專利名稱：新型氟苯尼考類抗生素的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及有機化學、藥物化學、生物化學及醫(yī)學領域。具體地說，本發(fā)明涉及新型氟苯尼考類抗生素。
背景技術：
氟苯尼考為具有抗多種革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌活性的廣譜抗生素。氟苯尼考可用于預防和治療由鳥類、爬行動物、魚類、貝類及哺乳動物的易感病原體引起的細菌感染。其主要用途之一為治療由Mannhemia haemolytica、多殺巴斯德氏菌(Pasturellamultocida)和(或)睡眠嗜血菌(Haemophilus somnus)引起的牛肺炎及相關的牛呼吸道感染(通常通稱為牛呼吸性疾病或BRD)。其還被證明可用于治療由以下細菌引起的感染壞死梭桿菌(Fusobacteriumnecrophorum)和產(chǎn)黑素擬桿菌(Bacterioides melaninogenicus)引起的牛蹄皮炎；多殺巴斯德氏菌、大葉性肺炎放線桿菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)、豬鏈球菌(Streptococcus suis)、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella cholerasuis)和(或)支原體(Mycoplasma spp.)引起的豬呼吸性疾??；大腸桿菌(Escherichia coli)引起的雞大腸桿菌??；鯰魚愛德華氏菌(Edwardsiella ictaluri)引起的鯰魚腸敗血癥；殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)引起的鱒魚癤病。已證實對氟苯尼考敏感的其它屬細菌包括腸桿菌屬(Enterobacter)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、博德特氏菌屬(Bordetella)、變形菌屬(Proteus)和志賀氏菌屬(Shigella)。尤其是，氯霉素耐藥性微生物菌株如肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)、陰溝腸桿菌(E.cloacae)、傷寒沙門氏菌(S.typhus)和大腸桿菌(E.coli)對氟苯尼考敏感。
氟苯尼考是甲砜霉素的結構類似物，后者又為氯霉素的衍生物，氯霉素的芳香硝基被甲磺?；脫Q，該硝基與氯霉素誘發(fā)的、非劑量相關的不可逆的人類再生障礙性貧血有關。
氯霉素甲砜霉素 氟苯尼考氟苯尼考含有氟原子，該氟原子代替了氯霉素和甲砜霉素的伯羥基。這使得氟苯尼考對含質粒編碼的酶，即氯霉素乙酰轉移酶(CAT)的細菌引起的失活作用較不敏感，CAT使氯霉素和甲砜霉素的伯羥基乙酰化，從而阻止了氯霉素和甲砜霉素與敏感細菌的核糖體亞基結合。與核糖體結合是氯霉素抗生素的主要作用機理，其導致抑制肽基轉移酶，該轉移酶負責細菌體內將氨基酸向生長肽鏈的轉運及隨后的蛋白質形成過程。盡管如此，全球持續(xù)使用氯霉素和甲砜霉素結果證明，具有伯羥基的化合物確實具有治療細菌感染的功效。
近年來，許多屬和種的細菌開始顯示出對氟苯尼考的某些耐藥性。例如已發(fā)現(xiàn)以下細菌有耐藥性沙門氏菌(Salmonella sp.)(Bolton，L.F.等，Clin.Microbiol.1999，37，1348)；大腸桿菌(Keyes，K.等，Antimicrob.Agents Chemother，2000，44，421.)；肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)(Cloeckaert，A.等，Antimicrob.AgentsChemother.，2001，45，2381)；以及水生病原體，美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種(Photobaterium damselae subsp.piscicida)(以前稱殺魚巴斯德氏菌(Pasteurella piscicida))(Kim，E.等，Microbiol.Immunol.，1996，40，665)。已發(fā)現(xiàn)該耐藥性與高度保守基因(flo)有關，所述基因產(chǎn)生抗生素流出泵(Flo)。
氟苯尼考耐藥性的出現(xiàn)及其擴散危險促進了對新的抗生素的需求，所述新抗生素能夠保留或超過氟苯尼考的活性，保持其不受CAT酶的影響，以及不會成為Flo流出泵的底物。本發(fā)明化合物就屬于這類抗生素。
概述因此，本發(fā)明的一個實施方案是具有以下化學結構式的化合物 其中R1選自-OH和-F；R2和R3獨立選自氫、(1C-4C)烷基、鹵基、-CF3、-NH2、-CN和N3；R4選自以下-C(＝R5)R6；其中R5選自氧、N-C≡N和NOR7，其中R7選自氫、烷基、芳基、雜芳基、脂環(huán)基和雜脂環(huán)基；R6選自氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷氧基、芳基、雜芳基、脂環(huán)基和雜脂環(huán)基； 其中A1為碳或氮；A2、A3、A4和A5獨立選自碳、氮、氧和硫，條件是A1-A5中至少一個不為碳，所述環(huán)上的氮、氧和硫原子的總數(shù)不超過四個，而且所示環(huán)為芳香環(huán)；所示環(huán)的碳原子獨立被選自以下的取代基取代氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷基O-、-CF3、-OH、-CN、鹵基、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-、-NH2、(1C-4C)烷基NH-、((1C-4C)烷基)2N-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基C(O)-、(3C-6C)環(huán)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基OC(O)-、(1C-4C)烷基C(O)NH-、-C(O)NH2、(1C-4C)烷基NHC(O)-和((1C-4C)烷基)2NC(O)-，其中在所述任何取代基上的任何烷基可任選被選自以下的基團取代鹵基和-OH；如果A1為碳且所示環(huán)不含氧或硫，則氮原子中的一個可任選被選自以下的取代基取代(1C-4C)烷基、(1C-4C)烷基S(O)2-和-NH2； 其中A6、A7、A8、A9和A10獨立選自以下碳、氮和 條件是每次在A6-A10中只能有一個可以為 所示環(huán)上碳原子獨立被選自以下的取代基取代氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷基O-、-CF3、-OH、-CN、鹵基、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-、-NH2、(1C-4C)烷基NH-、((1C-4C)烷基)2N-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基C(O)-、(3C-6C)環(huán)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基OC(O)-、(1C-4C)烷基C(O)NH-、-C(O)NH2、(1C-4C)烷基NHC(O)-、((1C-4C)烷基)2NC(O)-和-OCH2O-，-OCH2O-取代基上的氧原子與相鄰環(huán)碳原子結合，其中在所述任何取代基上的任何烷基可任選被選自鹵基和-OH的基團取代；除當R2和R3均為F時R8為氫或F外，R8在所有化合物中均為氫；所述化合物或者為具有所示相對立體化學的外消旋體，或者為基本對映體純的并且具有所示絕對立體化學。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R1為-F。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R2和R3獨立選自Cl、F。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R8為氫。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為-C(＝R5)R6，其中R5和R6如上定義。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為CH3C(O)-。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為 其中A6、A7、A8、A9和A10如上定義，且A6-A10中的任何碳被選自以下的取代基取代氫、-NH2、鹵基-、-CN、(1C-4C)烷基-、(1C-4C)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-，其中在所述任何取代基上的任何烷基可任選被鹵基或-OH取代。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為 而A6-A10中的一個、兩個或三個為氮；所示環(huán)上剩余碳原子中的一個或兩個任選被-NH2取代，環(huán)上的所有其它碳原子未被取代。
在本發(fā)明的一個目前優(yōu)選的實施方案中，R4選自以下
和 在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為如上定義的 在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為 所有的碳原子和氮原子均未被取代。
在本發(fā)明的一個實施方案中，R4為 A2-A5中的一個碳被-NH2取代，所示環(huán)上的所有其它的碳未被取代，合適時，氮原子也未被取代。
在本發(fā)明的一個目前優(yōu)選的實施方案中，R4選自以下
和 本發(fā)明的一個目前優(yōu)選的實施方案是選自以下的一種化合物
和 其中所述化合物或者為具有所示相對立體化學的外消旋體，或者為基本對映體純的并且具有所示絕對立體化學。
本發(fā)明的一個目前具體優(yōu)選的實施方案是選自以下的一種化合物
和 其中該化合物或者為具有所示相對立體化學的外消旋體，或者為基本對映體純的并且具有所示絕對立體化學。
在本發(fā)明另一個具體優(yōu)選的實施方案中，此中的化合物為基本對映體純的并且具有1-(R)-2-(S)絕對構型。
本發(fā)明的一個實施方案是治療或預防細菌感染的方法，所述方法包括給予有需要的患者藥用有效量的本發(fā)明化合物。
在本發(fā)明的一個實施方案中，所述細菌感染是由以下屬的細菌引起的巴斯德氏屬(Pasteurella)、嗜血菌屬(Haemophilus)、梭桿菌屬(Fusobacterium)、擬桿菌屬(Bacterioides)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、腸桿菌屬(Enterobacter)、埃希氏菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、沙門氏菌屬(Salmonella)、志賀氏菌屬(Shigella)、放線桿菌屬(Actinobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、支原體屬(Mycoplasma)、愛德華氏菌屬(Edwardsiella)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、博德特氏菌屬(Bordetella)、變形菌屬(Proteus)或Mannheimia。
在本發(fā)明的一個實施方案中，所述細菌感染是由以下細菌引起Mannhemia haemolytica、多殺巴斯德氏菌、睡眠嗜血菌、壞死梭桿菌(Fusobacterium necrophorum)、產(chǎn)黑素擬桿菌、大葉性肺炎放線桿菌、豬鏈球菌、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella cholerasuis)、牛支原體(Mycoplasma bovis)、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)、豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、雞敗血支原體(Mycoplasmagallisepticum)、鯰魚愛德華氏菌、大腸桿菌、陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、中間葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumomae)、產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)、奇異變形菌(Proteus mirabilis)或殺鮭氣單胞菌(Aeromonassalmonicida)。
發(fā)明詳述附表簡述表1顯示本發(fā)明代表性化合物的結構。該表和表中的化合物既不意味著也不應認為以任何方式限制本發(fā)明。
表2是測試本發(fā)明化合物的微生物一覽表。該一覽表既不意味著也不應認為以任何方式限制本發(fā)明。
定義本文所用的“鹵基”是指氟、氯、溴或碘。
本文所用的“烷基”是指飽和(不含多重鍵)脂族(無離域π電子系統(tǒng))烴(如果未被取代，則只含碳和氫)。符號(n1C-n2C)烷基，其中n1和n2為1-6的整數(shù)，是指含n1-n2個碳原子的直鏈或支鏈烷基。例如(1C-4C)烷基是指CH3-、CH3CH2-、CH3CH2CH2-、CH3CH(CH3)-、CH3CH2CH2CH2-、CH3CH2CH(CH3)-或(CH3)3C-。所述烷基可以是未取代的，或者被一個或多個選自以下的部分取代鹵基、-OH、OCH3和-C≡N。
本文所用的“環(huán)烷基”是指全碳環(huán)或稠合多環(huán)，其盡管可含有一個或多個雙鍵，但仍然保持基本的脂族特性；即雙鍵之間不會相互作用形成環(huán)繞環(huán)的離域π電子系統(tǒng)。對于本發(fā)明的目的，所述環(huán)最多可含有七個碳原子。符號(3C-6C)環(huán)烷基是指三、四、五和六元全碳原子環(huán)。本文所用的“稠合的”是指兩個環(huán)烷基至少共享它們之間的一個環(huán)原子。因此，對于本發(fā)明的目的，象螺[4.4]壬烷這種化合物可認為是“稠合的”。更常見的是，稠環(huán)共享兩個相鄰的環(huán)碳原子。這種稠合系統(tǒng)的一個實例為萘烷。環(huán)烷基環(huán)可以是未取代的，或者被一個選自以下的部分取代-OH、-OCH3、鹵基和-C≡N。
本文所用的“芳基”是指單個全碳六元環(huán)或兩個稠合的六元環(huán)，該單環(huán)或稠環(huán)具有離域π電子系統(tǒng)。“稠合”是指系統(tǒng)中的每個環(huán)與至少另外一個環(huán)共享兩個相鄰的環(huán)碳原子。芳環(huán)可以是未取代的，或者被一個或多個選自以下的部分取代-OH、-OCH3、鹵基和-C≡N。
本文所用的“雜芳基”是指五元環(huán)或六元環(huán)或雙環(huán)，即兩個五元環(huán)，兩個六元環(huán)或者一個五元環(huán)和一個六元環(huán)稠合在一起，其中單環(huán)和稠環(huán)具有離域π電子系統(tǒng)。如果環(huán)為六元環(huán)，其只能由碳和氮組成，可含有1-4個氮原子。如果環(huán)為五元環(huán)，其必須含有一個氮、氧或硫原子，可含有一個、兩個或三個另外的氮原子。在五元環(huán)中央的一個圓圈表示該環(huán)為雜芳環(huán)。該圓圈用于強調這樣一個事實，即使環(huán)具有芳香性的雙鍵的位置不是固定的，而是所述位置取決于形成環(huán)的原子的性質，即它們是碳、氮、氧還是硫，以及何種基團與它們結合。一旦指明環(huán)原子，本領域技術人員立即就能明了任何五元雜芳環(huán)的實際結構。對于雜芳基，術語“稠合的”與在芳基中的含義相同。雜芳基可以是未取代的，或者被上述芳基的任何部分取代。
本文所用的“雜脂環(huán)”是指含有選自碳、氮、氧和硫的原子但無離域π電子系統(tǒng)的環(huán)系或稠合環(huán)系?！俺砗系摹钡暮x與上述環(huán)烷基環(huán)中闡述的含義相同。同樣，雜脂環(huán)可以是未取代的，或者被任何上述環(huán)烷基環(huán)中的相同部分取代。
當環(huán)碳原子被稱作“未取代”時，說明任何未填滿的化合價實際上被氫原子占據(jù)。同樣，如果環(huán)氮原子能夠被進一步取代，則稱其是未取代的，是指該氮與氫原子結合。
本文所用的“相對立體化學”是指取代基彼此之間在空間的相對位置。
本文所用的“絕對立體化學”是指按Cahn-Ingold-Prelog規(guī)則確定的取代基在三維空間中的確切位置，所述規(guī)則的應用是本領域技術人員眾所周知的。
本文所用的“對映體”是指一個分子的兩種絕對立體化學構型中的一種，所述構型能使平面偏振光向一個方向或相反方向旋轉(即順其原來軸向的逆時針方向旋轉，習慣上稱“左旋”，或順時針方向旋轉，習慣上稱“右旋”)。“基本對映體純的”是指該化合物含有的一種對映體大于90％，優(yōu)選大于95％，最優(yōu)選大于99％。
本文所用的“外消旋體”是指化合物的兩種對映體的1∶1混合物。外消旋混合物用符號(+/-)表示。基本對映體純的化合物不用該符號表示。
本文所用的“患者”是指鳥類、爬行動物、魚類、貝類和哺乳動物。具體地說，是指鳥類例如但不限于雞和火雞；魚類例如但不限于鱒魚、鮭魚、鯰魚和黃條獅魚；哺乳動物例如但不限于貓、犬、兔、綿羊、牛、豬、馬和山羊以及人。
討論預期本發(fā)明化合物可用于治療患者的細菌感染。
化合物以上概述對本發(fā)明化合物進行了一般性的闡述。本發(fā)明的示例性化合物如表1所示。該表和表中的化合物既不意味著也不應認為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
表1
















合成以市售氯霉素堿(1)為原料制備對映體純形式的中間體，或在堿性條件下使對溴苯甲醛與甘氨酸縮合制成外消旋混合物。為了合成中間體如9的純對映體，可將氯霉素堿轉變?yōu)榛衔?(Rebstock，M.C.等，J.Am，Chem.Soc.，1949，71，2458；Evans，D.D.等，J.Chem.Soc.，1954，1687；Morris，D.S.和Smith，S.D.，J.Chem.Soc.，1954，1680)。使化合物3經(jīng)歷Sandmeyer反應，之后在酸性條件下除去乙酸酯保護基團，生成純對映體9。
另外，可使對溴苯甲醛(5)轉變?yōu)?d/l)-蘇-對溴苯基甘氨酸(6，流程1)(Bolhoffer，W.A.J.Am.Chem.Soc.1954，76，1322；Herbert，R.B.；Wilkinson，B.；Ellames，G.J.Can.J.Chem.1994，72，114)，其可被保護為N-Boc衍生物7，然后用兩步還原用DCC和N-羥基琥珀酰亞胺活化，隨后用NaBH4處理，得到8。可將化合物9分離為其TFA鹽或游離堿。通過將胺和芐羥基保護為苯基噁唑啉10，隨后用三氟化(二乙氨基)硫(DAST)或三氟化[雙(2-甲氧基乙基)氨基]硫氟化(Lal，G.S.，J.Org.Chem.，1999，64，7048)，區(qū)域選擇性地引入氟，得到11?；衔?1可用于Suzuki交叉偶聯(lián)反應，以合成聯(lián)芳衍生物。另一個Suzuki反應的參與者即芳基硼酸，例如12可按所示流程制備，并可與芳基鹵反應。
流程1 i)純Ac2O；ii)H2(g)、10％Pd/C；iii)0℃，NaNO2/HBr水溶液，然后CuBr/HBr水溶液；iv)10％H2SO4，Δ，然后NaOH后處理；v)KOH、甘氨酸，然后HCl水溶液，然后NH4OH；vi)Boc2O、二氧六環(huán)、水；vii)DCC、HOSu，然后NaBH4THF然后H2O；viii)TFA，然后NaOH后處理；ix)苯甲亞氨酸乙酯鹽酸鹽、Et3N；x)-78℃至室溫，DAST或三氟化[雙(2-甲氧基乙基)氨基]硫；xi)先n-BuLi，-78℃，然后B(OMe)3，-78℃至室溫。
