專利名稱：氧化氮合酶抑制劑磷酸鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型脒基化合物、其制備方法、包含所述化合物的藥用組合物以及它們的治療用途，尤其是其作為誘導(dǎo)型氧化氮合酶選擇性抑制劑的用途。
氧化氮是可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的內(nèi)源性刺激劑，參與許多生物作用。此外，認(rèn)為氧化氮過量產(chǎn)生與許多病癥有關(guān)，包括敗血癥休克和許多炎癥性疾病。氧化氮合酶催化L-精氨酸生物合成氧化氮。已經(jīng)介紹許多氧化氮合酶抑制劑并建議將其用于治療用途。
最近，該領(lǐng)域的目標(biāo)在于獲得相對(duì)于內(nèi)皮型氧化氮合酶(eNOS)對(duì)誘導(dǎo)型氧化氮合酶(iNOS)或神經(jīng)元型氧化氮合酶(nNOS)具有選擇性的氧化氮合酶抑制劑。
因此，WO98/30537介紹了下式的選擇性NO合酶抑制劑或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
根據(jù)WO98/30537，合適的鹽包括與有機(jī)和無機(jī)的酸或堿生成的鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽包括與以下酸形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、醋酸、三氟醋酸、丁二酸、乙二酸、富馬酸、馬來酸、丁酮二酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸和羥乙磺酸。藥學(xué)上可接受的堿鹽包括銨鹽、堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽和鎂鹽)以及與有機(jī)堿(例如二環(huán)己基胺和N-甲基-D-葡糖胺)形成的鹽。用鹽酸鹽作了舉例說明，并且認(rèn)為是吸濕性鹽。
本發(fā)明尋求提供一種選擇性iNOS抑制劑，它的吸濕性顯著小于例如WO98/30537中所舉例子鹽酸鹽。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)在WO98/30537范圍內(nèi)的選擇性iNOS抑制劑，并且具有包括相對(duì)非吸濕性等多種優(yōu)點(diǎn)。相對(duì)非吸濕性的化合物很有用，因?yàn)椴蝗菀讖目諝庵形账?，所以很容易分離、配制和加工。
根據(jù)本發(fā)明，提供一種式(I)化合物或其溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
因此，本發(fā)明提供(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸磷酸鹽或其溶劑化物(優(yōu)選水合物)或生理學(xué)功能衍生物。本發(fā)明包括該化合物的所有多晶體。優(yōu)選每一分子式(I)化合物與至少一分子水結(jié)合，例如與1、2或3分子水、尤其是1或3分子水結(jié)合。在一個(gè)特別優(yōu)選方面，本發(fā)明提供(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸磷酸鹽的(1∶1)水合物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解磷酸存在一種以上形式。本發(fā)明上下文中優(yōu)選使用的形式為正磷酸。
優(yōu)選在25℃、相對(duì)濕度60％以下時(shí)基本不潮解(即快速吸收空氣中水分)的式(I)化合物。更優(yōu)選在25℃、相對(duì)濕度70％以下時(shí)基本不潮解的式(I)化合物。
優(yōu)選在25℃、相對(duì)濕度70％以下時(shí)吸收水分的質(zhì)量變化不超過5％w/w的式(I)化合物。更優(yōu)選在25℃、相對(duì)濕度70％以下時(shí)吸收水分的質(zhì)量變化不超過2％w/w的式(I)化合物。最優(yōu)選在25℃、相對(duì)濕度70％以下時(shí)吸收水分的質(zhì)量變化不超過1％w/w的式(I)化合物。
適合醫(yī)學(xué)應(yīng)用的式(I)化合物的溶劑化物為結(jié)合藥學(xué)上可接受的溶劑的那些化合物。但是，結(jié)合非藥學(xué)上可接受的溶劑的溶劑化物也包含在本發(fā)明范圍內(nèi)，例如在制備式(I)化合物、其溶劑化物和生理學(xué)功能衍生物中用作中間體。
術(shù)語“生理學(xué)功能衍生物”是指具有與式(I)化合物相同的生理功能的式(I)化合物衍生物，例如通過在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為式(I)化合物。根據(jù)本發(fā)明，生理學(xué)功能衍生物的例子包括酯、酰胺以及氨基甲酸酯，優(yōu)選酯和酰胺。
式(I)化合物的藥學(xué)上可接受的酯和酰胺可能具有可轉(zhuǎn)化為C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、或氨基酸酯或酰胺的酸基。式(I)化合物的藥學(xué)上可接受的酰胺和氨基甲酸酯可能具有可轉(zhuǎn)化為C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、氨基酸酰胺或氨基甲酸酯的氨基。
