專利名稱：：2-烴基取代4,6-二氨基-1,3,5-三嗪類衍生物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬化合物的醫(yī)藥用途，主要涉及三嗪類衍生物對(duì)多種腫瘤癌細(xì)胞株的抑制增殖作用，及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。技術(shù)背景隨著環(huán)境污染等多種因素的影響，腫瘤的發(fā)病率持續(xù)上升,患者死亡率日益增加。因此，各國政府、研究機(jī)構(gòu)及制藥公司長期以來一直對(duì)腫瘤研究和抗腫瘤藥物予以高度重視。目前，治療腫瘤的方法是以化學(xué)治療為主，但眾多的抗腫瘤藥物存在選擇性差、效率低、免疫抑制、耐藥性等缺點(diǎn)，治療效果不甚理想。因此，新型的具有抗腫瘤潛力的化合物已成為藥物化學(xué)研發(fā)的熱點(diǎn)與重點(diǎn)。三嗪類衍生物因具有廣范圍的生物活性如抗菌活性、抗錐蟲活性、整聯(lián)蛋白極遲抗原-4(VLA-4)拮抗性、山梨糖醇脫氫酶的抑制作用、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒活性、雌激素受體調(diào)節(jié)作用、細(xì)胞毒活性和血管新生抑制活性等而備受關(guān)注，特別是抗癌活性引起學(xué)者們廣泛研究。六甲基三聚氰胺是一種有效的抗乳腺癌、肺癌和卵巢癌藥物，但其嚴(yán)重的副作用如惡心、嘔吐、腹部絞痛和厭食癥等限制了在臨床上的應(yīng)用[CancerTreat.Rev.,1986，13，197-217]。在日本用于抗胃潰瘍的藥物伊索拉定[2,4-二氨基-6-(2，5-二氯苯基)-l，3，5-三嗪]因具有血管新生抑制作用，所以在表皮瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤的異種嫁接小鼠模型中都呈現(xiàn)較強(qiáng)的抗腫瘤活性，且可抑制乳腺癌再生長和肺轉(zhuǎn)移瘤[BreastCancerRes.Treat.2004,83,195-199]。近年來學(xué)者們對(duì)三嗪骨架的衍生物用于抗腫瘤活性的評(píng)價(jià)展開了更多的研究。發(fā)現(xiàn)化合物2-環(huán)己基氨基-4-(4-甲氧芐基氨基)-6-(3,4-二甲氧芐基氨基)-l，3,5-三嗪可作為一種微管解聚的化學(xué)實(shí)體，對(duì)U937細(xì)胞具有強(qiáng)效的生長抑制作用(GIso-lnM)[J.Am.Chem.Soc.，2002,124,11608];化合物2-苯基氨基-4-(4-甲氧苯基氨基)-6-嗎啉基-l,3,5-三嗪對(duì)結(jié)腸直腸癌(CRC)細(xì)胞株HCT-116具有顯著的抑制活性(IC5()=0.76pM)，體內(nèi)抗腫瘤及代謝動(dòng)力學(xué)研究表明該化合物極有希望成為進(jìn)一步開發(fā)抗腫瘤藥物新的化學(xué)實(shí)體[Bioorg.Med.Chem.,2007,15,1815-1827]?；衔?-(苯并噻唑-6-氨基)-6-(芐基異丙基氨基)-l,3,5-三嗪-2-醇是一類新的血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGF-R2)酪氨酸激酶的強(qiáng)效抑制劑，在體外酶抑制濃度達(dá)到納摩爾級(jí)(IC5。=18nM)[J.Med.Chem.，2005,48,1717-1720]。化合物4-(3-氯苯基氨基)-2-[4-(2-羥丙氨基吡啶基)]-l,3，5-三嗪是一類新的廣譜周期依賴性蛋白激酶(CDK)的強(qiáng)效抑制劑，對(duì)CDK1、CDK2和CDK5的抑制作用較強(qiáng)(1(:5()分別為21、7和3nM)，對(duì)CDK4、CDK6和CDK7的半數(shù)抑制濃度也都小于lnM。體外實(shí)驗(yàn)表明，該化合物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株包括HeLa、HCT-116、U937和A375都表現(xiàn)出強(qiáng)效的抑制增殖活性[J.Med.Chem.，2005,48,4535-4546]。因此，三嗪骨架類的衍生物在抗腫瘤活性中具有可觀的應(yīng)用前景，并有望篩選出新的抗腫瘤藥物化學(xué)實(shí)體。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供三嗪類化合物2-烴基取代4,6-二氨基-1，3,5-三嗪類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。2-烴基取代4,6-二氨基-l,3,5-三嗪類衍生物具有以下結(jié)構(gòu)通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中R為C廣do的鏈烷基、C3-C7的環(huán)垸基、C2-do不飽和烴基、Crd。