已證明除去苯基噁唑啉保護基團的條件與芳環(huán)的對位上的許多官能團不兼容。因此，根據(jù)文獻方法(流程2；Jommi，G.等，Gazz.Chim.Ital.，1986，116485)開發(fā)出了新的保護基團。使苯基絲氨酸6轉變?yōu)榧柞?3，將后者保護為噁唑烷酮(oxazolidinone)14，而14又用NaBH4還原為15。用DAST或者用三氟化[雙(2-甲氧基乙基)氨基]硫氟化，生成中間體16，其不能達到穩(wěn)定良好的Suzuki反應收率。因此，將16轉變?yōu)?7。引入Boc基團可促進噁唑烷酮保護基團的裂解(Grehn，L.等，Acta Chim.Scand.B，1986，40，745)，隨后通過堿催化裂解，生成18(Ishizuka，T.和Kunieda，T.，Tetrahedron Lett.，1987，28，4185；Jommi，G.等Gazz.Chim.Ital.，1988，11875)。
流程2 i)HCl、MeOH，0℃至室溫，18小時，然后回流18小時；ii)CDI、Et3N、THF/1，2-二氯乙烷；iii)0℃，NaBH4、MeOH；iv)-78℃，DAST或三氟化[雙(2-甲氧基乙基)氨基]硫，10分鐘，然后室溫下直至完成反應；v)Boc2O、DMAP、MeCN；vi)Cs2CO3、MeOH。
將化合物18保護為異亞丙基衍生物19，使后者轉變?yōu)榕鹚?3(流程3)。將化合物18、19、22和23用于Suzuki交叉偶聯(lián)反應?；衔?3的用途最廣，因為其可與任何芳基溴或芳基碘進行交叉偶聯(lián)，并且保護基團在溫和條件下易于除去?；衔?2作為Suzuki交叉偶聯(lián)反應的參與者很引人注目，因為這種偶聯(lián)反應直接生成需要的氟苯尼考類似物，而無需脫保護和二鹵乙酰化。然而，用22進行交叉偶聯(lián)的收率低于用23。用21進行交叉偶聯(lián)生成需要的產(chǎn)物，但被乙酸酯和一氯乙酸酯類似物所污染。
外消旋化合物20的光譜與以半合成的化合物11為原料，通過水解裂解和堿后處理合成的樣品的光譜相同。這提供了確鑿的證據(jù)，即已經(jīng)發(fā)生了具有適宜的相對蘇型或順式立體選擇性的苯基絲氨酸6的縮合反應。
流程3 i)9∶1 TFA、H2O，如果需要游離堿，然后NaOH后處理；ii)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；iii)2-甲氧基丙烯、p-TsOH·H2O；iv)二氟乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；v)二氟乙酰氯、Et3N、隨后1∶8∶1 Et3N、MeOH、H2O；vi)先-78℃，n-BuLi，然后B(OMe)3，-78℃至室溫。
用化合物11和12制備化合物28和29(流程4)。使化合物11與3-吡啶硼酸在標準兩相的Suzuki條件下進行交叉偶聯(lián)反應，生成被保護的中間體26。N-C交叉偶聯(lián)產(chǎn)物27按照Lam和其同事最近報道的方法(Lam，P.Y.S.等，Synlett，2000，674；Lam，P.Y.S.，Tetrahedron，Lett.，1998，39，2941；Lam，P.Y.S.，Tetrahedron Lett，2001，42，3415)制備。使26和27脫保護和二氯乙酰化，生成28和29。
流程4 i)間吡啶硼酸、Na2CO3、Pd(PPh3)4、THF、H2O、Δ；ii)6 N HCl水溶液，密封管100℃，然后堿后處理；iii)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；iv)Cu(OAC)2、吡啶、CH2Cl2、室溫、敞口、40小時。
使化合物23與2-溴-1，3，4-噻二唑(24)反應，生成48(流程5)。經(jīng)Suzuki交叉偶聯(lián)反應生成雜聯(lián)芳25。用9∶1 TFA/H2O使化合物25脫保護，同時除去Boc和異亞丙基基團，然后進行二氟乙?；?，生成48。
流程5 i)Cs2CO3，PdCl2(dppf)，THF，DMF，H2O；ii)9∶1 TFA/H2O；iii)Et3N、二氟乙酸甲酯、Δ雖然衍生物例如11的對溴官能團和相應的硼酸例如12作為氟苯尼考類似物的合成中間體具有想當?shù)膶嵱眯?，但是對氰基化合物也可作為重要的中間體。應用文獻方法(Morris，D.S.；Smith，S.D.，(參見上文))，已將中間體如30制成純對映體(流程6)。更大量的中間體使用外消旋的全合成中間體如35制備。用經(jīng)改進的文獻方法(Pines，S.H.和Kazlowski，M.A.，J.Org.Chem.，1972，37，292)，使對氰基苯甲醛與甘氨酸甲酯進行羥醛縮合生成32。
流程6 i)文獻方法-見原文；ii)文獻方法-見原文；iii)CDI、TEA、THF或1，2-二氯乙烷；iv)NaBH4、MeOH、0℃；v)DAST或三氟化[雙(2-甲氧基乙基)氨基]硫、-78℃，10分鐘，然后在室溫下直至完成。
化合物41(流程7)用中間體36制備，用30制備36的方法已有介紹(von Strandtmann，M.等，J.Med.Chem.，1967，10，888)。化合物36用H2SO4水溶液脫保護，然后區(qū)域選擇性地保護為苯基噁唑啉38。38經(jīng)DAST處理，得到化合物39，然后脫保護和二氯乙酰化，生成41。
流程7 i)MeLi、THF，然后H2O；ii)10％H2SO4水溶液，Δ；iii)Et3N、苯甲亞氨酸乙酯鹽酸鹽，Δ；iv)DAST，-78℃至室溫；v)6N HCl，Δ；vi)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH，Δ。
化合物47通過以下方法制備用鹽酸羥胺處理中間體35，隨后用原甲酸三乙酯處理生成43，使其脫保護生成46，然后二氯乙酰化。
流程8 i)NH2OH·HCl、EtOH，Δ；ii)原甲酸三乙酯、Δ；iii)Boc2O、DMAP、MeCN；iv)Cs2CO3、MeOH；v)TFA/H2O 9∶1；vi)二氯乙酸甲酯、Et3N、Δ。
對酰基衍生物可通過使被保護的中間體(流程9，化合物87和88)與酰氯進行Stille偶聯(lián)反應制得。通過用六甲基二錫進行由Pd催化的反應，引入三甲基甲錫烷基。
流程9 i)Me3SnSnMe3、Pd(PPh3)4、Δ、C6H6或PhMe以87為原料經(jīng)過Stille偶聯(lián)反應生成中間體89(流程10)，使后者脫保護和二氯乙?；?，制得環(huán)丁基衍生物73。
嘗試使89的相應環(huán)丙基衍生物脫保護，導致發(fā)生HCl催化的開環(huán)。因此，為制備91，需使用boc/異亞丙基方法，因為脫保護在不影響環(huán)丙基的條件下進行。
流程10 i)Pd2dba3、K2CO3、Et3N、環(huán)丁烷甲酰氯，室溫，3小時；ii)6N HCl密封管，Δ；iii)二氯乙酸甲酯、Et3N、MeOH、Δ；iv)Pd2dba3、K2CO3、Et3N、環(huán)丙烷甲酰氯，室溫，3小時；v)TFA/H2O如果需要，被保護的苯尼考(phenicol)中間體的對羧基苯基衍生物可按兩種方法制備。例如，水解17的p-腈類似物生成相應的羧酸。然而，腈通常不象溴衍生物那樣容易獲得。因此，優(yōu)選的羧化方法為置換溴基團。例如羧酸衍生物102(流程11)可通過鋰化17，隨后用CO2處理和用酸后處理制得。將化合物102轉變?yōu)榧柞?03，使其與肼反應生成104。用原甲酸三乙酯環(huán)化104得到噁二唑105，使105脫保護和二鹵乙?；?，生成106和107。
流程11
i)-78℃，n-BuLi、THF，然后通入干燥CO2氣泡，然后升溫至室溫，然后加H3O+；CH2N2；iii)肼、EtOH、Δ；iv)原甲酸三乙酯、Δ；v)TFA/H2O；vi)制備106，Et3N、二氟乙酸乙酯，室溫；制備107的條件同106，但需用二氯乙酸甲酯替換二氟乙酸乙酯。
102的羧酸衍生物也用于制備化合物如109(流程12)，方法為使其還原為醇108，隨后脫保護和二氯乙酰化。
流程12 i)DCC、五氟苯酚、EtOAc；ii)NaBH4、MeOH；iii)TFA/H2O；iv)二氯乙酸甲酯、Et3N、Δ。
生物學評價預期本發(fā)明的所有化合物都有抗微生物活性，其抗菌譜與氯霉素家族的其它成員相同。此外，還預期其可對抗一些對現(xiàn)有氯霉素抗生素產(chǎn)生耐藥的細菌有效，具體地說其對氟苯尼考耐藥的細菌有效。還預期現(xiàn)有氯霉素類抗生素對其無活性的一些種、屬的細菌，本發(fā)明化合物可能對其有活性。
還要說明的是，就生物活性而言，化合物的一種對映體可能比另一種對映體的活性更強。在這種情況下，不管是否說明，活性更強的異構體應被看作本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。本文中任何化合物的具有1-(R)-2(S)絕對構型的活性最強的對映體為特別優(yōu)選的實施方案。
為確定本發(fā)明化合物的活性范圍和水平，可使用以下方案。本領域技術人員根據(jù)本文公開的資料，將會明了其它的這類方案，而這類方案也包括在本發(fā)明的范圍內。預期本文中的某些化合物不僅具有相當?shù)目咕钚?，而且對目前氯霉素耐藥機理較少敏感。本文的篩選方案也可用于檢測這類特征。
藥敏試驗用肉湯微量稀釋測定法評估化合物抗一組細菌菌株的活性，測定按照NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)2000，Methods for Dilution of Antimicrobial SusceptibilityTests for Bacteria That Grow Aerobically(針對需氧菌的抗微生物藥物敏感性試驗的稀釋方法)，第五版，Approved Standard，NCCLSDocument M7-A5，第20卷，第2期)推薦的方法操作。最小抑菌濃度(MIC)定義為化合物抑制細菌生長的最小濃度。
以下10種微生物構成主要的測評組表2
aAcrAB以低水平表達的流出泵在經(jīng)陽離子調整的Mueller-Hinton肉湯(CAMHB)中進行測定，細菌接種濃度為5×105CFU/ml，終體積為100μl。將氟苯尼考和氯霉素對照及試驗化合物制成需要的終濃度的4倍。用多道吸液器在板上按2倍連續(xù)稀釋度直接稀釋至需要的濃度。稀釋后，向各孔中加入25μl的CAMHB。
細菌接種物如下制備。對于每一菌株，用一個分離菌落接種5ml的CAMHB。將培養(yǎng)物在振蕩培養(yǎng)箱中于35℃培養(yǎng)過夜(20小時)。然后用無菌鹽水稀釋至相當于0.5 McFarland懸浮液(約108CFU/ml)的密度。用CAMHB將該懸浮液再稀釋至約5×105CFU/ml。向各孔中加入體積50μl的接種物。在每一個板上都包括陽性和陰性生長對照。在TSA板上應用幾個10μl的10倍稀釋液測定原始接種物。將瓊脂板在35℃保溫過夜，統(tǒng)計菌落形成單位(CFU)。將微量滴定板于35℃保溫20小時，用微量滴定板讀數(shù)器(Molecular Devices)在650nm處讀數(shù)并通過用微量滴定板讀數(shù)鏡肉眼觀察，測定MIC。
藥用組合物本發(fā)明化合物及其前體藥物、或本發(fā)明化合物或其前體藥物的生理上可接受的鹽，可以直接給予患者或以藥用組合物給予患者，在藥用組合物中，將述物質與合適的賦形劑混合。制劑技術及給藥方法可在Remington′s Pharmacological Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版中查找。在Remington中討論的制劑及技術主要是供人類患者使用；然而，通過用獸醫(yī)領域技術人員熟知的技術很容易將其改進為適合非人類患者使用。
給藥途徑本文所用的“給藥”是指將本發(fā)明的化合物、鹽或前體藥物，或將含本發(fā)明的化合物、鹽或前體藥物的藥用組合物給予生物體，以治療或預防微生物感染。
合適的給藥途徑可以包括但不限于口服、直腸內、經(jīng)粘膜、肌內、皮下、脊髓內、鞘內、直接心室內、靜脈內、玻璃體內、腹膜內、鼻腔內、耳朵或眼睛內給藥。優(yōu)選的給藥途徑為口服和胃腸外給藥。
另外，患者可以局部而非全身性方式使用所述化合物，例如通過將制劑如藥膏直接涂在感染部位，或將所述化合物直接注射到感染組織。在任一情況下，都可使用緩釋制劑。
組合物/制劑可按本領域眾所周知的方法制備本發(fā)明的藥用組合物，例如使用多種眾所周知的混和、溶解、制粒、包糖衣、粉碎、乳化、灌裝膠囊、包埋(entrapping)或凍干方法。該組合物可與一種或多種生理上可接受的載體一起配制，所述載體包括賦形劑和助劑，其可促使活性化合物制成可藥用的制劑。合適的制劑取決于所選擇的給藥途徑。
對于注射給藥，包括但不限于靜脈內、肌內和皮下注射，本發(fā)明化合物可用水溶液配制，優(yōu)選用生理相容性緩沖液配制，如Hanks氏溶液、林格氏溶液、生理鹽水緩沖液；或用極性溶劑配制，包括但不限于N-甲基-2-吡咯烷酮、2-吡咯烷酮、其它吡咯烷酮、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、丙酮和甘油縮甲醛。對于經(jīng)粘膜給藥，在制劑中使用適于穿越屏障的滲透劑。這種滲透劑在本領域通常是已知的。
對于口服給藥，可通過將活性化合物與本領域眾所周知的藥學上可接受的載體混合，來配制所述化合物。這類載體可使本發(fā)明化合物配制成片劑、丸劑、錠劑、糖衣丸劑、膠囊劑、液體劑、凝膠劑、糖漿劑、糊劑、結晶漿液劑、溶液劑、混懸劑、可用患者的飲用水稀釋的濃縮溶液劑和混懸劑、可用患者食物稀釋的預混物等，供患者口服攝入。口服給藥的藥用制劑可按以下方法制備使用固體賦形劑，任選將生成的混合物粉碎，處理顆粒的混合物，如果需要，加入其它合適的助劑，得到片劑或糖丸芯?？墒褂玫馁x形劑具體地說為填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制品例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉和馬鈴薯淀粉；及其它物料如明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸之類的崩解劑。還可使用如藻酸鈉之類的鹽。
需給糖丸芯提供合適的包衣。為此目的，可使用濃糖溶液，其可任選含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液以及合適的有機溶劑或溶劑混合物。在片劑或糖丸芯包衣中可加入染料或色素，以便鑒別或給活性化合物不同劑量的組合標記特征。
可口服的藥用組合物包括由明膠制成的推入配合(push-fit)膠囊、以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封軟膠囊。推入配合膠囊中可含有活性成分并混有填充劑例如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，活性化合物可溶于或懸浮于合適液體例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。在這些制劑中也可加入穩(wěn)定劑。
對于吸入給藥，本發(fā)明化合物可方便地以氣霧劑的形式遞藥，此時使用壓力容器或噴霧器及合適的拋射劑例如但不限于二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳。就壓縮氣霧劑而論，可通過提供閥門以給予計量的量來控制劑量單位?？芍瞥衫缬糜谖肫骰虼等肫鞯拿髂z膠囊和藥筒，其含有所述化合物和合適粉末基質如乳糖或淀粉的粉末混合物。
所述化合物也可配制成例如通過大劑量注射或連續(xù)輸注的胃腸外給藥制劑。注射用制劑可制成例如安瓿或多劑量容器的單位劑型。有用的組合物包括但不限于含有油性或水性溶媒的混懸劑、溶液劑或乳劑，并且可含輔料如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。胃腸外給藥用藥用組合物包括活性化合物的水溶性形式的水性溶液劑，例如但不限于活性化合物鹽的水性溶液劑。另外，活性化合物的混懸劑可用親脂性溶媒制備。合適的親脂性溶媒包括脂肪油例如芝麻油、合成脂肪酸酯例如油酸乙酯和甘油三酯或脂質體等物質。水性注射混懸劑可含有增加混懸劑粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖酐。任選所述混懸劑還可含有合適的穩(wěn)定劑和/或增加化合物溶解性的物質，以制備高濃度溶液劑?；蛘撸龌钚猿煞忠部蔀榉勰┬问?，臨用前用合適的溶媒例如無菌無熱原的水重建。
所述化合物也可使用常規(guī)的栓劑基質如可可脂或其它的甘油酯配制成直腸給藥組合物，例如栓劑或滯留型灌腸劑。
除了上述制劑外，所述化合物也可配制成貯庫制劑(depotpreparation)。這種長效制劑可通過植入(例如皮下或肌內)或通過肌內注射給藥。為了適合該給藥途徑，本發(fā)明化合物可與合適的聚合物或疏水性物質(例如含藥理上可接受的油的乳液)一起配制，與離子交換樹脂一起配制，或制成微溶衍生物例如但不限于微溶鹽。
可使用用于相對疏水性藥物的其它遞藥系統(tǒng)。脂質體和乳劑為眾所周知的疏水藥物的遞藥溶媒或載體的實例。另外，盡管通常存在較大的毒性風險，但也可使用二甲亞砜等有機溶劑。
此外，所述化合物還可用緩釋系統(tǒng)遞藥，例如含治療藥物的固體疏水聚合物半滲透骨架。已確定了多種緩釋物質，這是本領域技術人員所熟知的。緩釋膠囊根據(jù)其化學性質可在幾周至高達100多天內釋放所述化合物。根據(jù)具體化合物的化學性質及生物穩(wěn)定性，還可使用其它的穩(wěn)定性策略。
本文所用的藥用組合物也可以包括固體或凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的實例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚乙二醇等聚合物。
劑量治療有效量是指能夠有效預防、緩解或改善微生物感染癥狀的化合物的量。治療有效量的確定足以在本領域技術人員判斷能力范圍之內，尤其根據(jù)本文公開的資料判斷。
對于本發(fā)明方法中使用的任何化合物，其治療有效量可首先根據(jù)細胞培養(yǎng)試驗估計。然后，可配制成用于動物模型的劑量，以便達到包括在細胞培養(yǎng)中測得的MIC在內的循環(huán)濃度。然后將所得信息用于更準確地測定適用于患者的劑量。
本文介紹的化合物的毒性和治療功效可按標準藥學方法在細胞培養(yǎng)或實驗動物中測得。例如某個具體化合物的MIC和LD50可按本領域眾所周知的方法測得。得到的數(shù)據(jù)可用于配制可用于患者的劑量范圍。當然，劑量可能因劑型及給藥途徑的不同而不同。主治醫(yī)師可根據(jù)患者的狀況選擇確切的制劑、給藥途徑和劑量。(參見例如Fingl等，1975，“The Pharmacological Basis of Therapeutics”，第1章，第1頁)。然而，一般而言，本發(fā)明化合物目前優(yōu)選的全身給藥劑量范圍為約1mg/kg至約100mg/kg。目前優(yōu)選的局部用藥的劑量范圍通常為約0.1mg至約1g。
可對劑量及給藥間隔進行個別調整，以使該化合物的血漿水平足夠維持與MIC或任何其它需要的水平相等的濃度。這種血漿濃度通常稱為最小有效濃度(MEC)。每種化合物的MEC都不相同，但可通過體外數(shù)據(jù)進行估計，例如達到微生物80％以上抑制所需的濃度可通過本文介紹的試驗來確定。達到MEC所需劑量取決于個體特征和給藥途徑。可用HPLC分析或生物分析測定血漿濃度。
也可用MEC值測定給藥間隔。應使用某種控制方法給藥，所述方法使化合物在10-90％的給藥時間內，優(yōu)選在30-90％的時間內，最優(yōu)選在50-90％時間內，在血漿中的水平能夠維持在MEC以上。
就局部用藥或選擇性攝取而論，有效局部藥物濃度可能與血漿濃度無關，可使用本領域其它已知方法測定正確的劑量及給藥間隔。
當然，組合物的給藥量取決于待治療患者、感染的嚴重程度、給藥方式、主治醫(yī)師的判斷等。
包裝如果需要，組合物可以裝入小包裝或分配器中，例如FDA批準的藥盒，其可包括含活性成分的一種或多種單位劑型。該小包裝例如可包含金屬或塑料箔膜，例如水泡眼包裝。該包裝或分配器帶有使用說明書。該包裝或分配器還可附有有關的公告，該公告為監(jiān)管藥品生產(chǎn)、使用或銷售的政府部門出具的附表，該公告反映了政府部門對組合物的劑型或允許人用或獸用的批準情況。這種公告例如可以是美國食品及藥品管理局批準的處方藥標簽或批準的產(chǎn)品插頁。也可制備包含配制于相容的藥物載體的本發(fā)明化合物的組合物，將其放入適當?shù)娜萜髦胁①N上標簽，供適應癥的治療用。
實施例下面提供的實施例用以闡明本發(fā)明的某些實施方案，既不意味著也不應認為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
