專利名稱：作為神經(jīng)保護(hù)劑和/或神經(jīng)再生劑的非免疫抑制的親免素配體的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明通常涉及神經(jīng)保護(hù)劑和/或神經(jīng)再生劑。
親免素是在例如細(xì)菌，醇母以及不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞的免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。親免素類(lèi)包括親環(huán)素(cyclophilin)和FK506-結(jié)合蛋白(例如，F(xiàn)KBP)。環(huán)孢菌素A是與親環(huán)素相結(jié)合的大環(huán)內(nèi)酯親免素配體。已經(jīng)知道其它的大環(huán)內(nèi)酯親免素配體，例如meridamycin，F(xiàn)K 506和雷怕霉素可與FKBP相結(jié)合。
對(duì)親免素的酶活性進(jìn)行鑒別是描述親免素細(xì)胞內(nèi)功能的一種方式。例如，可以依據(jù)它們旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶(如，肽酰-脯氨酰順-反異構(gòu)酶)的活性來(lái)描述FKBP的功能。
FK506和雷怕霉素是免疫抑制的親免素配體。另一方面，meridamycin是非免疫抑制的的親免素配體。Salituro，等，TetrahedronLetters，36卷，No.7，997-1000(1995)。事實(shí)上，meridamycin是FK506和雷怕霉素二者的拮抗劑。(WO 94/18207)。
Steiner等描述(U.S.專利號(hào)6,500,843)了其它非免疫抑制的親免素，他們討論了使用對(duì)FKBP型親免素具有親和力的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性六氫哌啶羧酸衍生化合物作為與親免素蛋白有關(guān)的酶活性的抑制劑，特別是用作肽酰-脯氨酰異構(gòu)酶或旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性的抑制劑以刺激或促進(jìn)神經(jīng)元增長(zhǎng)或再生。
已經(jīng)確定Meridamycin可用作如macrophilin結(jié)合的免疫抑制劑例如FK 506或雷怕霉素，類(lèi)固醇增效劑，和/或用于由產(chǎn)生MIP(巨噬細(xì)胞感染性增效劑)或MIP類(lèi)似因子的生物體所引起的感染或感染性疾病的抗感染劑(WO 94/18207)過(guò)量時(shí)的解毒劑。此外，meridamycin可用于治療炎癥性/過(guò)度增生性皮膚病。(WO 94/18207)。
需要找到神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)劑，例如神經(jīng)保護(hù)劑和/或神經(jīng)再生劑。因此在本領(lǐng)域需要提供治療例如神經(jīng)障礙的非免疫抑制和相對(duì)低毒的化合物以及包含此類(lèi)化合物的治療藥物。
發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及親免素配體，特別是非免疫抑制的配體例如meridamycin，或其藥學(xué)上可接受的鹽在治療神經(jīng)障礙中的用途。本發(fā)明可用于制備組合物，包括藥物，其進(jìn)一步包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，賦形劑，或稀釋劑，含有meridamycin或其藥學(xué)上可接受的鹽。
一方面，本發(fā)明提供了治療神經(jīng)障礙的方法，包括給哺乳動(dòng)物施用有效量的meridamycin化合物。此類(lèi)治療方法可以進(jìn)一步包括對(duì)患有神經(jīng)障礙的哺乳動(dòng)物進(jìn)行鑒別。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括在施用meridamycin化合物前，施用后，或在施用前和施用后都對(duì)哺乳動(dòng)物的神經(jīng)變性程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
雖然不打算受限于本發(fā)明所包含的治療方法的性質(zhì)，但優(yōu)選使用meridamycin化合物治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥。影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病癥包括但不局限于，癲癇，中風(fēng)，腦缺血，腦麻痹，阿耳珀氏病，帕金森病，阿爾茨海默病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化癥，具有雷維小體的癡呆，Rhett綜合征，神經(jīng)性疼痛，脊髓創(chuàng)傷，或外傷性腦損傷。
在本發(fā)明藥物的制備中，可將meridamycin化合物或其鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，賦形劑，或稀釋劑混合。包括本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的制劑可以是任何適宜的遞迭載體，包括但不局限于固體劑型，液體劑型，氣溶膠等。
通過(guò)以下對(duì)本發(fā)明的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見(jiàn)的。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是在CH3OD中的式(I)化合物在400MHz時(shí)的質(zhì)子NMR光譜。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了meridamycin及其藥學(xué)上可接受的鹽，作為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性藥劑，即顯示出神經(jīng)保護(hù)和/或神經(jīng)再生活性的化合物的用途。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)“meridamycin”指具有式(I)母核結(jié)構(gòu)的化合物
