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      一種紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法

      文檔序號(hào):1003760閱讀:352來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:一種紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及從中藥紅鳳菜中提取制備總黃酮的方法。
      背景技術(shù)
      紅鳳菜(Gynura bicolor DC.)為菊科多年生草本植物,該植物全草有活血、止血、 解毒消腫的功效,用于治療痛經(jīng)、血崩、咳血、創(chuàng)傷出血、潰瘍久不收口 ;其根有行氣活血的 功用,用于治療產(chǎn)后停瘀腹痛、血崩、瘧疾。目前從紅鳳菜中分離的化學(xué)成分主要有黃酮類 等成分,但尚未有針對(duì)紅鳳菜總黃酮的制備工藝方面的報(bào)道。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明提供了一種紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,該方法包括以下步驟(1)將紅鳳菜干燥粉碎;(2)用乙醇或甲醇提取,合并提取液,減壓濃縮成浸膏;(3)將步驟( 浸膏加水放置冷沉,離心去沉淀,上清液備用;(4)將(3)得到的上清液上大孔吸附樹(shù)脂,用乙醇梯度洗脫;(5)收集步驟乙醇洗脫液減壓濃縮,再上大孔樹(shù)脂,用乙醇梯度洗脫;(6)步驟(5)乙醇洗脫液濃縮干燥得紅鳳菜總黃酮提取物。其中步驟O)的提取方法為每千克紅鳳菜藥材,加入8-12L濃度為70% -80%的 乙醇或甲醇,熱回流或浸漬或滲漉提取2-4次,熱回流提取每次l_3h,浸漬或滲漉提取每次 15天,合并提取液。步驟(3)中加入水量為浸膏重量比8-10倍水。步驟(4)中所述大孔樹(shù)脂為DlOl型大孔樹(shù)脂,大孔樹(shù)脂與步驟(1)中所述紅鳳菜 的重量比為0. 5-5 1。步驟⑷中洗脫溶劑采用大孔樹(shù)脂體積比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗 脫,合并40%乙醇洗脫液。步驟(5)中所述大孔樹(shù)脂為DlOl型大孔樹(shù)脂,大孔樹(shù)脂與步驟(1)中所述紅鳳菜 的重量比為0. 5-5 1。步驟(5)中洗脫采用大孔樹(shù)脂體積比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗脫,合 并40%乙醇洗脫液。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)有以下幾點(diǎn)(1)本發(fā)明采用醇提取結(jié)合大孔樹(shù)脂富集法對(duì)紅鳳菜中總黃酮進(jìn)行精制,能夠有 效提高總黃酮含量,經(jīng)紫外分光光度法測(cè)得總黃酮含量以蘆丁計(jì)均高于50%。(2)本發(fā)明在紅鳳菜醇提取后增加了加水冷沉步驟,可以使葉綠素等低極性雜質(zhì) 沉降濾去,而黃酮類大極性成分留于上清液中,使得溶液中總黃酮含量得到提高。(3)大孔吸附樹(shù)脂是以苯乙烯和丙酸酯為單體,加入乙烯苯為交聯(lián)劑,甲苯、二甲 苯為致孔劑,它們相互交聯(lián)聚合形成了多孔骨架結(jié)構(gòu)。樹(shù)脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附質(zhì))之間的范德華引力,通過(guò)它巨大的比表面進(jìn)行物理吸附而工作,使有機(jī)化合 物根據(jù)有吸附力及其分子量大小可以經(jīng)一定溶劑洗脫分開(kāi)而達(dá)到分離、純化、除雜、濃縮等 不同目的。紅鳳菜中除含有黃酮類成分外還含有多糖類,小分子氨基酸等雜質(zhì)。采用大孔 樹(shù)脂水-醇梯度洗脫方法,可以使黃酮和雜質(zhì)得到較好分離,提高成品中黃酮含量。(4)本發(fā)明中使用了大孔樹(shù)脂二次洗脫的方法,紅鳳菜總黃酮從第一次大孔精制 后含量30%增加到50%,提高了總黃酮含量。
      具體實(shí)施例方式工藝優(yōu)選實(shí)施例本試驗(yàn)采用以下4種方法制備紅鳳菜總黃酮提取物,根據(jù)紫外分光光度法測(cè)定總 黃酮含量,并進(jìn)行比較A、醇提取法100g紅鳳菜藥材粗粉,分別加藥材重量12倍量和10倍量70%乙醇 回流提取兩次,提取時(shí)間分別為2小時(shí)、1小時(shí),過(guò)濾,合并提取液并濃縮干燥。B、醇提水沉法100g紅鳳菜藥材粗粉,分別加藥材重量12倍量和10倍量70%乙 醇回流提取兩次,提取時(shí)間分別為2小時(shí)、1小時(shí),過(guò)濾,合并提取液并濃縮成浸膏,浸膏加 入重量比10倍量水溶解,冷沉12小時(shí),離心,上清液濃縮干燥。C、醇提水沉結(jié)合大孔樹(shù)脂精制法IOOg紅鳳菜藥材粗粉,分別加藥材重量12倍量 和10倍量70%乙醇回流提取兩次,提取時(shí)間分別為2小時(shí)、1小時(shí),過(guò)濾,合并提取液并濃 縮成浸膏,浸膏加入重量比10倍量水溶解,冷沉12小時(shí),離心,上清液加入50gD101大孔樹(shù) 脂中,分別以大孔樹(shù)脂10倍體積20%乙醇、40%乙醇梯度洗脫,收集40%乙醇洗脫液,濃縮干燥。