原料從市售供應商處購得，除非另有說明，無需進一步純化就可直接使用?；瘜W藥品供應商包括Aldrich、Fluka和Lancaster。Pd(PPh3)4得自Lancaster或Strem，并立即在N2手套包中將其轉移到充有N2的小瓶中(每個小瓶裝入10-100mg)。小瓶用鋁箔包裹，在-20℃下，將其儲存在充N2的拉鎖袋中。PdCl2(dppf)得自Aldrich，從瓶中取出就可使用。使用的溶劑為標準試劑級，使用時其不一定為無水的。無水溶劑購自化學藥品供應商并直接使用。
用300MHz Varian FT-NMR光譜儀記錄1H NMR光譜圖，以“化學位移”(多重性、積分、偶合常數(shù))的形式報告結果。偶合常數(shù)用Hz單位報告。質譜圖從配有電噴霧電離(ESI)的Micromass Platform II單四極質譜儀上獲得。
以下為使用的三種Suzuki交叉偶聯(lián)方法方法A使芳基硼酸(0.167mmol)和芳基溴(0.334mmol)在Na2CO3水溶液(3ml的10％(w/w)溶液)和THF(5ml)的混合物中混合。該混合物中通入N2。加入Pd(PPh3)4(10mol％，0.0167mmol)，混合物中通入N2，然后回流16小時。反應混合物用乙酸乙酯(EtOAc)稀釋，用飽和鹽水溶液洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，濃縮。然后殘余物用色譜法純化。
方法B在室溫下，使芳基硼酸(0.301mmol)、芳基溴(0.602mmol)和Cs2CO3(0.903mmol)在THF(2.0ml)、DMF(2,0ml)和H2O(0.5ml)中混合。該混合物中通入N2達5分鐘，加入二氯[1，1’-雙(二苯膦基)二茂鐵]合鈀(II)二氯甲烷絡合物(0.0301mmol)。該混合物中通入N2達5分鐘，然后在55℃下攪拌16小時。真空濃縮該混合物，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥并濃縮。殘余物用色譜法純化。
方法C使芳基硼酸(0.934mmol)、芳基溴(2.34mmol)和Cs2CO3(2.80mmol)懸浮于甲苯(4ml)、正丁醇(4ml)和H2O(2ml)的混合物中。在室溫下，該混合物中通入N2，然后加入Pd(PPh3)4(0.280mmol)。該混合物中再通入N2達5分鐘，然后加熱至75℃。12小時后，使該混合物冷卻至室溫，真空濃縮。使殘余物在H2O(75ml)和EtOAc(75ml)之間分配。EtOAc層用鹽水(2×50ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮。殘余物用色譜法純化。
實施例1化合物3 將8.13g(32.0mmol)氯霉素堿的N-乙酸酯溶于80ml的甲醇中，N-乙酸酯按文獻方法(Rebstock，M.C.等，(參見上文)，Crooks H.M.等，(參見上文)；Evans，D.D.；Morris，D.S.等，(參見上文))制備。通入N2后，加入Pd/C，將該混合物在H2(1atm)下攪拌16小時。然后通過Celite過濾除去Pd/C。真空濃縮溶液，殘余物用硅膠色譜法純化，用15％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫，得到3(7.13g，31.7mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.92(s，3H)，3.40(dd，1H，J＝11.1，6.0)，3.61(dd，1H，J＝11.1，5.7)，4.01(m，1H)，4.73(d，1H，J＝5.4)，6.69(d，2H，J＝8.4)，7.11(d，2H，J＝8.4)。
實施例2化合物4 在0℃下，將NaNO2水溶液(1.27g，18.5mmol，50ml H2O)滴加到3(3.76g，16.8mmol)的35ml 48％HBr水溶液中。加入結束后，將該混合物在0℃下攪拌30分鐘。然后將該混合物滴加到CuBr(2.65g，18.45mmol)的15ml 48％HBr水溶液中。將該混合物升溫至室溫，再攪拌16小時。用3 MNaOH水溶液中和該反應混合物，通過Celite墊過濾，用EtOAc(3×100ml)萃取。合并的有機部分經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮，得到1.2g(4.17mmol)的粗產(chǎn)物，無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.87(s，3H)，3.48(dd，1H，J＝11.0，5.9)，3.69(dd，1H，J＝11.0，6.5)，4.01(m，1H)，4.91(d，1H，J＝3.6)，7.30(d，2H，J＝8.3)，7.45(d，2H，J＝8.3)。
實施例3化合物6
在2L圓底燒瓶中，將4-溴苯甲醛(100g，0.540mol)溶于乙醇(EtOH)中。在快速攪拌下，加入甘氨酸(0.5摩爾當量，20.3g，0.270mol)，然后一次性加入KOH(30.3g，0.540mol)。必需同時加入KOH。因此，當該反應大規(guī)模進行時，為控制放熱，應該使用冰浴。加入KOH后，該混濁的混懸液變?yōu)辄S色均相溶液。約15分鐘后，開始形成粘稠的白色沉淀。將該混合物在室溫、N2下攪拌12小時。加入足量的2N HCl水溶液(～400ml)，使測試溶液的pH試紙變紅。然后在約60℃下，攪拌該混合物直至其再次變?yōu)榫嗟狞S色溶液。真空除去EtOH，得到含白色沉淀的水性混懸液。濾出沉淀，剩余水溶液用EtOAc洗滌3次。然后用濃NH3水將水溶液堿化至pH約9，真空除去過量的氨。除去NH3后，開始沉淀出產(chǎn)物6。繼續(xù)蒸發(fā)至開始出現(xiàn)沉淀時溶液體積的1/4。然后在真空過濾器上收集產(chǎn)物，將產(chǎn)物真空干躁至恒重(51.3g)。如果NMR顯示有不需要的反式立體異構體存在，可通過在H2O/EtOH中重結晶除去。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.64(d，1H，J＝3.6)，5.25(d，1H，J＝3.6)，7.41(d，2H，J＝8.4)，7.53(d，2H，J＝8.4)。
實施例4化合物7 將化合物6(32.60g，12.53mmol)溶于10％K2CO3水溶液(10％w/v；500ml)中。將二碳酸二叔丁酯(34.2g，157mmol)溶于1，4-二氧六環(huán)(500ml)中并加入到上述水溶液中，之后將該混合物在室溫下攪拌72小時。真空濃縮該混合物，再溶于100ml 1N NaOH水溶液中，用Et2O(2×100ml)洗滌。水層用1N HCl水溶液酸化，產(chǎn)物用EtOAc(3×200ml)萃取。合并的EtOAc萃取液經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮。分離出產(chǎn)物(26.7g，74.0mmol)，無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.32(s，9H)，4.37(d，1H，J＝2.7)，5.23(d，1H，J＝2.7)，7.32(d，2H，8.4)，7.46(d，2H，J＝8.4)。
實施例5化合物8 將化合物7(5.29g，14.7mmol)和N-羥基琥珀酰亞胺(1.69g，14.7mol)溶于EtOAc(200ml)中，使該混合物冷卻至0℃。加入N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(3.04g，14.7mmol)，將該混合物攪拌30分鐘，升溫至室溫，再攪拌30分鐘。然后冷卻至0℃，過濾除去N，N′-二環(huán)己基脲副產(chǎn)物沉淀。真空濃縮濾液，將殘余物溶于THF(100ml)中。將溶液冷卻至0℃，加入NaBH4(5.6g，150mmol)，將該混合物攪拌2分鐘。然后向該混合物中滴加水直至氣泡產(chǎn)生停止，然后在30分鐘內加入與THF等體積的水，之后將混合物升溫至室溫，攪拌5小時。真空除去二氧六環(huán)，加入EtOAc(200ml)，隨后用1N HCl水溶液逐步酸化水層。EtOAc層用鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾，之后真空濃縮，得到4.31g(12.4mmol)8，無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.32(s，9H)，3.46-3.51(m，1H)，3.63-3.73(m，2H)，4.88(br s，1H)，7.29(d，2H，J＝8.3)，7.45(d，2H，J＝8.3)。
實施例6化合物9(以4為原料) 將化合物4(1.0g，3.5mmol)溶于10％H2SO4水溶液(10％v/v，總共15ml)中，使該溶液回流10小時。用3M NaOH水溶液堿化該反應混合物，用EtOAc(3×50ml)萃取。合并的EtOAc部分經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮，得到710mg(2.9mmol)4，無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 2.80-2.90(br m，1H)，3.30-3.39(br m，1H)，3.40-3.50(br m，1H)，4.52-4.58(m，1H)，7.30(d，2H，J＝8.1)，7.49(d，2H，J＝8.1)。
實施例7化合物9(以8為原料) 將化合物8(4.31g，12.4mmol)溶于三氟乙酸(TFA，40ml)中。將該混合物在室溫下攪拌3小時，真空濃縮。使TFA鹽在50ml的2NNaOH水溶液和等體積的EtOAc之間分配。分離各層，水層用EtOAc(50ml)洗滌。合并的EtOAc部分用鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮，得到蠟狀固體(2.72g，11.1mmol)，其無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300Hz，CD3OD)δ 2.83-2.90(m，1H)，3.30-3.35(m，1H)，3.46(dd，1H，J＝10.8，4.8)，4.56(d，1H，J＝6.6)，7.29(d，2H，J＝8.6)，7.49(d，2H，J＝8.6)。
實施例8化合物10 將化合物9(710mg，2.89mmol)、苯甲亞氨酸乙酯鹽酸鹽(533mg，2.89mmol)和三乙胺(Et3N，0.40ml，2.89mmol)在25ml 1，2-二氯乙烷中混合。在N2下，將該混合物回流攪拌16小時，此時TLC顯示出現(xiàn)一種主要產(chǎn)物。冷卻至室溫后，該混合物用EtOAc稀釋，用飽和NH4Cl水溶液洗滌2次，用飽和NaHCO3水溶液洗滌2次，然后經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾該溶液，真空除去EtOAc，得到885mg(2.66mmol)10，其無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.74-3.89(m，2H)，4.13-4.18(m，1H)，5.59(d，1H，J＝6.6)，7.30(d，2H，J＝8.4)，7.46-7.57(m，5H)，7.99-8.02(m，2H)。
實施例9化合物11 將化合物10(885mg，2.66mmol)懸浮于CH2Cl2(15ml)中，冷卻至-78℃。通過注射器加入三氟化二乙氨基硫(DAST，0.53ml，4.00mmol)，在1小時內將該混合物升溫至室溫，然后在N2下，攪拌16小時。通過緩慢加入H2O猝滅過量的DAST，之后再用CH2Cl2稀釋該混合物。有機層用H2O、飽和NaHCO3水溶液洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮。殘余物(950mg)用硅膠色譜法純化，用15∶85 EtOAc/己烷洗脫，得到油狀物11(420mg，1.25mmol)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.23-4.35(m，1H)，4.45-4.75(m，2H)，5.43(d，1H，J＝6.9)，7.17(d，2H，8.3)，7.36-7.47(m，5H)，7.96(d，2H，J＝8.3)。
實施例10化合物12 在經(jīng)火焰干燥的圓底燒瓶中，將化合物11(807mg，2.41mmol，由氯霉素的純對映體或由(+/-)-蘇-對溴苯基絲氨酸外消旋體制備)溶于無水THF(10ml)中，冷卻至-78℃。在劇烈攪拌下，加入n-BuLi(1.6M的己烷溶劑，3.02ml，4.83mmol)。10分鐘后，加入硼酸三甲酯(0.55ml，4.83mmol)，在1小時內將該混合物升溫至室溫，然后攪拌6小時。該混合物用1N HCl水溶液猝滅，用EtOAc萃取3次。合并的EtOAc部分用鹽水洗滌3次，經(jīng)無水Na2SO4干燥。真空除去EtOAc，得到805mg產(chǎn)物，用快速柱色譜法純化，開始用1∶1己烷/EtOAc洗脫除去雜質，隨后用1∶9 MeOH/CH2Cl2洗脫，得到油狀產(chǎn)物(285mg，0.953mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 4.29-4.39(m，1H)，4.69(dd，2H，J＝47.1，4.2)，5.64(d，1H，J＝6.6)，7.37(d，2H，J＝8.1)，7.47-7.52(m，2H)，7.56-7.62(m，1H)，7.67(d，1H，J＝7.5)7.74-7.82(m，1H)，8.01(d，2H，J＝7.2)。
LRMS(ESI-)m/z298.0(M-H+C16H14BFNO3的計算值298.1)。
實施例11化合物13 將化合物6(20.6g，0.079mol)懸浮于400ml的無水MeOH中?？焖贁嚢柙摶旌衔铮诒≈欣鋮s至0℃。緩慢通入無水HCl氣體。10分鐘后，所有的固體均溶解。繼續(xù)酸化10分鐘直至混合物變?yōu)榫?，此時該MeOH溶液使pH試紙變得很紅。在反應儀器上安裝干燥管，將反應混合物回流8小時，隨后在室溫下攪拌12小時。真空濃縮該混合物，然后將其懸浮于300ml EtOAc和100ml水的混合物中。在快速攪拌下，極緩慢地加入3N NaOH直至懸浮物溶解。繼續(xù)加入堿直至pH達到10。分離各層，EtOAc部分用鹽水洗滌(2x)，經(jīng)無水Na2SO4干燥。真空濃縮，得到白色粉末13(15.3g)，其無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHZ，CD3OD)δ 3.59(d，1H，J＝4.5)，3.66(s，3H)，4.92(d，1H，J＝4.5)，7.29(d，2H，J＝8.3)，7.49(d，2H，J＝8.3)。
實施例12化合物14 在室溫下，將1，1′-羰基二咪唑(23.6g，0.146mol)溶于250ml的無水1，2-二氯乙烷中，隨后加入三乙胺(Et3N，12.2g，16.8ml)。在另一燒瓶中，將13(33.26g，0.121mol)溶于125ml的無水四氫呋喃(THF)和等當量的三乙胺中。用125ml的1，2-二氯乙烷稀釋THF溶液，然后在N2下，在2小時內加入到1，1’-羰基二咪唑溶液中。加入結束后，將混合物在室溫、N2下攪拌2小時。真空濃縮該反應混合物，殘余物用300ml EtOAc稀釋，用5×200ml的2N HCl、3×300ml的飽和NaHCO3和2×200ml的鹽水洗滌。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮，得到34.27g的14，1H NMR測定其純度為80-90％?；衔?4無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.83(s，3H)，4.34(d，1H，J＝5.0)，5.65(d，1H，J＝5.0)，7.36(d，2H，J＝8.7)，7.60(d，2H，J＝8.7)。
實施例13化合物15 將化合物14(55.3g，0.184mmol)溶于375ml MeOH中。將該溶液冷卻至0℃，分批加入NaBH4(2當量，13.9g，0.369mol)，注意勿使溫度超過20℃。加入最后一份后，停止冷卻，攪拌混合物2小時。緩慢加入冰乙酸直至達到pH 7。該混合物通過Celite過濾并真空濃縮。使殘余物在EtOAc(375ml)和2N HCl(500ml)之間分配。有機層用2N HCl(2×300ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×250ml)和鹽水(250ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮。使產(chǎn)物在己烷/EtOAc中結晶，得到26.3g的15。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 3.64-3.72(m，3H)，5.38(d，1H，J＝5.1)，7.32(d，2H，J＝8.6)，7.57(d，2H，J＝8.6)。
實施例14化合物16 將化合物15(7.57g，0.0278mol)懸浮于275ml的CH2Cl2中。在N2和快速攪拌下，將該兩相混合物在干冰/丙酮浴中冷卻至-78℃。用注射器在2-3分鐘內滴加DAST(5.51ml，6.72g，0.0417mol)。30分鐘后，將該混合物轉移至冰水浴，并攪拌30分鐘，在此期間混合物中的固體溶解。再加入1ml的DAST，以確保反應完全。將該混合物在0℃下攪拌20分鐘，然后升溫至室溫。將該混合物在室溫下攪拌20分鐘，然后冷卻至0℃。在極快攪拌下，在30分鐘內滴加飽和NaHCO3水溶液猝滅過量的DAST。氣泡生成停止后，水層略顯堿性(7＜pH＜9)。用足量的EtOAc(～600ml)稀釋該CH2Cl2，使用水萃取時有機層處于溶液上部。有機層用飽和NaHCO3水溶液(1×300ml)、1NHCl(2×200ml)、飽和NaHCO3水溶液(3×200ml)和鹽水(1×150ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾，真空濃縮該混合物，得到8.13g棕色油。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 3.87-3.98(dm，1H，J＝20(F-CHN))，4.54(dd，2H，J＝46.7(CH2-F)，4.2)，5.42(d，1H，J＝5.1)，7.34(d，2H，J＝8.4)，7.59(d，2H，J＝8.4)。
實施例15化合物17 將化合物16(8.13g或0.0297)溶于200ml的CH3CN中。然后加入Boc2O(9.71g，1.5當量，0.0445mol)和DMAP(362mg，0.00297mol，0.1當量)。將該混合物在室溫、N2下攪拌2小時。真空濃縮該混合物，隨后使其在200ml的EtOAc和200ml的1N HCl之間分配。EtOAc層用2N HCl(3×100ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×100ml)和鹽水洗滌。過濾EtOAc層，經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮。殘余物在己烷/EtOAc中重結晶2次。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.53(s，9H)，4.29-4.40(dm，1H，J＝24.6)，4.63-4.98(m，2H)，5.53(d，1H，J＝4.2)，7.34(d，2H，J＝8.4)，7.61(d.2H，J＝8.4)。
實施例16化合物18
將化合物17(0.050g，0.134mmol)懸浮于5ml的CH3OH中。在快速攪拌條件下，在室溫下加入Cs2CO3(8.7mg，20mol％，0.0267mmol)。混合物中的固體在約10分鐘內溶解，之后繼續(xù)攪拌10分鐘，此時TLC(3∶1己烷/EtOAc)檢測表明反應完成。真空濃縮該反應混合物，使殘余物在20ml的EtOAc和10ml的H2O之間分配。H2O層用1N HCl水溶液輕微酸化，劇烈振搖該混合物，分離各層。EtOAc層用飽和NaHCO3水溶液(1×20ml)和鹽水(1×20ml)洗滌。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮，得到43.4mg(0.124mmol)為白色泡沫狀物的18。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.33(s，9H)，3.90-4.57(m，4H)，7.29(d，2H，J＝8.1)，7.46(d.2H，J＝8.1)。