如上所述，式(I)化合物為NO合酶抑制劑。WO98/30537概括地證明了下式化合物或其鹽、溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物為NO合酶抑制劑 沒有以磷酸鹽舉例說明。
上述式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的溶劑化物和生理學(xué)功能衍生物可用于預(yù)防或治療需要氧化氮合酶抑制劑尤其是誘導(dǎo)型氧化氮合酶抑制劑的臨床病癥。所述病癥包括炎癥性疾病、休克狀態(tài)、免疫性疾病和胃腸道動(dòng)力性疾病。上述式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的溶劑化物和生理學(xué)功能衍生物也可以用于預(yù)防或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，包括偏頭痛和代謝性疾病(包括異常脂血癥)。
休克狀態(tài)是指氧化氮過量產(chǎn)生引起的狀態(tài)，例如敗血癥休克、出血性休克、創(chuàng)傷性休克或暴發(fā)型肝衰竭引起的休克或者以下治療引起的休克TNF、IL-1和IL-2等細(xì)胞因子治療或者細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑(例如5，6-二甲基呫噸酮醋酸)治療。
炎癥性疾病和免疫性疾病的實(shí)例包括以下疾病關(guān)節(jié)免疫性疾病、尤其是免疫性關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體關(guān)節(jié)衰竭)、胃腸道免疫性疾病(例如潰瘍性結(jié)腸炎、節(jié)段性回腸炎和其它炎癥性腸病、感染引起的胃炎和粘膜炎癥、非甾體抗炎藥引起的腸病)、呼吸道免疫性疾病(例如成人呼吸窘迫綜合征、哮喘、囊性纖維化、上呼吸道炎癥性疾病(例如鼻炎，如過敏性鼻炎)或慢性阻塞性肺病)、心臟免疫性疾病(例如心肌炎)、神經(jīng)組織免疫性疾病(例如多發(fā)性硬化)、胰腺免疫性疾病(例如糖尿病及其并發(fā)癥)、腎臟免疫性疾病(例如腎小球腎炎)、皮膚免疫性疾病(例如皮炎、牛皮癬、濕疹、蕁麻疹)、眼免疫性疾病(例如青光眼)、器官移植免疫性疾病(例如排斥反應(yīng))、多器官疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡)和病毒或細(xì)菌感染引起的炎癥性疾病。
此外，有證據(jù)顯示，動(dòng)脈粥樣硬化以及例如腦或缺血性心臟病低氧或缺血性損傷(再灌注或沒有再灌注)后存在誘導(dǎo)型氧化氮合酶引起的氧化氮過量產(chǎn)生。
胃腸道動(dòng)力性疾病包括腸梗阻，例如術(shù)后腸梗阻和敗血癥腸梗阻。
中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病是指涉及過量產(chǎn)生氧化氮的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，例如偏頭痛、精神病、焦慮癥、精神分裂癥、睡眠紊亂、腦缺血、CNS創(chuàng)傷、癲癇、多發(fā)性硬化、AIDS型癡呆、慢性神經(jīng)變性性疾病(例如Lewy Body癡呆、亨廷頓舞蹈病、帕金森氏病或阿耳茨海默氏病)、急性和慢性疼痛以及可能與非腎上腺素非膽堿能神經(jīng)有關(guān)的病癥如陰莖異常勃起、肥胖和飲食過多。
急性疼痛的實(shí)例包括骨骼肌疼痛、術(shù)后疼痛和手術(shù)疼痛。慢性疼痛的實(shí)例包括慢性炎癥疼痛(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎)、神經(jīng)疾病性疼痛(例如帶狀皰疹后神經(jīng)痛、糖尿病性神經(jīng)系統(tǒng)疾病、三叉神經(jīng)痛、功能性腸病性疼痛例如過敏性大腸綜合癥、非心臟性胸痛和交感持續(xù)性疼痛)以及癌癥和纖維肌痛性疼痛。
過量產(chǎn)生的氧化氮通過影響引起高甘油三酯血癥的脂蛋白脂酶活性而與代謝性疾病有關(guān)。誘導(dǎo)型氧化氮合酶選擇性抑制劑可用于涉及氧化氮過量產(chǎn)生的代謝性疾病，例如異常脂血癥。
此外，抑制氧化氮合酶可能具有以下方面的作用防止HIV感染性淋巴細(xì)胞減少、增加腫瘤在放療時(shí)的放射敏感性以及抑制腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤發(fā)展、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移。
因此，本發(fā)明提供一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物(例如人)的需要氧化氮合酶抑制劑抑制劑(例如iNOS抑制劑)的臨床疾病的方法，所述方法包括給予治療有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。本發(fā)明特別提供一種預(yù)防或治療炎性疾病和/或免疫疾病(例如關(guān)節(jié)炎、過敏性鼻炎或哮喘)的方法。本發(fā)明的更優(yōu)選方面是提供預(yù)防或治療選自疼痛、偏頭痛、腸梗阻和過敏性大腸綜合癥的臨床疾病的方法。