及其藥學(xué)上可接受的鹽。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽類(lèi)”和“藥學(xué)上可接受的鹽”指由有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸獲得的鹽，例如，醋酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、肉桂酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、草酸鹽、丙酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、乙醇酸鹽、丙酮酸鹽、甲磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽、苯甲酸鹽和類(lèi)似的已知可接受的酸的鹽。
為了方便，說(shuō)明書(shū)自始自終以式(I)的化合物為參考。然而，應(yīng)該理解本文所定義的鹽，或meridamycin可以按式(I)所述來(lái)制備或使用。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“meridamycin”或“meridamycin化合物”進(jìn)一步包括具有以下物理化學(xué)特性的化合物表觀分子式C45H75O12N分子量陽(yáng)離子電霧化m/z＝844.8(M+Na)+；陰離子電霧化MSm/z＝821.1(M-H)-；高分辨率傅里葉變換MS m/z＝822.53637(M+H)+紫外吸收光譜λ最大nm(乙腈/水)＝210nm，末端吸收；旋光度[α]25D-1.4(c 1.0，MeOH)質(zhì)子磁共振光譜(400mHz CH3OD)參見(jiàn)圖1。
雖然顯示沒(méi)有考慮式(I)的立體化學(xué)，但是式(I)的化合物可以包含一個(gè)或多個(gè)手性中心。提及“式(I)的化合物”時(shí)應(yīng)理解為包括任何涉及包括其所有立體異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)式的化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，制備該化合物的方法是利用通過(guò)16S rDNA序列比較歸類(lèi)到鏈霉菌屬的放線菌菌株的分離菌(細(xì)胞)。當(dāng)在瓊脂培養(yǎng)基上例如，本文所述的ATCC瓊脂培養(yǎng)基，第172或174號(hào)(ATCCMedia Handbook，第1版，1984)培養(yǎng)時(shí)，該放線菌菌株的分離菌不會(huì)產(chǎn)生氣生菌絲體，產(chǎn)生tan菌絲體和不溶性色素的。可選擇地，其它適宜的培養(yǎng)基可商購(gòu)獲得，例如，由Sigma獲得(St.Louis，MO)。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該放線菌菌株的分離菌產(chǎn)生至少一種式I的化合物。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該放線菌菌株的分離菌產(chǎn)生兩種式I的化合物。
優(yōu)選地通過(guò)提純土壤放線菌菌株LL-C31037(NRRL 30721)或BD240的發(fā)酵液獲得式(I)的化合物。提及“式(I)的化合物”時(shí)應(yīng)讀理解為包括其所有異構(gòu)體在內(nèi)的(I)結(jié)構(gòu)的任何化合物。例如如本文所述，由菌株LL-C31037或BD 240的發(fā)酵提取物中提純得到meridamycin。
為了制備神經(jīng)保護(hù)化合物(I)，本發(fā)明不局限于特定的生物體，例如，指定的鏈霉菌屬的LL-C31037和BD 240。實(shí)際上，希望并意欲包括使用該生物體天然形成的突變株，以及通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種誘變方法，例如暴露于氮芥，X-射線輻射，紫外線輻射，N′-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍，或放線菌噬菌體由該生物體制備的誘導(dǎo)突變株。還希望并意欲包括通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的遺傳技術(shù)例如，接合，轉(zhuǎn)導(dǎo)和遺傳工程技術(shù)制備的種屬間和種屬內(nèi)的遺傳重組體。
優(yōu)選地，式(I)化合物的制備方法包括發(fā)酵的放線菌菌株LL-C31037和BD 240的培養(yǎng)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明使用了放線菌菌株LL-C31037，根據(jù)布達(dá)佩斯條約規(guī)定，于2004年3月1日將其保存于Agricultural ResearchService Culture Collection(NRRL)，North University Avenue，Peoria，Illinois 61604，所賦予的NRRL指定號(hào)為30721。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明使用了放線菌菌種BD 240，根據(jù)布達(dá)佩斯條約規(guī)定，于2005年1月19日將其保存于Agricultural Research Service Culture Collection(NRRL)，1815 North University Avenue，Peoria，Illinois 61604，所賦予的NRRL指定號(hào)為30810。進(jìn)一步地，本發(fā)明可使用本發(fā)明的新菌株及其衍生物，突變株，重組體以及改良型的分離菌，它們的特點(diǎn)在于能夠產(chǎn)生式(I)的化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，衍生物，突變株，重組體及其改良型進(jìn)一步地以以下一個(gè)或多個(gè)特性為特征不產(chǎn)生氣生菌絲體，產(chǎn)生基質(zhì)菌絲體，其為tan菌絲體并且產(chǎn)生不溶性色素。
另外的例如與放線菌菌株LL-C31037有關(guān)的公開(kāi)在共同轉(zhuǎn)讓的2004年3月2日提交的名為“大環(huán)內(nèi)酯和組合物以及制備方法”的代理人中請(qǐng)案編號(hào)為AM 101593的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/549,480中有記載。另外，與放線菌株LL-C31037以及放線菌株BD240有關(guān)的公開(kāi)在與其同時(shí)提交的具有相同名稱和代理人中請(qǐng)案編號(hào)的相應(yīng)的美國(guó)非臨時(shí)專利申請(qǐng)中有記載，將其公開(kāi)內(nèi)容引入此處作為參考。
培養(yǎng)用于制備包括化合物(I)的大環(huán)內(nèi)酯化合物的鏈霉菌屬LL-C31037和BD 240的發(fā)酵條件可以在燒瓶中進(jìn)行?？蛇x地，更高體積的生產(chǎn)可以在相似條件下在發(fā)酵罐中進(jìn)行。