芳香基或雜芳香基。R2為氫、C廣d。的鏈垸基、CrC7的環(huán)烷基、C2-C1Q不飽和烴基、C5-C10芳香基或雜芳香基。R3為氫、CrC1()的鏈垸基、C3-C7的環(huán)垸基、C2-C1()不飽和烴基、C5-C10芳香基或雜芳香基。R4為氫、crc1()的鏈烷基、c3-c7的環(huán)烷基、c2-c1()不飽和烴基、c5-c10芳香基或雜芳香基。經(jīng)研究證實(shí)2-烴基取代4,6-二氨基-1，3,5-三嗪類衍生物對(duì)多種癌細(xì)胞株具有抑制增殖作用，特別對(duì)人肺癌A549細(xì)胞、人白血病K562細(xì)胞、人前列腺癌PC-3細(xì)胞、人卵巢癌HO8910細(xì)胞和人乳腺癌MCF-7細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用顯著，抗瘤譜較廣。具體實(shí)施方式本發(fā)明結(jié)合實(shí)施例做進(jìn)一步的說明。實(shí)施例2-烴基取代4，6-二氨基-1,3，5-三嗪類衍生物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用(1)實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞株人肺癌A549細(xì)胞、人白血病K562細(xì)胞、人前列腺癌PC-3細(xì)胞、、人卵巢癌HO8910細(xì)胞和人乳腺癌MCF-7細(xì)胞。培養(yǎng)基RPMI1640培養(yǎng)基，含10%小牛血清。藥物及配制藥物為上述所合成的2-烴基取代4,6-二氨基-1，3,5-三嗪類衍生物溶于二甲基亞砜(DMSO)?；衔锝Y(jié)構(gòu)見表l。陽性對(duì)照藥物為阿霉素。(2)實(shí)驗(yàn)方法將上述處于對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，以5x103/孔的密度接種于96孔板中，每孔加細(xì)胞懸液200^1，在培養(yǎng)24h后，分別加入5種濃度的2-烴基取代4，6-二氨基-l，3，5-三嗪類衍生物(0.01、0.1、1、10、100pmol/L共5個(gè)濃度梯度)，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，阿霉素作陽性對(duì)照。細(xì)胞在37'C，5Q/。C02培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)后，加入濃度為5mg/ml的MTT溶液20nl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。吸去上清液，加入150plDMSO，輕微振蕩板使甲瓚完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀于570nm處測定每孔吸光度(OD值)，取3復(fù)孔OD值求平均值，計(jì)算細(xì)胞抑制率抑制率(IR°/。)=(1-TOD/COD)xl00%TOD:給藥組OD均值COD:溶劑對(duì)照組OD均值重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理IC5o采用藥物抑制濃度計(jì)算軟件(LOGIT法，1.0.0版本。)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以"5表示。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果2-烴基取代4，6-二氨基-1，3,5-三嗪類衍生物作用72小時(shí)后，分別測定IC50值。結(jié)果表明，多數(shù)化合物對(duì)5種腫瘤細(xì)胞均有不同程度的體外抑制作用，其中ICso值小于10拜ol/L有化合物I、IV、XII、XIII、XIV、XVIII、XXI對(duì)人白血病K562細(xì)胞；化合物XV對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞；化合物I、VII對(duì)人卵巢癌HO8910細(xì)胞。它們對(duì)癌細(xì)胞的體外抑制作用結(jié)果見表2。綜合測試此類化合物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用，化合物I、IV、XIII和XVIII對(duì)4種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用較顯著，抗瘤譜較廣。