一種利用蔗糖酯輔助提取沙棘葉黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物天然產(chǎn)物領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種利用蔗糖酯輔助提取沙棘葉黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]沙棘葉中黃酮類主要成分為槲皮素、異鼠李素、山奈酚及其苷類、楊梅酮、氯原酸、豬草苷、兒茶酸、黃芪苷等。沙棘黃酮具有抗腫瘤，保護心血管系統(tǒng)，提高機體免疫，抗氧化，鎮(zhèn)痛等作用。目前對于黃酮類物質(zhì)的提取方法主要有傳統(tǒng)的溶劑提取法、超臨界萃取、酶法提取、微波萃取以及超聲波提取法。其中溶劑提取法是最常用的提取方法。沙棘黃酮提取方法都要使用大量有機溶劑，對環(huán)境壓力大，不符合綠色、環(huán)保的發(fā)展理念，亟需開發(fā)新的沙棘葉黃酮提取方法。
[0003]鹿糖脂肪酸醋簡稱鹿糖醋(Sucrose Esters，簡稱SE)，是一種新型的多元醇型非離子型表面活性劑。蔗糖酯的蔗糖部分為親水基，長鏈脂肪酸部分為親油基。蔗糖酯具有良好的乳化、分散、增溶、潤滑、滲透、起泡、粘度調(diào)節(jié)、防老化、抗菌等性能。同時，它還具有無毒、易生物降解等特性?，F(xiàn)已被批準作為食品添加劑。蔗糖酯還廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、石油開采、化肥、化妝品、制糖和果蔬保鮮等工業(yè)中。借助蔗糖酯的增溶作用，達到提高沙棘黃酮提取率的目的，為開發(fā)和利用沙棘葉中沙棘黃酮資源提新的更為綠色更加環(huán)保的方法。
[0004]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種利用蔗糖酯輔助提取沙棘葉黃酮的方法。在提高沙棘葉黃酮提取率的同時，建立一種綠色環(huán)保、高效、快速的沙棘葉黃酮提取方法
本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，首先通過將生物表面活性劑與同類化學表面活性劑進行系統(tǒng)研宄，選取效果最好的生物表面活性劑。隨后進行溫度、乙醇濃度、料液比、提取時間以及表面活性劑種類等做單因素實驗，并且通過進一步進行正交實驗得出在較低濃度乙醇輔助提取的條件下蔗糖酯提取沙棘黃酮的最優(yōu)條件。
[0006]本發(fā)明提供了一種利用蔗糖酯輔助提取沙棘葉黃酮的方法。本發(fā)明所具有的優(yōu)點是(I)利用表面活性劑蔗糖酯通過在其表面或界面的吸附作用或在溶液中形成的分子聚合體而改變黃酮類物質(zhì)在水溶液中的溶解性，提高活性成分的提取效率、降低提取成本；(2)該方法縮短了沙棘葉黃酮提取時間；(3)該方法降低了有機溶劑的使用量和提取溫度，在節(jié)約能源的同時降低了對環(huán)境的污染。
【附圖說明】
[0007]圖1為表面活性劑對沙棘黃酮提取率的影響結(jié)果示意圖；
圖2為乙醇濃度對沙棘黃酮提取率的影響結(jié)果示意圖；
圖3為溫度對沙棘黃酮提取率的影響結(jié)果示意圖； 圖4為提取時間對沙棘黃酮提取率的影響結(jié)果示意圖。
[0008]【具體實施方式】:
以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0009]若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。
[0010]本發(fā)明所用沙棘葉為烘干沙棘葉，購自于青海康普生物科技有限公司，粉碎后經(jīng)過篩分去除了尺寸較大的顆粒。
[0011]沙棘提取過程首先將沙棘葉干燥粉碎后按比例加入一定量表面活性劑和低濃度的乙醇提取液搖勻，在控溫水浴中以160r/min的速度震蕩提取一定的時間。再經(jīng)對表面活性劑種類、乙醇濃度、提取時間、提取溫度進行優(yōu)化，具體過程如下:
I)沙棘黃酮檢測方法的確立
黃酮的標準品為蘆丁，精密配制蘆丁對照品溶液濃度為0.2010mg/mL，各取0、1.0、
2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL各加5%乙醇稀釋至6mL，各取ImL嚴格依照1.3.1的測量方法進行操作，并于波長510nm處測定吸光度，以吸光度對溶液濃度進行回歸分析，所得回歸方程為:Y=0.087X+0.000053，R~2=0.998。式中，Y 為黃酮濃度(mg/mL)，X 為吸光度。
[0012]2)表面活性劑種類對沙棘葉黃酮提取的影響