用于鏈霉菌屬LL-C31037和BD 240的培養(yǎng)和大環(huán)內(nèi)酯化合物所制備的培養(yǎng)基包括可吸收的碳源例如，葡萄糖，蔗糖，甘油，糖密，半乳糖淀粉，果糖，玉米淀粉，麥芽提取物及其組合；可吸收的氮源如，例如，氯化銨，硫酸銨，硝酸銨，硝酸鈉，氨基酸，蛋白質(zhì)水解物，玉米漿，水解酪蛋白氨基酸，酵母提取物，蛋白胨，胰蛋白胨及其組合；以及無(wú)機(jī)陰離子和陽(yáng)離子如，例如，鉀，鈉，硫酸根，鈣，鎂，氯化物。微量元素如，例如，鋅，鈷，鐵，硼，鉬，和銅是以培養(yǎng)基其它成分的雜質(zhì)的形式所提供的。通過(guò)加壓使無(wú)菌空氣通過(guò)或到發(fā)酵培養(yǎng)基的表面上給培養(yǎng)箱和培養(yǎng)瓶提供通風(fēng)換氣。在培養(yǎng)箱中使用機(jī)械葉輪進(jìn)行進(jìn)一步的攪拌?？梢愿鶕?jù)需要加入消泡劑例如聚丙二醇。
如本文所述在控制條件下調(diào)節(jié)培養(yǎng)放線菌菌株的發(fā)酵條件以在培養(yǎng)基中產(chǎn)生具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)再生作用的式(I)的化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，發(fā)酵物生成培養(yǎng)基可通過(guò)將大約1％至大約2％重量百分?jǐn)?shù)的葡萄糖；大約1％至大約3％的大豆源，大約0.25％至大約1％的醇母，大約0.1％的鈣源，大約5％至大約10％，優(yōu)選地6％至8％的麥芽糊精，以及任選地0至0.5％的脯氨酸混合來(lái)制備。任選地可包括其它組分。適宜地，將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至大約6.5至7.5，優(yōu)選地大約6.8至7。典型地，在適宜的攪動(dòng)和通風(fēng)條件下將培養(yǎng)物發(fā)酵?？蛇x地，其它適宜的發(fā)酵培養(yǎng)基可由本領(lǐng)域技術(shù)人員用其它適合的碳源或其它的組分替換制備得到和/或商購(gòu)獲得。通常參見(jiàn)，例如，Sigma Aldrich(St.Louis，MO)；G.J.Tortora e tal，MicrobiologyAn Introduction MediaUpdate(Benjamin Cummings Publishing Co；Oct.1，2001)；MaintainingCultures for Biotechnology and Industry，eds.J.C.Hunter-Cevera andA.Bet(Academic Press，Jan 25，1996)。
發(fā)酵大約5至10天，和優(yōu)選大約7天后，通過(guò)離心使培養(yǎng)物細(xì)胞集結(jié)。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用適宜的溶劑例如乙酸乙酯提取該細(xì)胞。將提取物在真空下濃縮并在最小體積的適宜溶劑，例如甲醇中懸浮。將溶液裝入反相二氧化硅柱中，以20％-100％的甲醇水溶液洗脫。將60％甲醇至100％甲醇洗脫的級(jí)分在真空中濃縮。通過(guò)適宜的方法例如色譜法將包含脯氨酰meridamycin的級(jí)分分離。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將上清液與適宜的樹(shù)脂混合，靜止大約8至16小時(shí)。此后，使用適宜的溶劑，例如甲醇沖洗樹(shù)脂，收集濾液，向細(xì)胞團(tuán)塊中加入乙酸乙酯-甲醇混合物。反復(fù)振搖并離心，收集上清液，將細(xì)胞上清液和肉湯(broth)甲醇濾液合并，真空濃縮。將粗提物吸附到二氧化硅上，并且通過(guò)真空液相色譜(VLC)分離。使用適宜的溶劑，例如甲醇的二氯甲烷溶液洗脫該化合物。將提取物濃縮，吸附到二氧化硅上并裝填到快速二氧化硅柱上。使用適宜的溶劑洗脫該化合物，濃縮，通過(guò)色譜柱進(jìn)一步純化。
可以通過(guò)常規(guī)的方法，例如，對(duì)級(jí)分進(jìn)行液相色譜質(zhì)譜(LCMS)分析來(lái)證實(shí)在粗制物和半純化物中存在式I的化合物?？蓪⑦@些級(jí)分集中，通過(guò)色譜法進(jìn)一步純化，任選地進(jìn)行濃縮，例如，真空濃縮。
所得的純化化合物不合細(xì)胞和細(xì)胞材料，副產(chǎn)物，試劑，及其它雜質(zhì)，這對(duì)于根據(jù)實(shí)驗(yàn)室和/或臨床目的處理和配制該化合物是必要的。用于本發(fā)明的化合物純度優(yōu)選大于80％重量；更優(yōu)選至少90％重量；甚至更優(yōu)選大于95％重量；甚至還更優(yōu)選至少99％重量。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明所使用的化合物的組合物，而不管此類(lèi)化合物是如何制備的。
如此處所用，術(shù)語(yǔ)“有效量”和“治療有效量”指當(dāng)給患者施用時(shí)，有效的至少部分地改善患者被懷疑所患有的病癥的式(I)的化合物的量。雖然不打算受其治療應(yīng)用所限，但是使用式(I)的化合物治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥是合乎需要的。影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病癥包括但不局限于癲癇，中風(fēng)，腦缺血，腦麻痹，阿耳珀氏病，帕金森病，阿爾茨海默病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化癥，具有雷維小體的癡呆，Rhett綜合征，神經(jīng)性疼痛，脊髓創(chuàng)傷，或外傷性腦損傷。
如此處所用，術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”或“患者”指哺乳動(dòng)物，可以是人或非人動(dòng)物。
如此處所用，術(shù)語(yǔ)“施用”，“給藥”，或“給予”指直接給患者施用化合物或組合物，或給患者施用在患者體內(nèi)將形成等效數(shù)量活性化合物或物質(zhì)的化合物的前藥衍生物或類(lèi)似物。
根據(jù)本發(fā)明神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括但不局限于，與神經(jīng)變性有關(guān)的各種外周神經(jīng)病和神經(jīng)障礙包括但不局限于三叉神經(jīng)痛，舌咽神經(jīng)痛，貝耳(氏)麻痹，重癥肌無(wú)力，肌營(yíng)養(yǎng)不良，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化癥，進(jìn)行性肌萎縮，進(jìn)行性延髓遺傳性肌肉萎縮，疝氣，脊椎盤(pán)破裂或突出綜合癥，頸椎病，網(wǎng)狀組織疾病，胸廓出口破壞綜合征，例如由鉛，丙烯酰胺，γ-二酮(Glu-sniffer′s神經(jīng)病)，二硫化碳，氨苯砜，蜱引起的外周神經(jīng)病，卟啉病，格林-巴利綜合征，癡呆，阿爾茨海默病，帕金森病，和亨廷頓病。
