專利名稱：單乙酰螺旋霉素的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是制造單乙酰螺旋霉素的生產(chǎn)工藝，屬于新的抗生素制品的制造方法。
乙酰螺旋霉素是日本1965年首先半合成的(專利號43-16-748)其產(chǎn)品是單乙酰螺旋霉素和雙乙酰螺旋霉素的混合物，含有四種組分，即單乙酰螺旋霉素B、單乙酰螺旋霉素C、雙乙酰螺旋霉素B和雙乙酰螺旋霉素C。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗菌素研究所于1982年按照日本專利合成的產(chǎn)品同樣是單乙酰螺旋霉素和雙乙酰螺旋霉素的混合物。
現(xiàn)有技術(shù)存在的主要問題是按此方法合成的乙酰螺旋霉素為混合物。其中單乙酰和雙乙酰的比例隨螺旋霉素組分不同而異。日本的螺旋霉素以組分Ⅰ為主，因此，按原專利合成乙酰螺旋霉素其單乙酰螺旋霉素含量占50-60%。我國螺旋霉素以組分Ⅱ、Ⅲ為主，因此按原專利合成乙酰螺旋霉素其雙乙酰螺旋霉素含量占50-60%。這樣，導(dǎo)致藥品質(zhì)量控制比較困難。
本發(fā)明的目的是尋找一種新的制造方法，使生產(chǎn)出來的乙酰螺旋霉素90%以上為單乙酰螺旋霉素，以提供一種新的抗生素制品。
本發(fā)明的內(nèi)容與要點1.反應(yīng)物的配料比(以取螺旋霉素10克為基準(zhǔn)所得的比例)螺旋霉素 10克醋酐 25毫升吡啶 1毫升合成乙酰螺旋霉素的原料螺旋霉素有三個組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，其區(qū)別在于內(nèi)酯環(huán)3位上羥基(-OH)者為組分Ⅰ、乙?；邽榻M分Ⅱ、丙?；邽榻M分Ⅲ，螺旋霉素的碳霉糖和碳霉胺基糖上還分別有一個和兩個羥基，即2′位、3″位、4″位，這三個羥基的活性依次是2′＞4″＞3″，乙酰化時，2′位的羥基最容易乙?；?，3″位最難乙酰化。
2.單乙酰螺旋霉素合成工藝流程
當(dāng)原料以螺旋霉素組分Ⅱ、Ⅲ為主時，在10-35℃下，在上述組分中，加入醋酐、吡啶，反應(yīng)12小時后，往混合物中加5倍體積的冰水，然后用6N NaOH調(diào)pH9.0，用乙酸丁酯提取3次，再用無水Na2SO4干燥過夜，減壓濃縮，得中間體;用80%甲醇回流10小時，減壓蒸去甲醇，再用乙酸丁酯提取3次，用6N HCl調(diào)pH2.0-2.5，用磷酸氫二鈉緩沖液提3次，得單乙酰螺旋霉素水提液，再用6N NaOH調(diào)pH9.0，50℃保溫10分鐘，60℃下真空干燥，得單乙酰螺旋霉素成品。
當(dāng)原料以螺旋霉素組分Ⅰ為主時，在40-50℃下，在上述組分中加入醋酐、吡啶，反應(yīng)10-12小時后，往混合物中加5倍體積的冰水，然后用6N NaOH調(diào)pH9.0，用乙酸丁酯提取3次，再用無水Na2SO4干燥過夜，減壓濃縮，得中間體;用80%甲醇回流10小時，減壓蒸去甲醇，再用乙酸丁酯提取3次，用6N HCl調(diào)pH2.0-2.5，用磷酸氫二鈉緩沖液提3次，得單乙酰螺旋霉素水提液，再用6N NaOH調(diào)pH9.0，50℃保溫10分鐘，60℃下真空干燥，得單乙酰螺旋霉素成品。
①反應(yīng)溫度制備單乙酰螺旋霉素，當(dāng)原料主要為組分Ⅱ、Ⅲ時，反應(yīng)溫度控制在35℃以下(室溫)，產(chǎn)品含單乙酰螺旋霉素90%。