實施例17化合物22 在室溫下，將化合物18(0.740g，2.13mmol)在10ml TFA/H2O(9/1，v/v)中攪拌1小時。真空濃縮該混合物，使其在30ml的EtOAc和30ml的1N NaOH水溶液之間分配。劇烈振搖該混合物，讓各層分離。有機層用鹽水(2x)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，真空濃縮，得到0.484g(1.95mmol，92％)的產(chǎn)物，將其溶于20ml的CH2Cl2中。向該溶液中加入1ml的Et3N和1ml的二氟乙酰氯，其按文獻方法(Yu，K.-L.等，J.Med.Chem.，1996，39，2411-2421.)制備。1小時后，真空濃縮該混合物。將殘余物放入10ml的1∶8∶1(v/v/v)Et3N/MeOH/H2O溶液，在室溫下攪拌1小時，以使芐基氧上的任何二氟乙酰基裂解。然后真空濃縮該混合物，使其在EtOAc(50ml)和1N HCl(50ml)之間分配。EtOAc層用20ml的1N HCl洗滌2次，用20ml飽和NaHCO3水溶液洗滌2次，用20ml鹽水洗滌2次。然后經(jīng)無水Na2SO4干燥EtOAc萃取液，過濾，真空濃縮?；衔?2(584mg，1.79mmol)無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.25-4.67(m，3H)，4.90(d，1H，J＝3.9)，5.98(t，1H，J＝53.9)，7.30(d.2H，J＝8.6)，7.48(d，2H，J＝8.6)。
實施例18化合物19 在50ml的圓底燒瓶中，將化合物18(1.03g，2.94mmol)溶于CH2Cl2(30ml)中。用注射器加入2-甲氧基丙烯(339μl，3.54 mmol)，隨后加入對甲苯磺酸(p-TsOH)水合物單晶體。約1分鐘后，該混合物變黃。TLC(4∶1己烷/EtOAc)顯示還存在一些18。再加入5滴2-甲氧基丙烯，2分鐘后再加入5滴，此時TLC表明反應完成。真空除去CH2Cl2，使殘余物在EtOAc(75ml)和飽和NaHCO3水溶液(50ml)之間分配。分別用50ml NaHCO3和鹽水將EtOAc層各洗滌2次。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾并蒸發(fā)，得到黃色油(1.08g，2.78mmol)，其固化為蠟質固體，無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.49(s，9H)，1.55(s，3H)，1.67(s，3H)，3.70-3.85(m，1H)，4.34-4.53(m，2H)，5.08(d.1H，J＝7.5)，7.37(d，2H，J＝8.6)，7.54(d，2H，J＝8.6)。
實施例19化合物23 將化合物19(309mg，0.796mmol)放入用微波爐干燥的、裝有磁力攪拌棒的50ml圓底燒瓶中。立即用橡皮塞塞緊瓶口，充入干燥N2。用注射器加入無水THF(15ml)，用長套管充入含N2溶劑達10分鐘。然后將該混合物冷卻至-78℃。在劇烈攪拌下，用注射器在3分鐘內滴加n-BuLi(850μl，0.995mmol)，得到澄清的橙色溶液。20分鐘后，用微波爐干燥的氣密注射器在1分鐘內滴加B(OMe)3(158μl，1.39mmol，經(jīng)活化的4_分子篩共貯存至少48小時)。將該混合物升溫至室溫，并在N2下攪拌16小時。在劇烈攪拌下，加入約20ml飽和NH4Cl水溶液，其導致生成的白色沉淀分散于兩液相中。再將該混合物攪拌90分鐘，然后用EtOAc和H2O稀釋，直至所有沉淀都溶解。分離有機層，用鹽水洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾，真空除去EtOAc，得到328mg黃色油。該產(chǎn)物用硅膠色譜法純化，得到23(163mg)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.49(s，9H)，1.56(s，3H)，1.67(s，3H)，3.74-3.88(m，1H)，4.33-1.52(m，2H)，5.10(d，1H，J＝7.5)，7.43(d，2H，J＝8.1)，7.64(d，2H，J＝8.1)。LRMS(ESI-)m/z352.2(M-H+C17H24BFNO5的計算值352.7)。
實施例20化合物28 該實施例為Suzuki偶聯(lián)方法A的實例。將化合物11(47mg，0.14mmol)和吡啶-3-硼酸(21mg，0.17mmol)溶于5.0ml的THF中。加入Pd(PPh3)4(11mg，0.0098mmol)和3.0ml的10％(w/v)Na2CO3水溶液。使該反應混合物回流16小時，冷卻，用EtOAc稀釋，分別用10％(w/v)Na2CO3水溶液和鹽水各洗滌2次。然后EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮。用硅膠色譜法純化(用1∶1己烷/EtOAc洗脫)，得到47mg(0.14mmol)26。在一密封管中，將中間體26和6M HCl水溶液加熱至105℃，并在此溫度下保持16小時。使該混合物冷卻至室溫，用3N NaOH堿化至pH 10。產(chǎn)物用EtOAc萃取，萃取液經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮，得到42mg的脫保護的游離胺，估計其被與苯甲酸有關的副產(chǎn)物所污染，該副產(chǎn)物是由保護基團的裂解而產(chǎn)生的。按29的合成中的方法，使該粗殘余物二氯乙?；?。用硅膠色譜法純化(用7.5％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫)，得到10mg產(chǎn)物。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 4.31-4.74(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.49-7.56(m，3H)，7.64(d，2H，J＝8.4)，8.09(ddd，1H，J＝8.0，2.3，1.5)，8.50(br d，1H，J＝3.9)，8.78(br s，1H)。LRMS(ESI+)m/z356.9(M+H+C16H16Cl2FN2O2的計算值357.0)。
實施例21化合物27 使硼酸12(43mg，0.144mmol)、咪唑(15mg，0.215mmol)和4_粉狀分子篩(110mg)在CH2Cl2(4.0ml)和吡啶(23μl)中混合。在快速攪拌下，加入Cu(OAc)2(26mg，0.144mmol)，攪拌該混合物，在室溫下在空氣中暴露40小時。用3ml的2M NH3的MeOH溶液猝滅該混合物。該混合物通過Celite過濾并真空濃縮。該產(chǎn)物用快速柱色譜法純化(19∶1 CH2Cl2/MeOH)。盡管1H NMR顯示有明顯的副產(chǎn)物與需要的產(chǎn)物一起被洗脫出來，但是該混合物無需進一步純化就可直接使用。LRMS(ESI+)m/z321.9(M+H+C19H17FN3O的計算值322.1)。
實施例22化合物29 在封閉管中，將化合物27(27mg，0.084mmol)和6N HCl(3.0ml)一起加熱至100℃并保持16小時。將該混合物冷卻至室溫，用3NNaOH水溶液堿化，用EtOAc萃取3次。合并的EtOAc部分經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮，得到9mg殘余物。LRMS(ESI+)m/z236.1(M+H+C12H15FN3O的計算值236.1)。
使該殘余物在含Et3N(26μl 0.189mmol)和二氯乙酸甲酯(13μl，0.126mmol)的MeOH(5.0ml)中回流3小時。真空濃縮該混合物，用硅膠色譜法純化(7.5％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到29(6.0mg，0.017mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 4.33-4.75(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.26(s，1H)，7.13(s，1H)，7.51-7.58(m，5H)，8.10(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z345.8(M+H+C14H15Cl2FN3O2的計算值346.0)。
實施例23化合物34 化合物32按Pines等的方法(參見上文)制備。將1，1′-羰基二咪唑(CDI，5.06g，31.2mmol)與Et3N(2.17ml，15.6mmol)的1，2-二氯乙烷(50ml)溶液放入250ml的圓底燒瓶中。將化合物32(4.00g，15.6mmol)加入盛有1，2-二氯乙烷(50ml)的燒杯中。向燒杯中加入Et3N(4.34ml，31.2mmol)，立即形成濃懸浮液。再加入1，2-二氯乙烷(20ml)和THF(50ml)以使該懸浮液變稀。在30分鐘內，使該混合物分批加入到CDI懸浮液。將大致均相和變黃的混合物攪拌12小時。真空除去溶劑，使殘余物在2N HCl水溶液和EtOAc之間分配。EtOAc層用2N HCl(2×45ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×30ml)和鹽水洗滌。經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)，得到3.27g的黃色蓬松固體33，其無需進一步純化就可直接使用。
將化合物33(1.00g，4.06mmol)溶于MeOH(50ml)中，在冰浴中冷卻至0℃。在5分鐘內，分批加入NaBH4(308mg，8.13mmol)。停止生成泡沫后，TLC(5％MeOH的CH2Cl2溶液)顯示仍有原料存在，所以再加入100mg的NaBH4。泡沫生成停止后，用冰HOAc猝滅該混合物，直至pH約至7。真空濃縮該混合物，使其在EtOAc和1N HCl之間分配。EtOAc層用飽和NaHCO3水溶液(2×40ml)和鹽水(40ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。該產(chǎn)物用硅膠色譜法分離(2％→3％→4％→10％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到128mg的油34。另外一部分產(chǎn)物通過蒸發(fā)水層，隨后用熱EtOAc研磨獲得(153mg，總共281mg)。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ3.69(br s，3H)，5.50(br s，1H)，7.58(d，2H，J＝7.8)，7.79(d，2H，J＝7.8)。
實施例24化合物35 與化合物11的合成相同，用DAST進行氟化反應。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.89-3.97(m，1H)，4.49-4.66(m，2H)，5.55(d，1H，J＝4.8)，7.59(d，2H，J＝8.1)，7.80(d，2H，J＝8.4)。
實施例25化合物38 化合物36(2.12g)按照von Strandtmann(參見上文)的方法制備。在密封管中，使化合物36與10％H2SO4水溶液一起加熱至100℃，保持4小時。冷卻至室溫后，該混合物用1M NaOH堿化，用正丁醇萃取3次。合并正丁醇部分，經(jīng)無水Na2SO4干燥。蒸發(fā)溶劑，得到1.61g的37。
將化合物37(1.61g，7.70mmol)溶于1，2-二氯乙烷(100ml)、苯甲亞氨酸乙酯鹽酸鹽(1.42g，7.70mmol)和Et3N(1.06ml，7.70mmol)中。使該混合物回流12小時，冷卻至室溫，用EtOAc稀釋。該溶液用飽和NH4Cl水溶液(3x)和飽和NaHCO3(1x)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。冷卻，加入幾滴己烷，產(chǎn)物從EtOAc中沉淀析出，得到0.62g的38(2.1mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.60(s，3H)，3.79(dd，1H，J＝11.3，5.9)，3.89(dd，1H，J＝11.3，4.1)，4.14-4.20(m，1H)，5.70(d，1H，6.3)，7.47-7.61(m，5H)，8.01-8.05(m，4H)。
實施例26化合物39 將化合物38(0.62g，2.1mmol)懸浮于CH2Cl2(15ml)，冷卻至-78℃。用注射器加入DAST(0.42ml，3.1mmol)，將該溶液攪拌過夜，在此期間隨著冷浴升溫，使其升至室溫。真空除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠色譜法分離(1∶4 EtOAc/己烷)，得到0.17g的39。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.60(s，3H)，4.30-4.40(m，1H)，4.63-4.67(m，1H)，4.79-4.81(m，1H)，5.74(d，1H，6.9)，7.48-7.63(m，5H)，8.01-8.07(m，4H)。
實施例27化合物40 在密封管中，將化合物39(0.17g，0.58mmol)懸浮于6N HCl水溶液(5ml)中。將混合物加熱至100℃，保持12小時。將該混合物冷卻至室溫，用3N NaOH堿化，產(chǎn)物用CH2Cl2(3x)萃取。合并的CH2Cl2部分經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，得到40(0.113g，0.541mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.60(s，3H)，3.04-3.15(m，1H)，4.09-4.48(m，3H)，4.71(d，1H，J＝6.0)，7.52(d，2H，J＝8.1)，7.90(d，2H，J＝8.1)。
實施例28化合物41 用使27轉變?yōu)?9的方式，使化合物40二氯乙酰化生成41。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ 2.57(s，3H)，4.31-4.78(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.23(s，1H)，7.53(d，2H，J＝8.6)，7.95(d，2H，J＝8.6)。
實施例29化合物43 將化合物35(100mg，0.454mmol)溶于3ml的EtOH，移入25ml圓底燒瓶。加入鹽酸羥胺(38mg，0.545mmol)，隨后加入Et3N(127μL，0.909mmol)。將該混合物攪拌回流3小時，此時TLC顯示原料已完全耗盡。真空濃縮該混合物，得到232mg黃色油，其無需進一步純化就可直接使用。將一部份油(115mg)溶于10ml原甲酸三乙酯。在N2下，將該混合物在120℃下攪拌2小時，然后在室溫下攪拌48小時。TLC(10％MeOH的CH2Cl2溶液)上出現(xiàn)一個新的大斑點。真空除去原甲酸三乙酯，使殘余物在EtOAc和1N NaOH水溶液之間分配。有機層用1N NaOH水溶液(2x)和鹽水(2x)洗滌。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)，得到84mg油。該產(chǎn)物用chromatotron純化(1mm硅膠板，60∶40→50∶50→40∶60己烷/EtOAc)。再用chromatotron純化(2％MeOH的CH2Cl2)，得到白色固體43(20mg)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.93-4.04(m，1H)，4.49-4.67(m，2H)，5.53(d，1H，J＝5.1)，7.59(d，2H，J＝8.3)，8.17(d，2H，J＝8.3)，9.28(s，1H)。
實施例30化合物45 將化合物43(20mg，0.076mmol)溶于CH3CN(2ml)中。加入Boc2O(25mg，0.114mmol)，隨后加入DMAP單晶體(約1mg，0.008mmol)。2小時后，TLC(1∶1己烷/EtOAc)顯示反應完成。真空除去CH3CN，將所得白色固體溶于EtOAc中，其用1N HCl水溶液(2x)洗滌，隨后用NaHCO3(2x)、鹽水洗滌。有機層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮，得到白色固體44(28mg)。
將化合物44(0.026mg，0.072mmol)溶于MeOH(2ml)中，一次性加入Cs2CO3(5mg，0.014mmol)。1小時后，TLC(1∶1己烷/EtOAc)顯示為單一產(chǎn)物。真空除去溶劑，加入EtOAc，在室溫下快速攪拌該混合物。然后加入H2O，隨后滴加0.5M HCl直至固體溶解。有機相用0.5N HCl洗滌，隨后用飽和NaHCO3水溶液(2x)和鹽水洗滌。然后有機層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，得到黃色油，用chromatotron純化(1mm硅膠板，4∶1己烷/EtOAc-1∶1己烷/EtOAc)，得到45(13mg，0.039mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.31(s，9H)，4.01-4.63(m，3H)，4.94(d，1H，J＝2.7)，7.55(d，2H，J＝8.4)，8.05(d，2H，J＝8.4)，9.24(s，1H)。
實施例31化合物47 在10ml燒瓶中，將化合物45溶于2.5ml的9∶1 TFA/H2O中。將該混合物在室溫下攪拌30分鐘，此時TLC顯示反應完成。真空濃縮該混合物，在快速攪拌條件下，使?jié)饪s物在1N NaOH水溶液和EtOAc之間分配。EtOAc層用鹽水(1x)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)，得到11mg的油46。
在盛有6mg(0.025mmol)46的10ml圓底燒瓶中，加入MeOH(2ml)，隨后加入Et3N(3.5μl，0.025mmol)和二氯乙酸甲酯(13.1μL，0.025mmol)。使該混合物回流4小時，此時TLC顯示未發(fā)生反應。再加入26.2μl的二氯乙酸甲酯，隨后加入7μl Et3N。使該混合物回流20小時，之后TLC顯示反應完成。該產(chǎn)物用chromatotron純化(1mm硅膠板，99∶1 CH2Cl2/MeOH)，得到5mg 47。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 4.32-4.72(m，3H)，5.03(d，1H，J＝2.7)，6.25(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.3)，8.05(d，2H，J＝8.3)，9.24(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z346.0(M-H+C13H11Cl2FN3O3的計算值346.0)。
實施例32化合物24 在200ml圓底燒瓶中，將2-氨基-1，3，4-噻二唑(1.00g，9.89mmol)加入到10ml的48％HBr水溶液中。加入水(10ml)，生成黃色溶液，大部分固體在該溶液中溶解。使該混合物冷卻至0℃，加入CuBr(142mg，0.989mmol)，生成具有一些沉淀的不透明棕色溶液。將NaNO2(682mg，9.89mmol)溶于25ml的H2O，在45分鐘內將其滴加到噻二唑混合物。加入第一滴NaNO2溶液后，該混合物變?yōu)椴煌该鞯纳罹G色。該溶液緩慢變?yōu)樽攸S色并產(chǎn)生棕色氣體。從氣體開始出現(xiàn)時起，將該混合物在0℃下再攪拌10分鐘。在30分鐘內將該混合物升溫至室溫。滴加飽和NaHCO3水溶液，直至氣泡產(chǎn)生停止，pH為8.5。向該混合物中加入50ml的EtOAc，快速攪拌該雙相混合物。該混合物用Celite墊過濾除去固體，然后分離各層。有機層用鹽水洗滌(2x)。水層用EtOAc萃取，用鹽水洗滌(1x)。合并的有機層經(jīng)Na2SO4干燥。剩余的水溶性物質用EtOAc(50ml)通過劇烈攪拌12小時再萃取一次。該EtOAc層用鹽水洗滌，與經(jīng)Na2SO4干燥的EtOAc層合并。將該溶液過濾，真空蒸發(fā)，得到棕褐色固體24(1.22g，7.36mmol)，其無需進一步純化就可直接使用。