使用meridamycin治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病是合乎需求的。影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的情況包括但不局限于，癲癇，中風(fēng)，腦缺血，腦麻痹，阿耳珀氏病，帕金森病，阿爾茨海默病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化癥，具有雷維小體的癡呆，Rhett綜合征，神經(jīng)性疼痛，脊髓創(chuàng)傷，或外傷性腦損傷。
在具體情況中表明神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性治療能夠保證中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病，多發(fā)性硬化癥，肌萎縮性側(cè)索硬化，外傷性腦損傷，脊髓損傷，癲癇，衰老，炎癥性疾病，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫疾病，呼吸性窘迫，氣腫，牛皮癬，成人呼吸窘迫綜合征，中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和中風(fēng)的治療。
本發(fā)明的化合物還可用于提高認(rèn)知力，治療或抑制老年性癡呆，具有雷維小體的癡呆，輕度認(rèn)知缺損，阿爾茨海默病，認(rèn)知衰退，神經(jīng)變性疾病，提供神經(jīng)保護(hù)作用或增強(qiáng)認(rèn)知力。
當(dāng)施用治療或抑制特定的疾病狀態(tài)或病癥時(shí)，應(yīng)讀理解有效劑量可根據(jù)所使用的特定化合物，施用方式，病癥，所治療病癥的嚴(yán)重程度以及與所治療個(gè)體相關(guān)的各種身體因素而變化?？梢砸悦吭拢恐?，或每日或其它的適宜間隔確定本發(fā)明化合物的施用有效量。例如，以一周為基準(zhǔn)，每周所遞送的腸胃外劑量為可以為大約10mg至大約1000mg，大約50mg至大約500mg，或大約100mg至大約250mg。適宜的口服劑量可大于約0.1mg/天。優(yōu)選地，以單次劑量或兩次劑量或更多分劑量的方式施用大于約10mg/天，更特別地大于大約50mg/天?？诜┝客ǔ２怀^(guò)大約1,000mg/天，更特別地不超過(guò)大約600mg/天。預(yù)期的日常劑量將隨施用途徑而變化。
此劑量可以以任何有利于將本文的活性化合物遞送至受者血液的方式施用，包括口服，通過(guò)植入，腸胃外(包括靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)和皮下注射)，直腸，鼻內(nèi)，陰道以及經(jīng)皮施用。
包含本發(fā)明活性化合物的口服制劑可包括任何常規(guī)使用的口服形式，包括片劑，膠囊，口腔形式，含片，錠劑和口服液體，混懸液或溶液。膠囊可包含活性化合物與惰性填充劑和/或稀釋劑例如藥學(xué)上可接受的淀粉(例如玉米，馬鈴薯或木薯淀粉)，糖，人工甜味劑，粉狀纖維素，例如結(jié)晶和微晶纖維素，面粉，明膠，樹(shù)膠等的混合物。有益的片劑制劑可通過(guò)常規(guī)的壓制，濕法制?；蚋煞ㄖ屏Ｒ约笆褂盟帉W(xué)上可接受的稀釋劑，粘合劑，潤(rùn)滑劑，崩解劑，表面改性劑(包括表面活性劑)，混懸劑或穩(wěn)定劑，包括但不局限于，硬脂酸鎂，硬脂酸，滑石粉，十二烷基硫酸鈉，微晶纖維素，羧甲基纖維素鈣，聚乙烯吡咯烷酮，明膠，藻酸，阿拉伯膠，黃原膠，檸檬酸鈉，復(fù)合硅酸鹽，碳酸鈣，甘氨酸，糊精，蔗糖，山梨糖醇，磷酸二鈣，硫酸鈣，乳糖，高嶺土，甘露糖醇，氯化鈉，滑石粉，干淀粉和糖粉來(lái)制備。優(yōu)選的表面改性劑包括非離子和陰離子表面改性劑。表面改性劑代表性的實(shí)例包括，但是不局限于，泊洛沙姆188，潔爾滅，硬脂酸鈣，十六十八醇，西土馬哥乳化蠟，脫水山梨醇酯，膠體二氧化硅，磷酸鹽，十二烷基硫酸鈉，硅酸鎂鋁和三乙醇胺。本文的口服制劑可使用常規(guī)的延遲或定時(shí)釋放制劑以改變活性化合物的吸收?？诜苿┻€可由在水中或果汁中的所施用的活性成分，根據(jù)需要含有適當(dāng)?shù)脑鋈軇┗蛉榛瘎?br> 在某些情況中需要將活性化合物以氣溶膠的形式直接施用于氣管。
本發(fā)明的化合物還可腸胃外或腹腔內(nèi)施用。適合地可在水中將其與表面活性劑例如羥丙纖維素混合來(lái)制備這些活性化合物的游離堿或藥理學(xué)上可接受的鹽的溶液或混懸液游。還可以在甘油，液體聚乙二醇及其在油中的混合物中來(lái)制備分散體。在正常的貯藏和使用情況下，這些制劑包含預(yù)防微生物生長(zhǎng)的防腐劑。
適于注射注射的藥用形式包括無(wú)菌水溶液或分散體以及用于無(wú)菌注射溶液或分散體臨時(shí)配制的無(wú)菌粉末。在所有情況下，該形式必須是無(wú)菌的，并且其流動(dòng)性必須達(dá)到易于注射程度。其在制備和貯藏條件下必須是穩(wěn)定的并且必須防止微生物例如細(xì)菌和真菌的污染作用。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包含例如，水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇和液體聚乙二醇)，及其適宜的混合物和植物油。
對(duì)于本發(fā)明的公開(kāi)而言，經(jīng)皮施用應(yīng)該理解為包括所有通過(guò)身體表面和身體通道包括上皮細(xì)胞和粘膜組織的內(nèi)層的施用。這種施用可以以以洗液，乳膏，泡沫，貼劑，混懸液，溶液和栓劑(直腸和陰道)的形式使用本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽來(lái)實(shí)現(xiàn)。
經(jīng)皮施用可通過(guò)使用包含活性化合物和對(duì)于活性化合物為惰性的，對(duì)皮膚無(wú)毒的，并且允許通過(guò)皮膚遞送活性化合物全身吸收進(jìn)入血液的載體的經(jīng)皮貼劑來(lái)完成。載體可選擇任何形式例如乳膏和軟膏，糊劑，凝膠，和閉合的裝置。乳膏和軟膏可以是粘性液體或水包油或油包水型半固體乳劑。由分散于包含活性成分的石油或親水性石油中的可吸收粉末組成的糊劑也是適合的?？墒褂枚喾N閉合的裝置將活性成分釋放入血液中例如覆蓋有包含活性成分與載體或無(wú)載體的儲(chǔ)庫(kù)的半滲透膜，或包含活性成分的基質(zhì)。其它閉合的裝置在文獻(xiàn)中是已知的。
栓劑制劑可由常規(guī)的材料制備，包括可可脂，可加入或不加入蠟以改變栓劑的熔點(diǎn)，和甘油。還可使用水溶性的栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇。