水浴溫度為60°C，料液比1:50，分別使用5%乙醇輔助浸提，分別使用八種化學表面活性劑:十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、雙-(2-乙己基)磺基丁二酸、聚氧乙烯月桂醚、十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨、吐溫20和兩種生物表面活性劑:鼠李糖酯、蔗糖酯浸提60min，考察和篩選最優(yōu)表面活性劑。
[0013]3)乙醇濃度沙棘葉黃酮提取的影響
水浴溫度為60°C，料液比1:50，蔗糖酯濃度為0.02g/mL，分別使用含有5%、10%、20%、40%、60%的乙醇溶液分別浸提lh。
[0014]4)水浴溫度沙棘葉黃酮提取的影響
料液比1:50，蔗糖酯濃度為0.02g/mL，用5%乙醇輔助蔗糖酯在40°C、50°C、60°C、70°C、80°C的水浴溫度下分別浸提lh。
[0015]5)提取時間沙棘葉黃酮提取的影響
料液比為1:50，蔗糖酯濃度為0.02g/mL，用5%乙醇輔助蔗糖酯在60°C的水浴溫度下分別浸提 30min、lh、l.5h、2h、2.5h。
[0016]最終確定采用蔗糖酯作為表面活性劑對沙棘葉黃酮進行提??；添加乙醇濃度為5%，大大降低了提取過程中乙醇的使用量；提取溫度為50-70攝氏度；提取時間為1.5小時。
[0017]進一步地，比較八種化學表面活性劑和兩種生物表面活性劑對沙棘黃酮提取率的影響，包括十二烷基硫酸鈉(AS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、雙(2-乙基己基)磺基丁二酸鈉(AOT)、十二烷基三甲基氯化銨(DTAC)、十二烷基磺酸鈉(SDS)、聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)、吐溫-20(Tween-20)、曲拉通X-1OO(X-1OO)、鼠李糖脂和蔗糖酯由圖1可以看到提取率由 Brij-35>AS> 蔗糖酯 >SDS>A0T> 鼠李糖酯 >5% 乙醇 >X-100>Tween-20>CTAB>DTAC逐漸降低，同時X-100、Tween-20、CTAB和DTAC提取率低于5%乙醇提取率，即其除了不能促進沙棘黃酮的提取，反而對其有抑制作用。因此選擇蔗糖酯進行后續(xù)試驗。
[0018]進一步地，乙醇濃度對沙棘黃酮提取的影響
乙醇濃度對蔗糖酯提取沙棘黃酮的提取率影響的單因素實驗結(jié)果如圖2所示:用5%的乙醇提取時蔗糖酯的提取效率是最高的(此時蔗糖酯濃度為0.02g/mL)，此后隨著乙醇濃度的提高其提取率反而降低，只有當乙醇濃度達到60%等高濃度的情況下，提取率才有所回升，但回升幅度較低。這與預(yù)期計劃用5%的乙醇來提取而達到減小有機溶劑對環(huán)境的污染的目的恰好相契合，因此，選擇5%的乙醇為本實驗的最優(yōu)條件。
[0019]進一步地，溫度對沙棘黃酮提取的影響
溫度對蔗糖酯提取沙棘黃酮單因素實驗結(jié)果如圖3所示，通過反復(fù)實驗得出，控制其他因素不變，溫度介于50~70攝氏度是最好的，當溫度達到70攝氏度的時候提取率達到峰值，在溫度小于40度時提取率與其他水平下溫度相比，提取率明顯較低，同樣當溫度高于80度時，提取率呈降低趨勢，故蔗糖酯發(fā)揮表面活性劑功效的最優(yōu)溫度應(yīng)介于50~70度之間。
[0020]進一步地，提取時間對沙棘黃酮提取的影響
提取時間對蔗糖酯提取率的影響單因素實驗如圖4所示，從30分鐘到2.5h的提取時間內(nèi)，提取率在1.5h的時候達到峰值，2小時的時候提取率有明顯回落，但將提取時間延長至2.5h時，提取率又發(fā)生了突變性的增長且高于其他水平。其中在提取時間為lh、1.5h、
2.5h提取效率相對比較高。
[0021]實施例1。
[0022]比較八種化學表面活性劑和兩種生物表面活性劑對沙棘黃酮提取率的影響，包括十二烷基硫酸鈉(AS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、雙(2-乙基己基)磺基丁二酸鈉(AOT)、十二烷基三甲基氯化銨(DTAC)、十二烷基磺酸鈉(SDS)、聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)、吐溫-20(Tween-20)、曲拉通X-1OO(X-1OO)、鼠李糖脂和蔗糖酯由圖1可以看到提取率由 Brij-35>AS> 蔗糖酯 >SDS>A0T> 鼠李糖酯 >5% 乙醇 >X-100>Tween-20>CTAB>DTAC逐漸降低，同時X-100、Tween-20、CTAB和DTAC提取率低于5%乙醇提取率，即其除了不能促進沙棘黃酮的提取，反而對其有抑制作用。因此選擇蔗糖酯進行后續(xù)試驗。
[0023]乙醇濃度對蔗糖酯提取沙棘黃酮的提取率影響的單因素實驗結(jié)果如圖2所示:用5%的乙醇提取時蔗糖酯的提取效率是最高的(此時蔗糖酯濃度為0.02g/mL)，此后隨著乙醇濃度的提高其提取率反而降低，只有當乙醇濃度達到60%等高濃度的情況下，提取率才有所回升，但回升幅度較低。這與預(yù)期計劃用5%的