在另一方面，本發(fā)明還提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物，該化合物用于醫(yī)學(xué)治療、尤其用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物(例如人)的需要氧化氮合酶抑制劑抑制劑(例如iNOS抑制劑)的臨床疾病的方法。本發(fā)明特別提供用于預(yù)防或治療炎性疾病和/或免疫疾病(例如關(guān)節(jié)炎、過敏性鼻炎或哮喘)的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。本發(fā)明的更優(yōu)選方面是提供用于預(yù)防或治療選自疼痛、偏頭痛、腸梗阻和過敏性大腸綜合癥的臨床疾病的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
當(dāng)然，達(dá)到治療效果的式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物的必需用量根據(jù)具體化合物、給藥途徑、所治療的患者、所治療的具體病癥或疾病變化。本發(fā)明化合物可以口服用藥或注射用藥，劑量范圍為0.001-200mg/kg/天、優(yōu)選0.01-20mg/kg/天。成人的劑量范圍通常為0.1mg/天-10g/天、優(yōu)選1mg/天-1g/天。以分散單位提供的片劑或其它形式可以方便地包含有效量本發(fā)明化合物，所述有效量為上述劑量或多個(gè)相同劑量單位，例如含0.1mg-500mg、通常約1mg-200mg的劑量單位。
雖然式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物可以單獨(dú)用藥，但是優(yōu)選以藥用制劑形式用藥。
因此，本發(fā)明還提供藥用制劑，該藥用制劑包括式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物和藥學(xué)上可接受的載體或賦型劑并任選一種或多種其它治療成分。
本發(fā)明還提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物在制備用于預(yù)防或治療需要氧化氮合酶抑制劑(例如iNOS抑制劑)的臨床疾病例如炎性疾病和/或免疫疾病(例如關(guān)節(jié)炎、過敏性鼻炎或哮喘)的藥物中的用途。在進(jìn)一步優(yōu)選方面，本發(fā)明提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物在制備用于預(yù)防或治療選自疼痛、偏頭痛、腸梗阻和過敏性大腸綜合癥的臨床疾病的藥物中的用途。
在下文中，術(shù)語“活性成分”是指式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
制劑包括適合以下用藥途徑的制劑口服、胃腸外(包括皮下、真皮內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi))、吸入(包括微細(xì)顆粒的粉劑或?qū)⒉煌愋陀?jì)量量壓入氣溶膠、霧化器或吹入器制備的煙霧劑)、直腸以及局部(包括皮膚、口腔、舌下和眼內(nèi))，雖然最適合的用藥途徑可能依賴?yán)缃邮苷叩慕】禒顩r和疾病類型。制劑可以方便地以單位劑型出現(xiàn)，并且可以用藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的任何方法制備。所有方法包括將活性成分與一種或多種輔助成分組成的載體結(jié)合的步驟。通常，制劑的制備通過將活性成分與液體載體或微細(xì)固體載體或這兩種載體均勻、緊密地結(jié)合，然后如果需要可使產(chǎn)品成型為所需的制劑。
本發(fā)明適合口服的制劑可以為分散單位，例如膠囊、扁囊劑或片劑，每個(gè)單位含有預(yù)先確定數(shù)量的活性成分；為散劑或顆粒劑；為溶液劑或在水性液體或非水性液體中的混懸劑；或水包油的液體乳劑或油包水的液體乳劑?；钚猿煞菀部梢詾榇笸鑴?、干藥糖劑或粘貼。
可以任選與一種或多種輔助成分壓縮或模塑制備片劑。在合適的機(jī)器上將自由流動(dòng)形式(例如粉末或顆粒)的活性成分任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、潤(rùn)滑劑、表面活性劑或分散劑混合壓縮制備壓縮片劑。在合適的機(jī)器將用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的粉狀化合物的混合物模塑制備模塑片劑。片劑可以任選包衣或刻痕，并且可以配制為緩慢或控制釋放其中活性成分的片劑。
胃腸外用藥的制劑包括水性和非水性無菌注射液，它可以包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑以及使制劑與準(zhǔn)備接受者的血液等滲的溶質(zhì)；水性或非水性無菌混懸液，它可以包含混懸劑和增稠劑。制劑可以為單位劑量或多劑量容器，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以在冷凍干燥條件下貯存，只需要在臨用前立即加入無菌液體載體，例如鹽水或注射用水?？梢杂脽o菌粉劑、顆粒劑和前述的各種片劑制備即時(shí)使用的注射溶液和懸浮液。