本發(fā)明進(jìn)一步提供包含用于遞送的配制化合物的產(chǎn)品，包括包裝。另一方面，本發(fā)明提供了用于遞送本發(fā)明化合物的試劑盒，包括例如注射針，注射器及其它包裝。任選的，這種試劑盒可包括藥物，稀釋劑，和或用于混合本發(fā)明固體形式化合物的載體的施用說(shuō)明書(shū)。
本發(fā)明化合物制備中使用的試劑可商購(gòu)獲得或通過(guò)文獻(xiàn)中描述的常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
在以下實(shí)施例中描述了本發(fā)明代表性的實(shí)施例的制備。
實(shí)施例1-放線菌菌株LL-C31037的發(fā)酵條件在控制條件下調(diào)節(jié)培養(yǎng)指定的放線菌菌株LL-C31037的發(fā)酵條件在培養(yǎng)基中產(chǎn)生具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)再生作用的式(I)的化合物。
放線菌菌株在Wyeth Research，Pearl River，New York 10965的菌種保藏中心以菌種LL-C31037保存。該微生物活的菌種已根據(jù)布達(dá)佩斯條約，保存于Patent Culture Collection，Northern Regional ResearchLaboratory(NRRL)，U.S.Department of Agriculture，Peoria，IL61604，并將其加入永久保藏。賦予菌種LL-C31037的NRRL登記號(hào)為30721，于2004年3月1日保存。
放線菌菌株LL-C31037在瓊脂平板，ATCC瓊脂培養(yǎng)基172號(hào)進(jìn)行培養(yǎng)不會(huì)產(chǎn)生氣生菌絲體，基質(zhì)菌絲體為tan菌絲體，并且產(chǎn)生不溶性的色素。在將擴(kuò)增的基因分離和直接測(cè)序后確定16SrDNA序列屬于菌株LL-C31037。將核苷酸序列與以前所研究的鏈霉菌的序列進(jìn)行排列，通過(guò)使用兩種鄰接樹(shù)算法產(chǎn)生系統(tǒng)樹(shù)。16SrDNA序列證明該菌株的分類(lèi)為鏈霉菌屬。
培養(yǎng)鏈霉菌屬LL-C31037制備化合物(I)的條件是在燒瓶中進(jìn)行?？蛇x地，更高體積的生產(chǎn)可以在相似條件下在發(fā)酵罐中進(jìn)行。
A.燒瓶發(fā)酵通過(guò)混合制備以下配方的菌種培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，1％；可溶性淀粉，2％；酵母提取物，0.5％；N-Z胺A型(Sheffield)，0.5％；碳酸鈣，0.1％；pH7.0。
在25×150mm玻璃管中給10ml菌種培養(yǎng)基接種在ATCC瓊脂培養(yǎng)基#172上培養(yǎng)的兩菌環(huán)量的LL-C31037細(xì)胞群。在培養(yǎng)72小時(shí)后，由瓊脂培養(yǎng)基獲得足夠的接種體用于提供污濁的菌種。使用具有2-英寸軌道的gyro-rotary振蕩器以200rpm將原代菌種的試管在28℃培養(yǎng)72小時(shí)。然后給含有30ml菌種培養(yǎng)基的250ml Erlenmeyer燒瓶接種原代菌種(7ml)。使用gyro-rotary振蕩器(2-英寸軌道)以200rpm將傳代菌種燒瓶在28℃培養(yǎng)24小時(shí)。
通過(guò)混合制備以下配方的發(fā)酵物生成培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，1％；maitrin M180，6％；大豆粉，1％；酵母提取物，0.6％；Gamaco(CaCO3)，0.1％；pH 7.0。
將傳代菌種培養(yǎng)物1ml接種到在250ml Erlenmeyer燒瓶中的50ml發(fā)酵物生成培養(yǎng)基。使用gyro-rotary振蕩器(2-英寸軌道)以200rpm將這些制備燒瓶在26℃培養(yǎng)7天。
B.發(fā)酵罐發(fā)酵通過(guò)混合制備以下配方的菌種培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，2％；可溶性淀粉，2％；酵母提取物(Difco)，0.3％；小麥水解產(chǎn)物WGE80M(DMV International)，0.5％；大豆水解產(chǎn)物SE50MAF(DMV International)，1.5％；pH 6.8至7.0。
將冷凍的菌種培養(yǎng)物1ml接種到4升Erlenmeyer燒瓶?jī)?nèi)的1升菌種培養(yǎng)基中。使用gyro-rotary振蕩器(2-英寸軌道)以250rpm將菌種燒瓶在30℃培養(yǎng)72小時(shí)。
通過(guò)混合制備以下配方的發(fā)酵物生成培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，2％；maltrin M500，8％；nutrisoy(GPC)，1％；酵母提取物(Difco)，0.6％；Gamaco(CaCO3)，0.1％；Macol P2000，0.2％；pH 6.8至7.0。
將1升菌種培養(yǎng)物接種到在70升發(fā)酵罐中的60升發(fā)酵物生成培養(yǎng)基中。將發(fā)酵物在26℃以350-550rpm攪拌培養(yǎng)5天，以0.5-0.75volvol-1min-1(VVM)進(jìn)行換氣。
實(shí)施例2-放線菌菌株BD 240的發(fā)酵條件在控制條件下調(diào)節(jié)培養(yǎng)指定的放線菌菌株BD240的發(fā)酵條件在培養(yǎng)基中產(chǎn)生具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)再生作用的式(I)的化合物。
放線菌菌株在Wyeth Research，Pearl River，New York 10965的菌種保藏中心以培養(yǎng)菌BD240保存。該微生物活的菌種已根據(jù)布達(dá)佩斯條約，保存于Patent Culture Collection，Northern Regional ResearchLaboratory(NRRL)，U.S.Department of Agriculture，Peoria，IL61604，并將其加入永久保藏。賦予培養(yǎng)菌BD240的NRRL登記號(hào)為30721，于2005年1月19日保存。
放線菌菌株BD240在瓊脂平板，ATCC瓊脂培養(yǎng)基174號(hào)進(jìn)行培養(yǎng)不會(huì)產(chǎn)生氣生菌絲體，基質(zhì)菌絲體為tan菌絲體，并且產(chǎn)生不溶性的色素。在將擴(kuò)增的基因分離和直接測(cè)序后確定16SrDNA序列屬于菌株BD240。將核苷酸序列與以前所研究的鏈霉菌的序列進(jìn)行排列，通過(guò)使用兩種鄰接樹(shù)算法產(chǎn)生系統(tǒng)樹(shù)。16SrDNA序列證明該菌株的分類(lèi)為鏈霉菌屬。
培養(yǎng)鏈霉菌屬BD240制備化合物(I)的條件是在燒瓶中進(jìn)行。可選地，更高體積的制備可以在相似條件下在發(fā)酵罐中進(jìn)行。
