疾病并需要治療的病人，給藥以有效量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物上可接受的鹽。
23.一種用于診斷焦慮或恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖癥、肺動(dòng)脈高壓癥、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中的任何一種疾病的方法，包括向經(jīng)受上述疾病并需要治療的病人，給藥以有效量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物上可接受的鹽。
24.一種治療哺乳動(dòng)物腫瘤用的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥以一種組合物，該組合物含有抑制腫瘤量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物學(xué)上可接受的鹽。
25.一種用于診斷存在哺乳動(dòng)物腫瘤的哺乳動(dòng)物方法，它包括向哺乳動(dòng)物給藥以診斷成像量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
已發(fā)現(xiàn)式I化合物的新型應(yīng)用，式I中Ar、Ar
文檔編號(hào)A61P25/24GK1461217SQ0082008
公開日2003年12月10日 申請(qǐng)日期2000年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月20日
發(fā)明者羅伯特·D·平諾克, 馬丁·C·普里查德 申請(qǐng)人:沃納-蘭伯特公司