直腸用藥的制劑可以為采用通常載體(例如可可油或聚乙二醇)的栓劑。
在口腔(例如面頰或舌下)局部用藥的制劑包括活性成分在調(diào)味基質(zhì)(例如蔗糖和阿拉伯膠、西黃蓍膠)中的錠劑以及活性成份在基質(zhì)(例如明膠和甘油、或蔗糖和阿拉伯膠)中的軟錠劑。
式(I)化合物的相對(duì)非吸濕性質(zhì)使得它特別適合以固體形式如片劑用藥。
在一個(gè)優(yōu)選方面，本發(fā)明提供包含式(I)化合物或其溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物的固體劑型。
優(yōu)選的單位劑量制劑是包含如上所述的有效劑量或其合適部分的活性成分的制劑。
應(yīng)該理解除了上述特別提到的成分外，本發(fā)明制劑還可包括其它與所討論制劑類型有關(guān)的本領(lǐng)域常規(guī)試劑，例如適合口服用藥的的試劑包括調(diào)味劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種制備式(I)化合物或其的溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物的方法，所述方法包括(i)使式(II)化合物或其對(duì)映異構(gòu)體、鹽或被保護(hù)的衍生物，
與式(III)化合物或其鹽反應(yīng)， 其中L為離去基團(tuán)，最合適的為C1-6烷氧基(例如乙氧基)、烷硫基、芳烷基硫基、芳硫基(例如芐硫基)、1-或2-萘基甲硫基或雜環(huán)基團(tuán)；接著以任何順序進(jìn)行以下步驟(ii)將所得化合物轉(zhuǎn)化為一磷酸鹽；(iii)任選除去任何保護(hù)基團(tuán)；(iv)任選從對(duì)映異構(gòu)體的混合物中分離出對(duì)映異構(gòu)體；(v)任選將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
由此方法制備的式(I)化合物優(yōu)選通過用合適溶劑(例如水性溶劑如水、含水乙醇或含水乙腈，或者極性溶劑如N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、二甲基乙酰胺或1-甲基-2-吡咯烷酮)重結(jié)晶提純。重結(jié)晶優(yōu)選溶劑為含水乙醇。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，將式(II)化合物和式(III)化合物反應(yīng)得到的化合物與磷酸、優(yōu)選與正磷酸反應(yīng)生成式(I)化合物。
將所得化合物轉(zhuǎn)化為磷酸鹽的步驟優(yōu)選包括利用甲苯和含水磷酸的兩相反應(yīng)。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，進(jìn)行以下步驟(i)將甲苯加入由式(II)化合物或其對(duì)映異構(gòu)體、鹽或被保護(hù)的衍生物與式(III)化合物或其鹽反應(yīng)所得的水層，形成兩相混合物；從該混合物中分離出甲苯層；將磷酸水溶液加入到甲苯層再次形成兩相混合物；再?gòu)脑摶旌衔镏蟹蛛x出水層。
當(dāng)L為C1-6烷氧基時(shí)，以上反應(yīng)步驟(i)可以在以下條件實(shí)現(xiàn)在堿性pH溶液，例如pH8-11，適合在pHp.5-10.5，在低溫下，例如-5℃-25℃，適合在20℃。當(dāng)L為烷硫基、芳烷基硫基或芳硫基時(shí)，以上反應(yīng)可以在以下條件實(shí)現(xiàn)在有機(jī)溶劑中，例如二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙酸乙酯或C1-4醇如乙醇中，在適當(dāng)?shù)臏囟认?，例?0-40℃，適合在室溫下進(jìn)行。
式(II)化合物優(yōu)選 式(III)化合物優(yōu)選 式(II)化合物和其衍生物可以如下制備使式(IV)化合物或其對(duì)映異構(gòu)體、鹽或被保護(hù)的衍生物， 其中X為離去基團(tuán)，最適合的基團(tuán)為鹵基如Br，與式(V)化合物或其鹽或被保護(hù)的衍生物反應(yīng)。
式(III)化合物和其鹽可以用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的有機(jī)化學(xué)方法制備，例如按照Shearer等在Tetrahedron Letters，1997，38，179-182中介紹的方法制備。
用于制備式(I)化合物的保護(hù)基團(tuán)可以按常規(guī)方法使用，例如用“Protective Groups in Organic Synthesis”，Theodora W Green，第2版(John Wiley and Sons，1991)介紹的方法，其中也介紹了除去此類基團(tuán)的方法。