A.燒瓶發(fā)酵通過(guò)混合制備以下配方的菌種培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，1％；可溶性淀粉，2％；酵母提取物(Difco)，0.3％；小麥水解產(chǎn)物WGE80M(DMV International)，0.5％；大豆水解產(chǎn)物SE50MAF(DMV International)，1.5％；pH 6.8至7.0。
將冷凍的菌種培養(yǎng)物BD240 0.2ml接種于25×150mm玻璃管中的10ml菌種培養(yǎng)基。使用具有2-英寸軌道的gyro-rotary振蕩器以200rpm將菌種試管在30℃培養(yǎng)48小時(shí)。
通過(guò)混合制備以下配方的發(fā)酵物生成培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，1％；maitrin M180，6％；大豆粉，1％；酵母提取物，0.6％；Gamaco(CaCO3)，0.1％；L-脯氨酸，0.4％；3-(N-嗎啉代)丙磺酸，20.9g/L；pH 7.0。
將菌種培養(yǎng)物(0.5mL)接種到在250ml Erlenmeyer燒瓶中的50ml發(fā)酵物生成培養(yǎng)基。使用gyro-rotary振蕩器(2-英寸軌道)以250rpm將這些制備燒瓶在26℃培養(yǎng)5天。
B.發(fā)酵罐發(fā)酵通過(guò)混合制備以下配方的菌種培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，1％；可溶性淀粉，2％；酵母提取物(Difco)，0.3％；小麥水解產(chǎn)物(WGE80M，DMV International)，0.5％；大豆水解產(chǎn)物SE50MAF(DMV International)，1.5％；pH 6.8至7.0。
將冷凍的菌種培養(yǎng)物(0.5ml)接種到在2升Erlenmeyer燒瓶中的250ml菌種培養(yǎng)基上。使用gyro-rotary振蕩器(2-英寸軌道)以200rpm將菌種試管在30℃培養(yǎng)48小時(shí)。
通過(guò)混合制備以下配方的發(fā)酵物生成培養(yǎng)基葡萄糖(高壓滅菌后加入)，1％；maltrin M180，6％；大豆粉，1％；酵母提取物(Difco)，0.6％；Gamaco(CaCO3)，0.1％；L-脯氨酸，0.4％；Macol P2000，0.1％；pH 6.8至7.0。
將250mL菌種培養(yǎng)物接種至在10升發(fā)酵罐內(nèi)8升發(fā)酵物生成培養(yǎng)基中。將發(fā)酵物在26℃以480-650rpm攪拌培養(yǎng)7天，以1.0volvol-1min-1(VVM)進(jìn)行換氣。
實(shí)施例3-從BD 240中提純化合物(I)通過(guò)離心使1OL的BD 240培養(yǎng)菌的細(xì)胞集結(jié)。將5％的Diaion-HP20樹(shù)脂水溶液加至上清液，將其在室溫下攪拌過(guò)夜。使用甲醇洗滌HP20樹(shù)脂并收集濾液。向細(xì)胞團(tuán)塊中加入80∶20的乙酸乙酯甲醇溶液。重復(fù)振搖，離心，收集上清液。將細(xì)胞上清液和broth甲醇濾液合并，真空下濃縮。
將粗提物吸附至二氧化硅上(32-63μ，60A)，并通過(guò)VLC分離。使用5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫該化合物。將該物質(zhì)在真空中濃縮，吸附至二氧化硅(32-63μ，60A)上，并裝填至快速二氧化硅柱中(60mm×250mn)。使用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫化合物。將該物質(zhì)真空濃縮，裝填到Sephadex LH-20柱上(60×400mm，甲醇)。起初使用300ml的甲醇洗滌該柱，收集30ml級(jí)分，通過(guò)LCMS進(jìn)行測(cè)試。收集包含令人感興趣的化合物的早期級(jí)分并濃縮。將半純化物通過(guò)制備HPLC(YMC ODS-A 50×250mm 10μL柱，A水B甲醇，梯度洗脫在200分鐘內(nèi)55％B至70％B，30ml/min)進(jìn)行色譜分離。通過(guò)對(duì)級(jí)分的LCMS分析鑒別出化合物I。收集這些令人感興趣的級(jí)分，于真空濃縮至得到純化的化合物I(tR＝150min，220mg)。
使用類(lèi)似的方法可從放線菌菌株LL-C31037中提純化合物I。
實(shí)施例4-化合物(I)在神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)物中的神經(jīng)保護(hù)特性如先前Ponget等，J Neurochem.69986-994(1997)所述制備中腦的多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)物。收集胚胎期第15天的大鼠胎兒，在冰凍的磷酸鹽-緩沖鹽水(PBS)中解剖。解剖出包含中腦多巴胺能區(qū)域的組織腹側(cè)碎片。收集解剖的組織碎片，轉(zhuǎn)移至含有20IU/ml木瓜胃蛋白酶的在Earle′s平衡鹽溶液中中的酶解培養(yǎng)基中(WorthingtonBiochemical，F(xiàn)reehold，NJ，U.S.A.)在37℃培育60分鐘。在酶解后，將木瓜蛋白酶溶液吸出，并在包含2,000IU/ml DNase和10mg/ml卵類(lèi)粘蛋白酶抑制劑的完整的培養(yǎng)基[相等體積的最少量的必須培養(yǎng)基(MEM)與補(bǔ)充有0.1mg/ml去鐵鐵傳遞蛋白和2.5μg/ml胰島素的F-12營(yíng)養(yǎng)混合物(Gibco BRL)]用尖端拋光的玻璃Pasteur吸管將該組織機(jī)械粉碎。
高-親和力多巴胺攝取試驗(yàn)對(duì)于多巴胺攝取試驗(yàn)，將在完整培養(yǎng)基中的單細(xì)胞混懸液接種于涂覆有聚-L-鳥(niǎo)氨酸和層粘連蛋白的24-孔平板上。在試驗(yàn)前培養(yǎng)七天。使用不同濃度的式(I)的化合物(用PBS洗滌并使用培養(yǎng)基將濃度稀釋1nM至1000nM)預(yù)處理培養(yǎng)物24小時(shí)，然后與10μM的神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯吡啶(MPP+)接觸1小時(shí)以評(píng)價(jià)在細(xì)胞培養(yǎng)物中式(I)的化合物的神經(jīng)保護(hù)效果。在培育1個(gè)小時(shí)之后，更換培養(yǎng)基三次，加入新的化合物維持另外48小時(shí)。
