專利名稱：氨苯砜作為神經(jīng)保護(hù)劑在腦中風(fēng)中的應(yīng)用的制作方法
背景技術(shù)：
對(duì)于腦中風(fēng)的藥物治療，過去曾經(jīng)應(yīng)用過一些臨床療效甚微的藥物；其中我們可提及的有胞磷膽堿。在2002年出版的近期研究(Davalos A，Castillo J.，Alvarez-Sabin J.，Secades JJ.，Mercadal J.，Lopez S.，Cobo E.，Warach S.，Sherman D.，Clark WM.，Lozano R.，Oralciticoline in acute ischemic strokean individual patient data poolinganalysis of clinical trials.Stroke 33(12)2850-2857，2002)中，表明該藥給予腦中風(fēng)患者三個(gè)月后，產(chǎn)生平均25％的改善，而接受安慰劑的患者平均改善20％。從這些結(jié)果可以推斷，該藥物治療不能使腦中風(fēng)相關(guān)的腦損傷降低平均多于20-30％。
另一方面，防止腦中風(fēng)后果的新藥的研究和開發(fā)取得了令人失望的結(jié)果。例如美國食品藥品管理局2001年批準(zhǔn)了5種針對(duì)心臟病的藥物，但是沒有針對(duì)腦中風(fēng)的藥物。這得出這樣的事實(shí)對(duì)于該嚴(yán)重疾病沒有選擇性的藥物治療。
本發(fā)明的目的是證明氨苯砜作為針對(duì)患者腦中風(fēng)相關(guān)的致殘后果的首選有效治療的應(yīng)用。
氨苯砜是目前已經(jīng)使用的藥物，其用于麻風(fēng)病的化學(xué)治療以及卡氏肺囊蟲(pneumocystis carinii)引起的肺炎的預(yù)防?？紤]到麻風(fēng)病是一種不常見的疾病，氨苯砜的治療應(yīng)用近來受到局限。
急性腦中風(fēng)是世界人群中排名第三的死因，并且是造成殘疾的主要原因?？紤]到腦中風(fēng)意味著社會(huì)擔(dān)負(fù)患者康復(fù)和醫(yī)療保健費(fèi)用的嚴(yán)重后果，因此研究了比現(xiàn)有治療藥更有效的新的治療藥，合成氨苯砜作為新的神經(jīng)保護(hù)化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是開發(fā)一種用于在急性腦中風(fēng)治療中治療使用的產(chǎn)品。該疾病在世界人群中廣泛分布，僅在美國每年就有500000-750000人發(fā)病，因此決定尋求比目前使用的產(chǎn)品更有效的其他治療產(chǎn)品。
在研究比目前用于腦中風(fēng)藥物治療更有效的新型治療藥的過程中，合成了作為下式的化合物的氨苯砜 自從八十年代以來藥物氨苯砜在墨西哥已經(jīng)不生產(chǎn)，并且它的原料也已不生產(chǎn)。
由于上述原因，通過實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ鸵约巴ㄟ^急性腦中風(fēng)患者臨床對(duì)照試驗(yàn)，本文的工作表明，當(dāng)缺血事件發(fā)生后的最初十二個(gè)小時(shí)之內(nèi)給藥時(shí)，氨苯砜有效地防止該疾病的有害后果。
采用將縫合線通過動(dòng)物的頸內(nèi)動(dòng)脈引起大鼠大腦中動(dòng)脈永久性梗塞的急性腦中風(fēng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?實(shí)施例1)來進(jìn)行藥理學(xué)測(cè)試。該藥物還給予急性腦中風(fēng)患者，所述患者參加the Emergency Services of theNational Institute of Neurology and Neurosurgery“Manuel VelascoSuarez”，in Mexico City(實(shí)施例2)。
大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，9.325毫克/千克劑量的氨苯砜(I)具有93％的療效，而12.5毫克/千克劑量的療效為91％，所述療效指降低大鼠實(shí)驗(yàn)性中風(fēng)模型中激發(fā)的中風(fēng)引起的腦損傷的體積。
患者中的療效結(jié)果表明，劑量達(dá)200毫克的氨苯砜能使平均67％的患者的神經(jīng)癥狀改善。
氨苯砜的有效劑量為0.013毫摩爾/千克。
所使用的劑量沒有副作用出現(xiàn)。
