本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域和食品醫(yī)藥領(lǐng)域，具體提供了一種可以改善胃腸功能的大黃酚葡聚糖包合物，及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

現(xiàn)代中草藥減肥藥或保健食品其中一個(gè)主要作用機(jī)制分就是抑制腸道消化吸收(奧利司他)，其機(jī)制主要是作為腸道的胰脂肪酶抑制劑，它可使胰脂肪酶的活性降低，使人的脂肪不能分解，同時(shí)減低腸道對(duì)脂肪酸的運(yùn)輸。減少脂質(zhì)的吸收達(dá)到目的。但是，長(zhǎng)期服用這種藥物或者保健食品，會(huì)造成胃腸道功能紊亂，負(fù)荷加重，對(duì)胃腸道的造成病理損害。為了避免此類現(xiàn)象的發(fā)生，市場(chǎng)需要研制開發(fā)來源于天然、效果顯著、無明顯不良反應(yīng)的防治腹瀉和改善胃腸道功能的新型口服制劑，以減輕患者的痛苦。長(zhǎng)期腹瀉致胃腸道功能紊亂患者眾多，因此開發(fā)此類制劑產(chǎn)品具有良好的應(yīng)用前景，是十分有益和必要的。

在豐富的中草藥資源中，有些提取物具有非常好的健胃腸活性。古代學(xué)者認(rèn)為，脾胃是人體重要的消化臟器之一，其功能不僅關(guān)系著人體的生理健康，且對(duì)人體的生命功能至關(guān)重要。胃腸道功能是否正常直接影響食物中營(yíng)養(yǎng)成分的消化吸收，對(duì)維持人體各器官的正常功能至關(guān)重要。

大黃酚(chrysophanol，Chr)是一種蒽醌衍生物，化學(xué)名為1，8-二羥基-3-甲基蒽醌，是大黃、虎杖、何首烏、決明子等中草藥中主要有效成分之一，具有抗菌、縮短血液凝固時(shí)間、興奮神經(jīng)、麻痹肌肉、止咳、利尿、抗癌作用。近年來研究表明，大黃酚還具有明顯的減肥作用，并且有抗大鼠肝、腦過氧化脂質(zhì)生成的作用。但大黃酚具有味苦、對(duì)胃有刺激性，基于此，需要一種載體將大黃酚包合，減弱其對(duì)胃腸的刺激性，但是目前采用的脂質(zhì)體或者環(huán)糊精等方式其包合效果有限。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

因此，本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供一種可以改善胃腸功能的大黃酚包合物，以克服現(xiàn)有大黃酚應(yīng)用技術(shù)存在的刺激胃腸道的缺陷。本申請(qǐng)的發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，使用含大黃酚的大黃、虎杖、決明子等中草藥來進(jìn)行減肥的缺點(diǎn)在于會(huì)導(dǎo)致腹瀉，而葡聚糖包合可以減緩或者消除這種不利影響。大黃酚葡聚糖包合物在改善胃腸道功能方面具有滿意的效果。原因在于兩個(gè)方面，一是口服大黃酚葡聚糖包合物后可長(zhǎng)時(shí)間黏附與小腸壁而不被排入大腸，可有效延長(zhǎng)藥物在小腸的滯留時(shí)間從而提高藥物在腸道的吸收；另一方面大黃酚葡聚糖包合物可以改善胃腸道的額菌群平衡。

有鑒于此，本發(fā)明的目的首先在于提供一種大黃酚葡聚糖包合物，本包合物內(nèi)容物包含大黃酚、葡聚糖。可有效幫助人們排腸毒、宿便，且無任何副作用，可避免服用單純服用大黃酚或者西藥引發(fā)的多種并發(fā)癥，利于人體養(yǎng)生、美容，適合各種人群服用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚葡聚糖包合物由大黃酚和葡聚糖制備而成，所述大黃酚和葡聚糖的摩爾比為0.001-150：2000。

進(jìn)一步，所述的大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚和葡聚糖的摩爾比為50-100：2000。

進(jìn)一步，所述的大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚葡聚糖包合物由大黃酚、葡聚糖和淀粉制備而成，所述大黃酚、葡聚糖和淀粉的摩爾比為0.001-150：2000：1000-2000。

優(yōu)選的，所述的大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚、葡聚糖和淀粉的摩爾比為50-100：2000：1500-1800。

