專利名稱：一種蓬子菜總黃酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種蓬子菜總黃酮的制備方法，尤其是涉及 一種采用大孔樹脂和納濾技術(shù)提取制備蓬子菜總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
蓬子菜為茜草科豬殃殃屬植物蓬子菜(Galium verum L.的全草。生于山坡灌叢 及曠野草地，分布于東北、西北至長江流域。蓬子菜的干燥全草在民間有廣泛的藥用基礎(chǔ)， 藥用最早始于《救荒本草》，別名黃米花、療毒蒿、雞腸草、針葉蒿等；民間用于治療肝炎、 稻田皮炎、跌打損傷、尊麻疹、婦科疾病等。國外研究顯示蓮子菜可用于治療多種疾病，包 括淋巴腺炎、扁桃體炎等，還具有降血壓、解熱作用，并可作為收斂劑；配以止痛劑還能治 療膀朧炎、結(jié)石、病氣等泌尿系統(tǒng)疾病。近年來臨床上用蓮子菜治療下肢深靜脈血栓效果 較好，對其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及藥理活性的研究逐漸得到重視。蓬子菜根含蒽醌類化合物， 地上部分含黃酮類和環(huán)烯醚萜類化合物。其黃酮類化合物包括蕓香苷(rutin)、喇叭茶 苷(palustroside)、槲皮素-3-葡萄糖苷(3-glucosylquercetin)、香葉木苷、香葉木素 (2-1)葡萄阿拉伯糖，異槲皮苷，香葉木素7-0-β-D葡萄糖苷等。蓬子菜具有行血、消瘀、 祛風(fēng)、治癢之功效，中國專利申請?zhí)?4104335. 5以蓬子菜的煎煮液和乙醇為主料配置成外 用擦劑，用于治療蕁麻疹，具有良好的治療效果。蓬子菜中的黃酮類化合物具有較好的生理 活性，其中有效部位中香葉木苷含量較高，最高可達0. Μ%，并且研究表明香葉木苷具有維 生素P樣作用，降低兔毛細(xì)血管滲透性的作用強于兒茶酚水合物、陳皮昔、槲皮素和蘆丁 ； 有維生素C樣作用，能增強豚鼠毛細(xì)血管的抵抗力和減少腎上腺抗壞血酸的排出；有抗炎 作用，對角叉菜膠引起的大鼠足水腫有消腫作用。王靜等模擬航天用藥要求，進行了香葉木 苷對尾吊大鼠血液系統(tǒng)的作用研究，通過對尾吊大鼠耳廓微循環(huán)、體外血栓形成、循環(huán)內(nèi)皮 細(xì)胞的觀察以及椎動脈恒速灌流腦血管阻力的影響進行實驗，發(fā)現(xiàn)香葉木昔可使大鼠耳廓 細(xì)動脈和細(xì)靜脈血管口徑增大，血流速度加快，尤其使靜脈血流速度加快明顯，毛細(xì)血管開 放量增多，與對照組有顯著差異，表明香葉木昔具有明顯改善尾吊大鼠耳廓微循環(huán)的作用。 與對照組相比，香葉木昔可顯著減小血栓長度，降低血栓的干質(zhì)量和濕質(zhì)量，大鼠新鮮脫落 內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量顯著減少，明顯降低血壓和腦血管阻力。此外，還發(fā)現(xiàn)香葉木苷具有消腫、止 血、抗癌、保肝等作用。國內(nèi)外提取黃酮的方法很多，有水煮法、有機溶劑提取法、酶解法、超臨界萃取法、 超聲波提取法、微波提取法。分離黃酮的方法有樹脂吸附法、高效液相色譜法等。蓬子菜的 研究，目前僅限于藥理和化學(xué)成分研究，提取工藝研究較少，盧衛(wèi)紅等發(fā)表的“大孔吸附樹 脂分離純化香葉木苷”，采用70%乙醇回流提取，濃縮提取液得浸膏，水溶解上大孔吸附樹 脂柱，該方法提取得到的雜質(zhì)多，樹脂吸附容量很低，對樹脂污染大，不適用于工業(yè)生產(chǎn)。從 蓬子菜中提取制備高含量總黃酮的方法還沒有公開文獻。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種蓬子菜總黃酮的制備方法。該方法能夠得到 較高含量的蓬子菜總黃酮，操作簡單，便于工業(yè)操作。本發(fā)明提取技術(shù)方案如下一種蓬子菜總黃酮的制備方法，其特征在于包含以下步驟(1)將蓬子菜凈制、干燥、粉碎，得粗粉；將粗粉與水按質(zhì)量比1 1-5混合置于提 取釜中，加熱提取2-3次，每次1-3小時，過濾，濾渣再用20-50%乙醇超聲提取1-2次，每次 0. 5-2小時，合并濾液；(2)濾液加熱至50_80°C，攪拌條件下加入堿液，調(diào)節(jié)PH至7. 5_13，保持10_30分 鐘，趁熱過濾，濾液在50-80°C，攪拌條件下用酸調(diào)節(jié)pH至2-5，靜置冷卻至室溫，放置析出 沉淀，抽濾，收集沉淀物；(3)加去離子水分散沉淀物，以石油醚萃取至石油醚萃取層顏色變淺，棄石油醚萃 取液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的樹脂柱，飽和吸附后依次用水、30% 乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，干燥即得蓮子菜總黃酮。