特別地，使用下述技術(shù)氨苯砜的合成氨苯砜可以通過不同的路線合成，下面的合成僅作為實(shí)例提供。所述合成分兩步進(jìn)行1.-將60克N-乙酰苯胺置于錐形瓶中，緩慢加熱直至所有固體物質(zhì)熔化。將所得粘稠液體使用冰浴冷卻，在該錐形瓶瓶底留下固體物質(zhì)。不移去冰浴，加入165毫升氯磺酸。之后，從冰上移去該錐形瓶，小心攪拌，進(jìn)行反應(yīng)10分鐘，10分鐘結(jié)束時(shí)將反應(yīng)混合物再次加熱直至剩余的N-乙酰苯胺完全溶解，再繼續(xù)反應(yīng)10分鐘。將產(chǎn)物冷卻，并小心倒入盛有冰和水的容器中，過濾沉淀并用冷水洗滌。收集該沉淀，溶于氯仿中，并用水萃取3次，收集氯仿相，將其置于冰浴上，沉淀純化的亞硫酰氯(cloruro de tionilo)(報(bào)告的中間產(chǎn)物熔點(diǎn)為149℃)。
2.-將123.6毫升無水硝基苯置于反應(yīng)容器中，加入89.2克氯化鋁并緩慢加熱；向該熱混合物中加入41.3克亞硫酰氯，將該反應(yīng)混合物加熱至140-145℃的溫度，并緩慢加入13克N-乙酰苯胺，保持該反應(yīng)溫度兩小時(shí)。在該期結(jié)束時(shí)，將粗反應(yīng)物倒入104毫升鹽酸酸化的水中，沉淀出深色產(chǎn)物，將其用稀乙酸重結(jié)晶。重結(jié)晶和過濾之后，將該固體物質(zhì)與5N鹽酸一起回流30分鐘，之后中和反應(yīng)混合物，沉淀白色晶體(粗DDS)，將其用乙醇重結(jié)晶。
氨苯砜的合成 合成化合物的化學(xué)性質(zhì)為確定所合成的化合物的真實(shí)性，測(cè)量它們的熔點(diǎn)，結(jié)果反應(yīng)中間產(chǎn)物亞硫酰氯的熔點(diǎn)為151-153℃，DDS的熔點(diǎn)為172-175℃。
這些化合物已報(bào)道的熔點(diǎn)中間產(chǎn)物和DDS分別是149℃和175-176℃。
本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式實(shí)施例1-氨苯砜在大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞引起的急性腦中風(fēng)中的神經(jīng)保護(hù)作用的評(píng)價(jià)在大腦中動(dòng)脈閉塞產(chǎn)生的急性腦中風(fēng)模型中評(píng)價(jià)作為神經(jīng)保護(hù)劑的氨苯砜。將該藥物懸浮于適當(dāng)?shù)妮d體中。
3組動(dòng)物每組5只，在如下所述的大腦中動(dòng)脈閉塞后30分鐘，通過腹膜內(nèi)途徑注射等滲鹽水(SSI，對(duì)照組)、氨苯砜(12.5毫克/千克)和氨苯砜(9.375毫克/千克)來治療。
通過將縫合線穿過頸動(dòng)脈管腔在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生永久性選擇性腦缺血。在外科手術(shù)過程中，所有動(dòng)物都通過面罩接受1.5％氟烷(halotane)的持續(xù)麻醉。將動(dòng)物仰臥位放置，固定，頸前區(qū)備皮，以沿胸骨向胸骨舌骨肌(sternohiodeous muscle)區(qū)至其側(cè)緣的中線做切口，分辨該側(cè)胸鎖乳突肌中緣以及其深面頸淺筋膜，切除該部分以暴露頸總動(dòng)脈弓(common carotid blow)以及深層二腹肌后腹。切開頸總動(dòng)脈至舌下環(huán)(hypoglose loop)。分辨頸動(dòng)脈分支，頸外動(dòng)脈及其枕動(dòng)脈和甲狀腺動(dòng)脈分支，后兩者用8-0單絲尼龍線連接，并電凝其后的切開。將頸內(nèi)動(dòng)脈切開約5毫米的長度，同時(shí)分辨翼腭動(dòng)脈。置入微芯片或?qū)⑵溆?-0單絲尼龍線連接。一旦將通過這些動(dòng)脈流出的血流停止，將3-0單絲尼龍線通過頸外動(dòng)脈根部向頸內(nèi)動(dòng)脈引入至距分支處17毫米的長度。縫合傷口，允許動(dòng)物恢復(fù)，自由飲食水。所有病例，通過肉眼觀察及線的位置證實(shí)缺血。
大鼠中氨苯砜神經(jīng)保護(hù)作用的評(píng)價(jià)缺血操作后的96小時(shí)中，用功能量度每24小時(shí)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)學(xué)評(píng)價(jià)。所述量度根據(jù)動(dòng)物表現(xiàn)的癥狀嚴(yán)重程度建立，等級(jí)從0至50＝?jīng)]有神經(jīng)學(xué)改變；1＝難以完全伸展前肢；2＝向右轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)；3＝向右倒；4＝動(dòng)物不能自然行走并且意識(shí)水平降低；5＝死亡。