在上述反應(yīng)中，伯胺適合保護(hù)為氨基甲酸酯，例如叔丁氧基羰基或芐氧基羰基，這些基團(tuán)可以在酸性條件下除去，例如用鹽酸或氫溴酸處理或通過水解除去。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能夠理解這種保護(hù)基團(tuán)的使用可以包括式(II)化合物中氨基的正交保護(hù)，從而在存在另一個(gè)基團(tuán)時(shí)有助于選擇性除去一個(gè)基團(tuán)，因此使得選擇性官能化一個(gè)氨基官能團(tuán)。例如，可以通過水解選擇性除去芐氧基羰基。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員也能夠理解其它正交保護(hù)策略，可以按照Theodora W Green(參見上文)介紹的常規(guī)方法實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明化合物的對(duì)映異構(gòu)體可以如下獲得(a)分離相應(yīng)的外消旋混合物的組分，例如通過手性色譜柱、酶拆解方法或制備并分離適當(dāng)?shù)姆菍?duì)映異構(gòu)體，或者(b)用適當(dāng)?shù)氖中猿跏荚贤ㄟ^上述方法直接合成。
任選將式(I)化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物可以用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的方法實(shí)現(xiàn)。例如，式(I)化合物的三水合物可以如下制備將相應(yīng)的一水合物在高濕度環(huán)境暴露24小時(shí)。
現(xiàn)在參照附圖舉例說明本發(fā)明。


圖1為在25℃下目標(biāo)相對(duì)濕度(％)對(duì)重量變化(％w/w)的完全等溫圖，表示式(I)化合物一水合物對(duì)水分的吸收作用和解吸作用；圖2為在25℃下目標(biāo)相對(duì)濕度(％)對(duì)重量變化(％w/w)的另一個(gè)完全等溫圖，表示式(I)化合物一水合物對(duì)水分的吸收作用和解吸作用；圖3為在25℃下目標(biāo)相對(duì)濕度(％)對(duì)重量變化(％w/w)的又一個(gè)完全等溫圖，表示式(I)化合物一水合物對(duì)水分的吸收作用和解吸作用；圖4為(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸鹽酸鹽的在25℃下目標(biāo)相對(duì)濕度(％)對(duì)重量變化(％w/w)的水分吸收的對(duì)照完全等溫圖；圖5為在25℃下目標(biāo)相對(duì)濕度(％)對(duì)重量變化(％w/w)的完全等溫圖，表示式(I)化合物三水合物對(duì)水分的吸附作用和解吸作用。吸收作用和解吸作用曲線重疊。吸附作用等溫線以相對(duì)濕度30％為起點(diǎn)一直增加到90％，接著解析作用從90％RH到0％RH。
圖6為式(I)化合物一水合物的X-射線衍射圖。
圖7為式(I)化合物三水合物的X-射線衍射圖。
實(shí)施例1制備式(II)化合物A)階段1制備L-高絲氨酸內(nèi)酯 L-甲硫氨酸 L-高絲氨酸內(nèi)酯MW＝149.21 MW＝182.01反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在室溫?cái)嚢柘轮苽銵-甲硫氨酸(1mol eq.，1.0wt)的水(4Vol)溶液、異丙醇(4vol)和冰醋酸(1.6vol)的懸浮液，向其中加入溴醋酸(1.0wt)。將懸浮液加熱至50℃，在此溫度保持2小時(shí)。溫度升至約82-85℃，將溶液再加熱5小時(shí)。冷卻橙棕色溶液，減壓除去溶劑。將茶褐色稠漿狀物在真空下加熱(水浴溫度90℃)2小時(shí)。讓漿狀物冷卻，然后懸浮于4M HCl的二噁烷(2Vol)溶液，在室溫下最少攪拌3小時(shí)。過濾收集結(jié)晶固體，將其懸浮于異丙醇(1.5vol)將懸浮液攪拌至少1小時(shí)。再次過濾收集固體，在50-60℃真空干燥獲得乳白色結(jié)晶固體L-高絲氨酸內(nèi)酯。
B)階段2制備(2S)-2-氨基-4-溴丁酸氫溴酸鹽 反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在20±5℃，靜止氮?dú)夥障拢瑢-高絲氨酸內(nèi)酯(1.0mol eq.，1.0wt)在冰醋酸(2Vol)中懸浮并攪拌。在懸浮液中加入45％w/v溴化氫的醋酸溶液(8Vol)。將反應(yīng)物在4小時(shí)內(nèi)漸變加熱至52±1℃，然后在52±1℃攪拌16小時(shí)獲得懸浮于黃色或橙色溶液的白色固體。將反應(yīng)物冷卻至20±2℃，在20±2℃保持至少2小時(shí)使產(chǎn)物完全沉淀。過濾收集固體。然后洗滌濾餅，首先用醋酸(3×2Vol)洗滌，然后用叔丁基甲基醚洗滌(TBME；3×2vol)。將產(chǎn)物在烘箱內(nèi)于45±5℃真空干燥至恒重，收集得到白色/乳白色結(jié)晶固體。