更特別地，在中腦的多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)物繼接觸MPP+后培育48個(gè)小時(shí)后，使用由Prochiantz等，Nature 293570-572(1981)所述的改良方法進(jìn)行高親和力的3H-多巴胺攝取。使用包含5.6mM葡萄糖和1mM抗壞血酸的預(yù)熱的磷酸鹽-緩沖鹽水(PBS)洗滌培養(yǎng)物。然后將培養(yǎng)物與50nM的3H-多巴胺在37℃培育15分鐘(31Ci/mmol，Du Pont-NEN，Wilmington，DE，U.S.A.)。使用緩沖液洗滌培養(yǎng)物兩次，用0.5N NaOH溶解。將溶解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至含有Ultima Gold閃爍雞尾酒的閃爍管中，使用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定其放射性。可選地，可使用緩沖液將培養(yǎng)物的溶解產(chǎn)物洗滌兩次，與Optiphase Supermix閃爍雞尾酒(Wallac scintillation Products，Gaithersburg，MD，USA)在室溫下培育2小時(shí)，使用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)量其放射性。
表1MPP+誘導(dǎo)毒性后在培養(yǎng)的多巴胺神經(jīng)元中3H-多巴胺攝取(未處理的對(duì)照的％)處理3H-多巴胺攝取(未處理的對(duì)照組的％)未處理的對(duì)照組 100％10uM MPP+40％1nM meridamycin 47％10nM meridamycin51％100nM meridamycin 51％1000Nm meridamycin 64％測(cè)量在3H-多巴胺攝取細(xì)胞試驗(yàn)中MPP+誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性。在MPP存在的情況下通過(guò)向培養(yǎng)物中加入化合物(1nM至1000nM)來(lái)測(cè)定在細(xì)胞培養(yǎng)物中的神經(jīng)保護(hù)作用。如表1所示，該化合物具有對(duì)抗在培養(yǎng)的多巴胺能神經(jīng)元中MPP+誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性的神經(jīng)保護(hù)作用，相對(duì)于最大保護(hù)作用(84％攝取)EC50為555nM，由10ng/mL GDNF提供。
實(shí)施例5-化合物(I)在神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)物中的神經(jīng)再生特性如先前所述制備解離的皮層神經(jīng)元培養(yǎng)物[Pong等.，ExpNeuroi.2001 Sep；171(1)84-97(2001)]。簡(jiǎn)言之，收集胚胎期第15天的大鼠胎兒，在冰凍的PBS中解剖。收集解剖的皮質(zhì)，轉(zhuǎn)移至含有木瓜胃蛋白酶的酶解培養(yǎng)基中。30分鐘后，用尖端拋光的玻璃Pasteur吸管將該組織機(jī)械粉碎。將在完整培養(yǎng)基中的單細(xì)胞混懸液接種于涂覆有聚-L-鳥(niǎo)氨酸和層粘連蛋白的96-孔平板上。24小時(shí)后，使用不同濃度的式(I)的化合物處理培養(yǎng)物72小時(shí)，然后將培養(yǎng)物固定，使用神經(jīng)微絲原代抗體和過(guò)氧化物酶標(biāo)記的傳代抗體進(jìn)行染色。加入過(guò)氧化物酶底物(K-Blue Max)，在比色板讀數(shù)器上測(cè)量色度。
如先前所述制備解離的皮層神經(jīng)元培養(yǎng)物(Pong等.，2001)。簡(jiǎn)言之，收集胚胎期第15天的大鼠胎兒，在冰凍的PBS中解剖。收集解剖的皮質(zhì)，轉(zhuǎn)移至含有木瓜胃蛋白酶的酶解培養(yǎng)基中。30分鐘后，用尖端拋光的玻璃Pasteur吸管將該組織機(jī)械粉碎。將在完整培養(yǎng)基中的單細(xì)胞混懸液接種于涂覆有聚-L-鳥(niǎo)氨酸和層粘連蛋白的96-孔平板上。24小時(shí)后，使用不同濃度的式(I)的化合物處理培養(yǎng)物72小時(shí)，然后將培養(yǎng)物固定，使用神經(jīng)微絲原代抗體和過(guò)氧化物酶標(biāo)記的傳代抗體進(jìn)行染色。加入過(guò)氧化物酶底物(K-Blue Max)，在比色板讀數(shù)器上測(cè)量色度變化。
表2在培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元中的神經(jīng)微絲的含量(超過(guò)未處理的對(duì)照的增加倍數(shù))處理 神經(jīng)微絲含量(超過(guò)未處理的對(duì)照的增加倍數(shù))未處理的對(duì)照 1.010nM meridamycin 1.71100nM meridamycin 2.241μM meridamyein 2.3210μM meridamycin 2.56
如表2所示，向神經(jīng)元細(xì)胞中加入化合物以增強(qiáng)了在培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元中神經(jīng)元的存活率，EC50為12nM。
實(shí)施例6-化合物(I)在培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元中的神經(jīng)再生特性如先前所述制備解離的皮層神經(jīng)元培養(yǎng)物(Pong等.，2001)。簡(jiǎn)言之，收集胚胎期第15天的大鼠胎兒，在冰凍的PBS中解剖。收集解剖的皮質(zhì)，轉(zhuǎn)移至含有木瓜胃蛋白酶的酶解培養(yǎng)基中。30分鐘后，用尖端拋光的玻璃Pasteur吸管將該組織機(jī)械粉碎。將在完整培養(yǎng)基中的單細(xì)胞混懸液接種于涂覆有聚-L-鳥(niǎo)氨酸和層粘連蛋白的96-孔平板上。24小時(shí)后，使用不同濃度的式(I)的化合物處理培養(yǎng)物72小時(shí)，然后將培養(yǎng)物固定，使用抗微管蛋白原代抗體和熒光標(biāo)記的傳代抗體進(jìn)行染色。通過(guò)使用Enhanced Neurite Outgrowth(ENO)算法和Cellomics ArrayScan測(cè)定軸突生長(zhǎng)，并表示為每個(gè)細(xì)胞的軸突總長(zhǎng)度。