組織損傷體積的測(cè)定96小時(shí)的觀察之后，用過量的巴比妥鈉通過腹膜內(nèi)途徑處死動(dòng)物，并通過顱骨切除術(shù)取出它們的腦。一經(jīng)取出，用無水乙醇將腦固定兩周。進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)方法，10微米切片，每200微米保存一切片。后者用蘇木精-伊紅技術(shù)染色。所有切片均由一名不知道治療組的病理專家觀察，用肉眼和顯微鏡確定缺血區(qū)域。
用數(shù)字分析系統(tǒng)和照相放大器確定每張組織切片的面積。所有病例放大比為1∶10。根據(jù)該病理專家的檢查，對(duì)每張切片評(píng)估3個(gè)測(cè)量結(jié)果A)總面積，包括室面積；B)室面積；C)缺血面積。用下式確定損傷體積V=P(0.2mm)10]]>其中P指面積的總和(以平方毫米計(jì))，0.2毫米是每張切片之間的固定長度，除以10是由于為測(cè)量體積對(duì)每張切片進(jìn)行了放大。應(yīng)用該公式得到三種不同的體積總體積、室體積和缺血體積。總體積減去室體積可得腦實(shí)質(zhì)的體積。后者用作參數(shù)，利用缺血體積，得出損傷百分率。
實(shí)施例2氨苯砜在急性腦中風(fēng)患者中的神經(jīng)保護(hù)作用的評(píng)價(jià)The Emergency Services of the National Institute of Neurology andNeurosurgery“Manuel Velasco Suarez”經(jīng)準(zhǔn)許進(jìn)行了評(píng)價(jià)氨苯砜在患有血栓栓塞急性腦中風(fēng)的患者中神經(jīng)保護(hù)作用的研究。氨苯砜以單劑200毫克的混懸劑口服給藥。該混懸劑于4℃冰箱中穩(wěn)定保存可達(dá)一個(gè)月。
氨苯砜盲法給予15名患者，而另外15名患者給予抗酸混懸劑，該抗酸混懸劑作為安慰劑藥物。使用便攜式計(jì)算器產(chǎn)生的隨機(jī)編號(hào)將患者隨機(jī)地分入各治療組中。兩種藥物都在腦中風(fēng)后的最初12小時(shí)內(nèi)給予。這些步驟使得所述臨床試驗(yàn)在隨機(jī)、雙盲并有安慰劑對(duì)照的情況下進(jìn)行。
臨床征象和癥狀的評(píng)價(jià)由不知情的神經(jīng)學(xué)專家按照NIH量度進(jìn)行，該量度量化腦中風(fēng)引起的殘疾程度。所述量度在患者進(jìn)入該研究時(shí)(第0日)、腦中風(fēng)后第2、6和30日時(shí)使用。當(dāng)NIH評(píng)價(jià)值高于七時(shí)，則認(rèn)為中風(fēng)為中等嚴(yán)重或嚴(yán)重。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析在患者口服或在大鼠腹膜內(nèi)給藥的情況下，氨苯砜的使用劑量為1-12.5毫克/千克。
大鼠神經(jīng)學(xué)量度和損傷體積百分率的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過Kruskal-Wallis檢驗(yàn)及之后的Mann-Whitney的U檢驗(yàn)確定。
兩組患者的NIH量度結(jié)果用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，使用進(jìn)入日(第0日)的NIH量度以及性別、年齡、血壓和患者表現(xiàn)的其他重要臨床變量作為協(xié)變量。
取≤0.01和≤0.05的值以判斷統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的界限。
大鼠神經(jīng)學(xué)評(píng)價(jià)的結(jié)果顯示在

圖1中，其中可見引起大鼠中風(fēng)后作為時(shí)間的函數(shù)的神經(jīng)學(xué)測(cè)試評(píng)分。結(jié)果表示為4個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。D＝氨苯砜(9.375和12.5指劑量，單位為毫克/千克，ip)。*P＜0.05(Kruskal-Wallis檢驗(yàn)及之后的Mann-Whitney檢驗(yàn))。