實施例33化合物25 該實施例為Suzuki偶聯(lián)方法B的實例。將化合物23(19mg，0.0538mmol)溶于THF(1ml)、DMF(1ml)和H2O(0.5ml)中。將該混合物在室溫下攪拌直至所有的物料都溶解，然后加入2-溴-1，3，4-噻二唑(245.0mg，0.027mmol)。該溶液中通過長針通入N2達5分鐘。加入PdCl2(dppf)，然后該溶液中通入N2達5分鐘。然后，在N2下，將該混合物在55℃下攪拌18小時，然后在室溫下再攪拌30小時。真空濃縮所得澄清棕色溶液。用chromatotron純化(硅膠，1mm板，1∶9 EtOAc/己烷-1∶4 EtOAc/己烷)，得到為黃色油狀物的化合物25(5.4mg，0.0137mmol)。
試驗中發(fā)現(xiàn)，通過換用偶聯(lián)方法C能顯著提高收率。將化合物23(0.330g，0.934mmol)和24(0.385g，2.34mmol)溶于甲苯、正丁醇和H2O(8ml∶8ml∶2ml)的混合物，加入Cs2CO3(0.912g，2.80mmol)。該混合物中通入N2，加入Pd(PPh3)4。該混合物再次中通入N2達5分鐘，然后將該混合物在70℃、N2下快速攪拌12小時。真空濃縮該混合物，使殘余物在H2O(75ml)和EtOAc(75ml)之間分配。分離各層，EtOAc層用鹽水(2×50ml)洗滌。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮，得到0.720g黃色油。用硅膠色譜法純化(用5∶1→2∶1→1∶1己烷/EtOAC洗脫)，得到化合物25(0.220g)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.50(s，9H)，1.58(s，3H)，1.70(s，3H)，3.80-3.94(m，1H)，4.42-4.61(m，2H)，5.20，(d.1H，J＝7.5)，7.64(d，2H，J＝8.3)，8.05(d，2H，J＝8.3)，9.45(s，1H)。
實施例34化合物48 將化合物25(5.4mg，0.014mmol)移至25ml圓底燒瓶，加入2.5ml的9∶1 TFA/H2O(v/v)。將生成的鮮黃色混合物在室溫下攪拌18小時。真空除去溶劑，將殘余物溶于MeOH和甲苯的混合物3次，每次溶解后蒸發(fā)近干。所回收的產(chǎn)物為油狀物(4.9mg，0.013mmol)，其無需進一步純化就可直接使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.59-3.70(m，1H)，4.30-4.71(m，2H)，4.92(d，1H，J＝8.1)，7.64(d，2H，J＝8.3)，8.08(d，2H，J＝8.3)，9.47(s，1H)。
在10ml圓底燒瓶中，將上述產(chǎn)物溶于2ml的MeOH。在該混合物中加入Et3N(9.7μL，0.070mmol)，隨后加入二氟乙酸甲酯(3.0μL，0.035mmol)。使該混合物回流16小時，此時TLC顯示部分原料仍未反應。再加3滴Et3N，隨后加2滴二氟乙酸甲酯。3小時后，所有的原料均被消耗。使該混合物冷卻至室溫，真空蒸發(fā)至干。用chromatotron純化(硅膠，1mm板)，得到化合物48(4.1mg，012mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 4.31-4.72(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.9)，5.98(t，1H，J＝53.9)，7.58(d，2H，J＝8.3)，7.99(d，2H，J＝8.3)，9.43(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z330.1 (M-H+C13H11F3N3O2S的計算值330.1)。
實施例35化合物49 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用18和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。通過用90/10(v/v)TFA/H2O簡略處理，除去Boc基團。如同29的合成一樣進行二氯乙?；?H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.31-4.80(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.6)，6.26(s，1H)，7.52(d，2H，8.3)，7.65(d，2H，J＝8.3)，7.79(s.4H)。LRMS(ESI-)m/z379.0(M-H+C18H14Cl2FN2O2379.0)。
實施例36化合物50 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用22和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.27-4.68(m，3H)，4.99(d，1H，J＝4.5)，6.00(t，1H，J＝53.9)，7.52(d，2H，J＝8.1)，7.67(d，2H，J＝8.1)，7.76-7.82(m，2H)。LRMS(ESI-)m/z347.1(M-H+C18H14F3N2O2的計算值347.1)。
實施例37化合物51 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用22和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.14(s，3H)，4.30-4.68(m，3H)，5.00(d，1H，J＝4.5)，6.00(t，1H，J＝54)，7.53(d，2H，J＝8.3)，7.70(d，2H，J＝8.3)，7.88(d，2H，J＝8.6)，8.00(d，2H，J＝8.6)。LRMS(ESI-)m/z400.1(M-H+C18H17F3NO4S的計算值400.1)。
實施例38化合物52 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用22與合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.26-4.64(m，3H)，4.93(d，1H，J＝4.8)，6.01(t，1H，J＝53.9)，7.40-7.45(m，4H)，7.60-7.66(m，3H)。LRMS(ESI-)m/z328.1(M-H+C15H13F3NO2S的計算值328.1)。
實施例39化合物53 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用22和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.25-4.65(m，3H)，4.92(d，1H，J＝4.5)，6.01(t，1H，J＝53.9)，7.06-7.08(m，1H)，7.36-7.42(m，4H)，7.61(d，2H，J＝8.4)。LRMS(ESI+)m/z352.0(M+Na+C15H14F3NNaO2S的計算值352.1)。
實施例40化合物54 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用18和該硼酸制備聯(lián)芳中間體。通過用9/1(v/v)TFA/H2O簡略處理，除去Boc基團。如同29合成中一樣進行二氯乙?；?。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.33-4.79(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.26(s，1H)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.69-7.75(m，4H)，8.56(d，2H，J＝5.7)。LRMS(ESI+)m/z357.1(M+H+C16H16Cl2FN2O2的計算值357.1)。
實施例41化合物55 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用硼酸23和化合物24制備聯(lián)芳中間體。通過用9/1(v/v)TFA/H2O簡略處理，除去保護基團。如同29合成中一樣進行二氯乙?；?H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.34-4.76(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.0)，6.24(s，1H)，7.58(d，2H，J＝8.3)，7.97(d，2H，J＝8.3)，9.42(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z362.0(M-H+C13H11Cl2FN3O2S的計算值362.0)。
實施例42化合物56 將化合物54(29.4mg，0.0824mmol)溶于5ml CH2Cl2。將混合物冷卻至0℃，加入間氯過苯甲酸(m-CPBA，38mg，0.16mmol)并攪拌。5分鐘后，使混合物溫度升至室溫，攪拌12小時。真空濃縮該混合物，產(chǎn)物用硅膠色譜法純化，用2％、3％、4％、6％和10％MeOH的CH2Cl2溶液順序洗脫。得到白色固體化合物56(22.5mg，0.060mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.32-4.75(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.25(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.4)，7.74(d，2H，J＝8.4)，7.84(d，2H，J＝7.2)，8.34(d，2H，J＝7.2)。LRMS(ESI-)m/z371.0(M-H+C16H14Cl2FN2O3的計算值371.0)。
實施例43化合物57 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用18和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。通過用9/1(v/v)TFA/H2O簡略處理，除去保護基團。如同48合成中一樣進行二氟乙?；?H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.28-4.68(m，3H)，5.00(d，1H，J＝4.2)，5.99(t，1H，J＝53.9)，7.55(d，2H，J＝8.1)，7.70-7.77(m，4H)，7.84(d，2H，J＝7.2)，8.56(d，2H，J＝6.3)。LRMS(ESI+)m/z325.2(M+H+C16H16F3N2O2的計算值325.1)。
實施例44化合物58 由68制備化合物58，如同由54制備56。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.30-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.25(s，1H)，7.55-7.67(m，5H)，7.87(d，1H，J＝8.1)，8.30(d，1H，J＝7.2)，8.58(br s，1H)。LRMS(ESI-)m/z371.0(M-H+C16H14Cl2FN2O3的計算值371.0)。
實施例45化合物59 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用11和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。除去苯基噁唑啉保護基團，引入如同29的合成中的二氯乙酸酯基團。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.30-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.26(s，1H)，7.54-8.70(m，8H)。LRMS(ESI-)m/z354.8(M-H+C16H14Cl2FN2O2的計算值355.0)。
實施例46化合物60 化合物60用59制備，其制備方式與這些實施例中從相應吡啶制備吡啶N-氧化物的方法相同。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.33-4.78(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.25(s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.4)，7.75(d，2H，J＝8.4)，7.87(d，2H，J＝7.5)，8.38(d，2H，J＝7.5)。LRMS(ESI-)m/z370.8(M-H+C16H14Cl2FN2O3的計算值371.0)。
實施例47化合物61 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用11和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。裂解苯基噁唑啉保護基團，按29的合成方法引入二氯乙酸酯。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.14(s，3H)，4.36-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.3)，7.68(d，2H，J＝8.3)，7.87(d，2H，J＝8.7)，8.01(d，2H，J＝8.7)。LRMS(ESI-)m/z431.8(M-H+C18H17Cl2FNO4S的計算值432.0)。
實施例48化合物62 游離胺中間體的制備與合成28中的方法相同。用氯乙酰氯使氮一氯乙?；?。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.00-4.03(m，2H)，4.27-4.70(m，3H)，5.00(d，1H，J＝3.9)，7.49-7.55(m，3H)，7.66(d，2H，J＝8.4)，8.09(d app t，1H，J＝7.8，2.4)，8.50(dd，1H，J＝4.8，1.5)，8.78(br d，1H，J＝2.4)。LRMS(ESI+)m/z321.0(M+H+C16H15ClFN2O2的計算值357.1)。
實施例49化合物63 按28的合成方式，用氯氟乙酸乙酯制備。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.31-4.70(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，主要非對映體6.49(d，1H，J＝49.8)，次要非對映體6.51(d，1H，J＝49.8)，7.49-7.56(m，3H)，7.63-7.67(m，2H)，8.07-8.11(m，1H)，8.49-8.51(m，1H)，8.78(br d，1H，J＝1.5)。LRMS(ESI)m/z338.9(M-H+C16H14ClF2N2O2的計算值339.1)。
實施例50化合物64 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用12和2-溴吡啶制備聯(lián)芳中間體。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ4.28-4.74(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.33-7.37(m，1H)，7.53(d，2H，J＝8.1)，7.18-7.93(m，4H)，8.58-8.60(m，1H)。LRMS(ESI-)m/z354.8(M-H+C16H14Cl2FN2O2的計算值355.0)。
實施例51化合物65 化合物65按與59相同的方式用氯氟乙酸乙酯制備。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 4.32-4.70(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，主要非對映體6.48(d，1H，J＝49.8)，次要非對映體6.50(d，1H，J＝50.1)，7.55-7.58(m，2H)，7.73-7.78(m，4H)8.57(br d，2H，J＝5.7)。LRMS(ESI)m/z338.8(M-H+C16H14ClF2N2O2的計算值339.1)。
實施例52化合物66 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用12和合適的溴化物制備聯(lián)芳中間體。如同合成29中一樣進行除去保護基團和二氯乙?；?H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.34-4.72(m，3H)，5.01(d，1H，J＝2.4)，6.25(s，1H)，7.52(d，2H，J＝6.3)，7.57(d，1H，J＝2.6)7.84(d，1H，J＝2.6)，7.90(d，2H，J＝6.3)。LRMS(ESI-)m/z360.7(M-H+C14H12Cl2FN2O2S的計算值361.0)。
實施例53化合物67 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用12和合適的溴化物制備聯(lián)芳中間體。如同合成29中一樣進行除去保護基團和二氯乙?；?H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.32-4.75(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.6)，6.26(s，1H)，7.59(d，2H，J＝8.3)，7.70(d，2H，J＝8.3)9.06(s，2H，)，9.13(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z357.8(M+H+C15H15Cl2FN3O2的計算值358.0)。
實施例54化合物68 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用溴化物11和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。如同合成29中一樣進行除去保護基團和二氯乙?；?。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.31-4.74(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，6.27(s，1H)，7.48-7.51(m，1H)，7.54(d，2H，J＝8.3)，7.64(d，2H，J＝8.3)8.08(ddd，1H，J＝8.0，2.4，1.8)，8.50(dd，1H，4.8，1.5)，8.77(dd，1H，J＝2.4，0.9)。LRMS(ESI-)m/z354.8(M-H+C16H14Cl2FN2O2的計算值355.0)。
實施例55化合物69 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用溴化物11和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。如同合成29中一樣進行除去保護基團和二氯乙酰化。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.63(s，3H)，4.31-4.74(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，6.27(s，1H)，7.51(d，2H，J＝8.3)，7.67(d，2H，J＝8.3)，7.75(d，2H，J＝8.6)8.06(d，2H，J＝8.6)。