C)階段3制備(2S)-2-氨基-4-溴丁酸叔丁酯硫酸鹽 反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在氮?dú)夥眨?±3℃下，將(2S)-2-氨基-4-溴丁酸氫溴酸鹽(1mol eq.，1.0wt)在乙酸叔丁酯(10vol.)懸浮并攪拌約1小時(shí)。在約30分鐘內(nèi)向懸浮液滴加濃硫酸(1.2eq，0.445wt)，保持反應(yīng)物溫度在5±3℃。將反應(yīng)物加溫至18±3℃，在此溫度攪拌10min。在約10分鐘內(nèi)加入冰醋酸(2.5vol)，然后將反應(yīng)混合物劇烈攪拌直到獲得澄清溶液(達(dá)到3小時(shí))。繼續(xù)在18±3℃攪拌至少2小時(shí)。接著開始結(jié)晶，反應(yīng)混合物在18±3℃穩(wěn)定至少4小時(shí)。然后在50分鐘內(nèi)向漿狀物中加入甲苯(5.5vol)。將所得白色混合物在18±3℃攪拌18小時(shí)，然后過濾收集產(chǎn)物。濾餅用乙酸乙酯(2.5vol)洗滌。將潮濕產(chǎn)物與新的乙酸乙酯在20±3℃形成漿狀物1小時(shí)。再次過濾收集產(chǎn)物，濾餅用乙酸乙酯(2×2.5vol)洗滌。將產(chǎn)物在烘箱于20±5℃真空干燥。
D)階段4制備(2S)-4-溴-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸叔丁酯 反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在靜止氮?dú)夥眨?0±3℃下，將無水碳酸氫鈉(2.0mol eq.)在水(3.0vol)中劇烈攪拌。加入乙酸乙酯(3.0vol)，將混合物冷卻至5±2℃。在約20分鐘內(nèi)加入(2S)-2-氨基-4-溴丁酸叔丁酯硫酸鹽(1.0mol eq.，1.0wt)的水(2.0vol)溶液，保持反應(yīng)物溫度為5±2℃。然后在5分鐘內(nèi)，將二碳酸二叔丁酯(0.96eq)的乙酸乙酯(2.0vol)溶液加入反應(yīng)混合物中，保持反應(yīng)物溫度為5±2℃。讓兩相混合物加溫至20±3℃，然后再攪拌3-5小時(shí)。讓各層分離過夜。除去水層，有機(jī)層用鹽水(1×5vol)洗滌。分離出各層，有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥，過濾，然后減壓濃縮獲得無色油狀物。無色油狀物靜止固化得到白色堅(jiān)硬固體。
E)階段5制備S-(2-氨基乙基)-N-(叔丁氧基羰基)-L-高半胱氨酸叔丁酯 反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在氮?dú)夥眨?0±3℃下，將無水碳酸鉀(3.0mol eq.)加入攪拌下的巰基乙胺鹽酸鹽(1.5mol eq.)的甲醇(5vol)懸浮液。將混合物攪拌30分鐘，然后在反應(yīng)物保持在20±3℃下滴加(2S)-4-溴-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁酸叔丁酯(1.0mol eq.，1.0wt)的甲醇(5vol)溶液。將反應(yīng)混合物在25±2℃攪拌4小時(shí)。用水浴在＜30℃下減壓濃縮反應(yīng)混合物獲得白色殘余物。殘余物在叔丁基甲基醚(TBME；8vol)和水(8vol)間分配。在10分鐘后，充分振蕩/混合，讓各層分開。除去水相，用水浴在＜30℃下減壓濃縮有機(jī)相剩下約一半體積(約4vol)。在反應(yīng)物保持在20±3℃下將甲酸(1.0mol eq.)滴加到攪拌下的TBME溶液。將反應(yīng)混合物在20±3℃下攪拌1小時(shí)，在此期間形成白色沉淀。將混合物冷卻至5±2℃至少16小時(shí)。過濾收集產(chǎn)物，然后再用TBME(2×1vol)洗滌。在烘箱中于40±2℃真空干燥固體至恒重獲得白色結(jié)晶固體產(chǎn)物。
實(shí)施例2制備式(II)化合物的備選方法在靜態(tài)氮?dú)夥?，約5℃下，將(2S)-2-氨基-4-溴丁酸氫溴酸鹽(1.0wt，1.0mol)在乙酸叔丁酯(TBA，5vol)中懸浮并攪拌。將濃硫酸(98％純度；1.2mol eq.)在20分鐘內(nèi)加入懸浮液，反應(yīng)物溫度保持在～15℃。然后將反應(yīng)物加溫至約20℃，將其在20℃攪拌至少7小時(shí)。硫酸加入完畢后1-2小時(shí)觀測(cè)到結(jié)晶。將2M氫氧化鈉水溶液(8mol eqs)在約60分鐘內(nèi)加入反應(yīng)物，同時(shí)溫度保持在約20℃。檢測(cè)水溶液的pH，發(fā)現(xiàn)在9以上。分離出各層，丟棄水層。
在一個(gè)單獨(dú)容器中，將二碳酸二叔丁酯(99％；0.95mol eq.)溶于TBME(2vol)。在20分鐘內(nèi)將此溶液加入到TBA溶液，保持反應(yīng)物溫度低于20℃。將溶液在約20℃攪拌4小時(shí)。
將32％w/w NaOH(4vol)裝入反應(yīng)器，冷卻至約10℃。加入巰基乙胺鹽酸鹽(1.2mol eq.)，保持反應(yīng)物溫度在10-20℃。然后將此混合物攪拌約30分鐘使鹽酸鹽完全中和。加入Aliquat 175(甲基三丁基氯化銨；75％w/w水溶液；0.05mol)，保持反應(yīng)物溫度在10-20℃。將TBA/TBME溶液在20分鐘內(nèi)加入到以上水溶液，溫度保持在約20℃。然后兩相混合物在約20℃攪拌20小時(shí)。然后在10分鐘內(nèi)加入水(4vol)，反應(yīng)物溫度保持在約20℃。攪拌15分鐘得到2個(gè)澄清層。分離出水層并丟棄。有機(jī)層用水(2×4vol)洗滌，有機(jī)溶液中加入TBME(6-8vol)稀釋。然后將甲酸(98％w/w；0.8mol eq)在20分鐘內(nèi)加入攪拌下TBA/TBME溶液，反應(yīng)物溫度保持在約20℃。反應(yīng)混合物冷卻至-5℃24小時(shí)。過濾收集產(chǎn)物，然后加入TBME(2×1vol)洗滌。然后在烘箱中于40±5℃真空干燥固體獲得白色結(jié)晶固體產(chǎn)物。