表1.2-烴基取代4，6-二氨基-1，3，5-三嗪類單個(gè)化合物結(jié)構(gòu)與編號(hào)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2.2-烴基取代4,6-二氨基-1，3，5-三嗪類衍生物作用72小時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>XVI>50>50>50>50>50XVII>5017.13±5.08>50>50>50XVIII21.77±13.002.06±2.71>5014.80±2.7623.50±0.93XIX>50〉50>50>50>50XX>5040.49±8.32>50>50>50XXI17.08±3.946.77±6.04>50>50>50權(quán)利要求1.2-烴基取代4，6-二氨基-1，3，5-三嗪類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述衍生物具有以下結(jié)構(gòu)通式其中R2、R3和R4相同或不同，R1為C1-C10的鏈烷基、C3-C7的環(huán)烷基、C2-C10不飽和烴基、C5-C10芳香基或雜芳香基。R2為氫、C1-C10的鏈烷基、C3-C7的環(huán)烷基、C2-C10不飽和烴基、C5-C10芳香基或雜芳香基。R3為氫、C1-C10的鏈烷基、C3-C7的環(huán)烷基、C2-C10不飽和烴基、C5-C10芳香基或雜芳香基。R4為氫、C1-C10的鏈烷基、C3-C7的環(huán)烷基、C2-C10不飽和烴基、C5-C10芳香基或雜芳香基。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4,6-二氨基-l，3,5-三嗪類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征是所述衍生物涉及其光學(xué)活性體或消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體混合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑化物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4,6-二氨基-l,3，5-三嗪類衍生物在制備抑制人肺癌A549細(xì)胞活性藥物中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4,6-二氨基-1,3,5-三嗪類衍生物在制備抑制人白血病K562細(xì)胞活性藥物中的應(yīng)用。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4，6-二氨基-1，3,5-三嗪類衍生物在制備抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞活性藥物中的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4,6-二氨基-l,3,5-三嗪類衍生物在制備抑制人卵巢癌HO8910細(xì)胞活性藥物中的應(yīng)用。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4,6-二氨基-l，3,5-三嗪類衍生物在制備抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞活性藥物中的應(yīng)用。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2-烴基取代4，6-二氨基-l,3，5-三嗪類衍生物的用途，其特征是所制備的藥物還含有制劑允許的藥物賦形劑或載體。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的2-烴基取代4,6-二氨基-1，3，5-三嗪類衍生物的用途，其特征是所述藥物的制劑形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑或膠丸。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的2-烴基取代4,6-二氨基-1,3，5-三嗪類衍生物的用途，其特征是所述藥物的給藥方式包括口服給藥或注射給藥。全文摘要本發(fā)明提供2-烴基取代4，6-二氨基-1，3，5-三嗪類衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。經(jīng)研究證實(shí)，2-烴基取代4，6-二氨基-1，3，5-三嗪類衍生物對(duì)多種癌細(xì)胞株具有抑制增殖作用，特別對(duì)人肺癌A549細(xì)胞、人白血病K562細(xì)胞、人前列腺癌PC-3細(xì)胞、人卵巢癌HO8910細(xì)胞和人乳腺癌MCF-7細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用顯著，抗瘤譜較廣。文檔編號(hào)A61P35/00GK101305999SQ20081006305公開日2008年11月19日申請(qǐng)日期2008年7月8日優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日發(fā)明者俞永平,葉子奇,樓宜嘉,羊紅玉,章胡,哲陳申請(qǐng)人:浙江大學(xué)