所述步驟(1)中10-80%乙醇溶液用量為濾渣質(zhì)量的4-10倍。所述步驟( 堿液為0. 1-10%的氨水或氫氧化鈉水溶液；所述酸為5-15%的鹽酸 或硫酸水溶液。所述步驟(3)中加入的石油醚與分散液的體積比為0.5-2 1。所述步驟(3)中大孔樹脂為HPD400、HPD500、AB-8中的一種。綜上所述，本發(fā)明具有的優(yōu)點本發(fā)明采用水煎煮和醇超聲提取結(jié)合，提取充分； 采用石油醚萃取脫除脂溶性雜質(zhì)，使上柱液有效去除了雜質(zhì)，減輕了對樹脂吸附干擾，使樹 脂對黃酮的吸附能力大大增強，更能適應(yīng)規(guī)模化提取需要。膜濃縮溫度低，有效減少了黃酮 成分的分解。下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式
具體實施例方式實施例1 將采購的蓬子菜地上部分凈制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；稱取5kg蓬子菜粉 末用15L水加熱至70°C，提取3次，每次2小時，過濾，保留濾液，濾渣再加入30L50%乙醇水 溶液超聲提取半小時，合并所有濾液，加熱至60°C，在攪拌下用0.5%氨水溶液調(diào)pH至11， 在60°C條件下保持10分鐘，趁熱過濾得到濾液，濾液在60°C條件下，邊攪拌邊加入10%鹽 酸水溶液，調(diào)節(jié)PH至3，冷卻至室溫，靜置析出沉淀，抽濾，收集沉淀物，加去離子水分散沉 淀物，用石油醚(沸程60°C )萃取至石油醚萃取層顏色變淺，每次石油醚用量為分散液體 積的1倍，棄石油醚萃取液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂 柱，飽和吸附后用水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮，低溫真空干燥粉碎得 干粉，純度73%。實施例2:將采購的蓬子菜地上部分凈制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；稱取5kg蓬子菜粉末用23L水加熱至80°C，提取2次，每次3小時，過濾，保留濾液，濾渣再加入37L40 %乙醇 水溶液超聲提取1小時，合并所有濾液，加熱至50°C，在攪拌下用0. 3%氫氧化鈉水溶液調(diào) PH至13，在50°C條件下保持20分鐘，趁熱過濾得到濾液，濾液在50°C條件下，邊攪拌邊加 入5%鹽酸水溶液，調(diào)節(jié)pH至2，冷卻至室溫，靜置析出沉淀，抽濾，收集沉淀物，加去離子水 分散沉淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取層顏色變淺，每次石油醚用量為分散 液體積的0. 5倍，棄石油醚萃取液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的HPD400 大孔樹脂柱，飽和吸附后用水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮，低溫真空干 燥粉碎得干粉，純度69%。實施例3 將采購的蓮子菜地上部分凈制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；稱取5kg蓬子菜粉 末用20L水加熱至70°C，提取3次，每次1小時，過濾，保留濾液，濾渣再加入43L30%乙醇 水溶液超聲提取1小時，合并所有濾液，加熱至80°C，在攪拌下用2%氨水溶液調(diào)pH至8. 5， 在80°C條件下保持15分鐘，趁熱過濾得到濾液，濾液在80°C條件下，邊攪拌邊加入10%硫 酸水溶液，調(diào)節(jié)PH至5，冷卻至室溫，靜置析出沉淀，抽濾，收集沉淀物，加去離子水分散沉 淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取層顏色變淺，每次石油醚用量為分散液體積 的1. 5倍，棄石油醚萃取液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的HPD500大孔樹 脂柱，飽和吸附后用水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮，低溫真空干燥粉碎 得干粉，純度76%。實施例4 將采購的蓬子菜地上部分凈制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；稱取15kg蓬子菜粉 末用30L水加熱至80°C，提取3次，每次3小時，過濾，保留濾液，濾渣再加入120L40%乙醇 水溶液超聲提取半小時，合并所有濾液，加熱至70°C，在攪拌下用5%氫氧化鈉水溶液調(diào)pH 至10，在70°C條件下保持30分鐘，趁熱過濾得到濾液，濾液在70°C條件下，邊攪拌邊加入 8%鹽酸水溶液，調(diào)節(jié)pH至4，冷卻至室溫，靜置析出沉淀，抽濾，收集沉淀物，加去離子水分 散沉淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取層顏色變淺，每次石油醚用量為分散液 體積的2倍，棄石油醚萃取液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的HPD400大孔 樹脂柱，飽和吸附后用水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮，低溫真空干燥粉 碎得干粉，純度65%。