本發(fā)明控制反應(yīng)溫度在35℃以下時，使其2′，4″位的羥基乙酰化，成為二乙酰的中間體，再經(jīng)醇解脫乙酰反應(yīng)，將2′位的乙?；撊ィ蔀閱我阴Ｂ菪顾?、單乙酰螺旋霉素乙酰化在4″位。
螺旋霉素乙酰化成為乙酰螺旋霉素后，內(nèi)酯環(huán)3位上的羥基同樣也?；?，因為內(nèi)酯環(huán)3位上有乙?；捅；膮^(qū)別，因此，乙酰螺旋霉素有B組分和C組分兩種，內(nèi)酯環(huán)3位上乙?；邽锽組分，丙?；邽镃組分。
②反應(yīng)時間合成單乙酰螺旋霉素反應(yīng)12小時即可完成。
③螺旋霉素組分對反應(yīng)溫度有影響，以組分Ⅱ、Ⅲ為主的螺旋霉素合成單乙螺旋霉素時，室溫以下12小時即可完成，以組分Ⅰ為主的螺旋霉素合成單乙酰螺旋霉素時，需適當(dāng)提高反應(yīng)溫度至40-50℃，適當(dāng)延長反應(yīng)時間12-20小時。
本發(fā)明的優(yōu)點與積極效果是可以揭示參與反應(yīng)時間、溫度和物質(zhì)之間的內(nèi)在聯(lián)系與規(guī)律，能定向合成含單乙酰螺旋霉素90%的制品，制備單乙酰螺旋霉素可在室溫下完成，不需加熱(按日本專利需加熱至60℃)，可節(jié)省能源，減少投資，縮短反應(yīng)時間，產(chǎn)率在80%左右。是國內(nèi)外未報導(dǎo)過的抗生素新產(chǎn)品。
實施例(1)乙酰化螺旋霉素(Ⅱ、Ⅲ組分為主)10克、醋酐20毫升、吡啶1毫升在干燥好的100ml三頸瓶中，裝有冷凝器，內(nèi)溫溫度計，磁力攪拌棒，投入上面配比的物料，開始攪拌，室溫反應(yīng)12hr，反應(yīng)畢后，將反應(yīng)液傾入200ml冰水中，攪拌下加入6N NaOH約70ml，調(diào)pH9.0，用乙酸丁酯提取三次，每次40ml，合并乙酸丁酯提取液，用無水Na2SO4干燥，過濾，將丁酯液濃縮，得淺黃色固體。
(2)醇解脫乙酰反應(yīng)中間體 10克80%甲醇 25毫克100ml三頸瓶，裝有回流冷凝器，內(nèi)溫溫度計，磁力攪拌棒，開始投入上述原料，攪拌升溫，內(nèi)溫70℃，水解10hr，反應(yīng)畢后，減壓蒸去甲醇，得淺黃色濃縮物，用乙酸丁酯提取三次，每次20ml，合并丁酯液，棄去水層，將丁酯提取液用pH2.0-2.5的磷酸氫二鈉緩沖液100ml提取三次，合并酸水液，棄去丁酯液，將水提液用6N NaOH調(diào)至pH9.0，50℃保溫10分鐘，過濾，水洗，得含單乙酰螺旋霉素90%的白色結(jié)晶固體，收率在80%左右。


圖1 螺旋霉素結(jié)構(gòu)圖R＝H 組分ⅠR＝CH2CO 組分Ⅱ
R＝C2H3CO 組分Ⅲ圖2 單乙酰螺旋霉素B結(jié)構(gòu)3 單乙酰螺旋霉素C結(jié)構(gòu)4 乙酰螺旋霉素C的裂解方式圖5 單乙酰螺旋霉素B的電子轟擊質(zhì)譜實驗條件儀器日本電子DX-300GC/MS儀，JMA3500數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、快原子轟擊源(FAB)Xe為轟擊原子、分辨率1000，發(fā)射電源20mA，加速電壓3KV，倍增器電壓1.5KV，電子轟擊源，離化電壓70eV，離化電源3000μA，掃描速度10秒/10倍程，CsI質(zhì)量校正用標(biāo)準(zhǔn)。