進(jìn)一步，所述的大黃酚葡聚糖包合物，所述葡聚糖為β-葡聚糖和/或β-葡聚糖衍生物。

針對(duì)上述大黃酚葡聚糖包合物，本發(fā)明還提供一種它的制備方法。該方法制得的包合物載藥量高，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)單，便于后續(xù)多種類型制劑的進(jìn)行。該方法包括以下步驟：

(1)葡聚糖預(yù)處理

將葡聚糖充分溶解于去離子水中成為澄清透明的葡聚糖溶液；

(2)大黃酚預(yù)處理

將大黃酚充分溶解于50-70％乙醇中，得大黃酚溶液；

(3)在攪拌和加熱條件下，向步驟(1)所得葡聚糖溶液中加入步驟(2)所得的大黃酚溶液，攪拌混合均勻，靜置，干燥，得大黃酚葡聚糖包合物。

進(jìn)一步，所述的制備方法，所述大黃酚葡聚糖包合物由大黃酚、葡聚糖和淀粉制備而成，所述大黃酚、葡聚糖和淀粉的摩爾比為0.001-150：2000：1000-2000；所述制備方法包括如下進(jìn)行的步驟：

(1)葡聚糖和淀粉預(yù)處理

將葡聚糖和淀粉充分溶解于去離子水中成為澄清透明的葡聚糖淀粉混合溶液；

(2)大黃酚預(yù)處理

將大黃酚充分溶解于50-70％乙醇中，得大黃酚溶液；

(3)在攪拌和加熱條件下，向步驟(1)所得葡聚糖淀粉混合溶液中加入步驟(2)所得的大黃酚溶液，攪拌混合均勻，靜置，干燥，得大黃酚葡聚糖包合物。

進(jìn)一步，所述的制備方法，所述步驟(1)中，于80-90℃攪拌充分溶解。

進(jìn)一步，所述的制備方法，所述步驟(2)中，于30-50℃回流或者攪拌加熱充分溶解。

進(jìn)一步，所述的制備方法，所述步驟(3)中，控制溫度在40-100℃，攪拌速度控制在500-700r/min。優(yōu)選的，所述溫度控制在40-60℃。

進(jìn)一步，所述的制備方法，所述步驟(3)中，所述干燥可以是經(jīng)冷凍干燥或噴霧干燥或40-70℃低溫真空干燥，得大黃酚葡聚糖包合物的干品。獲得的干品便于制備為片劑、膠囊、顆粒劑、凍干劑、膠丸、吸入粉劑、栓劑等多種劑型。

本發(fā)明還提供了一種大黃酚葡聚糖包合物的應(yīng)用，具體為所述的大黃酚葡聚糖包合物在制備具有改善胃腸道功能藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果：

(1)與現(xiàn)有大黃酚制劑對(duì)胃腸道的刺激作用相比，本發(fā)明的大黃酚葡聚糖包合物可以顯著降低這種刺激作用。

(2)本發(fā)明的大黃酚葡聚糖包合物可以延長(zhǎng)在胃腸道中的停留時(shí)間，形成緩釋特性。

(3)本發(fā)明的大黃酚葡聚糖包合物的最終應(yīng)用形式可以是片劑、膠囊、顆粒劑、等多種形式，該方法不采用有毒、刺激性及對(duì)人體產(chǎn)生不良影響的溶劑，不需要進(jìn)行復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，即可實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。

(4)本發(fā)明的大黃酚葡聚糖包合物具有保護(hù)胃腸道黏膜、調(diào)理胃腸道功能、抗菌抗炎的作用；療效顯著，使用安全，作用優(yōu)于市場(chǎng)上常用的藥劑產(chǎn)品，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為在胃中的滯留時(shí)間及穩(wěn)定性對(duì)比結(jié)果圖。

圖2為在腸道中的滯留時(shí)間及穩(wěn)定性對(duì)比結(jié)果圖。

圖3為對(duì)小鼠腹瀉率的影響結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

所舉實(shí)施例是為了更好地對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行說明，但并不是本發(fā)明的內(nèi)容僅限于所舉實(shí)施例。所以熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容對(duì)實(shí)施方案進(jìn)行非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，還包括各具體實(shí)施方式間的任意組合，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

另外，在下列實(shí)施例中所采用的材料均為已知的并且可以通過商業(yè)手段獲得的，除非明確指出，所采用的裝置可以為本領(lǐng)域中常用的設(shè)備。