實施例5 將采購的蓬子菜地上部分凈制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；稱取35kg蓬子菜粉 末用170L水加熱至70°C，提取2次，每次2. 5小時，過濾，保留濾液，濾渣再加入200L50% 乙醇水溶液超聲提取1小時，合并所有濾液，加熱至60°C，在攪拌下用10%氨水溶液條pH 至12，在60°C條件下保持15分鐘，趁熱過濾得到濾液，濾液在60°C條件下，邊攪拌邊加入 15%鹽酸水溶液，調(diào)節(jié)pH至2，冷卻至室溫，靜置析出沉淀，抽濾，收集沉淀物，加去離子水 分散沉淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取層顏色變淺，每次石油醚用量為分散 液體積的1. 5倍，棄石油醚萃取液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的AB-8大 孔樹脂柱，飽和吸附后用水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮，低溫真空干燥 粉碎得干粉，純度67%。
權(quán)利要求
1.一種蓬子菜總黃酮的制備方法，其特征在于，該方法按照下列步驟(1)將蓬子菜凈制、干燥、粉碎，得粗粉；將粗粉與水按質(zhì)量比1 1-5混合置于提取 釜中，加熱提取2-3次，每次1-3小時，過濾，濾渣再用20-50%乙醇超聲提取1-2次，每次 0. 5-2小時，合并濾液；(2)濾液加熱至50-80°C，攪拌條件下加入堿液，調(diào)節(jié)pH至7.5_13，保持10-30分鐘，趁 熱過濾，濾液在50-80°C，攪拌條件下用酸調(diào)節(jié)pH至2-5，靜置冷卻至室溫，放置析出沉淀， 抽濾，收集沉淀物；(3)加去離子水分散沉淀物，以石油醚萃取至石油醚萃取層顏色變淺，棄石油醚萃取 液，水層藥液蒸去殘留石油醚，緩慢加入預(yù)處理好的樹脂柱，飽和吸附后依次用水、30%乙 醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，干燥即得蓬子菜總黃酮。
2.如權(quán)利要求1所述的一種蓬子菜總黃酮的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中 10-80%乙醇溶液用量為濾渣質(zhì)量的4-10倍。
3.如權(quán)利要求1所述的一種蓬子菜總黃酮的制備方法，其特征在于所述步驟O)中堿 液為0. 1-10%的氨水或氫氧化鈉水溶液；所述酸為5-15%的鹽酸或硫酸水溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的一種蓮子菜總黃酮的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中加 入的石油醚與分散液的體積比為0.5-2 1。
5.如權(quán)利要求1所述的一種蓮子菜總黃酮的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中大 孔樹脂為HPD400、HPD500、AB-8中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蓬子菜總黃酮的制備方法，屬于植物提取技術(shù)領(lǐng)域。所述蓬子菜總黃酮中主要包含蕓香苷、喇叭茶苷、香葉木苷、香葉木素(2→1)葡萄阿拉伯糖，異槲皮苷，香葉木素7-O-β-D葡萄糖苷等。蓬子菜中總黃酮由水提、有機溶劑提取、濃縮，除雜，大孔樹脂吸附洗脫制備獲得。所制得的蓬子菜總黃酮中黃酮含量高達50-95％。本方法采用石油醚萃取脫除脂溶性雜質(zhì)，上柱液有效去除了雜質(zhì)，減輕了對樹脂吸附干擾，使樹脂對黃酮吸附能力增強，并且本方法成本低廉，工藝合理，能適應(yīng)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號A61P15/00GK102038782SQ20101029324
公開日2011年5月4日 申請日期2010年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月27日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司