大鼠神經(jīng)學(xué)測(cè)試的數(shù)據(jù)顯示，應(yīng)用兩種劑量的氨苯砜治療的動(dòng)物，與對(duì)照組的動(dòng)物相比，自缺血損傷恢復(fù)得更好。
損傷體積的結(jié)果呈現(xiàn)在圖2中，顯示大鼠引起中風(fēng)后96小時(shí)的缺血損傷百分率。結(jié)果表示為4個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差。D＝氨苯砜(9.375和12.5指劑量，單位為毫克/千克，ip)。*P＜0.05(Kruskal-Wallis檢驗(yàn)及之后的Mann-Whitney檢驗(yàn))。
所得結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，氨苯砜的保護(hù)在9.375毫克/千克劑量下為93％，在12.5毫克/千克劑量下為90％。
患有急性血栓栓塞性腦中風(fēng)的患者的結(jié)果如圖3所示，該圖顯示給予氨苯砜或安慰劑后作為時(shí)間(以日計(jì))函數(shù)的神經(jīng)學(xué)量度(NIH)得分。結(jié)果表示為每組15名患者的平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)差。D＝氨苯砜，*P＜0.05，**P＜0.01(用協(xié)變量進(jìn)行方差分析檢驗(yàn))。
口服200毫克氨苯砜治療患者的結(jié)果顯示出顯著的臨床改善。該改善平均為67％。
本發(fā)明的氨苯砜的神經(jīng)保護(hù)作用的評(píng)價(jià)可以總結(jié)如下與對(duì)照組相比，觀察到治療組50％的大鼠神經(jīng)學(xué)癥狀的嚴(yán)重性顯著降低。還觀察到這些相同的動(dòng)物的損傷體積降低了93％和90％。
關(guān)于在患者中的研究，臨床改善平均為67％。
這些結(jié)果表明，氨苯砜比目前市場(chǎng)上存在的用于治療急性腦中風(fēng)的藥物更有效。雖然優(yōu)選氨苯砜在急性腦中風(fēng)最初的12小時(shí)內(nèi)以1-12.5毫克/千克的劑量給藥，不過氨苯砜也可以以重復(fù)劑量給藥。
權(quán)利要求
1.氨苯砜用于制備藥物的應(yīng)用，所述藥物在治療中用作神經(jīng)保護(hù)劑，用于治療急性腦中風(fēng)，其特征在于施用0.004-0.051毫摩爾/千克劑量的氨苯砜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的氨苯砜的應(yīng)用，其在0.004-0.051毫摩爾/千克的劑量下具有67％的療效。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的氨苯砜的應(yīng)用，其以100和200毫克的劑量口服。
4.根據(jù)上述權(quán)利要求的氨苯砜的應(yīng)用，其中給藥可以在所述中風(fēng)后最初十二小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的氨苯砜的應(yīng)用，其中優(yōu)選的給藥可以是每24小時(shí)重復(fù)給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及氨苯砜作為針對(duì)患者腦中風(fēng)相關(guān)的致殘后果的首選有效治療的應(yīng)用。在大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞引起的腦中風(fēng)模型和患有由血栓栓塞引起的急性腦中風(fēng)患者中評(píng)價(jià)了作為神經(jīng)保護(hù)劑的氨苯砜。在這兩項(xiàng)研究中，氨苯砜均顯示出使作為所述中風(fēng)的后果發(fā)生的有害影響減輕70％至90％。
文檔編號(hào)A61K31/135GK1852749SQ200480026445
公開日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2004年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月22日
發(fā)明者路易斯·卡米洛·里奧斯卡斯塔涅達(dá), 瑪麗娜·阿爾塔格拉夏馬丁內(nèi)斯, 胡安·納德爾卡瓦齊, 賈伊梅·卡拉夫佐夫吉尼齊 申請(qǐng)人:大都會(huì)自治大學(xué), 墨西哥神經(jīng)學(xué)和神經(jīng)外科學(xué)院