實(shí)施例1大黃酚葡聚糖包合物

葡聚糖溶液的預(yù)處理方法為：將葡聚糖溶于適量去離子水中，85℃攪拌溶解1-1.5h使其充分溶解成為澄清透明的葡聚糖溶液。

大黃酚的預(yù)處理方法為：稱取規(guī)定量的大黃酚置于60％乙醇中，40℃回流或者攪拌加熱使藥物完全溶解，得大黃酚溶液。

在攪拌和加熱條件下，向葡聚糖溶液中加入大黃酚溶液，攪拌6-12h后，靜置，抽真空干燥，得大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚和葡聚糖的摩爾比為：50：2000。其中，加熱溫度控制在60℃，攪拌速度控制在600r/min。

實(shí)施例2大黃酚葡聚糖包合物

葡聚糖溶液的預(yù)處理方法為：將葡聚糖溶于適量去離子水中，90℃攪拌溶解1-1.5h使其充分溶解成為澄清透明的葡聚糖溶液。

大黃酚的預(yù)處理方法為：稱取規(guī)定量的大黃酚置于65％乙醇中，45℃回流或者攪拌加熱使藥物完全溶解，得大黃酚溶液。

在攪拌和加熱條件下，向葡聚糖溶液中加入大黃酚溶液，攪拌6-12h后，靜置，抽真空干燥，得大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚和葡聚糖的摩爾比為：100：2000。其中，加熱溫度控制在50℃，攪拌速度控制在700r/min。

對(duì)比實(shí)施例1

葡聚糖溶液的預(yù)處理方法為：將葡聚糖溶于適量去離子水中，90℃攪拌溶解1-1.5h使其充分溶解成為澄清透明的葡聚糖溶液。

大黃酚的預(yù)處理方法為：稱取規(guī)定量的大黃酚置于65％乙醇中，45℃回流或者攪拌加熱使藥物完全溶解，得大黃酚溶液。

在攪拌和加熱條件下，向葡聚糖溶液中加入大黃酚溶液，攪拌6-12h后，靜置，抽真空干燥，得大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚和葡聚糖的摩爾比為：100：1000。其中，加熱溫度控制在50℃，攪拌速度控制在700r/min。

實(shí)施例3大黃酚葡聚糖包合物

葡聚糖和淀粉預(yù)處理：葡聚糖溶液的預(yù)處理方法為：將葡聚糖和淀粉溶于適量去離子水中，80℃攪拌溶解1-1.5h使其充分溶解成為澄清透明的葡聚糖淀粉混合溶液。

大黃酚的預(yù)處理方法為：稱取規(guī)定量的大黃酚置于65％乙醇中，45℃回流或者攪拌加熱使藥物完全溶解，得大黃酚溶液。

在攪拌和加熱條件下，向葡聚糖淀粉混合溶液中加入大黃酚溶液，攪拌6-12h后，靜置，抽真空干燥，得大黃酚葡聚糖包合物，所述大黃酚、葡聚糖和淀粉的摩爾比為100：2000：1600。其中，加熱溫度控制在50℃，攪拌速度控制在700r/min。

實(shí)施例4在胃腸道的滯留時(shí)間及穩(wěn)定性對(duì)比

(1)儀器與器材

高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；PHS-3C酸度計(jì)(上海虹益儀器儀表有限公司)；HH-S型恒溫水浴鍋、DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、SHZ-D(III)旋轉(zhuǎn)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；KH-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)市超聲儀器有限公司)；SD-1500實(shí)驗(yàn)型噴霧干燥機(jī)(上海沃迪科技有限公司)；R-124旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞典BUCHI公司)；CP-224S電子天平(德國(guó)賽多利斯)。

大黃酚標(biāo)準(zhǔn)品(Chr，HPLC≥98％，南京奧多福尼生物科技有限公司)；酵母β-葡聚糖(朗深系生物技術(shù)有限公司)；大黃酚葡聚糖包合物(本發(fā)明自制，本實(shí)施例中取實(shí)施例2、實(shí)施例3和對(duì)比實(shí)施例1所制備的大黃酚葡聚糖包合物進(jìn)行驗(yàn)證)；胃蛋白酶(1：10000)、胰蛋白酶(1：1000)(Sigma公司)；其它化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純；所用水為雙蒸水，所用溶液均自行配制。