此方法的反應(yīng)流程如下
實(shí)施例3制備式(III)化合物 反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在氮?dú)夥障聦⒘虼阴０?1wt，1eq.)加入攪拌下的乙腈(14vol)。所得漿狀物加熱至65℃±2℃，因此形成黃色溶液。在此溶液中滴加單獨(dú)的1-(氯甲基)萘(2.47wts，1.05eq.)的乙腈(3vol)溶液，以使反應(yīng)物溫度保持在60-65℃的方式控制加入。一旦加入完畢，再用部分乙腈(1vol)作內(nèi)部洗滌。將所得溶液加熱至70℃±2℃在10-20分鐘內(nèi)觀測(cè)到結(jié)晶。漿狀物在70℃±2℃總共加熱3小時(shí)，然后冷卻至室溫。濾出固體，濾餅用乙腈(2×5vol)洗滌。所得白色固體在45±5℃真空干燥至少16小時(shí)。
實(shí)施例4制備式(I)化合物(一水合物)反應(yīng)在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。在室溫下，將S-(2-氨基乙基)-N-(叔丁氧基羰基)-L-高半胱氨酸叔丁酯的甲酸鹽(1∶1)(式II化合物)(1.0moleq，1.0wt)以及硫代乙亞胺酸1-萘甲基酯鹽酸鹽(式III化合物)(1.2moleq)的混合物在乙酸乙酯(6vol)中攪拌2小時(shí)。加入水(8.5vol)，劇烈地?cái)嚢杌旌衔?0分鐘。讓各層靜止，收集包含N-(叔丁氧基羰基)-S-[2-(亞氨乙基氨基)乙基]-L-高半胱氨酸叔丁酯鹽酸鹽的水層。將水層冷卻至0℃，加入甲苯(5vol)。緩慢加入32％w/w氫氧化鈉水溶液(2.5mol eq)，溫度保持在2℃，劇烈攪拌兩相混合物10分鐘。分離各層，將水層再裝入容器中，貯存甲苯層。將甲苯(2.5vol)加入水層，混合物冷卻至0℃。緩慢加入32％w/w氫氧化鈉水溶液(1.0mol eq)，溫度保持在0℃，劇烈攪拌兩相混合物物5分鐘。分離各層，丟棄水層，包含N-(叔丁氧基羰基)-S-[2-(亞氨乙基氨基)乙基]-L-高半胱氨酸叔丁酯的甲苯層合并到以上容器中。加入正磷酸(1.5mol eq)的水溶液(2.5vol)。在70℃劇烈攪拌兩相混合物12小時(shí)。然后加入水(4vol)，混合物冷卻至40℃。分離出水層，用濃氨水溶液調(diào)節(jié)pH至5.5，溫度保持在35℃。將所得水溶液加熱至75℃，然后在20分鐘內(nèi)加入乙醇(6.5vol)，溫度保持在75℃。在30分鐘內(nèi)將溶液從75℃逐漸冷卻至53℃，加入晶種。將其在53℃保持2小時(shí)，在4小時(shí)逐步冷卻至5℃。所得漿狀物在此溫度保持20小時(shí)。過濾收集產(chǎn)物，用1∶1乙醇/水的混合物(2vol)洗滌，然后用乙醇(2vol)洗滌。將式(I)化合物，即(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸磷酸鹽一水合物，在60℃真空干燥至恒重。
此方法的反應(yīng)流程如下。
通過測(cè)量根據(jù)上述方法制備的式(I)化合物一水合物的三個(gè)樣品在25℃、0-90％的目標(biāo)相對(duì)濕度下的重量變化(％w/w)來測(cè)試其吸濕性。結(jié)果見附圖1-3。
為了進(jìn)行以上測(cè)試，使用以下儀器和參數(shù)Hiden IGASORP，系列IGA SA-040；Hiden Intelligent Analyser，型號(hào)HAS-022-120E，系列HALIGA-0042；-流動(dòng)速度＝495ml/min-等溫參數(shù)分析模式F1直到97％最小時(shí)間10min最大時(shí)間240minM-水平0.2％-等溫序列
溫度25℃吸附作用/％ 解吸作用/％0 80107020603050404050306020701080090-掃描＝2(1周期)從附圖1-3可以看出，本發(fā)明化合物在相對(duì)濕度70％以下沒有明顯吸收空氣中水分。
(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸磷酸鹽(1∶1)水合物的X-射線衍射數(shù)據(jù)見附圖6。下表1說明了使用的儀器及參數(shù)。下表2為峰值表。
表1
表2
實(shí)施例5制備式(I)化合物(三水合物)將根據(jù)實(shí)施例4方法制備的式(I)化合物一水合物(5g)暴露于相對(duì)濕度大于80％的環(huán)境中2個(gè)星期。產(chǎn)物用X-射線粉末衍射分析，證明為三水合物。(附圖7)(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸正磷酸鹽酸鹽的(1∶3)水合物的X-射線衍射數(shù)據(jù)見附圖7。下表3說明了使用的儀器和參數(shù)。下表4為峰值列表。
表3
表4
通過測(cè)量根據(jù)上述方法制備的式(I)化合物三水合物的一個(gè)樣品在25℃、0-90％的目標(biāo)相對(duì)濕度下的重量變化(％w/w)來測(cè)試其吸濕性。使用的儀器和參數(shù)與得到附圖1-3的數(shù)據(jù)所使用的一樣。結(jié)果見附圖5。