M/Z 927為單乙酰螺旋霉素B的分子離子峰，低質(zhì)量區(qū)的M/Z 173為碳霉胺基糖的碎片峰，說明2′的羥基沒有乙?；?，M/Z 187，884碎片峰說明碳霉糖上有一個羥基乙?；⑶沂且阴；?″位上，結(jié)構(gòu)如圖2。
圖6 國產(chǎn)乙酰乙酰螺旋霉素分離圖分離條件儀器Water 6000A泵 M 730數(shù)字處理機 島津 SPD-1檢測器CTO-2A柱溫箱色譜柱μ Bondapack C18柱流動相乙腈∶0.2M醋酸銨∶(53∶10∶37)樣品國產(chǎn)螺旋霉素，用原日本專利條件乙酰化。
峰1 單乙酰螺旋霉素B峰2 單乙酰螺旋霉素C峰3 雙乙酰螺旋霉素B峰4 雙乙酰螺旋霉素C圖7 單乙酰螺旋霉素分離圖分離條件同圖6要求的條件。
樣品為現(xiàn)申報專利的單乙酰螺旋霉素合成工藝合成的樣品。
峰1為單乙酰螺旋霉素B峰2為單乙酰螺旋霉素C含有少量的雙乙酰螺旋霉素B和雙乙酰螺旋霉素C(保留時間分別為27.03分和34.23分)圖8 乙酰螺旋霉素pH2.5放置48小時的HPLC分離圖，分離條件同圖9，由圖可見，乙酰螺旋霉素在pH2.5的條件下放置48小時，降解不明顯，因此在pH2.0-2.5的條件下提取是可行的。
權(quán)利要求
1.一種制備單乙酰螺旋霉素的方法，所用原料為螺旋霉素，其結(jié)構(gòu)式為
式中R代表乙?；虮；?，選用含R為乙?；蚏為丙酰基的螺旋霉素為主要原料，以取原料螺旋霉素10克為基準(zhǔn)所得的反應(yīng)物的配比為螺旋霉素 10克醋酐 20毫升吡啶 1毫升制備單乙酰螺旋霉素的方法包括以下工藝步驟(1)將上述三種反應(yīng)物按上述比例混合，在10-35℃溫度下反應(yīng)12小時，置于5倍體積的冰水中，用乙酸丁酯提取，得到二乙酰螺旋霉素中間體；(2)將所得中間體，按每10克加入80%甲醇25毫升的比例，將兩者混合，經(jīng)醇解脫乙酰反應(yīng)10小時后，用乙酸丁酯提取，得到含單乙酰螺旋霉素90%的制品。
2.一種制備單乙酰螺旋霉素的方法，所用原料為螺旋霉素，其結(jié)構(gòu)式為
以取螺旋霉素10克為基準(zhǔn)所得的反應(yīng)物配比為螺旋霉素 10克醋酐 20毫升吡啶 1毫升制備單乙酰螺旋霉素的方法包括以下工藝步驟(1)將上述三種反應(yīng)物按上述比例混合，在40-50℃溫度下，反應(yīng)12-20小時，置于5倍體積的冰水中，用乙酸丁酯提取，得到二乙酰螺旋霉素中間體。(2)將所得中間體，按每10克加入80%甲醇25毫升的比例，將兩者混合，經(jīng)醇解脫乙酰反應(yīng)10小時，后用乙酸丁酯提取，得到含單乙酰螺旋霉素90%的制品。
全文摘要
本發(fā)明是一種新的制備單乙酰螺旋霉素的方法，所用原料為螺旋霉素、醋酐和吡啶，在室溫下反應(yīng)12小時后，再經(jīng)醇解脫乙酰反應(yīng)，得到含單乙酰螺旋霉素90％的制品。用此方法制備單乙酰螺旋霉素，收率為80％左右，反應(yīng)不需加熱，且反應(yīng)時間要短一倍，所得制品可成為臨床有用的抗生素新品種。
文檔編號A61K31/70GK1078472SQ9211157
公開日1993年11月17日 申請日期1992年9月30日 優(yōu)先權(quán)日1992年9月30日
發(fā)明者唐秋瑾, 李素杰, 申玉珍, 薛聞鵬 申請人:中國藥品生物制品檢定所