(2)模擬胃腸液的制備

體外模擬消化過程分為兩個(gè)階段：模擬胃液消化和模擬腸道消化。

胃液：稱取3.2g胃蛋白酶和7mL 37％HCl加入1L的容量瓶，用超純水定容；

腸液：稱取6.8g KH₂PO₄溶于1L超純水，加入3.2g胰蛋白酶，NaOH調(diào)節(jié)至pH 6.8。

(3)胃腸道的滯留時(shí)間及穩(wěn)定性對(duì)比

口服藥物的吸收在小腸上皮細(xì)胞進(jìn)行，胃腸道生理環(huán)境的變化直接影響藥物的穩(wěn)定性從而間接對(duì)藥物的吸收產(chǎn)生較大的影響。功能性小分子在胃腸道環(huán)境下穩(wěn)定性測(cè)定是新產(chǎn)品發(fā)現(xiàn)和開發(fā)過程中非常必要的研究步驟，他對(duì)于功能性小分子結(jié)構(gòu)的修飾、劑型的選擇，生產(chǎn)條件的確定均具有重要的意義。由圖1和圖2可看出，總體而言含胃蛋白酶的胃液中葡聚糖對(duì)大黃酚吸附比含胰蛋白酶的腸液吸附量大，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，大黃酚葡聚糖包合物有不同程度的降解。研究葡聚糖配基在胃腸道中的穩(wěn)定性，為葡聚糖配基產(chǎn)品的開發(fā)和劑型的選擇提供依據(jù)，通過測(cè)定大黃酚葡聚糖包合物在人工胃液和人工腸液中隨著放置時(shí)間的穩(wěn)定性；結(jié)果顯示，大黃酚葡聚糖包合物在人工胃液中酸性環(huán)境下較穩(wěn)定，4h后，大黃酚游離率僅為58.3％；而在腸液中葡聚糖配基的剩余量仍然達(dá)到50％以上。

從大黃酚葡聚糖包合物在人工模擬胃液中與人工模擬腸液中的穩(wěn)定性基本一致，藥物殘留量與時(shí)間的關(guān)系曲線基本重合的情況說明胃蛋白酶和胰酶不是影響葡聚糖配基穩(wěn)定性的主要因素。

實(shí)施例5改善胃腸道的菌群平衡(小鼠腹瀉率試驗(yàn))

大腸桿菌菌懸液的制備：將大腸桿菌接種于LB培養(yǎng)基中，37℃氣浴恒溫振蕩器上振蕩培養(yǎng)12h后，將液體培養(yǎng)基離心得到沉淀，用滅菌生理鹽水沖洗菌落2次，離心后再用滅菌生理鹽水制成大腸桿菌菌懸液，根據(jù)平板計(jì)數(shù)法分別配制濃度為2×10⁷CFU/mL、2×10⁸CFU/mL、2×10⁹CFU/mL、2×10¹⁰CFU/mL細(xì)菌懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

建立大腸桿菌感染動(dòng)物腹瀉模型：小鼠實(shí)驗(yàn)前12h禁食、自由飲水。腹腔注射相應(yīng)濃度的菌液，注射體積為0.5mL，對(duì)照組腹腔注射等體積的無菌生理鹽水。小鼠出現(xiàn)明顯的腹瀉癥狀、水樣便、精神萎靡、行動(dòng)遲緩等表明模型建立成功。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)：小鼠60只，雌雄各半，體重30g±2g，分6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組組、本發(fā)明實(shí)施例2組、實(shí)施例3組和對(duì)比實(shí)施例1組。陽性對(duì)照組小鼠造模后4h口服蒙脫石散1g/kg，本發(fā)明實(shí)施例2組、實(shí)施例3組和對(duì)比實(shí)施例1組小鼠造模后4h口服本發(fā)明的大黃粉葡聚糖包合物300mg/kg，每天1次，連續(xù)6天。

腹瀉指標(biāo)：將小鼠放入鋪有濾紙的鼠籠內(nèi)，觀察小鼠腹瀉情況。計(jì)算腹瀉率：每組動(dòng)物中排稀便的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分比。對(duì)小鼠腹瀉率的影響結(jié)果如圖3所示。

結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組腹瀉率明顯升高。本發(fā)明大黃酚葡聚糖包合物可明顯降低腹瀉率，促進(jìn)小鼠的康復(fù)；并且效果的順序?yàn)椋簩?shí)施例3組＞實(shí)施例2組＞對(duì)比實(shí)施例1組。

最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。