實施例56化合物71 該化合物按照類似41的方式，用氯氟乙酸乙酯替換二氯乙酸甲酯制備。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.58(s，3H)，4.31-4.71(m，3H)，5.03(br d，1H，J＝3.9)，主要非對映體6.46(d，1H，J＝49.8)，次要非對映體(d，1H，J＝50.1)，主要非對映體7.53(d，2H，J＝8.1)，次要非對映體7.51(d，2H，J＝8.1)，7.94-7.96(m，2H)。LRMS(ESI-)m/z304.1(M-H+C13H13ClF2NO3的計算值304.1)。
實施例57化合物72 初始，使化合物11的對氰基類似物按照制備11本身的類似方法制備。嘗試除去苯基噁唑啉保護基團(如在合成29中介紹的)，導致出現(xiàn)某些需要的脫保護腈中間體。然而，回收的大部分物質是腈官能團酸水解生成的相應的脫保護的對羧酸。該物質按照29合成中相同的方法進行二氯乙?；?，然后用CH2N2使該產(chǎn)物轉變?yōu)槠浼柞ァ?HNMR(300MHz，CD3OD)δ 3.83(s，3H)，4.25-4.66(m，3H)，4.98(d，1H，J＝3)，6.17(s，1H)，7.46(d，2H，J＝8.3)，7.91(d，2H，J＝8.3)。
實施例58化合物73 在N2下，將化合物87(36.5mg，0.0873mmol)溶于THF(5ml無水)。加入無水K2CO3粉末(24mg，0.175mmol)，該混合物中通入N2。加入Et3N(31ml，0.218mmol)和環(huán)丁烷甲酰氯(13ml，0.113mmol)，該混合物中通入N2并緩慢通入達5分鐘。加入Pd2dba3，該混合物中再次通入N2。然后在N2下，將該混合物攪拌3小時，之后用EtOAc和H2O稀釋，經(jīng)過棉花篩過濾。EtOAc層用1N HCl水溶液(x2)洗滌、鹽水(x2)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾該混合物，除去溶劑，得到16.9mg，0.0501mmol產(chǎn)物，該產(chǎn)物用chromatotron純化(1mm板，用4∶1己烷/EtOAc洗脫)。使所得被保護的中間體經(jīng)過29合成中的苯基噁唑啉裂解和二氯乙酰化，得到73。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.73-1.85(m，1H)，1.99-2.11(m，1H)，2.20-2.27(m，4H)，3.97-4.09(m，1H)，4.23-4.67(m，3H)，4.95(d，1H，J＝3.3)，6.16(s，1H)，7.45(d，2H，J＝8.4)，7.81(d，2H，J＝8.4)。LRMS(ESI-)m/z360.0(M-H+C16H17Cl2FNO3的計算值360.0)。
實施例59化合物74 按照29的合成方法，使72合成中的羧酸中間體二氯乙?；?。使生成的中間體(95.8mg，0.297mmol)溶于2ml的MeOH，加入幾滴H2O，然后滴加20％(w/v)Cs2CO3水溶液直至該溶液達到pH 7。真空濃縮該混合物。加入1滴Et3N和10ml 2-氯乙醇，將該混合物在135℃攪拌2小時。真空除去殘留的氯乙醇，殘余物用色譜法純化?；衔?4(13.3mg)為主要產(chǎn)物，而75(9.2mg)為次要產(chǎn)物。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.78-3.82(m，2H)，4.23-4.68(m，5H)，4.97(d，1H，J＝3.0)，6.17(s，1H)，7.46(d，2H，J＝8.3)，7.93(d，2H，J＝8.3)。LRMS(ESI+)m/z407.9(M+Na+C14H15Cl3FNNaO4的計算值408.0)。
實施例60化合物75 1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.83-3.39(m，2H)，4.31-4.74(m，5H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.23(s，1H)，7.52(d，2H，J＝8.4)，8.02(d，2H，J＝8.4)。LRMS(ESI-)m/z366.0(M-H+C14H15Cl2FNO5的計算值366.0)。
實施例61化合物76 中間體89的環(huán)丙基類似物通過與類似于合成89的Stille偶聯(lián)方法制備。苯基噁唑啉基團的酸性裂解導致HCl催化的環(huán)丙基環(huán)的開裂。使該產(chǎn)物脫保護和二氯乙?；?，得到76。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.10-2.19(m，2H)，3.19(t，2H，J＝7.1)，3.66(t，2H，J＝6.6)，4.31-4.74(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.3)，6.23(s，1H)，7.53(d，2H，J＝8.3)，7.96(d，J＝8.3)。LRMS(ESI-)m/z381.9(M-H+C15H16Cl3FNO3的計算值382.0)。
實施例62化合物77 該類似物的噻唑環(huán)通過以下方法形成通過在吡啶中與H2S反應，使被保護的腈中間體轉化為相應的硫代酰胺。然后使硫代酰胺與適當保護的α-鹵基羰基化合物反應，形成所示的取代噻唑。脫保護和二氯乙?；幢景l(fā)明其它化合物的相關方法操作。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.32-4.75(m，5H)，5.01(d，1H，J＝3.3)，6.27(s，1H)，7.38(s，1H)，7.51(d，2H，J＝8.3)，7.91(d，2H，J＝8.3)。LRMS(ESI-)m/z390.9(M-H+C15H14Cl2FN2O3S的計算值391.0)。
實施例63化合物79 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，該化合物由其中的伯羥基未轉變?yōu)榉闹虚g體形成。脫保護和二氯乙?；幢景l(fā)明其它化合物的相關方法操作。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.55(dd，1H，J＝11.0，5.9)，3.77(dd，1H，J＝11.0，6.5)，4.07-4.11(m，1H)，5.02(d，1H，J＝3.6)，5.96(s，2H)，6.29(s，1H)，6.86(d，1H，J＝8.4)，7.05-7.07(m，2H)，7.40-7.50(m，4H)。LRMS(ESI-)m/z395.9(M-H+C18H16Cl2NO5的計算值396.0)。
實施例64化合物80
將化合物41(11.5mg，0.0346mmol)和鹽酸羥胺(2.8mg，0 0415mmol)在EtOH(3ml)中攪拌12小時，然后再回流12小時。真空除去溶劑，使產(chǎn)物分離為單一異構體(未確定該異構體是順式肟還是反式肟)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.21(s，3H)，4.26-4.68(m，3H)，4.95(d，1H，J＝3.9)，6.27(s，1H)，7.39(d，2H，J＝8.3)，7.61(d，2H，J＝8.3)。
實施例65化合物81 將游離胺37(4.7mg，0.0224mmol)溶于MeOH(1ml)，使該混合物冷卻至0℃。加入氯乙酸酐(5滴)和三乙胺(5滴)，將該混合物升至室溫，并攪拌2小時。真空除去溶劑，該產(chǎn)物用硅膠色譜法純化(2∶3EtOAC/己烷)，得到3.3mg(0.011mmol)產(chǎn)物。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.59(s，3H)，3.92-4.03(m，2H)，4.29-4.68(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，7.53(d，2H，J＝8.4)，7.96(d，2H，J＝8.4)。
實施例66化合物82 按照Suzuki偶聯(lián)方法A，用22和合適的硼酸制備聯(lián)芳中間體。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.28-4.68(m，3H)，5.00(d，1H，J＝4.2)，6.01(t，1H，J＝54)，7.49-7.60(m，3H)，7.66(d，2H，J＝8.4)，8.07-8.11(m，1H)，8.50(dd，1H，J＝4.8，1.5)，8.79-8.79(m，1H)。LRMS(ESI-) m/z322.9(M-H+C16H14F3N2O2的計算值323.1)。
實施例67化合物84 該化合物按照類似流程2和3中介紹的方法制備。6的4-(1，2，4-三唑-1-基)苯基絲氨酸類似物按照合成6的相同方法制備。需要的4-(1，2，4-三唑-1-基)苯甲醛按照文獻(Tanaka，A.等，J.Med.Chem.1998，41，2390-2410)介紹的方法制備。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.33-4.76(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.3)，6.26(s，1H)，7.59(d，2H，J＝8.6)，7.78(d，2H，J＝8.6)，8.14(s，1H)，9.05(s，1H)。LRMS(ESI-)m/z345.0(M-H+C13H12Cl2FN4O2的計算值345.0)。
實施例68化合物85 該聯(lián)芳中間體由硼酸12和2-碘吡嗪制備。按照合成29的方法完成脫保護和二氯乙?；?。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.32-4.75(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.3)，6.27(s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.4)，8.05(d，2H，J＝8.4)，8.51(d，1H，J＝2.7)，8.65-8.66(m，1H)，9.08(d，1H，J＝1.8)。LRMS(ESI-)m/z355.8(M-H+C15H13Cl2FN3O2的計算值356.0)。
實施例69化合物86 與68的合成方法相同。1H NMR(300MHZ，CD3OD)δ4.29-4.73(m，3H)，5.01(br d，1H，J＝3.9)，主要非對映體6.49(d，1H，J＝49.8)，次要非對映體6.51(d，1H，J＝49.8)，7.48-7.56(m，3H)，7.64-7.67(m，2H)，8.06-8.10(m，1H)，8.49-8.51(m，1H)，8.78-8.79(m，1H)。LRMS(ESI-)m/z338.9(M-H+C16H14ClF2N2O2的計算值339.1)。
實施例70化合物87 將化合物11(0.496g，1.48mmol)在N2下溶于無水苯(15ml)。將回流冷凝管固定在燒瓶上，將長針頭通過冷凝管投入溶液，溶液中通入和緩的干燥N2流達5分鐘。加入六甲基二錫(0.58g，1.78mmol)，該化合物中再通入N2達5分鐘。加入Pd(PPh3)4(0.171g，0.148mmol)，繼續(xù)通入N2，5分鐘后，移去針頭，將N2送氣口放置在回流冷凝管的頂端。在N2下，將該混合物回流約2小時。在整個反應過程中，該混合物從橙色變黃色，再變至黑色。真空除去溶劑，該產(chǎn)物用chromatotron純化(硅膠，1mm板)，得到440mg澄清油狀產(chǎn)物。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ0.27(s，9H-該共振峰含明顯的附屬峰，其由于錫的活性同位素的NMR所致)，4.27-4.41(m，1H)，4.59-4.76(m，2H)，5.60(d，1H，J＝6.9)，7.33(d，2H，J＝8.1)，7.45-7.31(m，5H)，7.99-8.02(m，2H)。
實施例71化合物88 該化合物按與87相同的方式制備。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.027(s，9H，具有明顯的附屬峰，其由于錫的活性同位素的NMR所致)，1.49(s，9H)，1.55(s，3H)，1.67(s，3H)，3.73-3.83(m，1H)，4.30-4.49(m，2H)，5.06(d，2H，J＝7.5)，7.36-7.51(m，4H)。
實施例72化合物89 將化合物87(36.5mg，0.0873mmol)在N2下溶于無水THF。在攪拌條件下，加入K2CO3(24mg，0.16mmol)。該混合物中通入和緩的N2流達5分鐘。加入Et3N(31μL，0.22mmol)和環(huán)丁烷甲酰氯(13μL，0.11mmol)，該混合物中通入N2達5分鐘。加入Pd2dba3，該混合物通入N2達5分鐘，然后在N2下攪拌3小時。該混合物用EtOAc(25ml)和H2O(25ml)稀釋，經(jīng)棉花塞過濾，除去固體。EtOAc萃取液用1NHCl(2x)和鹽水(2x)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，真空濃縮。該產(chǎn)物用chromatotron純化(1mm硅膠板，1∶4 EtOAc/己烷)，得到16.9mg(0.050mmol)產(chǎn)物。LRMS(ESI+)m/z338.2(M+H+C21H21FNO2的計算值338.2)。
實施例73化合物90 與89的合成方法相同。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ0.027(s，9H，具有明顯的附屬峰，其由于錫的活性同位素的NMR所致)，1.49(s，9H)，1.55(s，3H)，1.67(s，3H)，3.73-3.83(m，1H)，4.30-4.49(m，2H)，5.06(d，2H，J＝7.5)，7.36-7.51(m，4H)。
實施例74化合物91 用9/1 TFA/H2O簡略處理90，使化合物91脫保護。按照合成29的方法，引入二氯乙?；RMS(ESI-)m/z345.8(M-H+C15H16Cl2FNO3的計算值346.0)。
實施例75化合物92 與合成56使用的方法相同。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.28-4.74(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，5.98(t，1H，J＝53.8)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.76(d，2H，J＝8.4)，7.86(d，2H，J＝7.1)，8.35(d，2H，J＝7.1)。
實施例76化合物93 按照Suzuki偶聯(lián)A方法，通過使23與合適的溴化物反應制備該聯(lián)芳中間體。按照上述合成29的方法進行脫保護和二氯乙?；RMS(ESI-)m/z433.0(M-H+C17H16Cl2FN2O4S的計算值433.0)。
實施例77化合物94 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，該聯(lián)芳中間體通過使23與2-氨基-4-環(huán)丙基-1，3，4-噻二唑反應制備(制備方法同24的合成)。通過用90/10TFA/H2O簡略處理被保護的聯(lián)芳中間體完成脫保護，二氯乙酰化按照29合成中的方法操作。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.12-1.31(m，4H)，2.46-2.52(m，1H)，4.30-4.75(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.24(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.4)，7.87(d，2H，J＝8.4)。
實施例78化合物95 與94合成方法相同，用二氟乙酸甲酯替換二氯乙酸甲酯。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.13-1.15(m，2H)，1.28-1.32(m，2H)，2.47-2.52(m，1H)，4.29-4.70(m，3H)，5.01(d，1H，J＝4.2)；5.98(t，1H，J＝53.7)，7.54(d，2H，J＝8.7)，7.88(d，2H，J＝8.7)。LRMS(ESI-)m/z370.0(M-H+C16H15F3N3O2S的計算值370.1)。
實施例79化合物97 化合物96按照與制備24類似的方式制備?；衔?7按照與制備48類似的方式制備。使用Suzuki偶聯(lián)方法B，隨后脫保護和二氟乙酰化。LRMS(ESI-)m/z376.0(M-H+C14H13F3N3O2S2的計算值376.0)。
實施例80化合物98 在攪拌條件下，將化合物97(11.1mg或0.0294mmol)在室溫下溶于5ml的CH2Cl2中。加入m-CPBA(36mg，0.147mmol)。將該混合物攪拌23小時。嘗試用chromatotron純化(1mm板)，用己烷/EtOAc(80∶20→70∶30→50∶50)洗脫，無法除去與m-CPBA有關的物質。因此，使從chromotron上洗脫的產(chǎn)物經(jīng)過C-8反相HPLC處理，得到8.8mg(.021mmol)98。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 3.52(s，3H)，4.34-4.72(m，3H)，5.05(d，1H，J＝3.6)，5.97(t，1H，J＝53.9)，7.61(d，2H，J＝7.61)，8.05(d，2H，J＝8.1)。
實施例81化合物100 化合物99按與制備24類似的方式制備，100按與制備48類似的方式制備。使用Suzuki偶聯(lián)方法B，隨后脫保護和二氟乙酰化。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ2.80(s，3H)，4.30-4.70(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.6)，5.98(t，1H，J＝53.9)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.91(d，2H，J＝8.3)。
實施例82化合物101 化合物101按與合成100相同的方法制備，但需用二氯乙酸甲酯替換二氟乙酸甲酯。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ2.79(s，3H)，4.31-4.75(m，3H)，5.03(d，1H，J＝3.0)，6.24(s，1H)，7.55(d，2H，J＝8.4)，7.89(d，2H，J＝8.4)。
實施例83化合物102 將化合物17(100mg，0.258mmol)放入裝有攪拌棒的干燥圓底燒瓶中。向燒瓶中加入5ml干燥THF，在N2下，將內容物冷卻至-78℃。在快速攪拌條件下，加入n-BuLi(1.30M的己烷溶液，0.322mmol，0.248ml)，其產(chǎn)生澄清的棕色/黃色溶液。再將該混合物攪拌10分鐘。使干冰升華產(chǎn)生的過量CO2通過燥石膏干燥管直接進入-78℃的混合物產(chǎn)生氣泡，為防止CO2壓力升高，在燒瓶塞中安裝排氣針頭。使該混合物升溫至室溫，再攪拌30分鐘，此時該混合物為澄清黃色，TLC顯示有產(chǎn)物生成。加入10％(v/w)NH4Cl水溶液(5滴)猝滅該混合物，生成混濁黃色混懸液。真空濃縮該混合物，使其在EtOAc(50ml)中重新懸浮，加入足夠量的10％檸檬酸水溶液使產(chǎn)生pH 2.5的兩相混合物。分離各層，EtOAc層用鹽水(1×10ml)洗滌。該混合物經(jīng)Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)，得到105mg的黃色油。該產(chǎn)物通過chromatotron(1mm板，用4∶1己烷/EtOAc→65∶35己烷/EtOAc→1∶1己烷/EtOAc→2％MeOH的CH2Cl2溶液→5％MeOH的CH2Cl2溶液，最后用加有幾滴乙酸的10％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫)分離。合并合適的部分，用甲苯稀釋，蒸發(fā)，得到67.5mg(0.191mmol)102。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ1.49(s，9H)，1.57(S，3H)，1.69(s，3H)，3.77-3.90(m，1H)，4.39-4.57(m，1H)，4.90-5.10(br s，1H)，5.18(d，1H，J＝7.2)，7.56(d，2H，J＝8.1)，8.04(d，2H，J＝8.1)。LRMS(ESI-)m/z352(M-H+C18H23FNO5的計算值352)。