對(duì)照實(shí)施例A式(I)化合物為磷酸鹽的化合物的二鹽酸鹽如下制備使實(shí)施例1中間體產(chǎn)物，即N-(叔丁氧基羰基)-S-[2-(亞氨乙基氨基)乙基]-L-高半胱氨酸鹽酸鹽，與氯化氫和二噁烷在室溫下反應(yīng)，如以下所示。
通過測(cè)量根據(jù)上述方法制備的二鹽酸鹽化合物樣品在25℃、30-80％的目標(biāo)相對(duì)濕度下的重量變化(％w/w)來測(cè)試其吸濕性。結(jié)果見附圖4。
可以看出此化合物在50％以上相對(duì)濕度就快速吸收空氣中水分。在55％相對(duì)濕度，二鹽酸鹽的質(zhì)量變化約為11％；在60％相對(duì)濕度，二鹽酸鹽的質(zhì)量變化約為24％；在65％相對(duì)濕度，二鹽酸鹽的質(zhì)量變化約為32％。在相對(duì)濕度范圍30-75％的質(zhì)量變化約47％。
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物或其溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物
2.(2S)-2-氨基-4-{[2-(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸磷酸(1∶1)化合物或其溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
3.權(quán)利要求1或2要求保護(hù)的化合物，其中磷酸為正磷酸。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物，其中溶劑化物為水合物。
5.權(quán)利要求4要求保護(hù)的化合物，其中水合物為一水合物。
6.權(quán)利要求4要求保護(hù)的化合物，其中水合物為三水合物。
7.一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物例如人的需要氧化氮合酶抑制劑的臨床疾病的方法，所述方法包括給予治療有效量的權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中臨床疾病選自關(guān)節(jié)炎、哮喘、鼻炎、腸梗阻、偏頭痛、疼痛和過敏性大腸綜合癥。
9.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物的用途，該用途用于醫(yī)學(xué)治療。
10.一種藥用制劑，該制劑包含權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦型劑，任選一種或多種其它治療組分。
11.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物的用途，其中所述化合物用于制造預(yù)防或治療需要氧化氮合酶抑制劑的臨床疾病的藥物。
12.權(quán)利要求11的用途，其中臨床疾病選自關(guān)節(jié)炎、哮喘、鼻炎、腸梗阻、偏頭痛、疼痛和過敏性大腸綜合癥。
13.一種制備權(quán)利要求1或2定義的化合物、或其溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物的方法，該方法包括以下步驟(i)使式(II)化合物或其對(duì)映異構(gòu)體、鹽或被保護(hù)的衍生物 與式(III)化合物或其鹽反應(yīng)， 其中L為離去基團(tuán)；接著以任何順序進(jìn)行以下步驟(ii)將所得化合物轉(zhuǎn)化為一磷酸鹽；(iii)任選除去任何保護(hù)基團(tuán)；(iv)任選從對(duì)映異構(gòu)體的混合物中分離出對(duì)映異構(gòu)體；(v)任選將產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物。
14.權(quán)利要求13要求保護(hù)的方法，其中將所得化合物轉(zhuǎn)化為一磷酸鹽的步驟包括使用甲苯和含水磷酸的兩相反應(yīng)。
15.權(quán)利要求13或14要求保護(hù)的方法，其中步驟(i)以后將甲苯加入由式(II)化合物或其對(duì)映異構(gòu)體、鹽或被保護(hù)的衍生物與式(III)化合物或其鹽反應(yīng)所得的水層，形成兩相混合物；從該混合物中分離出甲苯層；將磷酸水溶液加入到甲苯層再次形成兩相混合物；再?gòu)脑摶旌衔镏蟹蛛x出水層。
全文摘要
一種式(I)化合物，即(2S)－2－氨基－4－{[2－(亞氨乙基氨基)乙基]硫基}丁酸磷酸鹽或其溶劑化物或生理學(xué)功能衍生物，該化合物用作誘導(dǎo)型氧化氮合酶的相對(duì)非吸濕性的選擇性抑制劑。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1527814SQ01822706
公開日2004年9月8日 申請(qǐng)日期2001年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月21日
發(fā)明者D·波克斯, D·科爾克洛, I·吉利斯, M·S·羅夫特, R·穆爾, D 波克斯, 寺, 羅夫特 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司