表3培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元中的軸突總長(zhǎng)度(對(duì)照組的％)處理 軸突總長(zhǎng)度(對(duì)照組的％)10nM化合物 19％100nM化合物40％1μM化合物 113％10μM化合物152％實(shí)施例7-化合物(I)在培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)中的神經(jīng)再生特性如先前所述制備解離的背根神經(jīng)節(jié)培養(yǎng)物[A.Wood等人，“Stimulation of neurite outgrowth by immunophilin ligandsquantitative analysis by Cellomics Array scan”Societyfor Neuroscience(2004)，abstract 104.3]。簡(jiǎn)言之，，對(duì)產(chǎn)后3-5天的幼鼠施無(wú)痛致死術(shù)。除去脊柱，將單個(gè)背根神經(jīng)節(jié)切下。收集切碎的DRG，轉(zhuǎn)移至含有木瓜胃蛋白酶的酶解培養(yǎng)基中。60分鐘后，用尖端拋光的玻璃Pasteur吸管將該組織機(jī)械粉碎。將在完整培養(yǎng)基中的單細(xì)胞混懸液接種于涂覆有聚-L-鳥(niǎo)氨酸和層粘連蛋白的96-孔平板上。24小時(shí)后，使用不同濃度的式(I)的化合物處理培養(yǎng)物72小時(shí)，然后將培養(yǎng)物固定，使用抗微管蛋白原代抗體和熒光標(biāo)記的傳代抗體進(jìn)行染色。通過(guò)使用Enhanced Neurite Outgrowth(ENO)算法和Cellomics ArrayScan測(cè)定軸突生長(zhǎng)，并表示為每個(gè)細(xì)胞的軸突總長(zhǎng)度。
表4在培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)中的軸突總長(zhǎng)度(對(duì)照組的％)處理 軸突總長(zhǎng)度(對(duì)照組的％)10nM化合物 4％100nM化合物 9％1μM化合物 14％10μM化合物 24％當(dāng)本文使用物理特性例如分子量，或化學(xué)特性例如化學(xué)式的范圍時(shí)，意欲包括其中范圍和具體實(shí)施方案的所有組合和亞組合。在本說(shuō)明書(shū)中所引用的所有出版物以及保藏引入本文作為參考。雖然本發(fā)明已經(jīng)對(duì)特定的實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但是應(yīng)該意識(shí)到所做的修改沒(méi)有背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。附加的權(quán)利要求書(shū)的范圍意欲包括此類(lèi)修改。
權(quán)利要求
1.治療神經(jīng)障礙的方法，包括給哺乳動(dòng)物施用有效量的meridamycin或其鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中meridamycin具有式(I)的結(jié)構(gòu)
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中meridamycin具有一個(gè)或多個(gè)以下特性表觀分子式C45H75O12N分子量陽(yáng)離子電霧化m/z＝844.8(M+Na)+；陰離子電霧化MS m/z＝821.1(M-H)-；高分辨率傅里葉變換MS m/z＝822.53637(M+H)+紫外吸收光譜λ最大nm(乙腈/水)＝210nm，末端吸收；旋光度[α]25D-1.4(c 1.0，MeOH)；和圖1所示的質(zhì)子磁共振光譜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括對(duì)患有神經(jīng)障礙的哺乳動(dòng)物進(jìn)行鑒別。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括對(duì)哺乳動(dòng)物的神經(jīng)變性程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中在施用所述化合物以前進(jìn)行評(píng)價(jià)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中在施用所述化合物以后進(jìn)行評(píng)價(jià)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的方法，其中神經(jīng)障礙是癲癇、中風(fēng)、腦缺血、腦麻痹、阿耳珀氏病、帕金森病、阿爾茨海默病、亨延頓病、肌萎縮性側(cè)索硬化、多發(fā)性硬化癥、具有雷維小體的癡呆、Rhett綜合征、神經(jīng)性疼痛、脊髓創(chuàng)傷或外傷性腦損傷。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的方法，其中神經(jīng)障礙是老年性癡呆、具有雷維小體的癡呆、輕度認(rèn)知缺損、阿爾茨海默病或認(rèn)知衰退。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的方法，其中將該化合物與一種或多種藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑混合。
11.meridamycin或其鹽在制備用于治療神經(jīng)障礙的藥物中的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中meridamycin具有式(I)的結(jié)構(gòu)
13.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中meridamycin具有一個(gè)或多個(gè)以下特性表觀分子式C45H75O12N分子量陽(yáng)離子電霧化m/z＝844.8(M+Na)+；陰離子電霧化MS m/z＝821.1(M-H)-；高分辨率傅里葉變換MS m/z＝822.53637(M+H)+紫外吸收光譜λ最大nm(乙腈/水)＝210nm，末端吸收旋光度[α]25D-1.4(c 1.0，MeOH)；和圖1所示的質(zhì)子磁共振光譜。
14.根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)的用途，其中神經(jīng)障礙是癲癇、中風(fēng)、腦缺血、腦麻痹、阿耳珀氏病、帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓病、多發(fā)性硬化癥、肌萎縮性側(cè)索硬化、具有雷維小體的癡呆、Rhett綜合征、神經(jīng)性疼痛、脊髓創(chuàng)傷或外傷性腦損傷。
15.根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)的用途，其中神經(jīng)障礙是老年性癡呆、具有雷維小體的癡呆、輕度認(rèn)知缺損、阿爾茨海默病或認(rèn)知衰退。
全文摘要
本發(fā)明部分地涉及非免疫抑制親免素配體，例如meridamycin在治療神經(jīng)障礙中的用途。
文檔編號(hào)A61P25/28GK1929837SQ200580007034
公開(kāi)日2007年3月14日 申請(qǐng)日期2005年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月2日
發(fā)明者E·I·格拉齊阿尼, K·龐 申請(qǐng)人:惠氏公司