實施例84化合物106 將化合物102(106mg，0.299mmol)溶于EtOAc，滴加重氮甲烷(用Aldrich Chemical Company重氮甲烷試劑盒生成)直至微黃色持續(xù)不變。在通風性能良好的通風廚中徹夜蒸發(fā)過量的重氮甲烷，真空濃縮剩余的EtOAc溶液。將殘余物溶于Et2O，用NaHCO3水溶液洗滌，然后用鹽水洗滌。分離各層，有機層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，濃縮，得到0.087g(0.24mmol，79％)甲酯103，其無需進一步純化或表征就可直接使用。
將化合物103(0.037g，0.136mmol)溶于1ml的EtOH中。向其中加入水合肼(.007g，0.177mmol)。將該混合物回流12小時。真空除去溶劑，產(chǎn)物用chromatotron純化(1mm板，10％MeOH的CH2Cl2溶液)。分離出化合物104(40.0mg，0.109mmol)，其無需進一步表征就可直接使用。LRMS(ESI-)m/z366(M-H+C18H25FN3O4的計算值366)。
將化合物104(0.050g，0.133mmol)溶于5ml原甲酸三乙酯中，在120℃下，攪拌24小時。蒸發(fā)該混合物，得到26mg的105粗品，其無需進一步表征或純化就可直接使用。
將化合物105(0.0051g，0.014mmol)在室溫下與10ml(9∶1)TFA/H2O一起攪拌10分鐘。真空濃縮該混合物，在MeOH/甲苯混合物中溶解3次，每次溶解后蒸去溶劑，干燥至恒重，得到0.5mg脫保護的物料。在敞口容器中將該殘余物溶于1ml MeOH，加5滴二氟乙酸甲酯和15滴Et3N。將該混合物在室溫下攪拌12小時。12小時后，TLC顯示為單一產(chǎn)物。真空濃縮該混合物，產(chǎn)物用硅膠色譜法分離(用20∶1 CH2Cl2/CH3OH洗脫)，得到2.3mg 106。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.31-4.74(m，3H)，5.04(d，1H，J＝3.9)，5.96(t，1H，J＝53.9)，7.61(d，2H，J＝8.4)，8.05(d，2H，J＝8.4)，8.99(d，1H)。LRMS(ESI-)m/z314(M-H+C13H11F3N3O3的計算值314)。
實施例85化合物107 用二氯乙酸甲酯化合物替換二氟乙酸甲酯，按類似于106的方法制備化合物107。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.32-4.80(m，3H)，5.06(d，1H，J＝3.0)，6.23(S，1H)，7.62(d，2H，J＝8.4)，8.03(d，2H，J＝8，4)，8.98(s.1H)。LRMS(ESI-)m/z346(M-H+C13H11Cl2FN3O3的計算值346)。
實施例86化合物108 將化合物102(32.7mg，0.0925mmol)溶于EtOAc(8ml)中，攪拌，冷卻至0℃。加入五氟苯酚(17mg，0.093mmol)。所有固體溶解后，立即加入DCC(19mg，0.093mmol)，在0℃下，將混合物攪拌1.25小時。將該混合物蒸發(fā)至原體積的1/4，此時生成DCU沉淀。過濾除去DCU，通過蒸發(fā)分離五氟苯酯。將殘余物溶于4ml MeOH，在攪拌條件下，冷卻至0℃。分批加入NaBH4(18mg，0.46mmol)。氣泡停止后，使該混合物升至室溫。2小時后，加入4滴冰HOAc猝滅NaBH4。將該混合物蒸發(fā)至干，使殘余物在1N HCl水溶液和EtOAc之間分配。分離EtOAc層，分別用1N HCl水溶液(2×15ml)、飽和NaHCO3水溶液(2×10ml)、最后用鹽水(1×25ml)洗滌。EtOAc層經(jīng)無水Na2SO4干燥，過濾，蒸發(fā)，得到50mg黃色油。用chromatotron純化(1mm板，用5％EtOAc的己烷溶液-10％EtOAc的己烷溶液洗脫)，得到108(10.3mg，0.030mmol)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.49(s，9H)，1.57(s，3H)，1.68(s.3H)，3.75-3.89(m，1H)，3.90(s，2H)，4.39-4.58(m，1H)，4.90-5.05(br s，1H)，5.19(d，1H，J＝7.2)，7.57(d，2H，J＝8.3)，8.04(d，2H，J＝8.3)。
實施例87化合物109 將化合物108(10mg，0.30mmol)溶于5ml的9∶1 TFA/H2O，在室溫下攪拌1小時。真空濃縮該混合物，得到約9mg的脫保護的TFA鹽。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.54-3.68(m，1H)，3.91(s，2H)，4.24-4.67(m，2H)，4.90(d，1H，溶劑干擾)，7.57(d，2H，J＝8.4)，8.07(d，2H，J＝8.4)。
在開口容器中，將9mg產(chǎn)物(0.03mmol)溶于2ml MeOH。向其中加入15滴Et3N和15滴二氯乙酸甲酯。將該混合物在室溫下攪拌56小時。反應結束時，溶劑完全蒸發(fā)。將殘余物在chromatotron(1mm板上樣，用2％MeOH的CH2Cl2溶液→4％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫，得到7.5mg 109。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ3.88(s，2H)，4.28-4.73(m，3H)，5.02(d，1H，J＝3.3)，6.22(s，1H)，7.51(d，2H，J＝8.4)，7.97(d，2H，J＝8.4)。
實施例88化合物110 按類似于本文中制備其它含吡啶的聯(lián)芳化合物的方法制備。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ2.54(s，3H)，4.30-4.68(m，3H)，4.99(d，J＝3.3)，5.98(t，1H，J＝40.5)，7.35(d，1H，J＝6.0)，7.49(d，2H，J＝6.2)，7.61(d，2H，J＝6.2)，7.95(dd 1H，J＝6.0，1.7)，8.61(d，1H，J＝1.7)。LRMS(ESI-)m/z336.9(M-H+C17H16F3N2O2的計算值337.1)。
實施例89化合物111 按類似于本文中制備其它含吡啶的聯(lián)芳化合物的方法制備。1HNMR(300MHz，CD3OD)δ2.56(s，3H)，4.30-4.74(m，3H)，5.01(d，1H，J＝3.9)，6.27(s，1H)，7.36(d，1H，J＝8.1)，7.56(d，2H，J＝8.4)，7.61(d，2H，J＝8.4)，7.96(1H，dd，J＝8.1，2.3)，8.62(d，1H，J＝2.31)。
實施例90化合物112 將化合物111(0.0185g，0.0499mmol)在0℃下溶于10mlCH2Cl2。加入m-CPBA(0.246g，0.0997mmol)。攪拌該混合物，直至冰浴融化和混合物溫度升至室溫，約需12小時。真空濃縮該混合物，用制備板硅膠色譜(15％MeOH的CH2Cl2溶液)分離112，隨后用硅膠塞(plug)(3％MeOH的CH2Cl2溶液)分離。LRMS(ESI-)m/z385(M-H+C17H16Cl2FN2O3的計算值385.1)。
實施例91化合物113 用化合物110合成化合物113，其方法與用111合成112相同。LRMS(ESI-)m/z353(M-H+C17H16Cl2FN2O3的計算值353.1)。
實施例92化合物114 按本文中制備其它聯(lián)芳的相同方法制備該化合物。LRMS(ESI-)m/z324(M-H+C15H13F3N3O2的計算值324.1)。
實施例93化合物115 制備方式同化合物48。需要的芳基溴按兩步制備用Br2溴化2-氨基-1，3，4-噻二唑，隨后進行乙酰化。LRMS(ESI-)m/z419(M-H+C15H14Cl2FN4O3S的計算值419.0)。
實施例94化合物116 化合物116按流程2和3闡述的方式合成。通過使4-溴-2-氟苯甲醛與甘氨酸縮合，制得苯基絲氨酸類似物。按Suzuki偶聯(lián)方法B，使溴化物中間體與間吡啶硼酸偶聯(lián)。按本文上述方法，進行脫保護和二氟乙酰化。LRMS(ESI+)m/z343(M+H+C16H15F4N2O2的計算值343.1)。
實施例95化合物117 與116合成的方法相同。LRMS(ESI+)m/z375(M+H+C16H15F4N2O2的計算值375.1)。
實施例96化合物118 將化合物19(100mg，0.258mmol)、乙酸鉀(38mg，0.386mmol)和2ml的N，N′-二甲基乙酰胺(DMAC)在玻璃壓力管中混合。用注射器加入噻唑(112mg，1.31mmol)，再用1ml DMAC沖洗注射器，沖洗液加入壓力管。在室溫下攪拌該混合物，同時通入N2達10分鐘。加入Pd(PPh3)4(15mg，0.013mmol)，該混合物中通入N2達5分鐘，在防護罩下，將該管封閉并加熱至150℃，并在此溫度下保持12小時。該混合物變?yōu)樯钭厣?。冷卻至室溫后，通過Celite墊過濾管中內容物，將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物溶于40ml的3∶1 EtOAc/己烷，用H2O(2×15ml)和鹽水(2×15ml)洗滌，然后經(jīng)無水Na2SO4干燥。過濾干燥的有機層，除去干燥劑，真空濃縮，得到109mg棕色油。化合物119用硅膠色譜法純化(用(80∶20→50∶50)己烷/EtOAc洗脫)(54mg，0.14mmol)。LRMS(ESI+)m/z393.1(M+H+C20H26FN2O3S的計算值393.2)。
將所有的化合物119溶于9∶1(v/v)TFA/H2O(7.5ml)，在室溫下攪拌30分鐘。然后真空濃縮該混合物，殘余物在甲苯和甲醇的混合物中溶解2次，每次溶解后蒸發(fā)溶劑。使一部分產(chǎn)物(9.7mg，0.027mmol)溶于2ml的MeOH，加入10滴Et3N和12滴二氟乙酸甲酯。使該混合物暴露在空氣中，快速攪拌16小時。將該混合物蒸發(fā)至干，殘余物用chromatotron純化(1mm板)，用3％MeOH的CH2Cl2溶液洗脫，得到118(6.0mg，0.018mmol。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.27-4.69(m，3H)，4.97(d，1H，J＝4.2)，5.99(t，1H，J＝53.9)，7.47(d，2H，J＝8.3)，7.65(d，2H，J＝8.3)，8.16(s，1H)，8.94(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z331.1(M+H+C14H14F3N2O2S的計算值331.1)。
實施例97化合物120 按類似于制備118的方式制備化合物120，用二氯乙?；鎿Q二氟乙?；?。LRMS(ESI+)m/z363.0(M+H+C14H14Cl2FN2O2S的計算值363.0)。
實施例98化合物121 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用23和3-氯-6-甲基噠嗪合成該被保護的聯(lián)芳中間體。如同本發(fā)明其它化合物中一樣進行脫保護和二氯乙?；?。LRMS(ESI+)m/z372.0(M+H+C16H17Cl2FN3O2的計算值372.1)。
實施例99化合物122 按類似于121的方式制備。LRMS(ESI+)m/z340.1(M+H+C16H17F3N3O2的計算值340.1)。
實施例100化合物123 按照Suzuki偶聯(lián)方法B，用硼酸23和合適的芳基溴制備該保護的聯(lián)芳中間體。然后按合成29介紹的方法，用9∶1(v/v)TFA/H2O簡略處理該中間體使其脫保護和二氯乙?；?。LRMS(ESI+)m/z380.0(M-H+C17H13Cl2FN3O2的計算值380.0)。
實施例101化合物124 按與123類似方式制備。如同本發(fā)明其它化合物中一樣進行二氟乙酰化。LRMS(ESI+)m/z348.0(M+H+C17H13F3N3O2的計算值348.1)。
實施例102化合物125 按Suzuki偶聯(lián)方法，用硼酸23制備該聯(lián)芳中間體。LRMS(ESI+)m/z392.0(M-H+C15H13Cl3FN3O2的計算值392.0)。
實施例103化合物126 按照類似溴中間體19的制備方法，用35制備原料腈。用Ph2P(S)SH處理，生成硫代苯甲酰胺，其通過與二甲基甲酰胺縮二甲醇反應轉變?yōu)榱虼郊纂咧虚g體。在甲醇/吡啶中，用羥胺-O-磺酸進行環(huán)化，得到該聯(lián)芳中間體。LRMS(ESI+)m/z364.0(M-H+C13H12Cl2FN3O2S的計算值364.0)。
實施例104化合物127 在-78℃下，通過用正丁基鋰的THF溶液處理中間體19制備該苯基鋰中間體。使該中間體與噠嗪反應，用DDQ氧化生成的2-和3-位加合物的混合物。用色譜法分離需要的3-噠嗪基(pyridazyl)區(qū)域異構體。LRMS(ESI+)m/z326.0(M-H+C15H14F3N3O2的計算值326.0)。
實施例105化合物128 化合物128用實施例104的方法合成。LRMS(ESI+)m/z358.0(M-H+C15H14Cl2FN3O2的計算值358.0)。
實施例106化合物129 使用實施例104中討論的方法。LRMS(ESI+)m/z358.0(M-H+C15H14Cl2FN3O2的計算值358.0)。
實施例107化合物130 使用實施例104的方法。LRMS(ESI+)m/z326.0(M-H+C15H14F3N3O2的計算值326.0)。
實施例108化合物131 使該苯基鋰中間體與N-甲氧基-N-甲基乙酰胺反應，在吡啶存在下，使生成的苯乙酮與溶于甲醇二甲基甲酰胺縮二甲醇和羥胺-O-磺酸反應，得到異噁唑。LRMS(ESI+)m/z347.0(M-H+C14H13Cl2N2O3的計算值347.0)。
實施例109化合物132 用實施例108的方法，合成化合物132。LRMS(ESI+)m/z315.0(M-H+C14H13F3N2O3的計算值315.0。
實施例110化合物133 使該苯基鋰中間體與二甲基甲酰胺反應，生成甲?；虚g體，然后使其與從(甲氧甲基)三苯基溴化鏻產(chǎn)生的內鎓鹽反應。用溴溴化生成的烯醇醚，得到該溴乙醛，用硫脲環(huán)化生成該氨基噻唑。LRMS(ESI+)m/z378.0(M-H+C14H14Cl2FN3O2S的計算值378.0)。
實施例111化合物134 用實施例110的方法，合成化合物134。LRMS(ESI+)m/z346.0(M-H+C14H14F3N3O2S的計算值346.0)。
實施例112化合物135(非對映體混合物) 用實施例108的方法，合成化合物135。LRMS(ESI+)m/z 331.0(M-H+C14H13F2N2O3的計算值331.0)。
實施例113化合物136 使實施例108的原料與Lawesson′s試劑反應，在吡啶存在下，用溶于甲醇的羥胺-O-磺酸使該產(chǎn)物環(huán)化為聯(lián)芳中間體。LRMS(ESI+)m/z363.0(M-H+C14H13Cl2FN2O2S的計算值363.0)。
實施例114化合物137 用實施例113的方法，合成化合物137。LRMS(ESI+)m/z331.0(M-H+C14H13F3N2O2S的計算值331.0)。
實施例115化合物138(非對映體混合物) 用實施例113的方法，合成化合物138。LRMS(ESI+)m/z347.0(M-H+C14H13ClF2N2O2S的計算值347.0)。
實施例116化合物139 用實施例96的方法，用需要的中間體19的對映體合成化合物139。LRMS(ESI+)m/z331.0(M-H+C14H13F3N2O2S的計算值331.0)。
實施例117化合物140(非對映體混合物) 用實施例41的方法，合成化合物140。LRMS(ESI+)m/z348.0(M-H+C13H12ClF2N3O2S的計算值348.0)。
實施例118化合物141 在碘化銅和PdCl2(PPh3)2存在下，使中間體19與三甲基甲硅烷基乙炔反應。通過用碳酸鉀的甲醇溶液處理該產(chǎn)物除去甲硅烷基。使乙炔與正丁基鋰反應，然后與氰化甲苯磺酰反應，生成氰基乙炔中間體。通過用羥胺的乙醇溶液處理該氰基乙炔，進行環(huán)化，得到3-氨基異噁唑。LRMS(ESI+)m/z330.0(M-H+C14H14F3N3O3的計算值330.0)。
實施例119化合物142
用實施例118的方法合成化合物142。LRMS(ESI+)m/z362.0(m-H+C14H14Cl2FN3O3的計算值362.0)。
實施例120化合物143 在二氯1，1’-雙(二苯膦基)二茂鐵合鈀(II)二氯甲烷存在下，使需要的中間體19的對映體與雙戊烯二硼反應。用Suzuki反應使該硼酸頻哪醇酯(Pinacolboronate ester)與5-溴-2-氰基吡啶偶聯(lián)。LRMS(ESI+)m/z350.0(M-H+C17H14F3N3O2的計算值350.0)。
實施例121化合物144 用實施例120的方法合成化合物144。LRMS(ESI+)m/z382.0(M-H+C17H14Cl2FN3O2的計算值382.0)。
實施例122化合物145(非對映體混合物) 使中間體19與正丁基鋰反應，然后與二甲基甲酰胺反應。使該甲酰基中間體與甲基溴化鎂反應，得到該苯甲醇的非對映體混合物。LRMS(ESI+)m/z324.0(M-H+C13H16Cl2FNO3的計算值324.0)。
實施例123化合物146 使(用實施例118介紹的方法制備)乙炔原料與正丁基鋰反應，隨后加入二氧化碳，用重氮甲烷的乙酸乙酯/乙醚溶液將生成的酸酯化。通過使該酯與羥胺反應得到3-羥基異噁唑，然后用重氮甲烷的乙酸乙酯/乙醚溶液使其甲基化。LRMS(ESI+)m/z377.0(M-H+C15H15Cl2FN2O4的計算值377.0)。
實施例124化合物147 用實施例120的方法，使用Suzuki偶聯(lián)反應中的2-溴-1，3，4-噻二唑，合成化合物147。LRMS(ESI+)m/z364.0(M-H+C13H12Cl2FN3O2S的計算值364.0)。
實施例125化合物148 用實施例118介紹的方法制備乙炔原料。3-甲酰乙氧基(carboethoxy)異噁唑中間體通過用硝基乙酸乙酯、二碳酸二叔丁酯和4-二甲氨基吡啶原位產(chǎn)生的氧化腈的環(huán)加成反應制得。通過使3-甲酰乙氧基異噁唑中間體水解成酸，酸轉化為酰氯，然后與氨反應制得該酰胺。LRMS(ESI+)m/z358.0(M-H+C15H14F3N3O4的計算值358.0)。
實施例126化合物149 用實施例108的方法，用需要的中間體19的對映體合成化合物149。LRMS(ESI+)m/z347.0(M-H+C14H13Cl2FN2O3的計算值347.0)。
實施例127化合物150 用Vilsmeyer試劑的二甲基甲酰胺溶液，使用實施例125介紹方法得到的3-羧基異噁唑中間體轉變?yōu)轷Ｂ取Ｓ盟亩』饸滗@的THF溶液將該粗產(chǎn)物還原為3-羥甲基異噁唑中間體。LRMS(ESI+)m/z377.0(M-H+C15H15Cl2FN2O4的計算值377.0)。
實施例128化合物151 用實施例127方法合成化合物151。LRMS(ESI+)m/z345.0(M-H+C15H15F3N2O4的計算值345.0)。
實施例129化合物152 用實施例125的方法合成化合物152。LRMS(ESI+)m/z390.0(M-H+C15H14Cl2FN3O4的計算值390.0)。
實施例130化合物153 用實施例40的方法合成化合物153。使用EDC/HOBT和氰基乙酸?；被虚g體。LRMS(ESI+)m/z314.0(M-H+C17H16FN3O2的計算值314.0)。