D、醇提水沉結(jié)合大孔樹(shù)脂再精制方法100g紅鳳菜藥材粗粉,分別加藥材重量12 倍量和10倍量70%乙醇回流提取兩次,提取時(shí)間分別為2小時(shí)、1小時(shí),過(guò)濾,合并提取液 并濃縮成浸膏,浸膏加入重量比10倍量水溶解,冷沉12小時(shí),離心,上清液加入50gD101大 孔樹(shù)脂,分別以大孔樹(shù)脂10倍體積20%乙醇、40%乙醇梯度洗脫,收集40%乙醇洗脫液。 40%乙醇洗脫液濃縮至無(wú)醇味,加入50gD101大孔樹(shù)脂中,分別以大孔樹(shù)脂10倍體積20% 乙醇、40%乙醇梯度洗脫,收集40%乙醇洗脫液,濃縮干燥??傸S酮的含量測(cè)定方法對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5. Omg于25mL容量瓶中,以70%乙醇超 聲溶解,定容,得濃度為0. 2mg · mL—1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。樣品溶液的制備精密移取紅鳳菜總黃酮提取物0. 5g于25mL的容量瓶中,加入 70%乙醇超聲使溶解,搖勻即得。樣品中總黃酮含量的測(cè)定精密移取樣品溶液Iml加入0. Imol · L—1 AlCl3 · 6H20 l.OmL,用70%乙醇定容,搖勻,放置15min后于412nm處測(cè)定吸光度,根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)
      算樣品總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表1,方法D醇提水沉結(jié)合大孔樹(shù)脂再精制方法得到的總黃酮含量明顯高 于其它三種方法得到的總黃酮含量。表1不同制備方法所得提取物的總黃酮含量
      權(quán)利要求
      1.一種紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于該方法包括以下步驟(1)將紅鳳菜干燥粉碎;(2)用乙醇或甲醇提取,合并提取液,減壓濃縮成浸膏;(3)將步驟( 浸膏加水放置冷沉,離心去沉淀,上清液備用;(4)將C3)得到的上清液上大孔吸附樹(shù)脂,用乙醇梯度洗脫;(5)收集步驟乙醇洗脫液減壓濃縮,再上大孔樹(shù)脂,用乙醇梯度洗脫;(6)步驟(5)乙醇洗脫液濃縮干燥得紅鳳菜總黃酮提取物。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于步驟(3)中 加入水量為浸膏重量比8-10倍水。
      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于步驟(4) 中所述大孔樹(shù)脂為DlOl型大孔樹(shù)脂,大孔樹(shù)脂與步驟(1)中所述紅鳳菜的重量比為 0.5-5:1。
      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于步驟(5) 中所述大孔樹(shù)脂為DlOl型大孔樹(shù)脂,大孔樹(shù)脂與步驟(1)中所述紅鳳菜的重量比為 0. 5-5 1。
      5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于步 驟(2)的提取方法為每千克紅鳳菜藥材,加入8-12L濃度為70%-80%的乙醇或甲醇,熱回 流或浸漬或滲漉提取2-4次,熱回流提取每次l_3h,浸漬或滲漉提取每次15天,合并提取液。
      6.根據(jù)權(quán)利要求要求1至4任一所述的紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于 步驟中洗脫溶劑采用大孔樹(shù)脂體積比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗脫,合并 40%乙醇洗脫液。
      7.根據(jù)權(quán)利要求要求1至4任一所述的紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,其特征在于 步驟(5)中洗脫溶劑采用大孔樹(shù)脂體積比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗脫,合并 40%乙醇洗脫液。
      全文摘要
      本發(fā)明公開(kāi)了一種紅鳳菜總黃酮提取物的制備方法,該方法包括以下步驟(1)將紅鳳菜干燥粉碎;(2)用乙醇或甲醇提取,合并提取液,減壓濃縮成浸膏;(3)將步驟(2)得到的浸膏加水放置冷沉,離心去沉淀,上清液備用;(4)將步驟(3)得到的上清液上大孔吸附樹(shù)脂,用乙醇梯度洗脫;(5)收集步驟(4)乙醇洗脫液減壓濃縮,再上大孔樹(shù)脂,用乙醇梯度洗脫;(6)步驟(5)乙醇洗脫液濃縮干燥得紅鳳菜總黃酮提取物。
      文檔編號(hào)A61K36/28GK102078357SQ201010611189
      公開(kāi)日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2010年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月29日
      發(fā)明者任冰如, 呂寒, 李維林, 裴詠萍, 趙慧芳, 陳劍 申請(qǐng)人:江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所
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