實施例131化合物154 用實施例130的方法合成化合物154。LRMS(ESI+)m/z330.0(M-H+C16H16FN5O2的計算值330.0)。
實施例132化合物155
用實施例118介紹的方法制備乙炔原料。通過進行由硝基乙烷、二碳酸二叔丁酯和4-二甲氨基吡啶原位產(chǎn)生的氧化腈環(huán)加成制備該3-甲基異噁唑中間體。LRMS(ESI+)m/z329.0(M-H+C15H15F3N2O3的計算值329.0)。
實施例133化合物156 用實施例132的方法合成化合物156。LRMS(ESI+)m/z361.0(M-H+C15H15Cl2FN2O3的計算值361.0)。
實施例134化合物157 在銅粉存在下，使中間體19與4-甲基咪唑在回流的二甲基甲酰胺溶液中反應。LRMS(ESI+)m/z3460.0(M-H+C14H14Cl2FN3O2的計算值346.0)。
實施例135化合物158 用實施例134的方法合成化合物158。LRMS(ESI+)m/z328.0(M-H+C15H16F3N3O2的計算值328.0)。
實施例136化合物159 用實施例126的方法合成化合物159。LRMS(ESI+)m/z315.0(M-H+C14H13F3N2O3的計算值315.0)。
實施例137化合物160 將需要的中間體19的對映體的混合物(1g，2.5mmol)、碳酸鉀(712mg，5mmol)和丙炔酰胺(1.07g，15mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(4ml)溶液在室溫下攪拌，與此同時通入N2達10分鐘。加入Pd(PPh3)4催化劑(15mg，0.013mmol)，混合物中再通入N2達5分鐘。將生成的混合物在100℃下攪拌9小時。冷卻至室溫后，所得粗品用快速硅膠色譜法純化，得到偶聯(lián)產(chǎn)物(601mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.49(s，9H)，1.59(s，3H)，1.70(s，3H)，3.75-3.90(m，1H)，4.35-4.60(m，2H)，5.15(d，1H，J＝7.5)，5.65(s，1H)，5.85(s，1H)，7.45(d，2H，J＝8.4)和7.55(d，2H，J＝8.4)。
在0℃下，在二甲基甲酰胺(dimethylformamamide)(2ml)中，緩慢加入亞硫酰氯(2ml)，在此溫度下，將反應混合物攪拌30分鐘。然后0℃下，用套管將該溶液導入丙炔酰胺中間體(600mg)的DMF(4ml)溶液中。在室溫下攪拌30分鐘后，將該混合物傾入到冰/水(50ml)中。用飽和碳酸氫鈉將pH調至7。該溶液用乙酸乙酯萃取3次。合并的有機層用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，用柱色譜法純化，得到丙炔腈中間體(326mg)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.49(s，9H)，1.59(s，3H)，1.70(s，3H)，3.75-3.90(m，1H)，4.35-4.60(m，2H)，5.15(d，1H，J＝7.5)，7.49(d，2H，J＝8.4)和7.63(d，2H，J＝8.4)。
向氫氧化鈉(206mg，7當量)的水溶液(2ml)中，加入鹽酸羥胺(256mg，5當量)。將該溶液加入丙炔腈中間體(263mg)的乙醇(7ml)中。在室溫下，攪拌生成的混合物6小時。加入乙酸乙酯，分離有機層，用水洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥。該粗品用柱色譜法純化，得到保護的3-氨基異噁唑，然后將其溶于THF(6ml)和4N HCl(6ml)，在80℃下攪拌2.5小時。將該反應混合物減壓蒸發(fā)至干。使該殘余物與甲醇共蒸發(fā)兩次，真空干燥過夜。向該粗品的甲醇(2ml)溶液中，加入三乙胺(2ml)，隨后加入二氯乙酸甲酯(1ml)。將該混合物在室溫下攪拌24小時。蒸發(fā)溶劑，該混合物用快速柱色譜法純化，得到化合物160(167mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3+CD3OD)δ4.35-4.70(m，3H)，5.05(m，1H)，5.85(s，1H)，6.16(s，1H)，7.44(d，2H，J＝8.1)和7.65(d，2H，J＝8.1)。LRMS(ESI+)m/z362.0(M-H+C14H14Cl2FN3O3的計算值362.0)。
實施例138化合物161 用實施例132的方法，以需要的中間體19的對映體為原料合成化合物161。LRMS(ESI+)m/z361.0(M-H+C15H15Cl2FN2O3的計算值361.0)。
實施例139化合物162 用實施例138的方法合成化合物162。LRMS(ESI+)m/z329.0(M-H+C15H15F3N2O3的計算值329.0)。
實施例140化合物163 用實施例120的方法合成化合物163。用二環(huán)己基碳二亞胺和氰基乙酸?；霭被虚g體。LRMS(ESI+)m/z339.0(M-H+C18H15FN4O2的計算值339.0)。
實施例141化合物164 用實施例120的方法合成化合物164。用二環(huán)己基碳二亞胺和疊氮乙酸?；霭被虚g體。LRMS(ESI+)m/z355.0(M-H+C17H15FN6O2的計算值355.0)。
實施例142化合物165 用實施例120的方法合成化合物165。所示氨基中間體用乙酸酐?；?。LRMS(ESI+)m/z314.0(M-H+C17H16FN3O2的計算值314.0)。
實施例143化合物166 用實施例120的方法合成化合物166。LRMS(ESI+)m/z350.0(M-H+C13H11F4N3O2S的計算值350.0)。
實施例144化合物167
用實施例120的方法合成化合物167。用二環(huán)己基碳二亞胺和N-Boc-甘氨酸?；霭被虚g體，用鹽酸的甲醇溶液使生成的甘氨酰胺脫保護。LRMS(ESI+)m/z329.0(M-H+C17H17FN4O2的計算值329.0)。
實施例145化合物168 用實施例144的方法合成化合物168。LRMS(ESI+)m/z343.0(M-H+C18H19FN4O2的計算值343.0)。
實施例146化合物169 將需要的中間體19的對映體(1.16g，3mmol)、碳酸鉀(1.659g，12mmol)、咪唑(1.225g，18mmol)和銅粉(191mg，3mmol)的20ml DMF溶液回流下劇烈攪拌4小時。使該反應混合物冷卻至室溫，倒入水(100ml)中。用乙酸乙酯萃取，有機萃取液用水洗滌(3x)，使有機層通過硅膠和無水硫酸鈉塞。蒸發(fā)溶劑，得到該咪唑(1.06g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H)，1.60(s，3H)，1.75(s，3H)，3.75-3.85(m，1H)，4.35-4.55(m，2H)，5.20(d，1H，J＝7.5)，7.22(s，1H)，7.28(s，1H)，7.41(d，2H，J＝8.4)，7.58(d，2H，J＝8.4)和7.89(s，1H)。
將該咪唑中間體(2.77g)溶于THF(20ml)和4N HCl(20ml)中，在80℃下攪拌2.5小時。將該反應混合物減壓蒸發(fā)至干。將殘余物與甲醇共蒸發(fā)2次，真空干燥過夜。將粗品溶于甲醇(20ml)中，加入三乙胺(5ml)，隨后加入二氯乙酸甲酯(5ml)。將該混合物在室溫下攪拌20小時。蒸發(fā)溶劑，混合物用快速柱色譜法純化，得到白色固體化合物169(1.1g)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.30-4.75(m，3H)，5.21(d，1H，J＝7.5)，5.86(s，1H)，7.05(d，1H，J＝7.5)，7.10(s，1H)，7.28(s，1H)，7.39(d，2H，J＝8.4)，7.52(d，2H，J＝8.4Hz)和7.81(s，1H)。LRMS(ESI+)m/z360.0(M-H+C15H16Cl2FN3O2的計算值360.0)。
實施例147化合物170 用實施例106的方法，用需要的中間體19的對映體合成化合物170。LRMS(ESI+)m/z358.0(M-H+C15H14Cl2FN3O2的計算值358.0)。
實施例148化合物171 用實施例147的方法合成化合物171。LRMS(ESI+)m/z326.0(M-H+C15H14F3N3O2的計算值326.0)。
實施例149化合物172
用實施例110的方法，用需要的中間體19的對映體合成化合物172。LRMS(ESI+)m/z346.0(M-H+C14H14F3N3O2S的計算值346.0)。
實施例150化合物173 按實施例137的方法合成化合物173。LRMS(ESI+)m/z330.0(M-H+C14H14F3N3O3的計算值330.0)。
實施例151化合物174 用實施例146的方法合成化合物174。LRMS(ESI+)m/z314.0(M-H+C14H14F3N3O2的計算值314.0)。
實施例152化合物175 用實施例28化合物的方法合成化合物175。LRMS(ESI+)m/z290.0(M-H+C13H14F3NO3的計算值290.0)。
實施例153化合物176 用實施例149的方法合成化合物176。LRMS(ESI+)m/z378.0(M-H+C14H14Cl2FN3O2S的計算值378.0)。
實施例154化合物177 通過實施例33的方法，用溴吡啶衍生物和硼酸23合成化合物177。LRMS(ESI+)m/z372.0(M-H+C16H16Cl2FN3O2的計算值372.0)。
實施例155化合物178 用實施例33的方法，用溴嘧啶衍生物和硼酸23合成化合物178。LRMS(ESI+)m/z373.0(M-H+C15H15Cl2FN4O2的計算值373.0)。
實施例156化合物179
用實施例33的方法，用溴嘧啶衍生物和硼酸23合成化合物179。使用標準條件除去保護基團，引入二氯乙酰胺官能團。LRMS(ESI+)m/z373.0(M-H+C15H15Cl2FN4O2的計算值373.0)。
實施例157化合物180 用實施例33的方法，用需要的氯噠嗪衍生物和硼酸23合成化合物180。使用標準條件除去保護基團，引入二氯乙酰胺官能團。LRMS(ESI+)m/z373.0(M-H+C15H15Cl2FN4O2的計算值373.0)。
結論因此，人們將會認識到，本發(fā)明提供了新型氟苯尼考類化合物及其在治療或預防動物或人類細菌感染中的使用方法。
盡管已經(jīng)用某些實施方案和實施例描述了本發(fā)明，但對本領域技術人員而言顯而易見，在不偏離本發(fā)明范圍的前提下，可以對所述實施方案和實施例進行各種變化。
權利要求
1.一種具有以下化學結構式的化合物，所述化合物或者為具有所示相對立體化學的外消旋體，或者為基本對映體純的并且具有所示絕對立體化學 其中R1選自-OH和-F；R2和R3獨立選自氫、(1C-4C)烷基、鹵基、-CF3、-NH2、-CN和N3；R4選自以下-C(＝R5)R6，其中R5選自氧、N-C≡N和NOR7，其中R7選自氫、烷基、芳基、雜芳基、脂環(huán)基和雜脂環(huán)基；R6選自氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷氧基、雜芳基、脂環(huán)基和雜脂環(huán)基； 其中A1為碳或氮；A2、A3、A4和A5獨立選自碳、氮、氧和硫，條件是A1-A5中至少一個不為碳，所示環(huán)上的氮、氧和硫原子的總數(shù)不超過四個，而且該環(huán)為芳環(huán)；所示環(huán)的碳原子獨立被選自以下的取代基取代氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷基O-、-CF3、-OH、-CN、鹵基、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-、-NH2、(1C-4C)烷基NH-、((1C-4C)烷基)2N-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基C(O)-、(3C-6C)環(huán)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基OC(O)-、(1C-4C)烷基C(O)NH-、-C(O)NH2、(1C-4C)烷基NHC(O)-和((1C-4C)烷基)2NC(O)-，其中在任何所述取代基上的任何烷基可以是未取代的，或者被選自鹵基和-OH的基團取代；如果A1為碳并且所示環(huán)不含氧或硫，則氮原子中的一個可任選被選自以下的取代基取代(1C-4C)烷基、(1C-4C)烷基S(O)2-和-NH2； 其中A6、A7、A8、A9和A10獨立選自碳、氮和 條件是每次A6-A10中只能一個可以為 所示環(huán)上的碳原子獨立被選自以下的取代基取代氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷基O-、-CF3、-OH、-CN、鹵基、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-、-NH2、(1C-4C)烷基NH-、((1C-4C)烷基)2N-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基C(O)-、(3C-6C)環(huán)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基OC(O)-、(1C-4C)烷基C(O)NH-、-C(O)NH2、(1C-4C)烷基NHC(O)-、((1C-4C)烷基)2NC(O)-和-OCH2O-，-OCH2O-基團上的氧原子與相鄰環(huán)碳原子結合，其中在任何所述取代基上的任何烷基可以是未取代的，或者被選自鹵基和-OH的基團取代；除當R2和R3均為F時，R8為氫或F外，R8在所有化合物中都為氫。
2.權利要求1的化合物，其中R1為-F。
3.權利要求2的化合物，其中R2和R3獨立選自Cl和F；R8為氫。
4.權利要求3的化合物，其中R4為-C(＝R5)R6，其中R5選自氧、N-C≡N和NOR7，其中R7選自氫、烷基、芳基、雜芳基、脂環(huán)基和雜脂環(huán)基；R6選自氫、(1C-4C)烷基、(3C-6C)環(huán)烷基、(1C-4C)烷氧基、芳基、雜芳基、脂環(huán)基和雜脂環(huán)基。
5.權利要求4的化合物，其中R4為CH3C(O)-。
6.權利要求2的化合物，其中R4為 其中A6、A7、A8、A9和A10的定義同權利要求1；且A6-A10中的任何碳被選自以下的取代基取代氫、-NH2、鹵基-、-CN、(1C-4C)烷基-、(1C-4C)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-，其中在任何取代基上的任何烷基可以是未取代的，或被鹵基或-OH取代。
7.權利要求3的化合物，其中R4為 其中A6、A7、A8、A9和A10獨立選自碳、氮和 條件是每次A6-A10中只能一個可為 且A6-A10中的任何碳被選自以下的取代基取代氫、-NH2、鹵基-、-CN、(1C-4C)烷基-、(1C-4C)烷基C(O)-、(1C-4C)烷基S(O)-、(1C-4C)烷基S(O)2-、NH2SO2-、(1C-4C)烷基SO2NH-、(1C-4C)烷基NHSO2-、((1C-4C)烷基)2NSO2-，其中在任何所述取代基上的任何烷基可以是未取代的，或者被鹵基或-OH取代。
8.權利要求2的化合物，其中A6-A10中的一個、二個或三個為氮；且所述環(huán)上的剩余碳原子中的一個或二個任選被-NH2取代，所述環(huán)上的所有其它碳原子未被取代。
9.權利要求3的化合物，其中A6-A10中的一個、二個或三個為氮；且所述環(huán)上的剩余碳原子中的一個或二個任選被-NH2取代，所述環(huán)上的所有其它碳原子未被取代。
10.權利要求2的化合物，其中R4選自以下 和
11.權利要求3的化合物，其中R4選自以下 和
12.權利要求2的化合物，其中R4為 其中A1、A2、A3、A4和A5的定義同權利要求1。
13.權利要求3的化合物，其中R4為 其中A1、A2、A3、A4和A5的定義同權利要求1。
14.權利要求12的化合物，其中所有的碳原子和氮原子都未被取代。
15.權利要求13的化合物，其中所有的碳原子和氮原子都未被取代。
16.權利要求12的化合物，其中A2-A5中的一個碳被-NH2基團取代，所述環(huán)上所有其它的碳均未被取代，合適時，所述環(huán)上的氮原子也未被取代。
17.權利要求13的化合物，其中A2-A5中的一個碳被-NH2基團取代，所述環(huán)上的所有其它的碳均未被取代，合適時，所述環(huán)上的氮原子也未被取代。
18.權利要求2的化合物，其中R4選自以下 和
19.權利要求3的化合物，其中R4選自以下 和
20.權利要求1的化合物，所述化合物選自以下 和 其中所述化合物或者為具有所示相對立體化學的外消旋體，或者為基本對映體純的并且具有所示絕對立體化學。
21.權利要求1的化合物，所述化合物選自以下 和 其中所述化合物或者為具有所示相對立體化學的外消旋體，或者為基本對映體純的并且具有所示絕對立體化學。
22.權利要求1的化合物，其中所述化合物為基本對映體純的并且具有1-(R)-2-(S)絕對構型。
23.一種治療或預防細菌感染的方法，所述方法包括給予有需要的患者藥用有效量的權利要求1的化合物。
24.權利要求30的方法，其中所述細菌感染由以下屬的細菌引起巴斯德氏屬(Pasteurella)、嗜血菌屬(Haemophilus)、梭桿菌屬(Fusobacterium)、擬桿菌屬(Bacterioides)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、腸桿菌屬(Enterobacter)、埃希氏菌屬(Escherichia)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、沙門氏菌屬(Salmonella)、志賀氏菌屬(Shigella)、放線桿菌屬(Actinobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、支原體屬(Mycoplasma)、愛德華氏菌屬(Edwardsiella)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、博德特氏菌屬(Bordetella)、變形菌屬(Proteus)或Mannheimia。
25.權利要求31的方法，其中所述細菌感染由以下細菌引起Mannhemia haemolytica、多殺巴斯德氏菌(Pasturella multocida)、睡眠嗜血菌(Haemophilus somnus)、壞死梭桿菌(Fusobacteriumnecrophorum)、產(chǎn)黑素擬桿菌(Bacterioides melaninogenicus)、大葉性肺炎放線桿菌(Actmobacillus pleuropneumoniae)、豬鏈球菌(Streptococcussuis)、豬霍亂沙門氏菌(Salmonella cholerasuis)、牛支原體(Mycoplasmabovis)、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)、豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、雞敗血支原體(Mycoplasma gallisepticum)、鯰魚愛德華氏菌(Edwardsiella ictaluri)、大腸桿菌(Escherichia coli)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、中間葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、奇異變形菌(Proteus mirabilis)或殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的具有化學結構(I)的氟苯尼考化合物，其中所述化合物用于治療和/或預防多種類型患者的細菌感染，所述患者例如但不限于鳥類、魚類、貝類及哺乳動物。
文檔編號A61K31/505GK1649829SQ03809896
公開日2005年8月3日 申請日期2003年3月7日 優(yōu)先權日2002年3月8日
發(fā)明者C·G·博亞姆拉, 張麗珊, S·J·赫克, T·W·格林卡, D·E·舒斯特 申請人:先靈-普勞有限公司